本發(fā)明涉及微生物促生及植物保護(hù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種提高中重度鹽堿地作物耐鹽性的促生菌組合。
背景技術(shù)：
：鹽堿地的改良與利用是國(guó)際研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)，目前已研發(fā)出以水壓鹽、物理吸附改良、鹽水排管、礦渣吸附等技術(shù)，但并不適宜淡水資源匱乏的干旱半干旱地區(qū)。在耐鹽堿植物根際，蘊(yùn)藏著大量有益微生物資源，有些菌株本身具有較高的耐鹽能力，同時(shí)可顯著提高植物的耐鹽能力，并具有促生、防病、抗衰老等作用，應(yīng)用于植物根際可大幅度提高作物的耐鹽、抗旱性和生物產(chǎn)量，從而達(dá)到改善和利用鹽堿地的目的。目前的研究多集中于單一菌株，往往出現(xiàn)效果不理想或不穩(wěn)定現(xiàn)象，應(yīng)用范圍也有一定限制，因此，研究具有功能多樣，應(yīng)用范圍廣譜的多菌組合是研究方向。在嗜鹽微生物中，中度嗜鹽菌是一個(gè)對(duì)鹽濃度耐受范圍最廣的類群，在自然界分布廣泛，具有獨(dú)特的基因類型、特殊的生理機(jī)制、多樣化的代謝產(chǎn)物和潛在的應(yīng)用價(jià)值。芽孢菌具有存活期長(zhǎng)和抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)，廣泛分布在不同的土壤和植物根際中，有的也可以侵入植物組織內(nèi)部。該屬中的許多菌株以其固氮能力、對(duì)致病菌的抗性和對(duì)植物的促生作用而受到研究者們的廣泛關(guān)注。我國(guó)幅員遼闊，環(huán)境多樣，土質(zhì)情況差異很大，使得我國(guó)的芽孢桿菌資源十分豐富，開發(fā)應(yīng)用潛力巨大。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種提高中重度鹽堿地作物耐鹽性的促生菌組合。本發(fā)明從海興縣鹽堿土壤中分離到一株具有廣譜促生抗逆作用的芽孢桿菌ZCM18。通過菌株形態(tài)學(xué)特征，生理生化特征和16SrRNA序列分析將該菌株鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)，該菌株于2016年9月12日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12959，分類名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。在自然條件下，該細(xì)菌ZCM18可定殖于多種植物根際，能分泌吲哚乙酸、玉米素、多肽抗菌素、脯氨酸等提高植物抗逆抗病性的物質(zhì)。菌株ZCM18的擴(kuò)繁方法：菌種的制備，采用LB培養(yǎng)基，配方為：Tryptone10gL-1，YeastExtract5gL-1，NaCl10gL-1，pH7.0。發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米淀粉10gL-1，酵母粉20gL-1，蛋白胨13gL-1，KH2PO42.0gL-1，K2HPO42.7gL-1。解淀粉芽孢桿菌的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基的最適pH值為7.0，最適培養(yǎng)溫度為35℃，培養(yǎng)15h即可到對(duì)數(shù)后期。本發(fā)明從海興縣鹽堿土壤中分離到一株芽孢桿菌ZCM5。通過菌株形態(tài)學(xué)特征，生理生化特征和16SrRNA序列分析將該菌株鑒定為特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)，該菌株于2016年9月12日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12960，分類名為特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)。該ZCM5菌株的培養(yǎng)特性為：可耐受5％鹽度。該ZCM5菌株能分泌吲哚乙酸、玉米素、多肽抗菌素、ACCD和嗜鐵素等，具有降解有機(jī)磷功能。特基拉芽孢桿菌ZCM5發(fā)酵培養(yǎng)基為：甘油14mLL-1，酵母粉20gL-1，胰蛋白胨13gL-1，KH2PO42.2gL-1，K2HPO42.7gL-1。特基拉芽孢桿菌培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基的最適pH值為7.2，最適培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)15h即可到對(duì)數(shù)后期。本發(fā)明提供了一種提高中重度鹽堿地作物耐鹽性的促生菌組合，其包含兩種菌株，分別為：解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZCM18和特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)ZCM5，其保藏編號(hào)分別為CGMCCNo.12959和CGMCCNo.12960。ZCM18和ZCM5二者有效活性菌的數(shù)量比例為1-2:1-5。本發(fā)明提供了含有上述促生菌組合的菌劑。本發(fā)明提供了含有上述促生菌組合的生物肥料。進(jìn)一步地，生物肥料中ZCM18和ZCM5的有效活菌數(shù)分別為2×107-2×108CFU/g。本發(fā)明的實(shí)施例中，采用將上述解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5的菌懸液或發(fā)酵液按1:3混合后噴灑在發(fā)酵有機(jī)肥顆?；蚍勰┥现苽涑勺罱K活菌數(shù)≥2×107cfu/g生物肥料，用于農(nóng)作物的生長(zhǎng)。本發(fā)明提供了上述促生菌組合或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑或含有其的生物肥料在作物促生中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了上述促生菌組合或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑或含有其的生物肥料在抵抗植物病原菌中的應(yīng)用。所述的植物病原菌為鐮刀菌、絲核菌和腐霉菌。具體地，ZCM18能夠拮抗鐮刀菌、絲核菌，ZCM5能夠拮抗腐霉菌。本發(fā)明提供了上述促生菌組合或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其菌劑或含有其活菌的生物肥料在提高作物抗逆性中的應(yīng)用。所述的抗逆性為提高植物耐受0.4％-1.0％中重度鹽堿度的能力。優(yōu)選地，所述植物為小麥、玉米、蘇丹草或蘋果、梨、棗樹等。本發(fā)明采用多級(jí)篩選方法獲得了一株解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5。ZCM18菌株耐鹽度為5％，具有較高的溶磷，固氮，產(chǎn)IAA，ACCD，嗜鐵素以及細(xì)胞分裂素的能力，還可以拮抗鐮刀菌、絲核菌病原菌。特基拉芽孢桿菌ZCM5具有拮抗腐霉菌的作用。試驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的含有解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZCM18和特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)ZCM5的菌株組合在多種植物(如糧食作物、蔬菜、果樹和中藥材)，多種土壤條件(如鹽堿地、設(shè)施蔬菜退化土壤)上應(yīng)用，均表現(xiàn)出顯著提高植物耐鹽性，促進(jìn)根系發(fā)育、防控多種根部病害，提高植物耐旱和耐寒性，能顯著改善作物生長(zhǎng)狀態(tài)，提高保苗率，增加產(chǎn)量，改善品質(zhì)，降低化學(xué)復(fù)混肥的使用量，在鹽堿地改良和利用領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的化學(xué)試劑均為常規(guī)市售試劑，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例1解淀粉芽孢桿菌ZCM18的分離和鑒定1、菌株的分離取海興縣鹽堿地小麥根際土壤1g到10mL無菌生理鹽水中，渦旋儀震蕩1min后制得根際土壤菌懸液。將菌懸液梯度稀釋，涂布于含5％NaCl的LB平板，30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h以分離菌株。2、菌株的形態(tài)學(xué)特征在LB平板上形成圓形、扁平、濕潤(rùn)有粘性的菌落，LB液體培養(yǎng)基中混濁生長(zhǎng)，培養(yǎng)后期會(huì)形成菌膜。經(jīng)革蘭氏染色，鏡下可見兩端鈍圓、長(zhǎng)短不一、革蘭陽性桿菌，有大于菌體的次末端芽胞。3、菌株生理生化特性該菌株可以在含鹽量為5％的LB平板上生長(zhǎng)。經(jīng)過溶磷，固氮，IAA，ACCD，嗜鐵素以及細(xì)胞分裂素的定性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該菌株具備產(chǎn)相應(yīng)物質(zhì)的能力。隨后進(jìn)行了ACCD和IAA酶活測(cè)定，并與之前獲得的優(yōu)良解淀粉芽孢桿菌XMW10，假單胞菌YMJ3比較見下表1。表1不同優(yōu)勢(shì)菌株產(chǎn)各種促進(jìn)植物生長(zhǎng)物質(zhì)能力比較菌株IAA(μg/mL)ACCD(mM·mg-1h-1)ZCM1869.047.23ZCM554.126.32XMW1020.495.46YMJ349.232.114、16SrDNA鑒定通過16SrDNA序列分析，菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)相似度達(dá)到90％。綜合菌體形態(tài)、生理生化特性和16SrDNA基因序列，菌株ZCM18為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)，于2016年9月12日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12959，分類命名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。5、抑菌特性采用抑菌圈試驗(yàn)方法，進(jìn)行了ZCM18菌株發(fā)酵液的抑菌活性試驗(yàn)，結(jié)果見表2。可見ZCM18對(duì)三種病原真菌都具有拮抗活性，其中對(duì)鐮刀菌和絲核菌的拮抗活性顯著優(yōu)于其他菌株。表2不同菌株對(duì)病原真菌抑菌活性實(shí)施例2特基拉芽孢桿菌ZCM5的分離和鑒定1、菌株的分離取海興縣鹽堿地小麥根際土壤1g到10mL無菌生理鹽水中，渦旋儀震蕩1min后制得根際土壤菌懸液。將菌懸液梯度稀釋，涂布于含NaCl濃度5％的LB平板，30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h以分離菌株。2、菌株的形態(tài)學(xué)特征在LB平板上形成圓形、表面光滑稍有褶皺，乳白色菌落，LB液體培養(yǎng)基中混濁生長(zhǎng)，培養(yǎng)后期會(huì)形成菌膜。經(jīng)革蘭氏染色，鏡下可見革蘭陽性桿菌，有芽胞。3、菌株生理生化特性該菌株可以在含鹽量為5％的LB平板上生長(zhǎng)。經(jīng)過溶磷，固氮，IAA，ACCD，嗜鐵素以及細(xì)胞分裂素的定性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該菌株具備產(chǎn)相應(yīng)物質(zhì)的能力。每種能力用5分制進(jìn)行評(píng)分，5分最優(yōu)，該菌產(chǎn)各種物質(zhì)的能力見表1。4、16SrDNA鑒定通過16SrDNA序列分析可知菌株為特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)。綜合菌體形態(tài)、生理生化特性和16SrDNA基因序列，該菌株ZCM5于2016年9月12日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101)，保藏編號(hào)為CGMCCNo.12960，分類命名為特基拉芽孢桿菌(Bacillustequilensis)。5、抑菌特性進(jìn)行了ZCM5菌株發(fā)酵液的抑菌活性試驗(yàn)，結(jié)果見表2。可見，該菌株對(duì)三種絲狀真菌均有生物抗性，對(duì)腐霉菌的拮抗活性顯著優(yōu)于其他菌株。實(shí)施例3含有解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5的生物肥制備解淀粉芽孢桿菌ZCM18的種子培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，將甘油管保存的菌液接種到LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，35℃培養(yǎng)2d，將單菌落接種到LB液體培養(yǎng)基中，35℃，200r/min，培養(yǎng)15h到對(duì)數(shù)后期時(shí)，按百分之一的接種量再進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)一次后獲得的菌液即為種子液。以此種子液進(jìn)行ZCM18的發(fā)酵。通常在35℃，200r/min，培養(yǎng)48h，菌數(shù)≥1×1010cfu/mL。特基拉芽孢桿菌ZCM5的種子培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，將甘油管保存的菌液接種到LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，30℃培養(yǎng)2d，將單菌落接種到LB液體培養(yǎng)基中，30℃，200r/min，培養(yǎng)15h到對(duì)數(shù)后期時(shí)，按百分之一的接種量再進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)一次后獲得的菌液即為種子液。以此種子液進(jìn)行ZCM5的發(fā)酵。通常在30℃，200r/min，培養(yǎng)48h，菌數(shù)為1.0×1010cfu/mL。上述解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5的種子培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，將甘油管保存的菌液接種到LB固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，30℃培養(yǎng)2d，將單菌落接種到LB液體培養(yǎng)基中，30℃，200r/min，培養(yǎng)15h到對(duì)數(shù)后期時(shí)，按百分之一的接種量再進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)一次后獲得的菌液即為種子液。最后分別進(jìn)行ZCM18和ZCM5的發(fā)酵，最終獲得的發(fā)酵液菌數(shù)≥1×1010cfu/mL。將菌液按1：3的比例混合后，噴灑在有機(jī)肥顆粒上，制備成菌數(shù)≥2×107cfu/g的生物有機(jī)肥。實(shí)施例4解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5防控土傳病害鐮刀菌、絲核菌和腐霉菌試驗(yàn)取菜田表層至20cm以上土壤，風(fēng)干，粉碎，過篩，高壓滅菌后作為基礎(chǔ)栽培基質(zhì)。采用實(shí)施例3制得ZCM18和ZCM5粉劑生物肥進(jìn)行盆栽試驗(yàn)。將病原鐮刀菌(Fusarium.sp)、絲核菌(Rhizoctonia.sp)和腐霉菌(Pythium.sp)活化后接入高壓滅菌的麩皮培養(yǎng)物上，25℃培養(yǎng)7-10天。將長(zhǎng)滿病原菌菌絲的麩皮培養(yǎng)物風(fēng)干、搗碎。不同處理栽培基質(zhì)的制備。處理1：滅菌土：ZCM18生物肥：病原接種物＝8.5:1:0.5(體積比，下同)，使ZCM18在栽培基質(zhì)中的活菌含量為2×106cfu/g；處理2：滅菌土：ZCM18生物肥：病原接種物＝9.3：0.2：0.5，ZCM18在栽培基質(zhì)中的活菌含量為4×105cfu/g；處理3：滅菌土：ZCM5生物肥：病原接種物＝8.5:1:0.5，ZCM5在栽培基質(zhì)中的活菌含量為4×106cfu/g；處理4：滅菌土：ZCM5生物肥：病原接種物＝9.3:0.2:0.5，ZCM5在栽培基質(zhì)中的活菌含量為4×105cfu/g；處理5為對(duì)照組：按滅菌土：有機(jī)肥(生物肥載體)：病原接種物＝8.5:1:0.5的比例混合制備栽培基質(zhì)。試驗(yàn)植物為四葉期的黃瓜苗，挑選生長(zhǎng)一致的栽培苗，進(jìn)行移栽，然后澆透水一次。每處理30株。各處理置于25℃光照培養(yǎng)室培養(yǎng)。25天觀察發(fā)病情況，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表3?？梢奪CM18生物肥對(duì)三種土傳病害的相對(duì)防效均達(dá)到了80％以上，對(duì)鐮刀菌和絲核菌的防控效果均顯著優(yōu)于ZCM5，而ZCM5對(duì)腐霉菌的仿效顯著優(yōu)于ZCM18。表3不同生物肥防控土傳病害盆栽試驗(yàn)效果實(shí)施例5解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5發(fā)酵產(chǎn)品在含NaCl0.4％－1.0％土壤上小麥盆栽效果試驗(yàn)將ZCM18和ZCM5分別進(jìn)行培養(yǎng)，最終獲得的發(fā)酵液菌數(shù)大于1010cfu/mL。將兩者按1：3的體積比例混合后使用。盆栽實(shí)驗(yàn)采用來自海興縣的鹽堿土壤，調(diào)整含鹽量為0.4％、0.7％和1.0％。試驗(yàn)組將前述混合菌液接種到小麥種子周圍，每顆小麥種子50μL。對(duì)照組接種等量的無菌水。重復(fù)10次。光照室培養(yǎng)25d后統(tǒng)計(jì)小麥的株高、地上干重和根干重。最終試驗(yàn)組的株高，地上干重，根干重見表4。表4ZCM18和ZCM5發(fā)酵產(chǎn)品在不同濃度含NaCl土壤上小麥盆栽試驗(yàn)數(shù)據(jù)實(shí)施例6解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5有機(jī)肥在中度鹽堿地小麥田間效果試驗(yàn)本試驗(yàn)使用實(shí)施例3制得的含有解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5的生物有機(jī)肥進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在河北省滄州市海興縣中度鹽堿地，土壤含鹽量為0.4％。施肥方式：旋耕1遍，撒施復(fù)混肥(39％)18kg/畝，再旋耕1遍，找平。采用常用的施肥一體播種機(jī)，對(duì)照組按2kg/畝施用化學(xué)復(fù)混肥(氮磷鉀含量39％)，播種，處理組按15kg/畝的用量施用生物有機(jī)肥(氮磷鉀含量5.2％)，播種。最終統(tǒng)計(jì)小麥的根干重和產(chǎn)量。最終處理組的根干重和產(chǎn)量分別比對(duì)照組增加13.3％，19.4％。表5實(shí)施例7解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5生物有機(jī)肥在重度鹽堿地蘇丹草的田間效果試驗(yàn)本試驗(yàn)使用實(shí)施例3制得的含有解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5的生物有機(jī)肥進(jìn)行田間試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在河北省滄州市海興縣鹽堿地。含鹽量為1.0％。施肥方式：旋耕2遍，找平，采用常用的施肥一體播種機(jī)，對(duì)照組按2kg/畝施用化學(xué)復(fù)混肥(氮磷鉀含量39％)，播種，處理組按15kg/畝的用量施用生物有機(jī)肥(氮磷鉀含量5.2％)，播種。最終統(tǒng)計(jì)蘇丹草兩茬的生物量(以每小區(qū)為單位，每株留茬30cm)。最終處理組的第一茬和第二茬的生物量分別比對(duì)照組增加9.5％，20.1％。表6實(shí)施例8解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5生物有機(jī)肥在中度鹽堿地玉米的田間效果試驗(yàn)本試驗(yàn)使用的是實(shí)施例3制得的解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5生物有機(jī)肥。田間試驗(yàn)的地點(diǎn)設(shè)在河北省滄州市海興縣鹽堿地。含鹽量為0.5％。施肥方式：采用常用的施肥一體播種機(jī)，對(duì)照組按2kg/畝施用化學(xué)復(fù)混肥(氮磷鉀含量39％)，播種，處理組按15kg/畝的用量施用生物有機(jī)肥(氮磷鉀含量5.2％)。其余田間管理一致。最終統(tǒng)計(jì)玉米的根干重和產(chǎn)量。最終處理組的根干重和產(chǎn)量分別比對(duì)照組增加12.6％，23.0％。表7實(shí)施例9解淀粉芽孢桿菌ZCM18和特基拉芽孢桿菌ZCM5生物有機(jī)肥提高番茄耐寒耐旱試驗(yàn)采用實(shí)施例3的方法，分別制得ZCM18和ZCM5單一菌株和混合菌株生物有機(jī)肥，作為供試肥料。以菜田土為栽培基質(zhì)，進(jìn)行番茄盆栽試驗(yàn)。處理設(shè)置如下：處理1：栽培基質(zhì)+ZCM18和ZCM5復(fù)合生物有機(jī)肥，比例9:1(體積比，下同)處理2：栽培基質(zhì)+ZCM5生物有機(jī)肥處理3：栽培基質(zhì)+ZCM18生物有機(jī)肥處理4：對(duì)照，只有栽培基質(zhì)處理：將長(zhǎng)到三個(gè)復(fù)葉、均勻一致的番茄苗移栽于不同處理的花盆中，定量澆透水。每處理20盆。在日光溫室培養(yǎng)一個(gè)月。耐寒試驗(yàn)：每處理各取5盆放入0℃培養(yǎng)箱中，處理12小時(shí)。取相同部位葉片檢測(cè)相對(duì)電導(dǎo)率。相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定方法：分別剪取不同處理番茄同葉位葉片，超純水沖洗5遍，用潔凈濾紙吸干葉片表面水分。用干凈的剪刀將葉片剪成1cm左右均勻等重條塊，分別放入刻度試管中，用超純水沖洗3遍，然后用超純水定容至20mL，室溫放置1h，期間可搖勻幾次，到時(shí)間后，搖勻，用DDS-11A型電導(dǎo)率儀測(cè)定其初始電導(dǎo)值C1。將試管至沸水浴中15min，取出自然冷卻至室溫，搖勻后測(cè)定其最終電導(dǎo)值C2。每個(gè)處理重復(fù)三次。相對(duì)電導(dǎo)率(％)＝C1/C2×100將冷處理番茄苗移至20℃室溫下，恢復(fù)24小時(shí)，觀察受凍害葉片恢復(fù)情況。上述檢測(cè)結(jié)果見下表8。表8不同處理耐寒情況比較處理相對(duì)電導(dǎo)率％受凍害葉片恢復(fù)率％對(duì)照67.233.5ZCM5生物肥35.483.5ZCM18生物肥21.597.2ZCM18+ZCM520.198.2耐旱性能試驗(yàn)：(1)干旱脅迫法：每處理取5盆，進(jìn)行缺水處理5天以上，待葉片打蔫，有植株頂尖含水率不足20％時(shí)，澆透水，24小時(shí)后觀察葉片恢復(fù)情況，檢測(cè)相對(duì)電導(dǎo)率。(2)測(cè)定葉片相對(duì)含水量法：取相同部位葉片檢測(cè)葉片相對(duì)含水量，該數(shù)值越高說明葉片保水性能越好，越耐旱。檢測(cè)方法：剪取葉片2份，迅速放入已知重量的鋁盒中，稱出鮮重Wf；其中一份連同鋁盒一并放入烘箱中，先105℃殺青，然后80℃烘干至恒溫，稱取重量Wd；另一份放入蒸餾水中浸泡6-7小時(shí)，取出用濾紙吸干表面水分，稱重Wt。相對(duì)含水量％＝(Wf-Wd)/(Wt－Wd)ⅹ100結(jié)果見表9。表9不同處理耐旱情況比較處理相對(duì)電導(dǎo)率％相對(duì)保水率％干旱葉片恢復(fù)率％對(duì)照48.524.247.4ZCM5生物肥25.926.479.2ZCM18生物肥16.835.785.3ZCM18+ZCM516.035.989.5可見，ZCM18+ZCM5生物肥可顯著提高番茄植株的耐旱、耐寒性，其效果顯著優(yōu)于單一菌株處理。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3