本發(fā)明屬于醫(yī)藥生產(chǎn)領(lǐng)域，具體地說(shuō)明運(yùn)用三次層析技術(shù)來(lái)純化絨促性素的方法。

背景技術(shù)：

絨促性素是從孕婦尿中提取的一種生物活性物質(zhì)，具有促進(jìn)胚胎發(fā)育、維持妊娠的功能。絨促性性素與促甲狀腺激素、促卵泡激素、黃體生成素等同為糖蛋白激素家庭一員。在臨床上，絨促性素能治療習(xí)慣性流產(chǎn)和促卵泡激素分泌過(guò)多或黃體生成素分泌不足引起的不孕癥等疾病。此外，在水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜牧業(yè)生產(chǎn)上也有廣泛應(yīng)用。絨促性素是我國(guó)的主要出口生化藥物，用于純化絨促性素的方法有很多，但現(xiàn)行方法工藝流程較繁瑣、絨促性素產(chǎn)品效價(jià)較低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種利用三次層析來(lái)純化絨促性素的方法。該方法優(yōu)化了純化工藝，使純化過(guò)程簡(jiǎn)單，收率明顯提高，效價(jià)高于現(xiàn)有工藝。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種提高絨促性素效價(jià)的方法，其特征在于：采用三次層析進(jìn)行純化，所述三次層析依次為親和層析、疏水層析和離子交換層析，最終得到高純度絨促性素固體。

在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征：包括如下步驟：

（1）預(yù)處理：絨促性素粗品溶于溶解液中，加入乙醇溶液至混合溶液中存在低濃度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高濃度乙醇，取沉淀得固體；

（2）第一步層析：步驟（1）得到的固體進(jìn)行capto blue（high sub）親和層析得蛋白溶液A；

（3）第二步層析：步驟（2）得到的蛋白溶液A經(jīng)Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水層析得蛋白溶液B；

（4）第三步層析：將步驟（3）得到的蛋白溶液B經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析得蛋白溶液C；

（5）后處理：步驟（4）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高純度乙醇，沉淀后收集固體，即得絨促性素固體。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：

優(yōu)化了純化工藝，使純化過(guò)程簡(jiǎn)單化，收率明顯提高，效價(jià)高于現(xiàn)有工藝，另外設(shè)備占地面積縮小，車(chē)間耗能變小。本發(fā)明中，預(yù)處理后絨促性素的效價(jià)為300iu/mg左右，而經(jīng)三次層析處理后絨促性素的效價(jià)可達(dá)9000iu/mg左右，效價(jià)顯著提高。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步了解本發(fā)明的技術(shù)特征，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

（1）預(yù)處理：絨促性素粗品溶于溶解液中，再加入乙醇溶液至混合溶液中存在低濃度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高濃度乙醇，取沉淀得固體；

（2）第一步層析：步驟（1）得到的固體進(jìn)行capto blue（high sub）親和層析得蛋白溶液A；

（3）第二步層析：步驟（2）得到的蛋白溶液A經(jīng)Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水層析得蛋白溶液B；

（4）第三步層析：將步驟（3）得到的蛋白溶液B經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析得蛋白溶液C；

（5）后處理：步驟（4）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高濃度乙醇，沉淀后收集固體，即得絨促性素固體。

實(shí)施例2

（1）預(yù)處理：絨促性素粗品溶于溶解液中，再加入乙醇溶液至混合溶液中存在低濃度乙醇后沉淀、取上清液，所述上清液再加入乙醇溶液至混合溶液中存在高濃度乙醇，取沉淀得固體；

（2）第一步層析：步驟（1）得到的固體進(jìn)行capto blue（high sub）親和層析得蛋白溶液A；

（3）第二步層析：步驟（2）得到的蛋白溶液A經(jīng)Phenyl Sepharose 6 Fast Flow（high sub）疏水層析得蛋白溶液B；

（4）后處理：步驟（3）得到的蛋白溶液C加乙醇溶液至混合溶液中存在高濃度乙醇，沉淀后收集固體，即得絨促性素固體。

以上所述，實(shí)施例僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。