本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12及其基因和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

利用磷酸吡哆醛(PLP)作為輔酶的酶稱為PLP酶。根據(jù)已知的蛋白序列和空間結(jié)構(gòu)，PLP酶可分為五大類。其中大部分屬于第一類，即天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶家族，包括芳香胺轉(zhuǎn)氨酶、甘氨酸乙?；D(zhuǎn)移酶。其他幾類PLP酶的代表依次為：第二類的色氨酸合成酶β族，第三類的真核生物鳥氨酸脫羧酶，第四類的D-甘氨酸轉(zhuǎn)氨酶，第五類的糖原磷酸化酶。所有的這五類酶都是以同源二聚體或更高級別的寡聚物組成。酶的活性中心位于亞基的表面，并且每個亞基都貢獻(xiàn)活性中心的氨基酸殘基。在PLP結(jié)合區(qū)域，這些酶有2個保守區(qū)域：一個用來和PLP形成席夫堿的賴氨酸殘基和一個用來和輔酶磷酸基團(tuán)相聯(lián)系的富含甘氨酸的loop。

轉(zhuǎn)氨酶主要指的是第一類或第四類PLP酶。在轉(zhuǎn)氨反應(yīng)中，氨基供體首先和PLP共價結(jié)合形成磷酸吡多胺(PMP)，隨后PMP把氨基轉(zhuǎn)移給含有羰基的氨基受體，由此完成轉(zhuǎn)氨反應(yīng)和輔酶的循環(huán)(如圖1所示)。根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和序列的特點，第一類PLP酶又可以分為五大類，即轉(zhuǎn)氨酶總共分為六大類。其中第三類的轉(zhuǎn)氨酶最受人們關(guān)注，這些酶的天然氨基供體底物都有一個共同特點：氨基位于羧基的非α位上。這些酶稱為ω-轉(zhuǎn)氨酶。ω-轉(zhuǎn)氨酶構(gòu)成了第三類轉(zhuǎn)氨酶中的絕大部分。

許多具有生物活性的物質(zhì)或其中間體都是手性胺，例如(R)-2-氨基-4-苯基丁烷是降壓藥地來洛爾的前體，苯丙胺是強效抗抑郁藥的手性砌塊，(S)-2-氨基-1-苯基丙基醚是除草劑Outlook的手性砌塊。然而，這些手性胺的制備大部分還是傳統(tǒng)的化學(xué)法，雖然化學(xué)法的反應(yīng)體系明確，但是缺點也很多，其對環(huán)境污染嚴(yán)重，反應(yīng)鏈冗長，立體選擇性差，特別是過渡態(tài)金屬的使用以及復(fù)雜的后期處理過程大幅度增加了生產(chǎn)成本。ω-轉(zhuǎn)氨酶酶法合成因其溫和的反應(yīng)條件，良好的立體選擇性，較高的轉(zhuǎn)化率，簡單的后期處理等特性能很好的解決上述問題。2010年，Christopher K.Savile等人利用蛋白質(zhì)工程手段得到的ω-轉(zhuǎn)氨酶突變型ATA-117成功的運用于抗糖尿病新藥Januvia的主要成分西他列汀的酶法合成工藝中，這項工藝獲得了當(dāng)年的美國總統(tǒng)綠色化學(xué)挑戰(zhàn)獎，這也標(biāo)志著ω-轉(zhuǎn)氨酶在手性胺合成中具有重要的應(yīng)用前景。

生物催化制備手性胺有2種途徑：①酶催化拆分外消旋胺(如圖2所示)；②酶催化不對稱合成手性胺(如圖3所示)。第一種手性拆分外消旋胺的方法簡單易行，但其最大轉(zhuǎn)化率只能達(dá)到50％，而且前體酮的還原胺化增加了生產(chǎn)成本，這無疑限制了它的工業(yè)化應(yīng)用進(jìn)程。第二種不對稱催化合成的方法是目前研究的熱點，因其理論產(chǎn)率能夠達(dá)到100％，但是存在嚴(yán)重的平衡抑制問題。

光學(xué)純的3-氨基哌啶(3APi)是一類非常重要的醫(yī)藥中間體，被用來合成一系列的生物活性藥物，例如妥舒沙星、克林沙星和頭孢菌素類衍生物。其他含有光學(xué)純3-氨基哌啶基團(tuán)的化合物被用于治療肥胖癥和Ⅰ型或者Ⅱ型糖尿病，以及用于合成治療抑郁癥和精神分裂癥等的精神藥物。目前關(guān)于合成3-氨基哌啶的文獻(xiàn)報道有很多，主要有三種不同的路線：取代，環(huán)化，拆分劑拆分。這些方法大多有一個或者更多的缺點：疊氮取代時需要用到昂貴的1-N保護(hù)的甲苯磺酸化的乙醇，即使合成也要經(jīng)過繁雜的步驟。由于取代過程涉及到構(gòu)型的反轉(zhuǎn)，無立體選擇性的S_N1取代過程則必須排除，避免產(chǎn)生立體選擇性相反的產(chǎn)物。這些文獻(xiàn)提供的方法，都沒有使用色譜技術(shù)去檢測產(chǎn)物的光學(xué)純度。至于環(huán)化反應(yīng)，1-N，3-N保護(hù)的3-氨基哌啶可以由光學(xué)純的天冬氨酸或谷氨酸環(huán)化得到，或者由環(huán)化的二酮化合物還原得到的氨基酸再環(huán)化生成。然而，所有的環(huán)化反應(yīng)所得到的產(chǎn)率都比較低，光學(xué)純度也很低。例如，由(S)-2,4-二氨基丁酸，經(jīng)過兩步可以得到(S)-3-氨基哌啶，但是產(chǎn)率非常低。環(huán)化過程最大的問題是產(chǎn)率只能達(dá)到50％，而且后期的處理包括拆分劑的循環(huán)利用和對映體的回收費時費力。目前合成3-氨基哌啶的方法主要是化學(xué)法，所以生物催化轉(zhuǎn)化法制備(S)-3-氨基哌啶具有良好的應(yīng)用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12及其基因和應(yīng)用，從而解決現(xiàn)有技術(shù)中制備手性胺的生物酶的缺失。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

所述ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12來源于棉花地土壤宏基因組。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12，其堿基序列如SEQ ID NO：1所示。

還提供一種重組質(zhì)粒，所述重組質(zhì)粒由所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12與表達(dá)載體質(zhì)粒連接構(gòu)建而成。

優(yōu)選地，該表達(dá)載體質(zhì)粒為pET-28a，可構(gòu)建重組質(zhì)粒ata-w12-pET-28a。

根據(jù)本發(fā)明的又一方面，提供一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株，其所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株是將所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌獲得的基因工程菌株。

本發(fā)明還提供一種所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12以及所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株在合成手性胺類產(chǎn)品中的應(yīng)用。

所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的催化溫度為20～60℃，最優(yōu)選為40℃。

所述S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的催化還原pH為8.0～10.0，最優(yōu)選為8.5。

特別是所述ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12以及所述基因工程菌株被用于催化N-Boc-3-哌啶酮生成(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的應(yīng)用。

具體地，本發(fā)明還提供了一種將ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株用于催化N-Boc-3-哌啶酮生成(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的應(yīng)用，該應(yīng)用包括：將S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株培養(yǎng)所得的ATA-W12濕菌體作為催化劑，在以下反應(yīng)體系中進(jìn)行催化反應(yīng)：pH 8.5Tris-HCl、ATA-W12濕菌體、500mM N-Boc-3-哌啶酮、2mL DMSO、1.5M酸化異丙胺、0.2mM PLP于40℃水浴鍋中，攪拌，反應(yīng)結(jié)束，反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取，收集萃取相，離心，取有機相減壓旋蒸回收乙酸乙酯，得到淡黃色油狀液體即為(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的粗品。

總之，本發(fā)明首次從棉花地土壤宏基因組中擴(kuò)增得到了一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12，并構(gòu)建了一株含有該S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的基因工程菌株，從而實現(xiàn)了該S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的異源表達(dá)，所獲得的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12具有優(yōu)良的酶學(xué)特性，催化胺化的溫度范圍為20-60℃，催化胺化pH值為8.0-10.0，在40℃條件下保存164h后酶活不減反增。此外，本發(fā)明還提供一種所述ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12以及所述基因工程菌株在合成手性胺類產(chǎn)品中的應(yīng)用，特別是ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12以及所述基因工程菌株被用于催化N-Boc-3-哌啶酮生成(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的應(yīng)用。本發(fā)明的生物催化法單水相制備手性胺(S)-N-Boc-3-氨基哌啶，產(chǎn)量高達(dá)500mM/L(100g/L)。與傳統(tǒng)的化學(xué)法相比，該ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌具有反應(yīng)速率快、方便、底物濃度高的特點。

附圖說明

圖1是ω-轉(zhuǎn)氨酶的作用原理圖；

圖2是酶催化拆分外消旋有機胺的原理圖；

圖3是酶催化不對稱合成手性胺的原理圖；

圖4是本發(fā)明純化的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的SDS-PAGE圖，其中，M為蛋白Marker，1為純化后的目的蛋白ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12；

圖5是本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)pH示意圖；

圖6是本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)溫度示意圖；

圖7是本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的熱穩(wěn)定性示意圖；

圖8是本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因工程菌株催化生成(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的示意圖。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限制本發(fā)明的范圍。

1.來源于土壤宏基因組的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的擴(kuò)增

本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12來源于棉花地土壤宏基因組，該土壤宏基因組就是山東省一般的棉花地采集的土壤樣品提取的基因組，然后宏基因組測序所得?；贜CBI(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)的同源比對，本申請的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)一個與其相似性最高為89％的來源于Caulobacter sp.K31的ω-轉(zhuǎn)氨酶。

本發(fā)明的ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，大小為1407bp。

根據(jù)序列分析結(jié)果設(shè)計擴(kuò)增ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的引物：

ata-w12F:5'AACCGGAATTCATGACCGCCCCCCTCCGCA 3'

ata-w12R:5'AACCCAAGCTTTCAGTCCTCGCCCTCCTTA 3'

以上述棉花地土壤宏基因組為模板，采用上面設(shè)計的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12。

2.含有ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的重組質(zhì)粒(ata-w12-pET-28a)的構(gòu)建

本發(fā)明的含有ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的重組質(zhì)粒是通過將ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12與可選的質(zhì)粒pET-28a(作為表達(dá)載體)連接構(gòu)建而成。該ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12與質(zhì)粒pET-28a的結(jié)合位點是EcoR I和HindIII。以土壤宏基因組為模板，以設(shè)計含酶切位點的引物ata-w12F/ata-w12R通過PCR擴(kuò)增，得到ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12。

PCR擴(kuò)增體系如下(50μL)：2×Taq Plus Master PCR Mix 25μL，引物2μL，模板2μL，加ddH2O補足至25μL。PCR擴(kuò)增條件：94℃5min；94℃30sec，55℃30sec，72℃3min，30個循環(huán)；72℃5min。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳驗證大小以及膠回收純化。具體步驟按照FAVORGEN DNA瓊脂糖凝膠回收試劑盒，回收的基因片段和pET-28a質(zhì)粒37℃下進(jìn)行雙酶切?；厥彰盖衅尾⒂?6℃連接過夜，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，均勻涂布在卡那霉素抗性平板上，37℃倒置培養(yǎng)16h，挑取單菌落驗證為陽性克隆后經(jīng)LB培養(yǎng)基培養(yǎng)后提取質(zhì)粒，獲得ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12與質(zhì)粒pET-28a的重組質(zhì)粒ata-w12-pET-28a。

3.含有ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的重組基因工程菌株的構(gòu)建

將上述實施例2獲得的重組質(zhì)粒ata-w12-pET-28a轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞(天根生物有限公司)，均勻涂布在卡那霉素抗性平板上，37℃倒置培養(yǎng)16h，挑取單菌落驗證為陽性克隆后經(jīng)LB培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得重組基因工程菌株。

4.ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12蛋白的表達(dá)和純化

4.1將上述構(gòu)建的重組基因工程菌株接種于含LB(+50μg/mL kanamycin)培養(yǎng)基的試管中，37℃搖床培養(yǎng)12h。

4.2以1％的接種量接種到新鮮的液體LB(+100μg/mL kanamycin)培養(yǎng)基中，200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下37℃搖至OD[600]＝0.6，加IPTG至100μM/mL，20℃誘導(dǎo)20h。

4.3菌液在4℃、8000rpm/min離心5min，收集菌體。生理鹽水(0.85％g/L NaCl)清洗一次，4℃、8000rpm/min離心5min，收集菌體。將菌體用含有0.1mM PLP的Tris-HCL(pH 8.5)重懸，于低溫水浴中超聲破碎，將破碎后的粗酶液8000rpm離心10min后，吸取上清用Ni NTA Beads(Smart-Lifesciences)純化，超濾脫鹽濃縮，獲得目的蛋白，即ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12。

4.4對獲得的目的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果如圖4所示，ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12在大腸桿菌中表達(dá)，在TPI-250(含0.1mM PLP)洗脫條件下純化后為單一條帶。

該ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，共468個氨基酸，其理論分子量為51kDa。

5.ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)pH值分析

本發(fā)明的重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)pH在6.0-10.5范圍內(nèi)測定。檢測的反應(yīng)體系(200μL)為：不同pH值緩沖溶液，2.5mM丙酮酸和2.5mM(S)-α-甲基芐胺，3.92×10^-7g純蛋白(即重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12)，37℃條件下反應(yīng)5min，在245nm波長下測定吸收值。測定所使用的緩沖液為：100mM磷酸鈉緩沖液(pH 6.0-8.0)，100mM Tris-HCl緩沖液(pH 8.0-9.0)，100mM甘氨酸-NaOH緩沖液(pH 9.0-10.0)。測定結(jié)果如圖5所示，表明：重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適pH為pH 8.5的Tris-HCl緩沖溶液，在pH8.0-10.0范圍內(nèi)均具有較高活性。

6.ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)溫度分析

本發(fā)明的重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)溫度在4-70℃范圍內(nèi)測定。檢測的反應(yīng)體系(200μL)為：100mMTris-HCl緩沖溶液(pH 8.5)，2.5mM丙酮酸和2.5mM(S)-α-甲基芐胺，3.92×10^-7g純蛋白(即重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12)，分別在4、20、30、40、50、60、65、70℃下反應(yīng)5min，測定結(jié)果如圖6所示，對ATA-W12最適反應(yīng)溫度分析發(fā)現(xiàn)ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)溫度為40℃，40℃和50℃下酶活基本一致，40℃時酶活性不會隨著反應(yīng)時間的改變而降低，而在大于50℃的反應(yīng)體系中酶活開始下降，70℃時酶幾乎失去活性。綜上所述，重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的最適反應(yīng)溫度為40℃。

7.重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的酶學(xué)穩(wěn)定性分析

重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的熱穩(wěn)定性在40-70℃范圍內(nèi)測定，檢測方法為：將純化的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12酶液分別保溫在40、50、60、70℃條件下，然后間隔同樣時間取樣測定殘余酶活，檢測的反應(yīng)體系(200μl)為：100mMTris-HCl緩沖溶液(pH 8.5)，2.5mM丙酮酸和2.5mM(S)-α-甲基芐胺，3.92×10^-7g純蛋白(即重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12)，在245nm波長下測定吸收值，分別在40℃下反應(yīng)5min，測定結(jié)果如圖7所示，表明：40℃時，168h酶活不減反增；50℃時，68h酶活下降到34.46％，168h降至5.54％；60℃時3h完全失活，70℃時1h就完全失活。

綜上所述，該ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12具有優(yōu)良的酶學(xué)性質(zhì)，催化溫度范圍為20-60℃，催化還原pH值為8.0-10.0。

8.重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12的底物譜分析實驗

該實驗的目的是檢測對根據(jù)上述實施例4所獲得的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12具有活性的底物。檢測的反應(yīng)體系(200μl)為：100mMTris-HCl緩沖溶液(pH8.5)，2.5mM氨基受體和2.5mM(S)-α-甲基芐胺，3.92×10^-7g純蛋白(即重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12)，在245nm波長下測定吸收值，分別在40℃下反應(yīng)5min，測定結(jié)果如表1所示，以模式氨基受體丙酮酸的酶活作為100％。重組ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12對丙酮酸的活性最高，對酮酯類物質(zhì)具有較好的活性，其中，對丙酮酸甲酯和丙酮酸乙酯的活力較高，丙酮酸甲酯的相對酶活達(dá)到94.6％，丙酮酸乙酯的相對活力高達(dá)94.09％，而對芳香酮和脂肪酮類物質(zhì)活性較低。

表1

9.ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12催化生成(S)-N-Boc-3-氨基哌啶

將上述實施例3獲得的含有ω-轉(zhuǎn)氨酶基因ata-w12的重組基因工程菌株培養(yǎng)所得濕菌體ATA-W12作為催化劑在100mL的三口燒瓶中進(jìn)行自動加樣，2M異丙胺水溶液控制pH 8.5。反應(yīng)體系(50mL)：pH 8.5Tris-HCl、ATA-W12濕菌體(1g/10mL)、500mM N-Boc-3-哌啶酮、2mL DMSO、1.5M酸化異丙胺、0.2mM PLP于40℃水浴鍋中，以300rpm/min的速度攪拌，隔1h取樣，取三次平行樣，用高效液相色譜檢測(ZORBAX Extend-C18柱，4.6×250mm×5μm，流動相:28％乙腈:72％水(0.1％TFA)，流速0.8mL/min，柱溫37℃，進(jìn)樣量5μL，UV 210nm檢測，底物N-Boc-3-哌啶酮出峰時間13min，產(chǎn)物N-Boc-3-氨基哌啶出峰時間3.8min)，反應(yīng)進(jìn)程曲線如圖8所示。500mM N-Boc-3-哌啶酮通過ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12催化8h得到(S)-N-Boc-3-氨基哌啶，轉(zhuǎn)化率為100％。反應(yīng)結(jié)束后，取樣品用五倍體積的乙酸乙酯萃取兩次加無水硫酸鈉干燥過夜，后溶于異丙醇中，利用高效液相色譜(Chiralcel AD-H，流動相：正己烷/乙醇＝90:10v/v，1mL/min，柱溫30℃，UV 210nm檢測)測得ee值>99.95％。對映體過量值：ee(％)＝(R-S)/(R+S)×100％，其中R、S分別為兩種對映體含量。轉(zhuǎn)化率(C)＝(產(chǎn)物量/底物量)×100％。反應(yīng)液用等體積的乙酸乙酯萃取三次，合并萃取相，12000rpm/min離心10min，取有機相30℃減壓蒸餾回收乙酸乙酯，得到淡黃色油狀液體為(S)-N-Boc-3-氨基哌啶的粗品。

以上所述的，僅為本發(fā)明的較佳實施例，并非用以限定本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的上述實施例還可以做出各種變化。即凡是依據(jù)本發(fā)明申請的權(quán)利要求書及說明書內(nèi)容所作的簡單、等效變化與修飾，皆落入本發(fā)明專利的權(quán)利要求保護(hù)范圍。本發(fā)明未詳盡描述的均為常規(guī)技術(shù)內(nèi)容。

序列表

<110> 華東理工大學(xué)

<120> 一種S型的ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12及其基因和應(yīng)用

<160> 4

<210> 1

<211> 1407

<212> DNA

<213> 棉花地土壤宏基因組

<220>

<221> gene

<222>

<223> ω-轉(zhuǎn)氨酶ATA-W12基因

<400> 1

atgaccgccc ccctccgcaa ccacgacatc gccgagctca agcgcctgga cctggcccac 60

cacctgccgg cccaggccga tcacaaggtc atcgccgagc agggcggaag ccggatcatc 120

acccgcgccg agggcgtcta catccatgac ggcgagggcc atcagatcct cgacggcatg 180

gccgggctgt ggtgcgtgaa cgtcggctac ggtcgcgagg aactggccaa ggccgcctac 240

gaccagatgc tggagctgcc ctactacaat acgttcttca agaccgcgac gccgccgccg 300

atcgagctgg cggccaagat cgcgcagaag atgggcgggc atctttccca cgtcttctac 360

aattcgtcgg ggtcggaggc gaacgacacg gtcttccgcc tggtgcgcca cttttggaag 420

ttgaaggggg agccaagccg cacggtcttc atcagccgct ggaacgccta tcacggctcg 480

acggtggcgg gcgtcagcct gggcggcatg aagcacatgc acaagcaggg cgacctgccg 540

atcgccggcg tcgagcatgt gatgcagccc taccagttcg gcgacggctt cggcgaggat 600

ccggccgcct tccgcgaccg ggcggtgcag gccatcgagg acaagatcct ggaagtcggg 660

cccgagaacg tcgcggcctt catcggcgag ccggtgcagg gcgcgggcgg ggtgatcatc 720

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<213> 棉花地土壤宏基因組

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<223>上海捷瑞生物工程有限公司

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