本發(fā)明涉及生物領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及戈登氏菌、用途及生產(chǎn)類胡蘿卜素的方法。
背景技術(shù)：
：類胡蘿卜素是常見的一類天然色素家族，包含多種類型，目前已鑒定的超過600種。因其具有單線態(tài)氧及自由基清除能力而表現(xiàn)出明顯的抗氧化能力，在延緩和預(yù)防動脈粥樣硬化、癌癥、老化和眼部疾病等均表現(xiàn)出了顯著的效果。做為類胡蘿卜素的一種，蝦青素具有極高的研究價(jià)值，特別是在自由基清除能力方面，其比β-胡蘿卜素強(qiáng)38倍，比維生素E強(qiáng)500倍。因此，蝦青素也能夠降低與年齡性退行性疾病和局部缺血性疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并可預(yù)防部分癌癥并提高免疫能力。在獲取蝦青素的來源中，角黃素是為蝦青素合成的重要前體，同樣具有較強(qiáng)的抗氧化性而得到廣泛關(guān)注。目前，類胡蘿卜素的生產(chǎn)主要來源于細(xì)菌、真菌及微藻。然而，為了豐富抗氧化色素的來源途徑，新型類胡蘿卜素表達(dá)物種仍有待進(jìn)一步開發(fā)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本申請是發(fā)明人基于對如下問題和事實(shí)的發(fā)現(xiàn)而提出的：發(fā)明人從雨生紅球藻的共生微生物中進(jìn)行了菌株的單克隆篩選，成功分離到一株陽性菌株，該菌株具有產(chǎn)類胡蘿卜素等色素的能力。發(fā)明人進(jìn)一步通過16S分子鑒定確認(rèn)該菌株為戈登氏菌(Gordoniaterrae)。為了進(jìn)一步獲取其產(chǎn)物信息，發(fā)明人對其產(chǎn)物進(jìn)行了高效液相色譜的化學(xué)分析，并優(yōu)化了產(chǎn)物的表達(dá)條件，同時對菌株的特性和產(chǎn)物的抗氧化性進(jìn)行了綜合評估，發(fā)現(xiàn)該菌株的代謝產(chǎn)物具有很好的抗氧化性，且在高溫及低濃度氧化劑存在下具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性。由此，在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種戈登氏菌(Gordoniaterrae)，于2016年9月5日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCCNo.60075，分類命名為：戈登氏菌(Gordoniaterrae)，保藏地址為：廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所。該菌株是發(fā)明人首次從雨生紅球藻的共生微生物中分離獲得的，該菌株具有產(chǎn)類胡蘿卜素的能力，且產(chǎn)生的類胡蘿卜素的抗氧化能力強(qiáng)，在高溫和低濃度氧化劑存在下，具有強(qiáng)的穩(wěn)定性。在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了前面所述的戈登氏菌在生產(chǎn)類胡蘿卜素中的用途。發(fā)明人通過高效液相色譜(UPLC)的化學(xué)分析對前面所述的戈登氏菌的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)，此株戈登氏菌的代謝產(chǎn)物中含有豐富的類胡蘿卜素。利用前面所述的戈登氏菌在生產(chǎn)類胡蘿卜素，具有生產(chǎn)周期短、成本低、易于基因工程改造等優(yōu)勢。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述用途還可以進(jìn)一步包括如下附加技術(shù)特征至少之一：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述類胡蘿卜素包括選自蝦青素、角黃素、σ-胡蘿卜素的至少之一。發(fā)明人通過比對上述菌株的代謝產(chǎn)物和類胡蘿卜標(biāo)準(zhǔn)品的UPLC分析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)，上述菌株的代謝產(chǎn)物中含有少量的角黃色、微量的蝦青素和σ-胡蘿卜素，以及大量的其它類胡蘿卜素或其衍生物。在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種生產(chǎn)類胡蘿卜素的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：在適于類胡蘿卜素表達(dá)的條件下，培養(yǎng)前面所述的戈登氏菌，以便獲得含有所述類胡蘿卜素的培養(yǎng)物，可選地，所述類胡蘿卜素包括選自蝦青素、角黃素、σ-胡蘿卜素的至少之一。利用根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的生產(chǎn)類胡蘿卜素的方法，能夠高效、高產(chǎn)地獲得類胡蘿卜素。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述方法還可以進(jìn)一步包括如下附加技術(shù)特征至少之一：根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)是在LB培養(yǎng)基中進(jìn)行的，所述LB培養(yǎng)基中含有0.05～1％NaCl、0.025～0.5％酵母粉和0.05～1％蛋白胨。其中，前面的百分比表示質(zhì)量體積比，即0.05～1％NaCl表示100mlLB培養(yǎng)基中含有0.05～1g的NaCl，0.025～0.5％酵母粉表示100mlLB培養(yǎng)基中含有0.025～0.5g的酵母粉，0.05～1％蛋白胨表示100mlLB培養(yǎng)基中含有0.05～1g的蛋白胨。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在上述LB培養(yǎng)基中，所述戈登氏菌的生物量較高，代謝產(chǎn)物-類胡蘿卜素的單位產(chǎn)量較高，并且所述戈登氏菌的生物量隨營養(yǎng)成分的提高而提高，類胡蘿卜素的單位含量在低營養(yǎng)濃度條件下相對較高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述LB培養(yǎng)基中含有1％NaCl、0.5％酵母粉和1％蛋白胨。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，LB培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分在上述濃度下，類胡蘿卜素總產(chǎn)量相對最高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)是在低氧脅迫下進(jìn)行的。需要說明的是，“低氧脅迫”是指環(huán)境中的氧氣含量低于正常水平。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在低氧脅迫環(huán)境下，對該株戈登氏菌的生物量不會產(chǎn)生顯著的影響，但會刺激代謝產(chǎn)物的合成，總體代謝產(chǎn)物的合成量在低氧脅迫環(huán)境下有所提高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述LB培養(yǎng)基中進(jìn)一步含有225μMFeSO4和22.5mMSA。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)培養(yǎng)基中中含有225μMFeSO4和22.5mMSA時，可以營造一個較低的低氧脅迫環(huán)境，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在此環(huán)境下，該株戈登氏菌的代謝產(chǎn)物的單位含量顯著提高，代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量顯著提高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)基的pH為5～9。發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基的pH在5～9時，該株戈登氏菌的生物量較高，代謝產(chǎn)物的單位含量較高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)基的pH為9。發(fā)明人通過培養(yǎng)基pH的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH為9時，該株株戈登氏菌的代謝產(chǎn)物的單位含量顯著提高，代謝產(chǎn)物的總產(chǎn)量顯著提高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)是在30～37℃下進(jìn)行的。發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在30～37℃下，該株戈登氏菌的生物量較高，代謝產(chǎn)物的單位含量較高，且在此溫度范圍內(nèi)，戈登氏菌的生物量隨溫度的升高而升高，代謝產(chǎn)物的單位含量隨溫度的升高而降低。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)優(yōu)選在30℃下進(jìn)行。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在30℃下培養(yǎng)該株戈登氏菌，其代謝產(chǎn)物的單位含量顯著提高，其代謝產(chǎn)物的總含量顯著提高。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)的時間是3天。發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)3天是積累類胡蘿卜素的最適時間，培養(yǎng)3天類胡蘿卜素的單位含量達(dá)到最大值。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)是通過如下方式實(shí)現(xiàn)的：將所述戈登氏菌與培養(yǎng)基在30℃的條件下進(jìn)行3小時接觸，其中，所述培養(yǎng)基為包含1％NaCl、0.5％酵母粉、1％蛋白胨、225μMFeSO4和22.5mMSA的LB培養(yǎng)基，所述LB培養(yǎng)基的pH為9。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，在上述培養(yǎng)方式下，所述戈登氏菌的代謝產(chǎn)物-類胡蘿卜的總產(chǎn)量顯著提高。另外，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述生產(chǎn)類胡蘿卜素的方法進(jìn)一步包括：從獲得的含有所述類胡蘿卜素的培養(yǎng)物中分離和提取類胡蘿卜素。分離和提取類胡蘿卜素的方法不受特別限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)常規(guī)技術(shù)手段，依據(jù)實(shí)驗(yàn)室或工業(yè)生產(chǎn)的需求，進(jìn)行選擇。附圖說明圖1是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1的從雨生紅球藻藻際微生物中分離得到的陽性菌種的圖；圖2是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例2的UPLC鑒定結(jié)果圖；圖3是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3的不同營養(yǎng)梯度對生物量和主要成分單位含量的影響圖；圖4是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3的不同溫度對菌種生物量和主要成分單位含量的影響圖；圖5是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3的不同pH對菌種生物量和主要成分單位含量的影響圖；圖6是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3的不同培養(yǎng)時間對菌種生物量和主要成分單位含量的影響圖；圖7是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例3的不同氧脅迫條件下對菌種生物量和主要成分單位含量的影響圖；圖8是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例4的菌株抗氧化能力的檢測結(jié)果圖；圖9是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例5的對菌種提取物進(jìn)行紫外吸收全波長掃描的結(jié)果圖；圖10是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例5的高溫對產(chǎn)物穩(wěn)定性的影響圖；以及圖11是根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例5的氧化劑H2O2對提取物穩(wěn)定性的影響圖。具體實(shí)施方式下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實(shí)施例1在本實(shí)施例中，發(fā)明人詳細(xì)介紹了戈登氏菌分離和鑒定過程。1.1實(shí)驗(yàn)材料戈登氏菌(Gordoniaterrae)，分離自雨生紅球藻的共生微生物。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1藻際微生物篩選取1mL藻液，10000rpm離心1min。無菌水清洗2次后加入1mL無菌水超聲震蕩1min；10000rpm離心1min。取100μL上清液涂布于LB固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h。挑取菌落在LB固體培養(yǎng)基劃線培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h后，挑取單克隆保種，圖1顯示了從雨生紅球藻藻際微生物中分離得到的陽性菌種的圖。1.2.2菌種鑒定利用16SrDNA進(jìn)行菌種鑒定，并采用微量生化鑒定管(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)對該菌種進(jìn)行生理生化功能方面的鑒定。菌種的16SrDNA如SEQIDNO：1所示，TGGCACGGCGGACAGTAATCGATAAAAGCTTACCTCCCACAAGGGGTTTAGGCCACCGGCTTTCGGGTGTTACCGACTTAAATGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCGTTGCTGATCTGCGATTACTAGCGACTCCGACTTCATGGGGTCGAGTTGCAGACCCCAATCCGAACTGAGACTGGCTTTAAGGGATTCGCTCCACCTCACGGTATCGCAGCCCTCTGTACCAGCCATTGTAGCATGTGTGAAGCCCTGGACATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCTCCTGCAAGTCCCCGGCATAACCCGCTGGCAATACAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTACACCAACCACAAGGGAACGACTATCTCTAGCCGCGTCTGGTGTATGTCAAACCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGTACTTAATGCGTTAGCTACGCACGGATCCCGTGAAAAGGAACCCACACCTAGTACCCACCGTTTACGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACTACCCAGAGACCCGCCGTCGCCACCGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGAAATTCCAGTCTCCCCTGTAGTACTCAAGTCTGCCCGTATCGCCTGCACGCCTGCAATTGAGTTGCAGAATTTCACAGACGACGCGACAAACCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAGTAATTCCGGACAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTGGCCGGTGCTTCTTCTCCAGGTACCGTCACTCACGCTTCGTCCCTGGTGAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTAGGCCATTACCCCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGGGCCCATCCCACACCGCAAAAGCTTTCCACCAACCACCATGCGACAGTTGGTCATATCCGGTATTAGACCCAGTTTCCCAGGCTTATCCCAGAGTGCAGGGCAGATCACCCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTCGGAGTACCCAAGCAAGCTGGGCCTTTCCGTTCGAACTTGCAATTGGGTGCCACCGGACCTCGAC(SEQIDNO：1)。上述序列經(jīng)NCBI比對，相似性為99％，確認(rèn)為戈登氏菌(Gordoniaterrae)。菌株生理生化結(jié)果如表1所示，其中，陽性用“+”，陰性用“-”表示。表1實(shí)驗(yàn)結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)論葡萄糖生化鑒定+醋酸鹽生化鑒定-乳糖生化鑒定-尿素生化鑒定試劑-麥芽糖生化鑒定+丙二酸鹽生化鑒定-甘露醇生化鑒定-β-半乳糖苷(ONPG)生化鑒定-蔗糖生化鑒定+葡萄糖酸鹽生化鑒定-果糖生化鑒定-苯丙氨酸生化鑒定-木糖生化鑒定-葡萄糖銨生化鑒定-半乳糖生化鑒定-鳥氨酸脫羧酶生化鑒定-山梨醇生化鑒定-賴氨酸脫羧酶生化鑒定-肌醇生化鑒定-精氨酸脫羧酶生化鑒定-水楊素生化鑒定-蛋白胨水生化鑒定-硝酸鹽還原生化鑒定+葡萄糖磷酸鹽胨水生化鑒定+從表1結(jié)果可以看出該菌株可以利用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖作為碳源；并具有脲酶活性，可分解利用尿素。同時，根據(jù)葡萄糖磷酸鹽胨水生化鑒定實(shí)驗(yàn)表明該菌種在代謝過程可以產(chǎn)酸，使甲基紅試劑變紅。另一方面，該菌種也具有硝酸鹽還原性。該結(jié)果為菌種培養(yǎng)基的改良，特別是在碳源、氮源方面的調(diào)控提供了指導(dǎo)意義。實(shí)施例2在本實(shí)施例中，發(fā)明人詳細(xì)介紹了菌株的培養(yǎng)物的提取和鑒定過程。將實(shí)施例1所得菌種接入LB液體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h。15000g離心5min，冷凍干燥后稱重。加入有機(jī)溶劑(甲醇:二氯甲烷＝3:1)超聲破碎20min，離心，取上清。上清液40℃條件下真空旋蒸，加入乙腈定容。采用超高效液相色譜儀(UPLC，Waters)對提取物進(jìn)行檢測。同時與蝦青素、角黃素、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和σ-胡蘿卜素的標(biāo)準(zhǔn)品的UPLC色譜圖進(jìn)行對比鑒定。UPLC的色譜條件如下所述：WatersBEHC18柱(2.1×50mm，1.7μm)，流動相為甲醇(A)與乙腈(B)，洗脫條件：10％A，90％B；20％A，80％B；30％A，70％B，線性洗脫，流速為0.4mL/min；柱溫為35℃；紫外檢測450nm。UPLC鑒定結(jié)果如圖2所示，其中，A為提取物樣品的色譜圖，B為標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖，峰1.蝦青素，峰2.角黃素，峰3.σ-胡蘿卜素，峰4.α-胡蘿卜素，峰5.β-胡蘿卜素。從UPLC檢測結(jié)果中可以看出，在保留時間上，樣品中峰1與蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品一致，峰2與角黃素標(biāo)準(zhǔn)品一致，峰3與σ-胡蘿卜素一致。表明該株戈登氏菌種可以合成少量的角黃素以及微量的蝦青素和σ-胡蘿卜素。樣品中峰4為菌種提取物中含量最高的物質(zhì)，其為某種類胡蘿卜素或類胡蘿卜素衍生物。實(shí)施例3在本實(shí)施例中，發(fā)明人設(shè)置不同的營養(yǎng)濃度、溫度梯度、PH梯度、培養(yǎng)時間以及氧脅迫濃度等培養(yǎng)條件，從而在不同培養(yǎng)條件下對菌種進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而考察不同條件對生物量及主要產(chǎn)物含量的影響，優(yōu)選出最佳的發(fā)酵表達(dá)條件。其中以天平連續(xù)稱取3次恒重為生物量測定值。3.1營養(yǎng)濃度實(shí)驗(yàn)以LB培養(yǎng)基(1％NaCl、0.5％酵母粉、1％蛋白胨)為基礎(chǔ)，分別設(shè)置0.01倍、0.05倍、0.1倍、0.5倍、1倍和2倍濃度梯度。不同營養(yǎng)梯度對生物量和主要成分單位含量的影響如圖3所示。從圖3可以看出，隨著營養(yǎng)濃度的升高，菌種生物量顯著增加。但圖3表明，低營養(yǎng)濃度(0.05倍、0.1倍)條件下主要產(chǎn)物的單位含量高于高濃度營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組，說明在低營養(yǎng)濃度產(chǎn)生的應(yīng)激環(huán)境下會誘導(dǎo)該株戈登氏菌合成類胡蘿卜素。但綜合考慮到菌種生物量，適宜采用正常濃度的LB培養(yǎng)基(1％NaCl、0.5％酵母粉、1％蛋白胨)進(jìn)行培養(yǎng)。3.2溫度實(shí)驗(yàn)設(shè)置30℃、37℃和45℃三種溫度梯度，考察結(jié)果如圖4所示。圖4結(jié)果顯示，溫度的升高促進(jìn)了菌種生物量的增加，但主要產(chǎn)物的單位含量隨著溫度的升高而降低，呈現(xiàn)出顯著性差異(P<0.05)。綜合考慮后，適宜采用30℃條件下培養(yǎng)該菌株，以獲得最大量的代謝產(chǎn)物。3.3pH值實(shí)驗(yàn)設(shè)置了從酸性到堿性的培養(yǎng)條件(即pH3、pH5、pH7、pH9和pH11五種梯度)，考察結(jié)果如圖5所示。從圖5結(jié)果顯示，在PH為7時，生物量達(dá)到最大，當(dāng)培養(yǎng)條件偏離中性環(huán)境(變酸或變堿)時，生物量顯著降低，表明酸性或堿性條件不利于細(xì)菌的生長。但在偏酸(PH＝5)或偏堿(PH＝9)條件下，主要產(chǎn)物的單位含量卻顯著升高，特別是在PH＝9條件下達(dá)到最大值(P<0.05)。綜合考慮后，適宜采用PH＝9條件下培養(yǎng)該菌株，以獲得最大量的代謝產(chǎn)物。3.4培養(yǎng)時間實(shí)驗(yàn)設(shè)置了1d、3d、5d和7d四種時間梯度，考察結(jié)果如圖6所示。隨著培養(yǎng)時間的增加，菌種生物量逐漸增加。但在培養(yǎng)3天時，主要產(chǎn)物的單位含量達(dá)到最大值(P<0.05)，表明培養(yǎng)3天是該菌種積累類胡蘿卜素的最適時間；而隨著時間的推移，主要產(chǎn)物的單位含量下降，可能是菌種已失去最適生理狀態(tài)，類胡蘿卜素合成過程中所需酶失活，從而導(dǎo)致含量降低。3.5氧脅迫實(shí)驗(yàn)向培養(yǎng)基中加入450μMFeSO4和45mMSA以制造氧脅迫條件，設(shè)置0.5倍、1倍和2倍濃度實(shí)驗(yàn)組，以不加入氧脅迫試劑作為對照組，考察結(jié)果如圖7所示。圖7結(jié)果表明，氧脅迫對于菌種生物量沒有顯著影響，但在225μMFeSO4和22.5mMSA的條件下，主要產(chǎn)物的單位含量顯著升高(P<0.05)，表明在較低氧脅迫條件會明顯刺激其代謝產(chǎn)物的合成。實(shí)施例4產(chǎn)物抗氧化能力鑒定根據(jù)Dong等人的方法(DongS，HuangY，ZhangR，etal.FourdifferentmethodscomparisonforextractionofastaxanthinfromgreenalgaHaematococcuspluvialis.[J].TheScientificWorldJournal，2014:694305)，采用DPPH自由基清除率方法檢測菌株提取物的抗氧化性，以雨生紅球藻提取物及蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品(1mg/L)作為對照。結(jié)果如圖8所示。圖8可以看出，相同濕重的菌種提取物與雨生紅球藻提取物的抗氧化能力相當(dāng)，DPPH自由基清除率在20％左右；但顯著低于1mg/L的蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)證明該菌種提取物具有較強(qiáng)的抗氧化能力。實(shí)施例5產(chǎn)物穩(wěn)定性鑒定對菌種提取物進(jìn)行紫外吸收全波長掃描，結(jié)果如圖9所示，結(jié)果顯示該提取物在470nm處有最大吸收值。進(jìn)行穩(wěn)定性檢測時，以470nm處的紫外吸收值的變化作為定量標(biāo)準(zhǔn)?？疾飚a(chǎn)物在高溫條件(50℃、60℃、70℃)和高氧化劑環(huán)境中的穩(wěn)定性(設(shè)置終濃度為0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％的H2O2)。操作中將提取的菌株產(chǎn)物分別與上述條件中放置0.5h、1h、1.5h、2h和4h，檢測產(chǎn)物吸光度的變化。每個濃度設(shè)置3個重復(fù)。5.1高溫對產(chǎn)物穩(wěn)定性的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)置了50℃、60℃、70℃三個溫度梯度，分別在0.5h、1h、1.5h、2h和4h時取樣檢測470nm處的吸收值，考察結(jié)果如圖10所示。從圖10中可以看出產(chǎn)物的吸光度隨著溫度的升高而降低，特別是在70℃的條件下放置4h后，其吸光度仍具有初始值的92.3％，表明該產(chǎn)物在高溫下具有很強(qiáng)的穩(wěn)定性。5.2氧化劑H2O2對提取物穩(wěn)定性的影響實(shí)驗(yàn)設(shè)置了0.1％、0.2％、0.5％、1％、2％五個H2O2濃度梯度，分別在0.5h、1h、1.5h、2h和4h時取樣檢測470nm處的吸收值，并計(jì)算每個實(shí)驗(yàn)組相對以加入超純水作為對照的百分比。結(jié)果如圖11所示。結(jié)果顯示，當(dāng)H2O2的濃度在0.1％-1％時，產(chǎn)物的吸光度未見顯著變化，而當(dāng)H2O2的濃度達(dá)到2％時，產(chǎn)物的吸光度顯著下降，表明在較高濃度的氧化劑存在下，產(chǎn)物的穩(wěn)定性遭到破壞。在本說明書的描述中，參考術(shù)語“一個實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個實(shí)施例或示例中。在本說明書中，對上述術(shù)語的示意性表述不必須針對的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任一個或多個實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說明書中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。當(dāng)前第1頁1 2 3