本發(fā)明涉及一種從工業(yè)大麻中提取大麻二酚的方法，特別涉及一種從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚的方法。

背景技術(shù)：

大麻(學(xué)名：Cannabis sativa L.)大麻科、大麻屬植物，又名麻、漢麻、火麻、山絲苗、黃麻，具有重要的農(nóng)用及藥用價值。大麻中含有一種毒性成分THC(四氫大麻酚)可使人致幻成癮，可作毒品，曾在相當(dāng)長時期內(nèi)禁種。

由于大麻的經(jīng)濟、藥用價值極高，專供工業(yè)用途的原料大麻簡稱為“工業(yè)大麻”，其生長期大麻花葉中的四氫大麻酚(THC)含量小于千分之三，不具備提取毒性成分四氫大麻酚的價值或直接作為毒品吸食，可以合法進(jìn)行規(guī)?；N植與工業(yè)化開發(fā)利用。

目前，人們已從大麻植株中分離出了500余種物質(zhì)，其中大麻酚類化合物至少有86種。大麻酚類化合物是大麻植株中特有的一類物質(zhì)，是大麻植物中主要的活性成分，有關(guān)它的研究一直是大麻研究的熱點。大麻植株中主要的大麻酚類化合物有四氫大麻酚(THC)、大麻酚(CBN)、大麻二酚(CBD)、大麻萜酚(CBG)、大麻環(huán)萜酚(CBC)等，其中前三者占大麻酚類化合物的90％以上。

近年來，通過對大麻活性成分的研究發(fā)現(xiàn)，大麻二酚(cannabidiol)不具有神經(jīng)毒性，藥用價值明顯。相關(guān)的藥理研究表明，其能阻礙四氫大麻酚對人體神經(jīng)系統(tǒng)的影響，并具有抗痙攣、抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗焦慮等藥理活性，具有巨大產(chǎn)業(yè)開發(fā)價值。

目前，公開信息中有一些關(guān)于從工業(yè)大麻中提取大麻二酚的方法的報道，其中與本發(fā)明最為接近的現(xiàn)有技術(shù)為：發(fā)明專利“從工業(yè)大麻中提取二氫大麻酚(CBD)工藝”(專利申請?zhí)枺?01410052776.8)。

通過對比研究，現(xiàn)有技術(shù)中所提及的從工業(yè)大麻中提取大麻二酚的方法，主要存在以下問題：

1)因原植物中大麻酚類成分復(fù)雜，極性相似成分較多，采用傳統(tǒng)方法提取、精制后，最終產(chǎn)品中大麻二酚純度不高。

2)提取純化后，仍可檢出精神毒性成分四氫大麻酚，產(chǎn)品安全性不能得到保證，產(chǎn)品流通受限，影響工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。

3)因大麻二酚在有機溶劑中的溶解度高于在乙醇中，故，為了提高大麻二酚的產(chǎn)率，行業(yè)中通常在提取、萃取、純化等工藝步驟中采用石油醚、正己烷、二氯甲烷等有毒有機溶劑。但此類有機溶劑的使用會對環(huán)境產(chǎn)生危害，而且終產(chǎn)品中溶劑殘留不能除盡，對產(chǎn)品安全性也有影響。

因此，目前亟需提供一種制備高純度且無四氫大麻酚的大麻二酚的方法，并且無不良有機溶劑殘留，該制備方法還應(yīng)滿足節(jié)能環(huán)保，經(jīng)濟適用的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在提供一種從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中提取大麻二酚純度不高、精神毒性成分四氫大麻酚殘留的問題。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚的方法。該方法包括以下步驟：1)將工業(yè)大麻的花葉粉碎、烘干，得到藥材粉末；2)將藥材粉末采用30-100v％的乙醇提取，得到提取液；3)將提取液濃縮，得到浸膏；4)將浸膏進(jìn)行水沉，去除雜質(zhì)，得到水沉液；5)將水沉液離心，在離心獲得的沉淀中加入10-100v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析；7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，加入乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；8)將結(jié)晶物，加入純化水或乙醇洗滌，得到初品；9)將步驟8)初品用純化水混勻，干燥，即得大麻二酚。

進(jìn)一步地，步驟1)中工業(yè)大麻花葉粉碎后烘干，包括在60-200℃溫度條件下，烘干0.5-3h，至水分5％以下。

進(jìn)一步地，步驟1)中工業(yè)大麻花葉粉碎至10-80目。

進(jìn)一步地，步驟2)的提取方式包括回流提取、超聲提取和/或浸泡提取，具體如下：

回流提?。翰捎?-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行回流提取1-3次，每次0.5-3h；

超聲提取：采用2-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行超聲提取1-3次，每次0.1-1h；

浸泡提取：采用2-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行浸泡提取1-3次，每次0.5-5h。

進(jìn)一步地，步驟3)具體包括：將提取液濃縮至50℃時測量，相對密度1.05-1.35。

進(jìn)一步地，步驟4)具體包括：采用1-10倍藥材量的純化水，在0-20℃的溫度條件下，水沉1-48h。

進(jìn)一步地，步驟6)中將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析的步驟包括：采用洗脫溶劑對層析柱進(jìn)行梯度洗脫，優(yōu)選洗脫溶劑為乙醇和水，更優(yōu)選梯度洗脫的步驟包括：先用0-30v％的乙醇除雜，再用40-80v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用90-95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生。

進(jìn)一步地，步驟6)中柱層析所用的層析柱的填料包括大孔樹脂、MCI樹脂、十八烷基硅烷鍵合硅膠中的一種或多種。

進(jìn)一步地，大孔樹脂包括AB-8、D-101、XDA-8、LSA-7、D-941、DM-130、ADS-17、SP-825和HPD-600中的一種或多種。

進(jìn)一步地，步驟7)中，還包括對洗脫液中乙醇的回收步驟。

進(jìn)一步地，步驟7)，包括在10-80℃溫度條件下，用60-100v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物。

進(jìn)一步地，步驟8)，具體為：0-24℃溫度條件下，加純化水或5-40v％乙醇洗滌，得到初品。

進(jìn)一步地，步驟9)中，干燥的方式包括噴霧干燥、真空干燥、冷凍干燥、近紅外干燥、微波干燥中的一種或幾種，干燥溫度不超過65℃。

進(jìn)一步地，步驟9)后，進(jìn)一步包括將獲得的大麻二酚粉碎成粉的步驟，優(yōu)選粉碎的方式包括汽流粉碎、和/或冷凍粉碎，進(jìn)一步優(yōu)選粉碎時物料溫度不超過65℃。

應(yīng)用本發(fā)明的技術(shù)方案從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚，通過擯棄現(xiàn)有技術(shù)中對大麻二酚(CBD)溶解度較高的石油醚、正己烷、二氯甲烷等溶劑，而采用溶解度相對低的乙醇作為提取溶劑，并結(jié)合改進(jìn)的提取工藝從而不僅提高了大麻二酚的純度，去除了成品中精神毒性成分四氫大麻酚，使產(chǎn)品安全性得到保障；而且使用的試劑為乙醇和水，減少了對環(huán)境、操作人員、產(chǎn)品溶劑殘留的影響，減少柱層析過程中造成的環(huán)境污染，對人員造成的傷害。此外，層析柱的填料可重復(fù)利用，使總體生產(chǎn)成本降低，且降低填料廢棄物對環(huán)境造成的污染。

附圖說明

構(gòu)成本申請的一部分的說明書附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1示出了產(chǎn)物1的色譜圖；

圖2示出了產(chǎn)物2的色譜圖；

圖3示出了產(chǎn)物3的色譜圖；

圖4示出了產(chǎn)物4的色譜圖；

圖5A、5B和5C分別示出了產(chǎn)物5-1、產(chǎn)物5-2和產(chǎn)物5-3的色譜圖；

圖6A、6B和6C分別示出了產(chǎn)物6-1、產(chǎn)物6-2和產(chǎn)物6-3的色譜圖；

圖7A、7B和7C分別示出了產(chǎn)物7-1、產(chǎn)物7-2和產(chǎn)物7-3的色譜圖；

圖8示出了對比產(chǎn)物1的色譜圖；以及

圖9示出了對比產(chǎn)物2的色譜圖。

具體實施方式

需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。下面將參考附圖并結(jié)合實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。

需要說明的是，本申請中的“2-8倍藥材量”或“1-10倍藥材量”等描述，是指采用的溶劑如乙醇或水的體積是藥材質(zhì)量的2-8倍或1-10倍，比如，藥材粉末為1g，提取溶劑乙醇的用量為2ml-8ml。

現(xiàn)有技術(shù)中大麻二酚的生產(chǎn)純化工藝存在大麻二酚純度不高且含有精神毒性成分四氫大麻酚等問題。針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明的發(fā)明人提出了以下技術(shù)方案。

根據(jù)本發(fā)明一種典型的實施方式，提供一種從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚的方法。該方法包括以下步驟：1)將工業(yè)大麻的花葉粉碎、烘干，得到藥材粉末；2)將藥材粉末采用30-100v％的乙醇提取，得到提取液；3)將提取液濃縮，得到浸膏；4)將浸膏進(jìn)行水沉，去除雜質(zhì)，得到水沉液；5)將水沉液離心，在離心獲得的沉淀中加入10-100v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析；7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，加入乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；8)將結(jié)晶物，加入純化水或乙醇洗滌，得到初品；9)將步驟8)初品用純化水混勻，干燥，即得大麻二酚。

應(yīng)用本發(fā)明的技術(shù)方案從工業(yè)大麻花葉中提取大麻二酚的方法，與現(xiàn)有技術(shù)的相比，提高了大麻二酚(CBD)純度，去除了成品中精神毒性成分四氫大麻酚，使產(chǎn)品安全性得到保障；并且層析柱的填料可重復(fù)利用，使總體生產(chǎn)成本降低，降低廢棄物對環(huán)境造成的污染；使用的試劑為乙醇和水，減少了對環(huán)境、操作人員、產(chǎn)品溶劑殘留的影響，也克服了本領(lǐng)域關(guān)于提取溶劑的選擇與產(chǎn)品得率間的技術(shù)偏見，產(chǎn)生了預(yù)料不到的技術(shù)效果。

本發(fā)明所述的方法，打破了本領(lǐng)域的常規(guī)認(rèn)識，在工藝過程中全程使用乙醇作為提取溶劑，通過對比同樣技術(shù)條件下采用現(xiàn)有有機溶劑進(jìn)行提取的結(jié)果，不僅克服了現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，而且出乎意料地發(fā)現(xiàn)大麻二酚的得率、純度均有明顯提高，且未檢出精神毒性成分四氫大麻酚，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。

上述方法的步驟5)中得到沉淀物的醇溶液的步驟包括：將水沉液離心，棄去上清液，獲得沉淀物；采用10-100v％乙醇對沉淀物進(jìn)行溶解，得到沉淀物的醇溶液。而在上述步驟7)中，濃縮步驟6)得到的洗脫液，并加入乙醇過飽和溶解洗脫液后，進(jìn)行靜置，從而獲得結(jié)晶物。

根據(jù)本發(fā)明一種典型的實施方式，步驟1)中工業(yè)大麻花葉粉碎后烘干，包括在60-200℃溫度條件下，烘干0.5-3h，至水分5％以下。在此種條件烘干效率高，干燥好，且不會破壞有效成分。優(yōu)選的，步驟1)中工業(yè)大麻花葉粉碎至10-80目，從而可以使大麻二酚在后續(xù)的乙醇提取步驟中充分提取出來。

根據(jù)本發(fā)明一種典型的實施方式，步驟2)的提取方式包括回流提取、超聲提取和/或浸泡提取，具體如下：回流提取：采用2-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行回流提取1-3次，每次0.5-3h；超聲提?。翰捎?-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行超聲提取1-3次，每次0.1-1h；浸泡提?。翰捎?-8倍藥材量的乙醇進(jìn)行浸泡提取1-3次，每次0.5-5h。

優(yōu)選的，步驟3)具體包括：將提取液濃縮至50℃測量，相對密度1.05-1.35。優(yōu)選的，步驟4)具體包括：采用1-10倍藥材量純化水，在0-20℃的溫度條件下，水沉1-48h。

優(yōu)選的，步驟6)中將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析的步驟包括：采用洗脫溶劑對層析柱進(jìn)行梯度洗脫；優(yōu)選洗脫溶劑為乙醇和水，更優(yōu)選梯度洗脫的步驟包括：先用0-30v％的乙醇除雜，再用40-80v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用90-95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生。上述梯度洗脫的步驟不僅使得目標(biāo)產(chǎn)物部分純度高，而且使層析柱不斷再生，可循環(huán)使用。

更優(yōu)選地，上述柱層析所用的層析柱的填料為選自大孔樹脂、MCI樹脂、十八烷基硅烷鍵合硅膠中的一種或多種。

本發(fā)明中提到的MCI樹脂，是最近幾年日本三菱化學(xué)在Diaion和Sepabeads大孔樹脂的基礎(chǔ)上設(shè)計的新型樹脂，粒徑只有75-150微米，較小的顆粒有更高的色譜分離性能，用于分離天然產(chǎn)物有獨特的效果。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)其對大麻二酚(CBD)有獨特的選擇性吸附，其再生簡單、可重復(fù)使用，減少成本，工藝重復(fù)性極佳。運用這一新的填料在大麻二酚的純化工藝中，極大的提高了精制后CBD的含量。

根據(jù)本發(fā)明一種典型的實施方式，大孔樹脂包括AB-8、D-101、XDA-8、LSA-7、D-941、DM-130、ADS-17、SP-825和HPD-600中的一種或多種。上述型號的樹脂，價格便宜，再生簡單，用于大麻二酚的初步純化。

根據(jù)本發(fā)明一種典型的實施方式，步驟7)中，還包括對洗脫液中乙醇的回收步驟。

優(yōu)選的，步驟7)，包括在10-80℃溫度條件下，用60-100％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物。優(yōu)選的，步驟8)，具體為：0-24℃溫度條件下，加純化水或者5-40％乙醇洗滌，得到初品。

優(yōu)選的，步驟9)中，干燥的方式包括噴霧干燥、真空干燥、近紅外干燥、微波干燥中的一種或幾種，干燥溫度不超過65℃。

優(yōu)選的，步驟9)后，進(jìn)一步包括將獲得的大麻二酚粉碎成粉的步驟，優(yōu)選粉碎的方式包括汽流粉碎和/或冷凍粉碎，進(jìn)一步優(yōu)選粉碎時物料溫度不超過65℃。

下面將結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果。

實施例1

本發(fā)明所述方法制備大麻二酚

本實驗提供了采用本發(fā)明所述方法，在不同技術(shù)參數(shù)條件下，制備大麻二酚，本實驗中采取的工業(yè)大麻花葉的量均為10千克。

方法1：

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過80目篩，得到藥材粉末。在60℃溫度條件下，烘干3h，通過檢測，其水分含量為4％。

2)將上述藥材粉末采用2倍量、30v％的乙醇、回流提取3次，每次0.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.05，得到浸膏；

4)將上述浸膏用1倍純化水，在溫度20℃條件下，水沉1h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入100v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為AB-8，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用30v％的乙醇洗脫除雜，再用80v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.15，在溫度10℃下，用100v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，在溫度0℃條件下，加純化水洗滌，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物1。

方法2：

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過10目篩，得到藥材粉末。在200℃溫度條件下，烘干0.5h，通過檢測，其水分含量為2.7％。

2)將上述藥材粉末采用2倍量、100v％的乙醇、超聲提取1次，每次1h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.35，得到浸膏；

4)將上述浸膏用10倍純化水，在溫度0℃條件下，水沉48h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入10v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為MCI樹脂，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用10v％的乙醇洗脫除雜，再用40v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用90v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.25，在溫度80℃下，用60v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度24℃條件下，加5v％乙醇洗滌，得到初品；

9)將步驟8)所述初品用純化水混勻，冷凍干燥，即得大麻二酚。

10)采用冷凍粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物2。

方法3：

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過40目篩，得到藥材粉末。在130℃溫度條件下，烘干1.7h，通過檢測，其水分含量為3.1％。

2)將上述藥材粉末采用5倍量、60v％的乙醇、浸泡提取2次，每次2.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.2，得到浸膏；

4)將上述浸膏用5倍純化水，在溫度10℃條件下，水沉24h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速7500轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入60v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為ODS，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用25v％的乙醇洗脫除雜，再用60v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用93v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.2，在溫度45℃下，用80v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度12℃條件下，加40v％乙醇洗滌，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物3。

方法4：

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過40目篩，得到藥材粉末。在120℃溫度條件下，烘干1h，通過檢測，其水分含量為2.6％。

2)將上述藥材粉末采用3倍量、70v％的乙醇、60赫茲條件下，超聲提取3次，每次0.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.1，得到浸膏；

4)將上述浸膏用5倍純化水，在溫度4℃條件下，水沉12h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入80v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為MCI樹脂，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用15v％的乙醇洗脫除雜，再用75v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.1，在溫度70℃下，用80v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度10℃條件下，加10v％乙醇洗脫，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物4。

實施例2不同提取方法制備大麻二酚

本次實驗用藥材量與實施例1相同

超聲提?。?/p>

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過40目篩，得到藥材粉末。在120℃溫度條件下，烘干1h，通過檢測，其水分含量為2.6％。

2)將上述藥材粉末采用5倍量、80v％的乙醇、70赫茲條件下，超聲提取2次，每次0.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.1，得到浸膏；

4)將上述浸膏用5倍純化水，在溫度4℃條件下，水沉12h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入80v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為MCI樹脂，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用30v％的乙醇洗脫除雜，再用75v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，50℃時，相對至密度1.1，在溫度70℃下，用80v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度10℃條件下，加10v％乙醇洗滌，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物。

按此方法，平行制備三批，所得產(chǎn)物分別命名為產(chǎn)物5-1，產(chǎn)物5-2，產(chǎn)物5-3。

回流提取：

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過40目篩，得到藥材粉末。在120℃溫度條件下，烘干1h，通過檢測，其水分含量為2.6％。

2)將上述藥材粉末采用5倍量、80v％的乙醇、回流提取2次，每次1.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.1，得到浸膏；

4)將上述浸膏用5倍純化水，在溫度4℃條件下，水沉12h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入80v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為MCI樹脂，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用30v％的乙醇洗脫除雜，再用75v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.1，在溫度70℃下，用80v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度10℃條件下，加10v％乙醇洗滌，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物。

按此方法，平行制備三批，所得產(chǎn)物分別命名為產(chǎn)物6-1，產(chǎn)物6-2，產(chǎn)物6-3。

浸泡提??；

1)將實驗用工業(yè)大麻的花葉粉碎，過40目篩，得到藥材粉末。在120℃溫度條件下，烘干1h，通過檢測，其水分含量為2.6％。

2)將上述藥材粉末采用5倍量、80v％的乙醇、浸泡提取2次，每次2.5h，得到提取液；

3)將上述提取液濃縮，濃縮至50℃時，相對密度1.1，得到浸膏；

4)將上述浸膏用5倍純化水，在溫度4℃條件下，水沉12h，得到水沉液；

5)將上述水沉液離心，轉(zhuǎn)速5000轉(zhuǎn)，在離心獲得的沉淀中加入80v％乙醇溶解，得到沉淀物的醇溶液；

6)將沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析，其層析柱的填料為MCI樹脂，脫溶劑為乙醇和水，洗脫的步驟包括：先用30v％的乙醇洗脫除雜，再用75v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用95v％的乙醇洗脫以使層析柱再生；

7)濃縮上述步驟6)得到的洗脫液，至50℃時，相對密度1.1，在溫度70℃下，用80v％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；

8)將步驟7)所述結(jié)晶物，然后在溫度10℃條件下，加10v％乙醇洗脫，得到初品；

9)將步驟8)所述初品真空干燥，即得大麻二酚。

10)采用汽流粉碎步驟9)所得大麻二酚，即得產(chǎn)物。

按此方法，平行制備三批，所得產(chǎn)物分別命名為產(chǎn)物7-1，產(chǎn)物7-2，產(chǎn)物7-3。

對比例參照現(xiàn)有技術(shù)的方法制備大麻二酚

參數(shù)1：

1)采用盛花期的花葉，將其投入烘烤設(shè)備內(nèi)，130℃烘干35min；

2)把烘干的花葉進(jìn)行磨碎，粒徑達(dá)到5-10目之間；

3)把磨好的花葉裝入浸泡器內(nèi)進(jìn)行浸泡，浸泡溶劑采用石油醚。浸泡溫度48℃，浸泡時間1h；

4)浸泡后，將花葉濾出，濾液在90℃下加熱，得到浸膏；

5)層析分離：把吸附齊稱量后裝入層析分離器內(nèi)；將浸膏均勻地放在吸附劑表面吸附CBD，吸附劑與浸膏按重量比25：1；采用石油醚進(jìn)行洗脫，干燥即得對比產(chǎn)物1。

參數(shù)2：

1)采用盛花期的花葉，將其投入烘烤設(shè)備內(nèi)，160℃烘干15min；

2)把烘干的花葉進(jìn)行磨碎，粒徑達(dá)到5-10目之間；

3)把磨好的花葉裝入浸泡器內(nèi)進(jìn)行浸泡，浸泡溶劑采用正己烷。浸泡溫度20℃，浸泡時間2h；

4)浸泡后，將花葉濾出，濾液在120℃下加熱，得到浸膏；

5)層析分離：把吸附劑大孔樹脂稱量后裝入層析分離器內(nèi)；吸附劑與浸膏以1：1比例混勻吸附CBD；采用正己烷進(jìn)行洗脫，干燥即得對比產(chǎn)物2。

檢測1：不同制法所得產(chǎn)物中CBD含量及四氫大麻酚的檢出情況對比

檢測方法：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按A(％)：B(％)＝80:20進(jìn)行等度洗脫；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按CBD峰計算應(yīng)不低于2500。

對照品溶液的制備精密稱取CBD對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.1mg的對照品溶液，即得；精密稱取四氫大麻酚對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙腈-水(1:1)20ml，超聲處理15分鐘，加乙腈-水(1:1)稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

上述各產(chǎn)物的CBD含量及四氫大麻酚含量檢測結(jié)果參見表1及附圖1至附圖9。

表1.不同制法所得產(chǎn)物其CBD含量及THC檢出情況對比

由表1和圖1至圖9可知，通過本發(fā)明的方法制備得到的產(chǎn)物1、2、3、4，5-1、5-2、5-3，6-1、6-2、6-3，7-1、7-2、7-3中CBD(大麻二酚)的含量明顯高于現(xiàn)有技術(shù)制備所得CBD(對比產(chǎn)物1和對比產(chǎn)物2)的含量；采用本發(fā)明所述的技術(shù)其產(chǎn)物中無THC(四氫大麻酚)檢出，而采用現(xiàn)有技術(shù)制備所得的產(chǎn)物中明顯檢出THC。進(jìn)一步說明，采用本發(fā)明提取出來的CBD含量更高，純度更純，更安全，符合法規(guī)對產(chǎn)品的相關(guān)要求。

將對比產(chǎn)物1和2的制備方法與本發(fā)明的制備方法相比，具體存在以下差異點：

1)烘干、粉碎順序及條件

本發(fā)明：先粉碎，后烘干。60-200℃條件下，烘干0.5-3h，粉末水份含量5％以下

現(xiàn)有技術(shù)：先烘干，后粉碎。130-160℃條件下，烘干15-35min，花葉水份含量3-5％。

2)提取

本發(fā)明：采用2-8倍藥材量的30-100v％乙醇提取，提取方式選自回流提取、超聲提取和/或浸泡提取，具體如下：

(1)回流提取：1-3次，每次0.5-3h；

(2)超聲提取：1-3次，每次0.1-1h；

(3)浸泡提?。?-3次，每次0.5-5h；

現(xiàn)有技術(shù)：采用石油醚、正己烷或6#溶劑油作為溶劑通過浸泡提取，浸泡溫度不小于50℃，浸泡時間不少于1h。浸泡前可對加入的物料進(jìn)行溶劑噴淋。

3)濃縮

本發(fā)明：50℃時，濃縮至相對密度1.05-1.35；現(xiàn)有技術(shù)：在90-120℃下濃縮。

4)層析分離

本發(fā)明：將濃縮后的浸膏，用1-10倍純化水，在溫度0-20℃條件下，水沉1-48h，得到水沉液；水沉液離心，在離心獲得的沉淀中加入10-100v％乙醇溶解，得到乙醇溶液；

其層析柱的填料選自大孔樹脂、MCI樹脂、ODS(十八烷基硅烷鍵合硅膠填料)。

沉淀物的醇溶液進(jìn)行柱層析的步驟包括：采用洗脫溶劑對層析柱進(jìn)行梯度洗脫，優(yōu)選洗脫溶劑為乙醇和水。優(yōu)選梯度洗脫的步驟包括：先用0-30v％的乙醇除雜，再用40-80v％的乙醇洗脫獲得目標(biāo)產(chǎn)物部分，最后用90-95v％的乙醇洗脫以使所述層析柱再生。

現(xiàn)有技術(shù)：將浸膏用吸附劑吸附后，采用正己烷、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的一種或者任意幾種混合物進(jìn)行洗脫；吸附劑為大孔樹脂或柱層層析硅膠。

5)產(chǎn)物的富集及干燥方式

本發(fā)明：濃縮洗脫液后，優(yōu)選在10-80℃溫度條件下，用60-100％乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物。在0-24℃條件下，加純化水或者5-40％乙醇洗滌，得到初品。干燥方式選包括真空干燥、冷凍干燥、近紅外干燥、微波干燥中的一種或多種，干燥溫度不超過65℃。

干燥獲得大麻二酚后，可采用包括汽流粉碎、冷凍粉碎等方式粉碎，獲得大麻二酚成品，粉碎時物料溫度不超過去65℃。

現(xiàn)有技術(shù)：未明顯體現(xiàn)具體方式。

從上述制備方法的比較也可以看出，本發(fā)明通過全程采用乙醇為主要試劑進(jìn)行制備，相較于采用對CBD溶解度高的有機溶劑進(jìn)行提取的制備方法，不僅能大幅提高CBD的產(chǎn)量，而且打破了傳統(tǒng)科研的思維，帶來了“去除神經(jīng)毒性成分四氫大麻酚，提高CBD純度”的意想不到的有益技術(shù)效果。

檢測2：不同提取方法對CBD提取率影響的比較

(1)原花葉藥材含量檢測方法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按A(％)：B(％)＝80:20進(jìn)行等度洗脫；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按CBD峰計算應(yīng)不低于2500。

對照品溶液的制備精密稱取CBD對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.1mg的對照品溶液，即得；精密稱取四氫大麻酚對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品約1g，精密稱定，加甲醇25ml，超聲處理15分鐘，過濾，再加甲醇25ml，超聲處理15分鐘，合并濾液，定容至50ml，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

(2)提取液含量檢測方法

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按A(％)：B(％)＝80:20進(jìn)行等度洗脫；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按CBD峰計算應(yīng)不低于2500。

對照品溶液的制備精密稱取CBD對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.1mg的對照品溶液，即得；精密稱取四氫大麻酚對照品，加甲醇(1:1)制成每1ml各含0.01mg的對照品溶液，即得。

供試品溶液的制備提取液1ml，定容至25ml，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

上述三種提取方法采用實施例2中的三種方法：1)浸泡提取；2)回流提取；3)超聲提取。具體提取率的實驗結(jié)果見下表2。

表2.三種提取方法提取率試驗(以CBD含量為指標(biāo))

由上表2可知，三種提取方法提取效率相當(dāng)，提取方法的改變對提取率沒有影響。在其它技術(shù)參數(shù)相同的條件下，利用浸泡提取所得產(chǎn)物7-1、7-2、7-3中CBD(大麻二酚)的含量與利用超聲提取所得產(chǎn)物5-1、5-2、5-3中CBD(大麻二酚)的含量無明顯差別。進(jìn)一步說明，本發(fā)明的有益效果并非是由于僅是引入了超聲提取這一工藝技術(shù)導(dǎo)致的。

檢測3：采用穩(wěn)定性試驗方法檢測不同制法所得產(chǎn)物的穩(wěn)定性

主要儀器：

藥品穩(wěn)定性試驗箱(長期)：SHH-250SD，重慶永生實驗儀器廠；

藥品穩(wěn)定性試驗箱(加速)：SHH-250SD，重慶永生實驗儀器廠；

高效液相色譜儀：Agilent1200；

分析天平：MS-105DU，瑞士梅特勒-托利多；

紫外可見分光光度計：UV-2550，日本島津；

薄層色譜成像儀：TLC Visualizer，瑞士卡瑪；

試驗樣品：

將按照上述各實施例和對比例的方法制備的15批樣品，進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗。檢測具體數(shù)據(jù)參見表3至表17。

其中，

產(chǎn)物1，批號：11030801；產(chǎn)物2，批號：11030802；產(chǎn)物3，批號：11030803；

產(chǎn)物4，批號：11030804；產(chǎn)物5-1，批號：11030805；產(chǎn)物5-2，批號：11030806；

產(chǎn)物5-3，批號：11030807；產(chǎn)物6-1，批號：11030808；產(chǎn)物6-2，批號：11030809；

產(chǎn)物6-3，批號：11030810；產(chǎn)物7-1，批號：11030811；產(chǎn)物7-2，批號：11030812；

產(chǎn)物7-3，批號：11030813；對比產(chǎn)物1，批號：11030814；對比產(chǎn)物2，批號：11030815。

上述15批樣品中，每批批量為10kg(以藥材投料量計)，由漢義生物科技(北京)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品用玻璃料瓶密封包裝，每瓶10g。

表3.產(chǎn)物1穩(wěn)定性試驗

表4.產(chǎn)物2穩(wěn)定性試驗

表5.產(chǎn)物3穩(wěn)定性試驗

表6.產(chǎn)物4穩(wěn)定性試驗

表7.產(chǎn)物5-1穩(wěn)定性試驗

表8.產(chǎn)物5-2穩(wěn)定性試驗

表9.產(chǎn)物5-3穩(wěn)定性試驗

表10.產(chǎn)物6-1穩(wěn)定性試驗

表11.產(chǎn)物6-2穩(wěn)定性試驗

表12.產(chǎn)物6-3穩(wěn)定性試驗

表13.產(chǎn)物7-1穩(wěn)定性試驗

表14.產(chǎn)物7-2穩(wěn)定性試驗

表15.產(chǎn)物7-3穩(wěn)定性試驗

表16.對比產(chǎn)物1穩(wěn)定性試驗

表17.對比產(chǎn)物2穩(wěn)定性試驗

由表3-17可知，通過本發(fā)明的方法制備得到的產(chǎn)物1、2、3、4，5-1、5-2、5-3，6-1、6-2、6-3，7-1、7-2、7-3中CBD(大麻二酚)的含量經(jīng)6個月加速穩(wěn)定性試驗放置，穩(wěn)定性良好，CBD的含量變化范圍僅為0.6％以內(nèi)，(其中，存放3個月、2個月以及1個月后CBD含量的變化最高的也僅為0.6％)。而采用文獻(xiàn)方法制得對比產(chǎn)物1和對比產(chǎn)物2經(jīng)6個月加速穩(wěn)定性試驗放置后CBD(大麻二酚)的含量分別從83.1％降到73.8％(下降率為9.3％)，從81.2％降到69.1％(下降率為12.1％)，穩(wěn)定性較差。對比產(chǎn)物1和對比產(chǎn)物2經(jīng)3個月的穩(wěn)定性試驗中，含量下降率分別為7.1％和10.1％，同樣，穩(wěn)定性顯著差于實施例。

從以上的描述中，可以看出，本發(fā)明上述的實施例實現(xiàn)了如下技術(shù)效果：1)通過增加結(jié)晶步驟，使終產(chǎn)品中大麻二酚(CBD)含量提高至96％以上。2)通過對工藝技術(shù)的改進(jìn)，使成品中四氫大麻酚含量控制在0.3％以下(在實施例中，四氫大麻酚未檢出)，符合國家法律法規(guī)要求，產(chǎn)品安全性得到保障。3)初步精制步驟中使用大孔樹脂、MCI樹脂或ODS代替現(xiàn)有技術(shù)中的硅膠，使得填料可重復(fù)利用，使總體生產(chǎn)成本降低，減少廢棄物硅膠對環(huán)境的污染。4)采用乙醇和水作為提取溶劑，溶劑安全，對環(huán)境、操作人員危害小，產(chǎn)品溶劑殘留大大改善；柱層析過程中采用不同純度乙醇洗脫樹脂柱，減少對環(huán)境污染，減少人員傷害。

另外，經(jīng)實驗室規(guī)模實驗驗證和中試放大驗證，按照本發(fā)明所述工藝能生產(chǎn)出純度高(含量95％)以上，安全(THC含量0.3％以下)產(chǎn)品。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。