本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及硫酸雙肼屈嗪的新用途，具體涉及硫酸雙肼屈嗪的藥物組合物及其在高尿酸血癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：硫酸雙肼屈嗪為利尿藥，臨床常用于輕、中度高血壓的輔助治療。迄今為止，尚未見硫酸雙肼屈嗪及其藥物組合物與高尿酸血癥的相關(guān)性報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種硫酸雙肼屈嗪的藥物組合物，該藥物組合物中含有硫酸雙肼屈嗪和一種天然產(chǎn)物，硫酸雙肼屈嗪和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療高尿酸血癥。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(Ⅰ)，一種硫酸雙肼屈嗪的藥物組合物，包括硫酸雙肼屈嗪、如權(quán)利要求1所述的化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將大皂角粉碎，用80～90％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用30％乙醇洗脫6個柱體積，再用85％乙醇洗脫12個柱體積，收集85％洗脫液，減壓濃縮得85％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中85％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88％的甲醇水溶液等度洗脫，收集13～16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。上述化合物(Ⅰ)在制備治療高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。上述硫酸雙肼屈嗪的藥物組合物在制備治療高尿酸血癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明提供的硫酸雙肼屈嗪的藥物組合物中含有硫酸雙肼屈嗪和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，硫酸雙肼屈嗪和該天然產(chǎn)物單獨作用時，對高尿酸血癥具有治療作用；二者聯(lián)合作用時，對高尿酸血癥的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療高尿酸血癥的藥物。具體實施方式下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。實施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將大皂角(2kg)粉碎，用85％乙醇熱回流提取(15L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水飽和的正丁醇(3L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用30％乙醇洗脫6個柱體積，再用85％乙醇洗脫12個柱體積，收集85％洗脫液，減壓濃縮得85％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中85％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1(12個柱體積)、50:1(10個柱體積)、25:1(8個柱體積)和12:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(6個柱體積)、12:1(8個柱體積)和2:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88％的甲醇水溶液等度洗脫，收集13～16個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(HPLC歸一化純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z467.2382，結(jié)合核磁特征可得分子式為C28H34O6，不飽和度為12。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-2(2.22，ddd，J＝14.5，8.7，5.3Hz)，H-2(2.64，ddd，J＝14.5，9.7，6.3Hz)，H-3(1.88，m)，H-3(1.91，m)，H-4(1.23，m)，H-4(1.94，m)，H-6(3.12，br，s)，H-7(1.38，ddd，J＝14.5，11.1，1.3Hz)，H-7(2.16，ddd，J＝14.5，3.6，2.7Hz)，H-8(1.46，qd，J＝11.1，3.6Hz)，H-9(2.28，dd，J＝11.2，4.1Hz)，H-11(4.55，d，J＝4.1Hz)，H-14(2.02，m)，H-15(1.44，m)，H-15(1.93，m)，H-16(1.92，m)，H-16(2.05，m)，H-18(1.17，s)，H-19(1.05，s)，H-21(3.96，s，2H)，H-22(4.59，dd，J＝1.9Hz)，H-23(5.08，s)，H-27(1.77，s)，H-28(1.88，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CDCl3，125MHz)216.2(C，1-C)，39.5(CH2，2-C)，17.4(CH2，3-C)，29.6(CH2，4-C)，64.0(C，5-C)，60.2(CH，6-C)，30.8(CH2，7-C)，34.9(CH，8-C)，37.9(CH，9-C)，52.7(C，10-C)，102.2(CH，11-C)，160.4(C，12-C)，53.2(C，13-C)，46.4(CH，14-C)，35.2(CH2，15-C)，28.4(CH2，16-C)，143.1(C，17-C)，19.9(CH3，18-C)，16.8(CH3，19-C)，133.2(C，20-C)，60.7(CH2，21-C)，69.9(CH，22-C)，99.2(CH，23-C)，167.1(C，24-C)，123.5(C，25-C)，175.7(C，26-C)，8.6(CH3，27-C)，21.2(CH3，28-C)。紅外波譜表明該化合物含有酯(1749cm-1)和酮(1713cm-1)等基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有28個碳信號，包括四個甲基，七個亞甲基(一個含氧碳δC60.7)，七個次甲基(三個含氧碳δC60.2、69.9、99.2，一個烯屬次甲基δC102.2)，以及十個季碳(一個酯基碳δC175.7，一個酮基δC216.2，四個烯碳δC143.1、133.2、167.1、123.5，一個連氧碳δC64.0和一個連氧烯碳δC160.4)，碳?xì)鋽?shù)量為C28H33，剩余一個H歸屬于-OH；以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為七環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜顯示存在四個甲基質(zhì)子信號δH1.17(3H，s)、1.05(3H，s)、1.77(3H，s)、1.88(3H，s)；五個連氧質(zhì)子信號δH3.12(1H，br，s，H-6)、3.96(2H，s，H-21)、4.59(1H，d，J＝1.9Hz，H-22)、5.08(1H，s，H-23)，一個烯屬次甲基質(zhì)子信號δH4.55(1H，d，J＝4.1Hz，H-11)。碳?xì)浜舜抛V圖還表明存在一個α,β-不飽和內(nèi)酯邊鏈結(jié)構(gòu)[包含兩個烯甲基δH-271.77與δH-281.88，一個連氧次甲基δH-235.08(1H，s)；δC-26175.7(C)，δC-24167.1(C)，δC-25123.5(C)，δC-2399.2(CH)，δC-2821.2(CH3)，δC-278.6(CH3)]；通過C-12的酮與22-OH連接為半縮醛橋后C-12羥基與C-11氫脫去形成環(huán)外雙鍵六元半縮醛環(huán)[δH-224.59(1H，d，J＝1.9Hz)，δH-213.96(2H，s)；δC-2269.9(CH)，δC-12160.4(C)，δC-17143.1(C)，δC-2160.7(CH2)]；一個5β,6β-環(huán)氧結(jié)構(gòu)[δH-63.12(1H，br，s)；δC-564.0(C)，δC-660.2(CH)]。13C-NMR和HSQC譜顯示有一個單獨的酮基碳δC-1216.2(C)與兩個亞甲基[δC-239.5與δH-22.22(1H，ddd，J＝14.5，8.7，5.3Hz)、2.64(1H，2.64，ddd，J＝14.5，9.7，6.3Hz)存在相關(guān)信號；δC-317.4與δH-31.91(1H，m)、1.88(1H，m)存在相關(guān)信號]，1H-1HCOSY譜中顯示有-C(2)H2-C(3)H2-C(4)H2-片段，HMBC譜分析可知H2-2和H2-3與C-1存在相關(guān)信號，查閱文獻(xiàn)，對比相關(guān)信號，可知該化合物為睡茄內(nèi)酯化合物。此外，C-17位的-OH與C-20位的-H脫去形成六元半縮醛環(huán)內(nèi)的雙鍵結(jié)構(gòu)[δC-17140.7(C)，δC-20135.4(C)]，另C-21位為羥甲基[δH-213.96(2H，s)，δC-2160.7(CH2)]。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：實施例2：藥理作用本實施例用腺嘌呤+乙胺丁醇法制備高尿酸血癥大鼠模型，觀察藥物降低大鼠高尿酸癥的血尿酸水平和抑制黃嘌呤氧化酶的活性等方面的抗高尿酸血癥作用。1、材料與方法1.1動物SD大鼠，體質(zhì)量(180～220)g，雄性，由第四軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)動物實驗中心提供。1.2試劑與樣品硫酸雙肼屈嗪購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實施例1。血尿酸、黃嘌呤氧化酶(XO)，南京建成生物工程有限公司生產(chǎn)。別嘌呤醇片由重慶青陽藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。1.3儀器XD811型生化分析儀，上海迅達(dá)醫(yī)療儀器中心生產(chǎn)；LD4-2型低速離心機，北京醫(yī)用離心機廠生產(chǎn)；GB-204電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司生產(chǎn)；CS-3G型電子計價秤，撫順宇辰衡有限公司生產(chǎn)。1.4大鼠分組及模型制備隨機分6組，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組(別嘌醇，40mg·kg-1·d-1)和硫酸雙肼屈嗪組(80mg·kg-1·d-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1·d-1)、硫酸雙肼屈嗪與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1·d-1硫酸雙肼屈嗪+40mg·kg-1·d-1化合物(Ⅰ)】。灌胃給藥：給藥容量為[20mL/(kg·d)]，于給藥5天后開始造模。造模方法：正常對照組灌胃等體積水，其余各組動物每天灌胃腺嘌呤200mg/kg和乙胺丁醇250mg/kg造成大鼠高尿酸血癥，連續(xù)給藥14天。1.5血尿酸水平測定實驗?zāi)┐谓o藥1.0小時后，各組大鼠眼眶后靜脈叢取血，置水浴(37℃)溫浴中30分鐘，迅即離心10分鐘(2500r/min)，取血清測定其血尿酸水平。1.6黃嘌呤氧化酶水平測定實驗?zāi)┐谓o藥1.0小時后，各組大鼠眼眶后靜脈叢取血，置水浴(37℃)溫浴中30分鐘，迅即離心10分鐘(2500r/min)，取血清測定其黃嘌呤氧化酶水平。1.7統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2、實驗結(jié)果2.1對高尿酸血癥模型大鼠血尿酸的影響與正常對照組比較，模型對照組大鼠血尿酸值明顯增加(P＜0.01)；與模型對照組比較，硫酸雙肼屈嗪與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對照組血尿酸值明顯下降(P＜0.01)；與模型對照組比較，硫酸雙肼屈嗪組、化合物(Ⅰ)組血尿酸值下降(P＜0.05)。結(jié)果見表1。2.2對高尿酸血癥模型大鼠黃嘌呤氧化酶水平的影響與正常對照組比，模型對照組大鼠黃嘌呤氧化酶水平明顯升高(P＜0.01)。與模型對照組比，硫酸雙肼屈嗪與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對照組黃嘌呤氧化酶水平顯著降低(P＜0.01)；與模型對照組比，硫酸雙肼屈嗪組、化合物(Ⅰ)組黃嘌呤氧化酶水平降低(P＜0.05)。實驗結(jié)果見表1。表1對高尿酸血癥模型大鼠血尿酸和黃嘌呤氧化酶的影響組別血尿酸值/(mmol·L-1)黃嘌呤氧化酶/(μmol·L-1)正常對照組96.65±21.5947.55±11.13模型對照組155.54±46.0280.54±23.03陽性對照組90.32±18.2744.82±8.56硫酸雙肼屈嗪組119.60±32.7265.57±13.61化合物(Ⅰ)組111.53±32.0963.51±12.45硫酸雙肼屈嗪與化合物(Ⅰ)組合物組92.22±39.7448.88±13.40痛風(fēng)患者血清尿酸水平取決于尿酸的生成和排泄之間的平衡。尿酸是嘌呤在機體內(nèi)代謝的終產(chǎn)物。本研究通過尿酸生成增加和尿酸排泄減少兩個途徑制造大鼠高尿酸模型。一方面給予增加尿酸生成的尿酸前體物質(zhì)(腺嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤等)，另一方面給予抑制尿酸排泄的藥物(乙胺丁醇、煙酸等)。故增加體內(nèi)尿酸、尿酸前體(次黃嘌呤、黃嘌呤、腺嘌呤)的量或抑制腎小管尿酸的分泌均可導(dǎo)致體內(nèi)血尿酸含量的增高以致高尿酸血癥。黃嘌呤氧化酶是調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，在痛風(fēng)的發(fā)病過程中具有重要作用。黃嘌呤氧化酶活性增強則嘌呤在體內(nèi)分解代謝過旺，會增加尿酸的生成，可致血尿酸水平升高，抑制黃嘌呤氧化酶的活性是治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和降低血尿酸的重要機制。故采用尿酸酶抑制法和腺嘌呤合并乙胺丁醇復(fù)制高尿酸血癥模型。上述結(jié)果表明，硫酸雙肼屈嗪、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對高尿酸血癥具有治療作用；硫酸雙肼屈嗪和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對高尿酸血癥的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療高尿酸血癥的藥物。上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3