本發(fā)明涉及植物栽培領(lǐng)域，具體涉及一種純系條斑紫菜的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
紫菜具有重要經(jīng)濟(jì)價值，是主要經(jīng)濟(jì)海藻之一。據(jù)統(tǒng)計，紫菜年產(chǎn)量約1.8×104噸干品，年產(chǎn)值估計約20億美元。我國主要栽培的紫菜品種有壇紫菜和條斑紫菜，其中壇紫菜主要栽培于長江以南(福建省和廣東省)，條斑紫菜主要栽培于長江以北(江蘇省和山東省，主要是在南通、鹽城和連云港海區(qū))。條斑紫菜藻體較薄，口感較好，其產(chǎn)量雖不及壇紫菜，但其經(jīng)濟(jì)價值卻高于壇紫菜。
紫菜優(yōu)良品種的培育對紫菜栽培產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展至關(guān)重要。紫菜栽培過程中面臨復(fù)雜多變的環(huán)境，長時間的栽培也導(dǎo)致種質(zhì)發(fā)生退化，從而導(dǎo)致減產(chǎn)，嚴(yán)重制約紫菜產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。純系條斑紫菜的獲得是優(yōu)良種質(zhì)培育的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)。但紫菜純系的獲得卻面臨如下難題：(1)條斑紫菜生活史較復(fù)雜，其生活史包括宏觀的配子體(葉狀體)和微觀的孢子體(絲狀體)兩個重要階段，我們通常吃的紫菜是其配子體階段，既可以進(jìn)行有性生殖，也可以進(jìn)行無性生殖。條斑紫菜葉狀體雌雄同體，雌性組織與雄性組織間隔排列，其既可以自交也可以雜交。(2)特殊的減數(shù)分裂時間，條斑紫菜減數(shù)分裂發(fā)生在殼孢子萌發(fā)過程中，殼孢子發(fā)育的前兩次分裂為減數(shù)分裂第一次、第二次分裂，形成的四個細(xì)胞不分開，共同發(fā)育成葉狀體，這樣形成的葉狀體在遺傳上是嵌合的。
雖然條斑紫菜葉狀體可進(jìn)行自交，但由于其葉狀體的嵌合性，僅僅依靠葉狀體自交獲得的絲狀體也不一定是純合的，獲得的種質(zhì)性狀不穩(wěn)定。在單株葉狀體上切取一小塊進(jìn)行單獨培養(yǎng)可獲得絲狀體，但由于不能保證切取的小塊來源于遺傳組成一致的部分，獲得的絲狀體也不一定是純系。因此，如何開發(fā)一種快速簡單且能獲得純系絲狀體的方法對條斑紫菜優(yōu)良品種的培育尤為重要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種純系條斑紫菜的培養(yǎng)方法，以條斑紫菜單孢子苗培育純系條斑紫菜，由于所有單孢子苗來源于同一個單孢子，因而所有葉片都具有相同的遺傳物質(zhì)，不管是自交還是雜交，都能獲得純合的絲狀體，因而是一種快速簡單的獲得純系絲狀體的方法，對條斑紫菜優(yōu)良品種的培育尤為重要。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種純系條斑紫菜的培養(yǎng)方法，所述方法包括以下步驟：
1)培養(yǎng)條斑紫菜絲狀體，誘導(dǎo)使其釋放殼孢子；
2)殼孢子的培養(yǎng)；
3)從步驟2)中長出的殼孢子苗中挑出單個殼孢子苗，另放入干凈的三角瓶中，加入海水，培育至長出單孢子苗；
4)從步驟3)中長出的單孢子苗中挑出單個單孢子苗，另放入干凈的三角瓶中，加入海水，培育至母苗繼續(xù)放散單孢子苗；
5)將步驟4)中得到的單孢子苗培育至長成大的紫菜葉狀體，即為遺傳物質(zhì)上一致的純系葉狀體；
6)將步驟5)中的純系葉狀體培育至性成熟，經(jīng)自交或雜交，形成果孢子囊，放散出的果孢子萌發(fā)形成絲狀體，即為純系絲狀體。
其中，在步驟1)中，培養(yǎng)條斑紫菜絲狀體，誘導(dǎo)使其釋放殼孢子，是指將接種有條斑紫菜絲狀體的貝殼誘導(dǎo)，使殼孢子釋放；或培養(yǎng)條斑紫菜游離絲狀體，誘導(dǎo)使其釋放殼孢子。
其中，所述誘導(dǎo)的條件是：先在24-26℃誘導(dǎo)15-20天，使條斑紫菜絲狀體膨大，然后在20℃流水刺激3-5天，使殼孢子釋放。
其中，步驟2)中殼孢子的培養(yǎng)，是指將誘導(dǎo)釋放的殼孢子倒入干凈的培養(yǎng)皿中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水，在18℃下培育，光照強度為2500-3000lux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，培育至長成殼孢子苗。
其中，步驟2)中殼孢子的培養(yǎng)，是使殼孢子附著在網(wǎng)繩上生長為殼孢子苗；生長條件為添加了PES營養(yǎng)元素的海水，溫度18℃、光強2500-3000lux、光周期12h/12h(白天/黑夜)，培育至長成殼孢子苗。
其中，步驟3)-5)的培養(yǎng)條件是，添加了PES營養(yǎng)元素的海水，溫度18℃、光強2500-3000lux、光周期12h/12h(白天/黑夜)。
步驟1)和2)中，可以是將接種有紫菜絲狀體的貝殼誘導(dǎo)，使釋放殼孢子，然后將誘導(dǎo)釋放的殼孢子倒入干凈的培養(yǎng)皿中，培育至長成殼孢子苗；也可以是將條斑紫菜游離絲狀體誘導(dǎo)，使釋放殼孢子，獲得的殼孢子附著在網(wǎng)繩上生長，培育至長成殼孢子苗。所述誘導(dǎo)的條件是：先在24-26℃誘導(dǎo)15-20天，使條斑紫菜絲狀體膨大，然后在20℃流水刺激3-5天，使殼孢子釋放。
在步驟3)中，將長出的殼孢子苗中挑出單個殼孢子苗，放入干凈的三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。長出單孢子苗后，將母苗(殼孢子苗)取出扔掉。
在步驟4)中，將長出的單孢子苗中挑出單個單孢子苗，放入干凈的三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。長出新的單孢子苗后。將母苗(單孢子苗)取出扔掉。
在步驟5)中，由同一個單孢子苗釋放的單孢子苗具有相同遺傳物質(zhì)，將這樣的單孢子苗培養(yǎng)至長成葉狀體，得到純系條斑紫菜葉狀體。將這樣的純系葉狀體培育至性成熟，經(jīng)自交或雜交，最終得到純系絲狀體。
本發(fā)明提供了一種條斑紫菜純系培育方法，由于所有葉狀體和絲狀體均來源于同一個單孢子苗，具有相同的遺傳物質(zhì)，因而長成的葉狀體和絲狀體均為純系。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
1.操作過程簡單，僅需在培養(yǎng)皿和三角瓶中培養(yǎng)即可。
2.單孢子由單個營養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來，發(fā)育形成的葉狀體在遺傳組成上一致，可避免遺傳混雜。
3.條斑紫菜單孢子放散出大量單孢子，可獲得較多的材料。
本發(fā)明由于所有單孢子苗來源于同一個單孢子，因而所有葉片都具有相同的遺傳物質(zhì)，不管是自交還是雜交，都能獲得純合的絲狀體，因而是一種快速簡單的獲得純系絲狀體的方法，對條斑紫菜優(yōu)良品種的培育尤為重要。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本發(fā)明所限定的范圍。
除非特別指明，以下實施例中所用的試劑均可從市面渠道商購獲得。
實施例1
一種純系條斑紫菜的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
1.將接種有條斑紫菜絲狀體的貝殼刷洗干凈，正面朝上擺放在干凈的燒杯中，先24-26℃誘導(dǎo)15-20天，每周換水一次并刷洗貝殼，誘導(dǎo)貝殼絲狀體膨大，然后降溫至20℃刺激3-5天，使殼孢子釋放，誘導(dǎo)期間每天早晨取貝殼后瀝取表面的水觀察，確定有無殼孢子放散，待觀察到較多孢子時即可進(jìn)行下一步；
2.將誘導(dǎo)釋放的殼孢子倒入高溫消毒的平皿中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水，在18℃下培育約三個星期，每周換水一次，至長成殼孢子苗，光照強度為2500-3000lux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，；
3.從步驟2中長出的殼孢子苗中挑出單個殼孢子苗，放入經(jīng)過高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水共200ml，光照強度為2500-3000lux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，在18℃下培育約三個星期，每周換水一次，至殼孢子苗釋放的單孢子長成肉眼可見的小苗，將母苗(殼孢子苗)取出扔掉；
4.從步驟3中長出的單孢子苗中挑出單個單孢子苗，放入經(jīng)過高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水共200ml，光照強度為2500-3000lux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，在18℃下培育約兩個星期，每周換水一次，至單孢子母苗繼續(xù)放散單孢子苗；然后將母苗取出扔掉；瓶中所剩的即為由同一個單孢子苗放出的小苗，在遺傳上是一致的；
5.將步驟4得到的小苗分裝到經(jīng)過高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水共200ml，培養(yǎng)條件同上，每周換水一次，繼續(xù)培育一個月至長成大的紫菜葉狀體，即獲得遺傳物質(zhì)上一致的純系葉狀體；
6將步驟5中的純系葉狀體在相同條件下培育約1個月至性成熟，經(jīng)自交或雜交，形成果孢子囊，放散出的果孢子萌發(fā)形成絲狀體，即為純系絲狀體。
實施例2
一種純系條斑紫菜的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
1.將條斑紫菜游離絲狀體放在高溫消毒的三角瓶中，添加含PES培養(yǎng)基的滅菌海水，每周換水一次，培養(yǎng)過程中通入經(jīng)硫酸銅過濾后的空氣，24-26℃誘導(dǎo)15-25天，使游離絲狀體膨大，然后降溫至20℃刺激3-5天(此時停止通氣)，誘導(dǎo)使游離絲狀體釋放殼孢子。
2.獲得的殼孢子附著在網(wǎng)繩上生長，生長條件為添加了PES營養(yǎng)元素的海水，每周換水一次，溫度18℃、光強2500-3000lux、光周期12h/12h(白天/黑夜)，培育約三個星期，至長成殼孢子苗。
3.將苗繩上的殼孢子苗挑單個放入高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水200ml，在18℃下培育約三個星期，每周換水一次，光照強度為2500-3000lux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，培育至母苗釋放單孢子苗，將母苗(殼孢子苗)取出扔掉。
4.從步驟3中長出的單孢子苗中再挑出單個單孢子苗，放入高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水共200ml，光照強度為2500-30001ux，光周期為12h/12h(白天/黑夜)，在18℃下培育約兩個星期，每周換水一次，至單孢子母苗繼續(xù)放散單孢子苗.將母苗取出扔掉.瓶中所剩的即為由同一個單孢子苗放出的小苗，在遺傳上是一致的；
5.將步驟4中的小苗分裝到高溫消毒的250ml三角瓶中，加入添加了PES營養(yǎng)元素的海水共200ml，培養(yǎng)條件同上，每周換水一次，繼續(xù)培育約一個月，至長成大的紫菜葉狀體，即獲得遺傳物質(zhì)上一致的純系葉狀體；
6.將步驟5中的純系葉狀體在相同條件下培育約一個月至性成熟，經(jīng)自交或雜交，形成果孢子囊，放散出的果孢子萌發(fā)形成絲狀體，即為純系絲狀體。
本發(fā)明提供了一種條斑紫菜純系培育方法，由于所有葉狀體和絲狀體均來源于同一個單孢子苗，具有相同的遺傳物質(zhì)，因而長成的葉狀體和絲狀體均為純系。本發(fā)明具有如下優(yōu)點：操作過程簡單，僅需在培養(yǎng)皿和三角瓶中培養(yǎng)即可，單孢子由單個營養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來，發(fā)育形成的葉狀體在遺傳組成上一致，可避免遺傳混雜，條斑紫菜單孢子放散出大量單孢子，可獲得較多的材料。
以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。