一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，通過(guò)利用CaCl2溶液對(duì)豬胰臟進(jìn)行酶原激活，使豬胰臟中復(fù)合蛋白酶的酶活性得到大幅度提高，從而可完全替代價(jià)格昂貴的人工合成胰蛋白酶，對(duì)由雞骨制備而成的蛋白提取液進(jìn)行充分的水解反應(yīng)，得到高純度的硫酸軟骨素，所得到的硫酸軟骨素純度達(dá)到90％以上，且得率高。另外，本發(fā)明采用變溫?zé)釅撼樘岱▽?duì)經(jīng)破碎的雞骨進(jìn)行抽提，通過(guò)階段性改變抽提溫度和壓力，能夠使雞骨更加充分地破碎溶解，從而使雞骨中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尤其是多種礦物質(zhì)更加充分溶出，大幅度提高蛋白提取液中的礦物質(zhì)含量，從而利用水解液制備營(yíng)養(yǎng)全面豐富的生物培養(yǎng)基，實(shí)現(xiàn)生物資源的充分利用。
【專利說(shuō)明】一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，中國(guó)的雞肉總產(chǎn) 量由1984年的139萬(wàn)噸增長(zhǎng)到2012年的1370萬(wàn)噸，已居世界第二位。雞骨架是雞肉加工的主要副產(chǎn)物，約占雞總重的30%，雞骨營(yíng)養(yǎng)相當(dāng)豐富，含有的16.3 %蛋白質(zhì)、14.5 %脂肪及3.95 % 鈣、2.04%憐和豐富的鐵等礦物質(zhì)兀素,其中蛋白質(zhì)及脂肪含量與等量鮮肉相似，而鈣、磷及鐵等礦物質(zhì)元素是鮮肉的數(shù)倍，并且比例適宜。由此可見(jiàn)，雞骨具有重要的綜合利用和開發(fā)價(jià)值。但是長(zhǎng)期以來(lái)由于資金、技術(shù)等方面的原因，大量的雞骨沒(méi)有得到合理的利用，而被加工成附加值很低的產(chǎn)品，如骨泥、飼料、肥料等，沒(méi)有完全體現(xiàn)出雞骨的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，甚至有的被遺棄，這不僅對(duì)資源造成了極大的浪費(fèi)，而且對(duì)環(huán)境有一定的影響。
[0003]硫酸軟骨素是中國(guó)十大出口原料藥之一，是從雞、豬等動(dòng)物的軟骨中提取的黏性多糖，主要用于治療頭疼、偏頭痛、心絞痛等的藥物中，國(guó)內(nèi)外消費(fèi)市場(chǎng)巨大。目前，硫酸軟骨素的生產(chǎn)多利用動(dòng)物軟骨為原料，采用酸堿法，添加大量胰蛋白酶水解后獲得，而酶解液作為廢水倒掉。這種生產(chǎn)模式產(chǎn)物單一，生物資源利用率低，得率低，產(chǎn)品純度低，耗能高，產(chǎn)品純度僅能達(dá)到30% -60%，得率普遍低于10%，且產(chǎn)生大量廢棄物對(duì)環(huán)境造成污染，另外添加的胰蛋白酶價(jià)格昂貴，導(dǎo)致硫酸軟骨素價(jià)格居高不下，既不利于企業(yè)節(jié)約成本，又不利于消費(fèi)者購(gòu)買。
[0004]胰臟是豬體內(nèi)唯一兼內(nèi)、外兩種分泌功能的實(shí)質(zhì)性腺體。胰臟中含有大量的活性物質(zhì)，其中胰酶含量豐富，主要成分為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶。據(jù)FAO數(shù)據(jù)，2005年，我國(guó)生豬出欄7.15億頭，每年可以提供大量的胰臟。但是現(xiàn)有的提取工藝，多為提取胰臟中的一種藥用成分而丟棄其它大量的活性物質(zhì)，因而使胰臟的利用率較低，致使豬胰臟未得到充分利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，通過(guò)利用CaCl2溶液對(duì)豬胰臟進(jìn)行酶原激活，使豬胰臟中復(fù)合蛋白酶的酶活性得到大幅度提高，從而完全取代價(jià)格昂貴的人工合成胰蛋白酶對(duì)由雞骨制備而成的蛋白提取液進(jìn)行充分的水解反應(yīng)，得到高純度的硫酸軟骨素，同時(shí)降低生產(chǎn)成本；
[0006]本發(fā)明的另一個(gè)目的是，通過(guò)變溫?zé)釅撼樘岱▽?duì)經(jīng)破碎的雞骨進(jìn)行抽提，使雞骨中的多種礦物質(zhì)更加充分溶出，大幅度提高蛋白提取液中的礦物質(zhì)含量，一方面對(duì)雞骨的價(jià)值利用更加充分，另一方面使利用提取硫酸軟骨素后的水解液制備的生物培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)更加全面和充足；
[0007]本發(fā)明的又一個(gè)目的是，通過(guò)利用純天然酶既豬胰臟對(duì)由雞骨制備的蛋白抽提液進(jìn)行水解，使蛋白水解液不含任何有害化學(xué)物質(zhì)，不僅得到高質(zhì)量高純度的硫酸軟骨素，而且充分利用提取硫酸軟骨素后的水解液制備營(yíng)養(yǎng)全面豐富的生物培養(yǎng)基，實(shí)現(xiàn)生物資源的充分利用。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0009]一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，
[0010]將由雞骨制備而成的蛋白提取液與經(jīng)過(guò)酶原激活的豬胰臟進(jìn)行混合后，于37-40°C進(jìn)行酶解反應(yīng)1.5-2h，得到蛋白水解液，其中所述酶原激活方法為:將豬胰臟與占豬胰臟質(zhì)量0.2-0.5%的濃度為0.2-0.5% CaCl2溶液混合反應(yīng)；
[0011]此外，還包括以下步驟:
[0012]步驟一、將所述蛋白水解液進(jìn)行濃縮得到蛋白水解濃縮液；
[0013]步驟二、采用乙醇沉淀法使所述蛋白水解濃縮液分層，取下層沉淀經(jīng)洗滌干燥后得所述硫酸軟骨素，取上層清液經(jīng)脫鈉及濃縮處理后得到所述生物培養(yǎng)基。
[0014]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，所述蛋白提取液由雞骨經(jīng)過(guò)變溫?zé)釅撼樘岱ㄖ苽涠?，包括以下步驟:
[0015]步驟一、將經(jīng)過(guò)破碎的雞骨與水按照1: 1-2質(zhì)量比混合，得到待抽提物料；
[0016]步驟二、將所述待抽提物料順次于溫度90-105 °C，壓力0.2-0.25MPa保持20-25min ；溫度 15- 12O °C，壓力 0.25-0.28MPa 保持 35_40min ；溫度 I2O-128 °C，壓力
0.28-0.3MPa保持30_35min，得到雞骨料液；
[0017]步驟三、將所得雞骨料液靜置，待分層后取下層料液進(jìn)行料液分離得到蛋白提取液。
[0018]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟三中料液分離方法為:采用孔徑為80-100目的振動(dòng)篩進(jìn)行料液分離。
[0019]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，所用豬胰臟的質(zhì)量為雞骨質(zhì)量的1_2%，進(jìn)行酶解反應(yīng)的pH值為7.8-8.0。
[0020]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，酶解反應(yīng)結(jié)束后將蛋白水解液升溫至80-90°C，保持20-30min進(jìn)行酶滅活。
[0021]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟一中所述蛋白水解液的濃縮方法為:
[0022]將蛋白水解液經(jīng)80-100目濾布過(guò)濾，將所得濾液經(jīng)過(guò)超濾膜進(jìn)行超濾后得到蛋白水解濃縮液；其中，所述超濾膜截留分子量為5000-6000麗，超濾條件為壓力
0.18-0.20MPa，溫度 23-25O。
[0023]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中所述乙醇沉淀法為:調(diào)節(jié)所述蛋白水解濃縮液pH值為6.8-7.2后，加入2.8-3倍體積的90-100%乙醇，攪拌1.8-2h后進(jìn)行靜置分層。
[0024]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中上層清液的脫鈉方法為納濾脫鈉法，其中納濾膜截留分子量為500-600MW，納濾條件為壓力 0.4-0.5MPa，溫度 40-60 °C。
[0025]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中上層清液的濃縮方法為真空濃縮，其中真空度為0.07-0.09MPa，溫度50_60°C，濃縮時(shí)間1.8-2h。
[0026]優(yōu)選的是，所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中對(duì)所述生物培養(yǎng)基可用噴霧干燥機(jī)進(jìn)行噴霧干燥，得到固體生物培養(yǎng)基，其中所述噴霧干燥機(jī)進(jìn)口溫度為130-160°C，出口溫度50-80°C，噴霧形式為霧化。
[0027]本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明所述的一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，通過(guò)利用CaCl2溶液對(duì)豬胰臟進(jìn)行酶原激活，使豬胰臟中復(fù)合蛋白酶的酶活性得到大幅度提高，從而可完全替代價(jià)格昂貴的人工合成胰蛋白酶，對(duì)由雞骨制備而成的蛋白提取液進(jìn)行充分的水解反應(yīng)，得到高純度的硫酸軟骨素，所得到的硫酸軟骨素純度達(dá)到90%以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一般的酸堿法加大量胰蛋白酶所提取的硫酸軟骨素的純度，并且得率高，達(dá)到15%以上，由于完全不用人工合成的胰蛋白酶，大幅度降低了硫酸軟骨素的生產(chǎn)成本。
[0028]另外，本發(fā)明通過(guò)變溫?zé)釅撼樘岱▽?duì)經(jīng)破碎的雞骨進(jìn)行抽提，通過(guò)階段性改變抽提溫度和壓力，能夠使雞骨更加充分地破碎溶解，從而使雞骨中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尤其是多種礦物質(zhì)更加充分溶出，大幅度提高蛋白提取液中的礦物質(zhì)含量，變溫?zé)釅撼樘岱ㄋ玫鞍滋崛∫褐械V物質(zhì)含量分別為:鐵1.2mg/kg>|IIj 51.2mg/kg、磷12.6mg/kg ;而常規(guī)熱壓抽提礦物質(zhì)含量為:鐵0.6mg/kg、鈣40.6mg/kg、磷8.3mg/kg,變溫?zé)釅撼樘岬V物質(zhì)含量具有顯著提高，一方面對(duì)雞骨的價(jià)值利用更加充分，另一方面使所制得的生物培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)更加全面和充足。
[0029]同時(shí)，通過(guò)利用純天然酶既豬胰臟對(duì)由雞骨制備的蛋白抽提液進(jìn)行水解，使蛋白水解液不含任何有害化學(xué) 物質(zhì)，不僅得到高得率、高純度的硫酸軟骨素，而且可充分利用提取硫酸軟骨素后的水解液制備營(yíng)養(yǎng)全面豐富的生物培養(yǎng)基，實(shí)現(xiàn)生物資源的充分利用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1為本發(fā)明所述豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法示意圖；
[0031]圖2為本發(fā)明所述提取的硫酸軟骨素理化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果；
[0032]圖3為本發(fā)明所制備的生物培養(yǎng)基理化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果；
[0033]圖4為本發(fā)明所提取的硫酸軟骨素高效液相色譜圖；
[0034]圖5為Sigma公司硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖；
[0035]圖6為本發(fā)明所提取的硫酸軟骨素的紅外光譜圖；
[0036]圖7為Sigma公司硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖；
[0037]圖8為本發(fā)明所述變溫?zé)釅撼樘徇^(guò)程中鐵含量變化圖；
[0038]圖9為本發(fā)明所述變溫?zé)釅撼樘徇^(guò)程中鈣含量變化圖；
[0039]圖10為本發(fā)明所述變溫?zé)釅撼樘徇^(guò)程中磷含量變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0040]下面結(jié)合附圖1-10對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說(shuō)明書后能夠據(jù)以實(shí)施。
[0041]如圖1所示，一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，將由雞骨制備而成的蛋白提取液與經(jīng)過(guò)酶原激活的豬胰臟進(jìn)行混合后，于37-40°C進(jìn)行酶解反應(yīng)1.5-2h，得到蛋白水解液，其中所述酶原激活方法為:將豬胰臟與占豬胰臟質(zhì)量
0.2-0.5%的濃度為0.2-0.5% CaCl2溶液混合反應(yīng)；
[0042]此外，還包括以下步驟:
[0043]步驟一、將所述蛋白水解液通過(guò)超濾膜超濾進(jìn)行濃縮得到蛋白水解濃縮液；
[0044]步驟二、采用乙醇沉淀法使所述蛋白水解濃縮液分層，取下層沉淀經(jīng)洗滌干燥后得所述硫酸軟骨素，取上層清液經(jīng)脫鈉及濃縮處理后得到所述生物培養(yǎng)基。
[0045]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，所述蛋白提取液由雞骨經(jīng)過(guò)變溫?zé)釅撼樘岱ㄖ苽涠?，包括以下步驟: [0046]步驟一、選用新鮮凍雞骨，通過(guò)破骨機(jī)破碎為2X2X2cm的顆粒，將經(jīng)過(guò)破碎的雞骨與水按照1: 1-2質(zhì)量比混合，得到待抽提物料；具體做法為，將破碎的雞骨顆粒裝入提取罐中，向提取罐中注入無(wú)菌水，使雞骨顆粒與水的比例為1: 1-2。
[0047]步驟二、控制提取罐的溫度和壓力進(jìn)行變溫?zé)釅撼閷?，將所述待抽提物料順次于溫?90-105 °C，壓力 0.2-0.25MPa 保持 20_25min ;溫度 105_12(TC，壓力 0.25-0.28MPa 保持35-40min ;溫度120_128°C，壓力0.28-0.3MPa保持30_35min，得到雞骨料液；抽提結(jié)束后將雞骨料液排出進(jìn)入靜置罐中。
[0048]步驟三、將所得雞骨料液靜置，待分層后取下層料液進(jìn)行料液分離得到蛋白提取液。而上層油相可經(jīng)水洗等方法精煉后食用。
[0049]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟三中料液分離方法為:采用孔徑為80-100目的振動(dòng)篩進(jìn)行料液分離，篩出的骨渣用于制作飼料。
[0050]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，所用豬胰臟的質(zhì)量為雞骨質(zhì)量的1_2%，使用NaOH溶液調(diào)節(jié)蛋白提取液的pH值，使進(jìn)行酶解反應(yīng)的pH值為
7.8—8.0 ο
[0051]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，酶解反應(yīng)結(jié)束后將蛋白水解液升溫至80-90°C，保持20-30min進(jìn)行酶滅活。
[0052]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟一中所述蛋白水解液的濃縮方法為:
[0053]將蛋白水解液經(jīng)80-100目濾布過(guò)濾，將所得濾液經(jīng)過(guò)超濾膜進(jìn)行超濾后得到蛋白水解濃縮液；其中，所述超濾膜截留分子量為5000-6000麗，超濾條件為壓力
0.18-0.20MPa，溫度 23-25O。
[0054]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中所述乙醇沉淀法為:使用HCL溶液調(diào)節(jié)所述蛋白水解濃縮液pH值為6.8-7.2后，加入2.8-3倍體積的90-100%乙醇，攪拌1.8-2h后進(jìn)行靜置分層。
[0055]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中上層清液的脫鈉方法為納濾脫鈉法，其中納濾膜截留分子量為500-600麗，納濾條件為壓力
0.4-0.5MPa，溫度40_60°C，脫鈉后含鹽量小于1% -2%，固形物含量15% -20%。
[0056]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中上層清液的濃縮方法為真空濃縮，其中濃縮罐內(nèi)真空度為0.07-0.09MPa,溫度50-60 °C，濃縮時(shí)間
1.8-2h，濃縮后固形物含量50-53%。
[0057]所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法中，步驟二中對(duì)所述生物培養(yǎng)基可用噴霧干燥機(jī)進(jìn)行噴霧干燥，得到固體生物培養(yǎng)基，其中所述噴霧干燥機(jī)進(jìn)口溫度為130-160°C，出口溫度50-80°C，噴霧形式為霧化。
[0058]具體實(shí)施例1
[0059]如圖1所示，包括以下步驟:
[0060]步驟一、將雞骨通過(guò)破骨機(jī)破碎，破碎后的粒徑為2 X 2 X 2cm。
[0061]步驟二、將破碎后的雞骨裝入提取罐中進(jìn)行變溫?zé)釅撼樘幔蛱崛」拗凶⑺?，使破碎后的雞骨與水的料液比為1: 2，抽提過(guò)程通過(guò)控制提取罐溫度和壓力實(shí)現(xiàn)變溫?zé)釅撼樘?當(dāng)提取罐中溫度達(dá)到95°C時(shí)，保持25min，壓力0.25MPa ;115°C時(shí)，保持40min，壓力
0.28MPa ;128°C時(shí)，保持35min，壓力0.28-0.3MPa。抽提結(jié)束后排出雞骨料液進(jìn)入靜置罐中。
[0062]步驟三、當(dāng)靜置罐內(nèi)有水分離完全后，排出下層料液過(guò)100目振動(dòng)篩得到蛋白提取液，篩后的濾渣用作飼料，上層油相經(jīng)過(guò)水洗等方法精煉后用于食用。
[0063]步驟四、當(dāng)?shù)鞍滋崛∫豪鋮s至40°C時(shí)，使用NaOH調(diào)節(jié)蛋白提取液pH值為7.8，用占雞骨質(zhì)量2%的豬胰臟進(jìn)行酶解。其中，酶解所用豬胰臟需用勻漿機(jī)進(jìn)行絞碎勻漿，勻漿機(jī)設(shè)定為5000轉(zhuǎn)/min，勻漿時(shí)間3min，勻漿后加入0.5 %的CaCl2溶液激活酶源，進(jìn)行酶解，酶解溫度37°C，時(shí)間2h。之后升溫至90°C，持續(xù)30min使酶滅活。
[0064]步驟五、將 蛋白水解液經(jīng)100目濾布過(guò)濾，濾液經(jīng)過(guò)超濾后得到蛋白水解濃縮液。該步驟中所使用的超濾膜截留分子量為5000MW，壓力0.18MPa，溫度25°C。
[0065]步驟六、使用HCl溶液調(diào)節(jié)蛋白水解濃縮液pH值為6.8，加入濃縮液3倍體積的95%的乙醇，攪拌2h后使之靜置分層。下層沉淀經(jīng)過(guò)洗滌干燥后得到硫酸軟骨素，上層清液用于制備生物培養(yǎng)基。
[0066]步驟七、將得到的上層清液經(jīng)過(guò)納濾脫鈉設(shè)備，納濾膜截留分子量為500MW，壓力
0.5MPa，溫度40°C，脫鈉后含鹽量小于固形物含量20%;之后進(jìn)行真空濃縮，濃縮罐內(nèi)真空度為-0.09MPa，溫度50°C，時(shí)間2h，濃縮后固形物含量53%;最后通過(guò)噴霧干燥后得到生物培養(yǎng)基，噴霧干燥機(jī)進(jìn)口溫度為150°C，出口溫度60°C，噴霧形式為霧化。
[0067]通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)分析，本發(fā)明所提取的硫酸軟骨素理化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。
[0068]其中，本發(fā)明利用高效液相色譜測(cè)定硫酸軟骨素的含量，本發(fā)明所提取硫酸軟骨素色譜圖見(jiàn)圖4，Sigma公司硫酸軟骨素標(biāo)品色譜圖見(jiàn)圖5，由圖可知，在1.928min時(shí)均出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰，由此說(shuō)明本發(fā)明所提取硫酸軟骨素質(zhì)量較好，含量較高，可達(dá)91.26%。由此可見(jiàn)，利用本發(fā)明提取的硫酸軟骨素具有很高的純度。
[0069]通過(guò)傅里葉變換紅外吸收光譜鑒定本發(fā)明所提取硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)，分別對(duì)Sigma公司硫酸軟骨素A標(biāo)準(zhǔn)品和本發(fā)明所提取的硫酸軟骨素進(jìn)行測(cè)定。由圖6和圖7可知本發(fā)明所提取硫酸軟骨素與Sigma公司硫酸軟骨素A的傅里葉變換紅外光譜圖基本一致，均在34000^1有特征吸收峰，說(shuō)明存在多糖羥基結(jié)構(gòu)；在1620CHT1和1560CHT1有特征吸收峰，說(shuō)明存在羰基和N-H鍵，證明存在乙酰氨基結(jié)構(gòu)；在1240CHT1和860CHT1有特征吸收峰，說(shuō)明存在硫酸基結(jié)構(gòu)。圖中沒(méi)有出現(xiàn)其他雜峰，說(shuō)明本發(fā)明所提取硫酸軟骨素純度較高。
[0070]所述生物培養(yǎng)基的理化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，對(duì)本發(fā)明所制生物培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目分別為顏色、堿性沉淀試驗(yàn)、磷酸鹽沉淀試驗(yàn)、含氮量、水分PH值、氨基氮、氯化鈉、含磷量、灰分和亞硝酸鹽。從圖3可以看出，樣品中各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明采用本發(fā)明所制的生物培養(yǎng)基為合格產(chǎn)品。
[0071]圖8-10為變溫?zé)釅撼樘徇^(guò)程中礦物質(zhì)含量變化圖，從中可以看出隨著抽提時(shí)間、抽提溫度的增加而礦物質(zhì)含量也不斷增加，而且每個(gè)階段提取罐內(nèi)都會(huì)達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定提取狀態(tài)，通過(guò)改變溫度和壓力改變提取罐內(nèi)狀態(tài)，使雞骨破碎溶解，有利于雞骨架中礦物質(zhì)的溶出。變溫過(guò)程主要為分三個(gè)階段:第一階段，溫度在95度左右，開始抽提過(guò)程，蛋白、礦物質(zhì)等物質(zhì)逐漸溶出；第二階段，通過(guò)增加抽提壓力和溫度，使抽提罐內(nèi)雞骨組織破碎，蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等物質(zhì)進(jìn)一步溶出；第三階段，通過(guò)進(jìn)一步提升壓力和溫度，使雞骨完全溶解，蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)等完全溶出。
[0072]本發(fā)明所述變溫?zé)釅撼樘岬V物質(zhì)含量:鐵含量:1.2mg/kg ;鈣含量:51.2mg/kg ;磷含量:12.6mg/kg。而常規(guī)熱壓抽提礦物質(zhì)含量:鐵含量:0.6mg/kg ;韓含量:40.6mg/kg ;磷含量:8.3mg/kg。因此，本發(fā)明所述的變溫?zé)釅撼樘岱ㄖ饕抢酶淖兲崛」迌?nèi)壓力和溫度，打破常規(guī)熱壓抽提罐內(nèi)穩(wěn)定環(huán)境，使雞骨抽提破碎，蛋白質(zhì)、及多種礦物質(zhì)比常規(guī)的熱壓抽提法溶出更加完全。本發(fā)明所制備的生物培養(yǎng)基富含礦物質(zhì)元素，不需額外加入礦物質(zhì)，有利于微生物生長(zhǎng)，屬于全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基。
[0073]此外還進(jìn)行了生物培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物檢測(cè)，A組為使用市售培養(yǎng)基進(jìn)行微生物培養(yǎng)，B組為使用本發(fā)明聯(lián)產(chǎn)的生物培養(yǎng)基進(jìn)行微生物培養(yǎng)。兩組培養(yǎng)皿中微生物生長(zhǎng)狀況基本相同，說(shuō)明本發(fā)明所聯(lián)產(chǎn)的生物培養(yǎng)基達(dá)到了微生物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求。
[0074]盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適 用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。
【權(quán)利要求】
1.一種豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于， 將由雞骨制備而成的蛋白提取液與經(jīng)過(guò)酶原激活的豬胰臟進(jìn)行混合后，于37-40°C進(jìn)行酶解反應(yīng)1.5-2h，得到蛋白水解液，其中所述酶原激活方法為:將豬胰臟與占豬胰臟質(zhì)量0.2-0.5%的濃度為0.2-0.5% CaCl2溶液混合反應(yīng)； 此外，還包括以下步驟: 步驟一、將所述蛋白水解液進(jìn)行濃縮得到蛋白水解濃縮液； 步驟二、采用乙醇沉淀法使所述蛋白水解濃縮液分層，取下層沉淀經(jīng)洗滌干燥后得所述硫酸軟骨素，取上層清液經(jīng)脫鈉及濃縮處理后得到所述生物培養(yǎng)基。
2.如權(quán)利要求1所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所述蛋白提取液由雞骨經(jīng)過(guò)變溫?zé)釅撼樘岱ㄖ苽涠桑ㄒ韵虏襟E: 步驟一、將經(jīng)過(guò)破碎的雞骨與水按照1: 1-2質(zhì)量比混合，得到待抽提物料； 步驟二、將所述待抽提物料順次于溫度90-105°C，壓力0.2-0.25MPa保持20-25min ;溫度 105-120°C，壓力 0.25-0.28MPa 保持 35_40min ?’溫度 120_128°C，壓力 0.28-0.3MPa 保持30-35min，得到雞骨料液； 步驟三、將所得雞骨料液靜置，待分層后取下層料液進(jìn)行料液分離得到蛋白提取液。
3.如權(quán)利要求2所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟三中料液分離 方法為:采用孔徑為80-100目的振動(dòng)篩進(jìn)行料液分離。
4.如權(quán)利要求1所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，所用豬胰臟的質(zhì)量為雞骨質(zhì)量的1_2%，進(jìn)行酶解反應(yīng)的pH值為7.8-8.0。
5.如權(quán)利要求4所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，酶解反應(yīng)結(jié)束后將蛋白水解液升溫至80-90°C，保持20-30min進(jìn)行酶滅活。
6.如權(quán)利要求1所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟一中所述蛋白水解液的濃縮方法為: 將蛋白水解液經(jīng)80-100目濾布過(guò)濾，將所得濾液經(jīng)過(guò)超濾膜進(jìn)行超濾后得到蛋白水解濃縮液；其中，所述超濾膜截留分子量為5000-6000MW，超濾條件為壓力0.18-0.20MPa,溫度 23-25 °C。
7.如權(quán)利要求1所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟二中所述乙醇沉淀法為:調(diào)節(jié)所述蛋白水解濃縮液PH值為6.8-7.2后，加入2.8-3倍體積的90-100%乙醇，攪拌1.8-2h后進(jìn)行靜置分層。
8.如權(quán)利要求7所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟二中上層清液的脫鈉方法為納濾脫鈉法，其中納濾膜截留分子量為500-600MW，納濾條件為壓力0.4-0.5MPa，溫度40_60°C。
9.如權(quán)利要求8所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟二中上層清液的濃縮方法為真空濃縮，其中真空度為0.07-0.09MPa，溫度50-60°C，濃縮時(shí)間 1.8-2h。
10.如權(quán)利要求9所述的豬胰臟和雞骨聯(lián)產(chǎn)硫酸軟骨素與生物培養(yǎng)基的方法，其特征在于，步驟二中對(duì)所述生物培養(yǎng)基可用噴霧干燥機(jī)進(jìn)行噴霧干燥，得到固體生物培養(yǎng)基，其中所述噴霧干燥機(jī)進(jìn)口溫度為130-160°C，出口溫度50-80°C，噴霧形式為霧化。
【文檔編號(hào)】C08B37/08GK104031175SQ201410242524
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月3日
【發(fā)明者】張春暉, 李俠, 李海, 賈偉, 王金枝 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所