專利名稱:改進(jìn)的融合方法
由Kohler和Milstein在1975年所進(jìn)行的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與已被免疫的小鼠脾細(xì)胞的融合(Nature.256(1975)，495-497)，首次證實(shí)了獲得產(chǎn)生同源(所謂的“單克隆的”)抗體的連續(xù)細(xì)胞系可能性。由于這一開創(chuàng)性的工作，使得科研人員作出了巨大努力，以生產(chǎn)各種雜交細(xì)胞(稱作“雜交瘤”)以及尋找由這些雜交瘤制造的抗體在各種科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷上的應(yīng)用。制備雜交瘤的方法一般包括下列步驟(a)用一種致免疫劑免疫適當(dāng)?shù)?，例如小鼠或大鼠一類?dòng)物。所用的免疫方案應(yīng)能夠產(chǎn)生有用量的適當(dāng)?shù)囊呀佑|抗原的脾細(xì)胞。
(b)從被免疫的動(dòng)物體中取出脾臟，在一種合適的介質(zhì)中制成脾臟懸浮液。
(c)在一種合適的融合促進(jìn)劑存在的條件下，將該懸浮的脾細(xì)胞與從一合適的細(xì)胞系得到的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。融合促進(jìn)劑可以是仙臺(tái)病毒或是一化學(xué)融合劑，如平均分子量約1000至4000的聚乙二醇((PEG)(如商業(yè)上可得到的PEG1000等)。另一項(xiàng)可用于產(chǎn)生融合的技術(shù)是根據(jù)已知方法的電-融合，如Zimmermann和Scheurich(Planta，157(1983)，331)以及Jacob等(Sbud.Biophys，94(1983)，99)等所使用的方法。所用的骨髓瘤細(xì)胞系最好是所謂的“抗藥”型，以便使未融合的骨髓瘤細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上不能存活，而雜種則能存活，最普通的一類是8-氮鳥嘌呤抗性細(xì)胞系，由于它缺乏次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶，從而不能夠在HAT(次黃嘌呤、氨基嘌呤和胸苷)培養(yǎng)基中存活。
(d)在各個(gè)容器中用選擇培養(yǎng)基稀釋和培養(yǎng)未融合的脾細(xì)胞，未融合的骨髓細(xì)胞和融合細(xì)胞的混合物，這種培養(yǎng)基將不能維持未融合的骨髓細(xì)胞以長(zhǎng)時(shí)間而使未融合細(xì)胞死亡(約一周)。稀釋可以是一種有限型，其中稀釋的體積是通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算出來的，以便分離一定量的細(xì)胞數(shù)(如微量滴定板的每一孔)。在選擇性培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞死掉。由于未融合的脾細(xì)胞是非惡性的，它們僅有有限的代數(shù)，因此，經(jīng)過一段時(shí)間后(約一周)，這些未融合的脾細(xì)胞將不能繁殖。而另一方面，融合細(xì)胞由于具有骨髓瘤親本的惡性性質(zhì)以及脾細(xì)胞親本的在選擇培養(yǎng)基上的存活能力，所以能夠連續(xù)繁殖。
(e)鑒定在含有雜交瘤的每一容器(孔)內(nèi)上清液中抗體的存在，這種抗體是直接抗最初所使用的抗原的。
(f)篩選(如通過有限稀釋)和克隆產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤。
一旦所需的雜交瘤被篩選和克隆出，則最終的抗體可以通過兩種方式產(chǎn)生。最純的單克隆抗體是在試管中在一種合適的培養(yǎng)基上對(duì)所需的雜交瘤進(jìn)行適當(dāng)時(shí)間的培養(yǎng)而產(chǎn)生的。隨后從上清液中回收所需要的抗體。適宜的培養(yǎng)基和適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)周期是已知的或很易確定。這一試管技術(shù)生產(chǎn)的基本是單一的單克隆抗體，基本上無其它的特定抗人免疫球蛋白。既然培養(yǎng)基必含有異種血清(如牛胎兒血清)，所以該抗體中有少量的其它免疫球蛋白存在。但是，這一試管方法不能夠產(chǎn)生用于某些目的的大量抗體或抗體濃縮物，因?yàn)閱慰寺】贵w的濃度僅約50微克/毫升。
為了產(chǎn)生大量的純度稍底的單克隆抗體濃縮物，可以將所需的雜交瘤注射進(jìn)小鼠中，最好是同源或半同源小鼠。適當(dāng)培養(yǎng)一段時(shí)間后，雜交瘤將引起產(chǎn)生抗體的腫瘤的形成，導(dǎo)致宿主小鼠的血流和腹膜浸出液(腹水)中所需抗體的濃度增高(約為5～20毫克/毫升)。
這一方法在文獻(xiàn)中已充分公開，它有特殊的和嚴(yán)重的缺點(diǎn)。PEG作為融合劑已被越來越多的人所接受，因?yàn)槠浼兤芬子诘玫角以谒璧姆肿恿糠秶鷥?nèi)，并且與仙臺(tái)病毒比較起來它較容易操縱。但是，PEG有鏟的整個(gè)濃度范圍非常窄。最佳濃度是50±5%(重量/體積)。在這一濃度下，它表現(xiàn)出對(duì)將被融合和已經(jīng)融合了的所有細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)。其結(jié)果是減少了活的雜交細(xì)胞數(shù)。另一方面，當(dāng)使用亞最佳濃度的PEG時(shí)，僅觀察到適度的細(xì)胞毒性，但是融合效率以及其后的雜交瘤形成都很低。與仙臺(tái)病毒相比，已知的化學(xué)融合劑如聚乙二醇(PEG)和電-融合不影響被融合的細(xì)胞的凝集，因此，細(xì)胞膜在緊密貼近處對(duì)融合并非直接有效。
因此，本發(fā)明的目的之一就是要發(fā)展一種改進(jìn)了的融合細(xì)胞的方法，即將能夠產(chǎn)生有用產(chǎn)物的哺乳動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞(如被免疫了的脾細(xì)胞)與能夠連續(xù)繁殖的適宜融合配偶體(如骨髓瘤細(xì)胞或其它永久細(xì)胞)融合，按照該方法，它允許被融合細(xì)胞的凝集。本發(fā)明的目的之二是減少常規(guī)的化學(xué)融合劑的細(xì)胞毒作用，這些融合劑包括PEG、溶血卵磷脂、葡聚糖、DMSO(二甲基亞砜)、聚乙烯醇、聚-L-鳥氨酸以及已知有用的鹽如硝酸鈉或其組合物。按照這一融合方法將導(dǎo)致產(chǎn)生高產(chǎn)量的所需的雜交細(xì)胞。本發(fā)明的目的之三是生產(chǎn)將被電-融合技術(shù)融合的凝集細(xì)胞。
這些目的及其它目的在以下的敘述中清楚可見。從總體上講，本發(fā)明涉及制備雜交細(xì)胞的方法，它是通過凝集原的作用首先進(jìn)行細(xì)胞凝集。更具體地說，本發(fā)明涉及一種改進(jìn)了的制備雜交細(xì)胞的方法，即在選擇性條件下，將能夠產(chǎn)生有用產(chǎn)物的哺乳動(dòng)物細(xì)胞與能夠連續(xù)繁殖的哺乳動(dòng)物細(xì)胞融合，它包括將融合細(xì)胞的混合物與有效量凝集原接觸，然后進(jìn)行凝集細(xì)胞的融合。另一方面，本發(fā)明涉及植物細(xì)胞的凝集與融合，以產(chǎn)生能夠生產(chǎn)有用產(chǎn)物的雜交細(xì)胞。因此本發(fā)明也涉及融合雜交細(xì)胞的方法，它包括將能夠產(chǎn)生有用產(chǎn)物的植物細(xì)胞和能夠連續(xù)繁殖的植物細(xì)胞與有效量的凝集原進(jìn)行接觸，然后進(jìn)行凝集細(xì)胞的融合。
“凝集原”是一個(gè)用于描述任何具有凝集被融合細(xì)胞的能力的試劑的術(shù)語。雖然它包括所有的凝集原，但典型的凝集原是植物凝集素(PHA)、伴刀豆球蛋白A和花生凝集素。本發(fā)明優(yōu)選的凝集原是PHA。凝集原的濃度應(yīng)進(jìn)行調(diào)整，使觀察不到細(xì)胞毒性作用，且發(fā)生明顯程度的凝集作用。
凝集原PHA的適當(dāng)范圍是25～400微克/毫升。較好的PHA濃度為約150～200微克/毫升，最好是200微克/毫升。其它凝集原的合適濃度可以采用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)很容易地被測(cè)定。凝集作用是在生理溫度(如37℃)下經(jīng)過足夠長(zhǎng)時(shí)間(如5～15分鐘)的處理而實(shí)現(xiàn)的。充分凝集后，就可進(jìn)行細(xì)胞的融合。在一實(shí)施方案中，首先加入常規(guī)的化學(xué)融合劑(最好是PEG)，然后在生理?xiàng)l件下培養(yǎng)混合物，實(shí)現(xiàn)凝集細(xì)胞的融合。當(dāng)使用PEG時(shí)，其濃度為約30～50%(重量/體積)。優(yōu)選的PEG的濃度約為40±5%(重量/體積)。最佳融合時(shí)間約為1分鐘。時(shí)間也可以更長(zhǎng)，特殊情況下達(dá)到2分鐘以上，但隨著時(shí)間的增加，存在著細(xì)胞毒性增加的危險(xiǎn)。在另一實(shí)施方案中，凝集細(xì)胞的融合是通過電-融合實(shí)現(xiàn)的。
與以前技術(shù)所產(chǎn)生的結(jié)果相比，本發(fā)明的這一新型融合技術(shù)形成的能存活雜交細(xì)胞明顯增加。
術(shù)語“有用產(chǎn)物”包括被融合的哺乳動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞可以產(chǎn)生的所有產(chǎn)物。典型的例子有生物活性蛋白、糖蛋白、多肽、酶和非蛋白質(zhì)化合物，如生物堿、甾類、薯蕷皂苷配基、蒽醌、除蟲菊酯、芳香油、多糖、強(qiáng)心苷、香料和美發(fā)油成分。
能夠由被融合的細(xì)胞產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)的典型例子如下面的表Ⅰ至Ⅴ所示。
表1生物堿 殺蟲劑變應(yīng)原 乳汁蒽醌 脂類抗白血病劑 萘醌抗腫瘤劑 核酸抗病毒劑 核苷酸香料 油苯醌 鴉片制劑碳水化合物(包括多糖) 有機(jī)酸強(qiáng)心苷 肽苯基苯乙烯酮 香水雙蒽 苯酚酶 色素酶抑制劑 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素類黃酮、黃酮 蛋白質(zhì)食用香料(增香劑) 甾類及其衍生物螢香豆?jié)M酮 糖激素 鞣酸類物萜和類萜維生素表Ⅱ生物活性物質(zhì) 細(xì)胞來源 用途胰島素 胰島細(xì)胞 抗糖尿病胰高血糖素 胰島細(xì)胞 調(diào)節(jié)胰島素的產(chǎn)生生長(zhǎng)激素抑制素 胰島細(xì)胞 調(diào)節(jié)胰島素的產(chǎn)生促腎上腺皮質(zhì)激素 垂體前葉細(xì)胞 消炎促黃體激素 垂體細(xì)胞 調(diào)節(jié)生殖促濾泡素 垂體細(xì)胞 調(diào)節(jié)生殖生長(zhǎng)激素 垂體細(xì)胞 促進(jìn)生長(zhǎng)促黃體激素 垂體細(xì)胞 調(diào)節(jié)生育力釋放激素促乳素 垂體細(xì)胞 刺激產(chǎn)乳促甲狀腺素(TSH) 垂體細(xì)胞 甲狀腺機(jī)能減退胸腺激素 胸腺細(xì)胞 免疫調(diào)諧劑紅血球生成素 腎臟 刺激紅細(xì)胞生成表皮生長(zhǎng)因子 頜下腺 促進(jìn)細(xì)胞增殖及抑制胃酸分泌催產(chǎn)素 垂體后葉 控制子宮收縮和產(chǎn)乳后葉加壓素 垂體后葉 制尿激素腦啡吠 腎上腺嗜鉻細(xì)胞 止痛前房Naturietic 心臟細(xì)胞 舒張血管因子(ANF)β-內(nèi)啡呔 腦，垂體 止痛表Ⅱ(續(xù))生物活性物質(zhì) 細(xì)胞來源 用途抑制素 粒膜細(xì)胞(卵巢) 控制生育力降鈣素甲狀腺細(xì)胞增加骨中Ca++的貯存甲狀旁腺激素 甲狀旁腺 引起骨的吸收(主細(xì)胞)白細(xì)胞介素-1 巨噬細(xì)胞 抗腫瘤白細(xì)胞介素-2 T輔助細(xì)胞 抗腫瘤白細(xì)胞介素-3 T輔助細(xì)胞 干細(xì)胞增殖α-干擾素 白細(xì)胞 抗病毒，抗腫瘤集落刺激因子-2 T細(xì)胞 MQ和粒細(xì)胞的增殖集落刺激因子-1 成纖維細(xì)胞 MQ的成長(zhǎng)和活化B細(xì)胞生長(zhǎng)因子 T輔助細(xì)胞 免疫缺陷腫瘤壞死因子 巨噬細(xì)胞 抗腫瘤γ-干擾素 巨噬細(xì)胞， 抗病毒和抗腫瘤T輔助細(xì)胞β-干擾素 成纖維細(xì)胞 抗病毒和抗腫瘤巨噬細(xì)胞激活因子 巨噬細(xì)胞 抗病毒和抗腫瘤血管原素 癌細(xì)胞 傷口愈合，血管形成甾類 腎上腺皮質(zhì)區(qū) 增殖神經(jīng)生長(zhǎng)因子 唾腺細(xì)胞 神經(jīng)元再生血小板衍生 (Endothine 傷口愈合生長(zhǎng)因子 血小板)
表Ⅱ(續(xù))生物活性物質(zhì) 細(xì)胞來源 用途黑素細(xì)胞刺激素 松果體細(xì)胞 著色控制和褪黑激素表Ⅲ化合物群 類型及舉例藥劑 生物堿，甾類，蒽醌酶 蛋白酶(如木瓜蛋白酶)膠乳 類異戊二烯(如橡膠)蠟 蠟酯(如西蒙得木蠟)色素 著色劑和染料油 脂肪酸(如種子油)農(nóng)用化學(xué)品 殺蟲劑(如除蟲菊酯)美發(fā)油物質(zhì) 芳香油(如單萜)食品添加劑 香味化合物，非營(yíng)養(yǎng)香料(如Thaumatin)樹膠 多糖(如阿拉伯樹膠)
表Ⅳ工業(yè) 植物產(chǎn)品 植物種 工業(yè)應(yīng)用藥劑 可待因(生物堿) 罌粟 止痛藥薯蕷皂苷配基(甾類) 三再葉薯蕷 抗生育力劑奎寧(生物堿) 金雞鈉樹 抗瘧藥地谷新(強(qiáng)心苷糖苷) 殺臘毛地黃 強(qiáng)心劑莨蓉胺(生物堿) 曼陀羅 抗高血壓藥長(zhǎng)青新堿(生物堿) 長(zhǎng)春花 抗白血病藥農(nóng)業(yè)化學(xué)品 除蟲菊酯 除蟲菊 殺蟲劑食物及飲料 奎寧(生物堿) 金雞鈉樹 苦味劑Thaumatin(苯基 Thaumatio- 非營(yíng)養(yǎng)甜味苯己烯酮) coccus 劑danilli美容劑 茉莉 茉莉?qū)? 香水表Ⅴ藥用試劑 活性 植物來源來自薯蕷皂 抗生育力劑 三角葉薯蕷元的生物堿可待因 止痛藥 罌粟阿托品 抗膽堿能藥 顛茄利血平 抗高血壓藥 印度蘿芙木(蛇根木)莨蓉堿 抗膽堿能藥 天仙子地高辛 強(qiáng)心劑 希蠟毛地黃東莨蓉堿 抗膽堿能藥 白花曼陀羅洋地黃毒 心血管藥 毛地黃匹魯卡品 膽堿能藥 毛果奎寧丁 抗瘧藥 金雞納樹可以使用哺乳動(dòng)物或植物來源的真核細(xì)胞，但植物細(xì)胞最好使用原生質(zhì)體的形式。原生質(zhì)體的形成對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是非常熟知的。
而且，能夠產(chǎn)生蛋白質(zhì)以外的生物活性物質(zhì)(如甾類激素)的細(xì)胞也可以使用。至于植物細(xì)胞，象那些能夠產(chǎn)生生物堿(如奎寧，利血平，柯卡因，阿托品，莨蓉胺，毛地黃，嗎啡類似物)的植物細(xì)胞都可被使用。
可被利用的細(xì)胞還包括那些產(chǎn)生芳香油和香水(麝香酮，靈貓酮，香葉醇以及其它在香水工業(yè)上有用的萜類似物質(zhì))的細(xì)胞。
用作配偶體的細(xì)胞以及使哺乳動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞永生的連續(xù)繁殖(永久)細(xì)胞包括各種來源的骨髓瘤細(xì)胞，如來源于小鼠、大鼠或人的細(xì)胞。典型的永久生長(zhǎng)細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，如骨髓瘤細(xì)胞，從人瘤形成得到的細(xì)胞(包括HeLa細(xì)胞)，從咽癌細(xì)胞得到的HE P-2，從鼻咽癌細(xì)胞得到的KB，類淋巴母細(xì)胞，Eppstein-Barr病毒，轉(zhuǎn)化細(xì)胞，高繁殖的胚胎細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，腎癌細(xì)胞等。本發(fā)明中尤其重要的是抗藥性骨髓瘤細(xì)胞，包括鼠和人的骨髓癌細(xì)胞。雖然分泌型也可使用，但一般優(yōu)選所謂的“非分泌”型。
典型的連續(xù)生長(zhǎng)植物細(xì)胞是根癌細(xì)胞，即被根癌土壤桿菌的有毒株轉(zhuǎn)化了的植物細(xì)胞及其原生質(zhì)體。
融合細(xì)胞在含有常規(guī)的碳源、氮源以及微量鹽的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和繁殖。繁殖基本上是在需氧條件下進(jìn)行的，即在95%的氧氣和5%的二氧化碳的混合物存在的條件下進(jìn)行。當(dāng)然，繁殖過程和所有在先步驟都是在無菌條件下進(jìn)行的。按照常規(guī)方法，可以在同源的或無胸腺的裸鼠中產(chǎn)生大量雜交細(xì)胞。這些細(xì)胞可以腹水或固體腫瘤的形式收集，且象常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)物一樣繁殖?？梢哉T導(dǎo)這些細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生大量的所需產(chǎn)物。一個(gè)典型的例子是從胰島細(xì)胞得到的雜交細(xì)胞的誘導(dǎo)，用葡萄糖誘導(dǎo)這些細(xì)胞，就可導(dǎo)致胰島素產(chǎn)量的增加。
與此方式相類似，通過向產(chǎn)生尿激酶的雜交細(xì)胞中加入甘氨酸，就可刺激尿激酶的產(chǎn)生。
由雜交細(xì)胞所產(chǎn)生的有用產(chǎn)物可用任何常規(guī)方法進(jìn)行分離，如從雜交細(xì)胞除去營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，然后采用提取、逆流分配、親和層析、沉降、凝膠過濾、離子交換層析、HPLC(高壓液體色譜法)等方法。也可將這些方法結(jié)合使用。
產(chǎn)物是熟知的，且進(jìn)行了鑒定，它們的用途也是熟知的。
下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明。
實(shí)例1將得自Balb/c小鼠的兩個(gè)脾臟的1×108個(gè)脾細(xì)胞與1×107個(gè)鼠骨髓瘤細(xì)胞(Fox-NY)混合。在15毫升的試管中用無菌Hank溶液沖洗細(xì)胞群體一次。離心后將所得到的沉淀輕輕重新懸浮(渦流)在所存留溶液中，加入0.2毫升PHA溶液(200微克/毫升)，于37℃培養(yǎng)10分鐘。培養(yǎng)結(jié)束后向試管中加入0.8毫升PEG50%(重量/體積，平均分子量1000)溶液，以達(dá)到40%PEG的最終濃度。培養(yǎng)1分鐘后加入10毫升完全培養(yǎng)基(MEM，含10%牛胎兒血清)，在CO2培養(yǎng)箱中于37℃繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)。培養(yǎng)完畢后進(jìn)行離心，抽出含有PHA和PEG的培養(yǎng)基。將沉淀懸浮在20毫升HAT培養(yǎng)基中。將所得到的細(xì)胞懸浮液以0.02毫升/孔的濃度分散到10個(gè)96孔平板中，在CO2培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)平板。每周更換HAT培養(yǎng)基一次，大約兩周后，可用顯微鏡觀察到某些孔中有活的雜交細(xì)胞。
實(shí)例2按照實(shí)例1的方法使用Balb/c小鼠脾細(xì)胞，而這種小鼠已按照Wands和Zurawski Jr.在美國(guó)專利4，271，145中所公開的方法預(yù)先被乙型肝炎病毒免疫過。分離出產(chǎn)生抗乙型肝炎病毒的抗原因子的單克隆抗體的雜交細(xì)胞。
實(shí)例3按照實(shí)例1的方法，將從被小棒桿菌處理過的小鼠得到的活化腹膜巨噬細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。從得到的細(xì)胞中篩選白細(xì)胞介素-1，γ-干擾素，腫瘤壞死因子和巨噬細(xì)胞活化因子。
實(shí)例4
通過混合的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，活化從鼠脾臟得到的T-淋巴細(xì)胞，然后按實(shí)例1所述的那樣進(jìn)行融合。從得到的雜交細(xì)胞中篩選白細(xì)胞介素2，3和B細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
實(shí)例5按實(shí)例1融合垂體細(xì)胞，然后從得到的雜交細(xì)胞中篩選生長(zhǎng)激素和促乳素利用激素。
實(shí)例6按實(shí)例1的方法，將由根癌(由煙草植物的根癌土壤桿菌有毒菌株誘導(dǎo))制備的原生質(zhì)體與從印度蘿芙木得到的原生質(zhì)體進(jìn)行融合。用已建立的方法提取迅速分裂的雜交細(xì)胞，以獲得利血平。
實(shí)例7按照實(shí)例1的方法，將從煙草植物的根癌得到的原生質(zhì)體與從毛地黃得到的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，對(duì)這樣得到的雜交細(xì)胞進(jìn)行提取，以得到毛地黃糖苷。
實(shí)例8按照實(shí)例1的方法，將從煙草植物的根癌得到的原生質(zhì)體與從顛茄得到的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，對(duì)得到的雜交細(xì)胞進(jìn)行提取，以得到阿托品。
權(quán)利要求
1.一種在選擇性條件下，通過能夠產(chǎn)生有用產(chǎn)物的哺乳動(dòng)物細(xì)胞與能夠連續(xù)繁殖的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的融合來制備雜交細(xì)胞的方法，它包括將被融合的細(xì)胞混合物與有效量的凝集原接觸，然后融合凝集了的細(xì)胞。
2.一種制備雜交細(xì)胞的方法，它包括將能夠產(chǎn)生有用產(chǎn)物的植物細(xì)胞和能夠連續(xù)繁殖的植物細(xì)胞與有效量的凝集原接觸，然后融合凝集了的細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求
1或2的方法，其特征在于凝集原是植物血球凝集素。
4.如權(quán)利要求
1或2的方法，其特征在于其融合是通過化學(xué)融合進(jìn)行的。
5.如權(quán)利要求
1或2的方法，其特征在于其融合是通過電-融合進(jìn)行的。
6.如權(quán)利要求
4的方法，其特征在于化學(xué)融合劑是平均分子量為1000至4000的PEG。
7.依照權(quán)利要求
1或2所產(chǎn)生的融合雜交細(xì)胞。
專利摘要
本發(fā)明介紹了新型的改進(jìn)融合方法。
文檔編號(hào)C12P21/00GK87104270SQ87104270
公開日1988年1月27日 申請(qǐng)日期1987年6月18日
發(fā)明者賽·P·孫卡拉 申請(qǐng)人:默里爾多藥物公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan