一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟：（1）茶葉籽干燥、去殼，粉碎過篩；（2）稱取茶葉籽粉，加部分水，加熱滅酶，然后冷卻至室溫，加入酶液及水，攪拌均勻，酶解0.5-2.0h；（3）在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液比為1:25、乙醇濃度為60%；調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，回流提取25-40min，然后離心，將離心后的上清液取出備用；濾渣用60%乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。本發(fā)明通過將酶法-半仿生法技術(shù)相結(jié)合，茶葉籽粉的總黃酮得率遠高于現(xiàn)有技術(shù)，說明采用該方法提取茶葉籽粉黃酮具有明顯優(yōu)勢。
【專利說明】一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于黃酮的提取領(lǐng)域，具體涉及一種水酶法集合半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國是產(chǎn)茶大國，種植面積及產(chǎn)量均居于世界首位，茶樹資源豐富，每年茶籽產(chǎn)量約8億多公斤，但長期以來人們對于茶葉籽的開發(fā)利用不足，大部分茶葉籽都被白白浪費掉了，國內(nèi)外對茶葉籽的研究主要集中在茶葉籽油的提取精煉和茶皂素的提取上，而對黃酮類物質(zhì)的研究開發(fā)較少，開發(fā)茶葉籽黃酮，避免資源浪費有著十分重要的意義和廣闊的前景。
[0003]水酶法提取黃酮是一種較為高效環(huán)保的方法，但是水酶法的提取率還不太理想，一定程度上造成黃酮資源浪費，而且由于茶籽中的兩性大分子物質(zhì)蛋白質(zhì)等物質(zhì)的存在，使富含油/水的水酶法提黃酮體系中不可避免的形成o/w型乳狀液(emulsion)，這不但給體系分離帶來極大的挑戰(zhàn)，而且嚴重限制了提取率。
[0004]由于茶葉籽黃酮的提取純化工藝還不完善，因此尋找更為高效的提取方法提取茶葉籽黃酮具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，將水酶法和半仿生技術(shù)相結(jié)合，顯著提高了茶葉籽中黃酮的提取率。
[0006]本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0007]—種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟:
[0008](I)茶葉籽粉制備:茶葉籽干燥去殼，粉碎過篩，得到茶葉籽粉；
[0009](2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:3_6，稱取茶葉籽粉，在此茶葉籽粉中先加入部分水，加熱3-8分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在51-55°C、攪拌條件下酶解0.5-2.0h ；
[0010](3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，在80°C水浴中回流提取25-40min,然后在3500_4500r/min下離心5_15min,將離心后的上清液取出備用；濾洛用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟(2)中酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中制成，纖維素酶的用量為6-12mg/g茶葉籽粉；所述酶液配制時在0-5°C條件下快速進行。
[0012]進一步地，水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟:
[0013](I)茶葉籽粉制備:茶葉籽去殼，粉碎過篩，烘干至恒重，得到茶葉籽粉；[0014](2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:4，稱取茶葉籽粉，先加入部分水，加熱4分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在53°C、攪拌條件下酶解0.85h ;所述酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中在0-5°C條件下快速制成，纖維素酶的用量為10mg/g茶葉籽粉；
[0015](3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為2.0，在80°C水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下離心lOmin，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7.4和8.0重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
[0016]采用上述方案后，本發(fā)明達到的有益效果為:通過酶法耦合半仿生法技術(shù)相結(jié)合，茶葉籽粉的總黃酮得率遠高于按照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準測出的茶葉籽粉黃酮得率，說明采用該方法提取茶葉籽粉總黃酮具有明顯優(yōu)勢。
[0017]以下通過下列實驗來具體說明本發(fā)明的效果:
[0018]試驗例1:提取方法篩選
[0019]在茶葉籽黃酮提取過程中，本發(fā)明人對提取工藝進行了設(shè)計和選擇，以提取時間、茶葉籽黃酮含量為考察指標(biāo)，充分考慮水劑法、水酶法、水酶法-半仿生法三種方法對提取時間及黃酮含量的影響，進行了一系列的選擇試驗。
[0020]樣品A:按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準NY/T1295-2007《蕎麥及其制品中總黃酮含量的測定》中“7.1試樣制備”及“7.2 試料溶液的制備”的方法制備樣品，即簡單工藝為:茶葉籽去殼一粉碎一一加入甲醇溶液在(65± 2) °〇下恒溫振蕩提取2小時一過濾一即得；
[0021]樣品B:按照文獻“茶葉籽中總黃酮的提取及結(jié)構(gòu)的初步鑒定”(王華清等，食品工業(yè)科技，2012年第7期)中最佳工藝條件制備，即工藝條件為:料液比1:26 (g:ml)、乙醇體積分數(shù)58%、提取溫度82 °C、提取時間2h ；
[0022]樣品C:按照本發(fā)明實施例1方法制備；
[0023]樣品D:按照本發(fā)明實施例1方法，去除半仿生法步驟3)制備，即僅采用水酶法提取，其中酶解時間為1.5h ；
[0024]上述方法中茶葉籽粉原料均為10g，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準檢測總黃酮含量，得到的目的產(chǎn)物的考察結(jié)果見表1。
[0025]表1工藝選擇實驗結(jié)果
[0026]
【權(quán)利要求】
1.一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)茶葉籽粉制備:茶葉籽干燥去殼，粉碎過篩，得到茶葉籽粉； (2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:3-6，稱取茶葉籽粉，在此茶葉籽粉中先加入部分水，加熱3-8分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在51-55°C、攪拌條件下酶解 0.5-2.0h ； (3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，在80°C水浴中回流提取25-40min,然后在3500_4500r/min下離心5_15min,將離心后的上清液取出備用；濾洛用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:所述步驟(2)中酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中制成，纖維素酶的用量為6-12mg/g茶葉籽粉；所述酶液配制時在0-5°C條件下快速進行。
3.如權(quán)利要求1-2任一所述的水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: (O茶葉籽粉制備:茶葉籽去殼，粉碎過篩，烘干至恒重，得到茶葉籽粉； (2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:4，稱取茶葉籽粉，先加入部分水，加熱4分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在53°C、攪拌條件下酶解0.85h ;所述酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中在0-5°C條件下快速制成，纖維素酶的用量為10mg/g茶葉籽粉；` (3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為2.0，在80°C水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下離心lOmin，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)PH至7.4和8.0重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
【文檔編號】C07G99/00GK103509062SQ201310435228
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】王曉琴, 林莉 申請人:華僑大學(xué), 貴州周以晴生物科技有限公司