抗原結(jié)合蛋白及其用作治療癌癥的定位產(chǎn)品的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種能特異性地結(jié)合蛋白Axl的抗原結(jié)合蛋白(尤其是單克隆抗體)以及編碼所述蛋白的氨基酸和核酸序列。根據(jù)一個方面，本發(fā)明涉及一種能特異性地結(jié)合Axl并通過誘導(dǎo)Axl的內(nèi)在化而被內(nèi)在化到細胞中的抗原結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還包括所述抗原結(jié)合蛋白連同其它抗癌化合物(如毒素、放射性元素或藥物)作為定位產(chǎn)品的用途，及其用于治療某些癌癥的用途。
【專利說明】抗原結(jié)合蛋白及其用作治療癌癥的定位產(chǎn)品的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種能特異性地結(jié)合蛋白Axl的新型抗原結(jié)合蛋白(尤其是單克隆抗體)以及編碼所述蛋白的氨基酸和核酸序列。根據(jù)一個方面，本發(fā)明涉及一種能特異性地結(jié)合Axl并通過誘導(dǎo)Axl的內(nèi)在化而被內(nèi)在化到細胞中的抗原結(jié)合蛋白或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還包括所述抗原結(jié)合蛋白連同其它抗癌化合物(如毒素、放射性元素或藥物)作為定位(addressing)產(chǎn)品的用途,及其用于治療某些癌癥的用途。
【背景技術(shù)】 [0002]“Axl” (也稱為“Ufo”、“Ark”或“Tyro7”)克隆自患有慢性粒細胞白血病的患者，當(dāng)由鼠NIH3T3過度表達時，作為致癌基因而觸發(fā)轉(zhuǎn)化。其屬于受體酪氨酸激酶(RTK)家族，稱為 TAM(Tyro3> Axl>Mer)家族,其包括 Tyro3 (Rse、Sky、Dtk、Etk、Brt、Tif)、Axl 以及Mer (Eyk、Nyk、Tyro-12) (Lemke G.Nat.Rev.Tmmunol.(2008).8, 327-336)。
[0003]人蛋白Axl是894個氨基酸的蛋白質(zhì)，其序列呈現(xiàn)于SEQ ID N0.29所列的序列中。氨基酸1-25對應(yīng)著信號肽，不含所述信號肽的人蛋白Axl呈現(xiàn)于SEQ ID N0.30所列的序列中。
[0004]Gas6最初作為生長停滯特異性基因而被分離，是TAM家族成員的常見配體(Varnum B.C.等人 Nature (1995).373，623-626)。Gas6 呈現(xiàn)出對 Axl 最高的親和性，其次是 Tyro3,最后是 Mer (Nagata K 等人 J.Biol.Chem.(1996).271，30022-30027)。Gas6 由如下組成:介導(dǎo)對磷脂膜結(jié)合的富含Y-羧基谷氨酸(Gla)的結(jié)構(gòu)域、4個表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域以及2個層粘連蛋白G樣(LG)結(jié)構(gòu)域(Manfioletti G., Brancolini, C, Avanzi, G.&Schneider, C.Mo 1.Cell Biol.(1993).13，4976-4985)。對于許多其它 RTK，配體的結(jié)合導(dǎo)致受體二聚化和酪氨酸殘基的自身磷酸化(對于受體Axl而言，酪氨酸殘基779、821和866),酪氨酸殘基作為各種細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子的?？课稽c(Linger R.M.Adv.Cancer Res.(2008).100, 35-83)。此外，Axl受體可通過配體非依賴性過程被激活。當(dāng)Axl受體過度表達時，可發(fā)生這種激活。
[0005]Gas6/Axl信號傳導(dǎo)已被證明調(diào)節(jié)各種細胞過程，包括大量各種細胞的體外細胞增殖、黏附、遷移和存活(Hafizi S.&Dahlback, B.FEBS J.(2006).273，5231-5244)。此外，TAM受體參與先天免疫的控制；它們抑制樹突狀細胞(DC)和巨噬細胞中對病原體的炎癥反應(yīng)。它們還驅(qū)動凋亡細胞被這些免疫細胞的吞噬作用，且其是自然殺傷(NK)細胞的成熟和殺傷活性所需要的(Lemke G.Nat.Rev.1mmunol.(2008).8，327-336)。
[0006]于正常細胞中弱表達，其主要見于成纖維細胞、髓系祖細胞、巨噬細胞、神經(jīng)組織、心肌和骨骼肌中，在其中主要支持細胞的存活。Gas6/Axl系統(tǒng)通過調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞的動態(tài)平衡在血管生物學(xué)中發(fā)揮重要作用(Korshunov V.A., Mohan, A.Μ., Georger, Μ.A.&Berk, B.C.Circ.Res.(2006).98, 1446-1452 ；Korshunov V.A., Daul, M., Massett, M.P.&Berk, B.C.Hypertension(2007).50, 1057-1062)。
[0007]在腫瘤細胞中，Axl在調(diào)節(jié)細胞的侵襲和遷移中起重要作用。Axl的過度表達不僅與預(yù)后不良相關(guān)，也與乳房、結(jié)腸、食管癌、肝細胞、胃、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺、黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢、前列腺、橫紋肌肉瘤、腎、甲狀腺和子宮內(nèi)膜癌中所報告的各種人癌癥的侵襲增加相關(guān)(Linger R.M.Adv.Cancer Res.(2008).100, 35-83 以及 Verma A.Mol.Cancer Ther.(2011).10，1763-1773，綜述)。在乳癌中，Axl似乎是上皮至間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)強大的效應(yīng)因子；EMT過程積極促進生物中癌癥細胞的遷移和傳播(Thiery J.P.Curr.0pin.Cell Biol.(2003).15，740-746)。
[0008]也已表明Axl調(diào)節(jié)血管生成。在內(nèi)皮細胞中敲除Axl確實損傷管的形成和遷移(Holland S.J.等人Cancer Res.(2005).65,9294-9303)以及干擾特定的血管生成信號通路(Li Y.等人 Oncogene (2009).28，3442-3455)。
[0009]最近對一系列細胞模型的一些研究描述了 Axl過度表達在耐藥現(xiàn)象中的參與。下表1總結(jié)了這些研究。
[0010]表1
【權(quán)利要求】
1.一種抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，其: i)特異性結(jié)合人蛋白Axl，優(yōu)選具有序列SEQID N0.29或30或其天然變體序列，以及 ii)其結(jié)合所述人蛋白Axl之后被內(nèi)在化， 所述抗原結(jié)合蛋白特征在于其包含至少選自SEQ ID N0.1至14或36至68的氨基酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其特異性結(jié)合至定位于人蛋白Axl細胞外結(jié)構(gòu)域中的表位，優(yōu)選具有序列SEQ ID N0.31或32或其天然變體序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其誘導(dǎo)至少200的MFI降低。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其由單克隆抗體組成。
5.一種抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其由抗體組成，所述抗體包含三個輕鏈⑶R和三個重鏈⑶R，其中三個輕鏈⑶R包含序列SEQ ID N0.1、2和3，以及三個重鏈CDR 包含序列 SEQ ID N0.4、5 和 6。
6.根據(jù)權(quán)利要 求5所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其包含選自如下的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域: i)序列SEQID N0.7的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.7表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列， ii)序列SEQID N0.36的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.36表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列；以及 iii)序列SEQID N0.37至47的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.37至47表現(xiàn)出至少80 %同一性的任何序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其包含選自如下的重鏈可變結(jié)構(gòu)域: i)序列SEQID N0.8的重鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.8表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列； ii)序列SEQID N0.48的重鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.48表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列；以及 iii)序列SEQID N0.49至68的重鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.49至68表現(xiàn)出至少80 %同一性的任何序列。
8.根據(jù)權(quán)利要求5、6或7所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，特征在于其包含: i)序列SEQID N0.7、36或37至47的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.7、36或37至47表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列；以及 ii)序列SEQID N0.8、48、或49至68的重鏈可變結(jié)構(gòu)域、或與SEQ ID N0.8、48、或49至68表現(xiàn)出至少80%同一性的任何序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗原結(jié)合蛋白，特征在于其由單克隆抗體1613F12或其抗原結(jié)合片段組成，所述單克隆抗體1613F12源自2011年7月28日保藏在法國巴斯德研究所CNCM的雜交瘤1-4505。
10.于2011年7月28日保藏在法國巴斯德研究所CNCM的鼠雜交瘤1-4505。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段，其用作定位產(chǎn)品將細胞毒性劑遞送至宿主靶標(biāo)位點，所述宿主靶標(biāo)位點由定位于蛋白Axl細胞外結(jié)構(gòu)域中的表位組成，優(yōu)選人蛋白Axl細胞外結(jié)構(gòu)域，更優(yōu)選具有序列SEQ ID N0.31或21的人蛋白Axl細胞外結(jié)構(gòu)域或其天然變體序列。
12.一種免疫綴合物，其包含綴合至細胞毒性劑的根據(jù)權(quán)利要求1至9和11任一項所述的抗原結(jié)合蛋白、或其抗原結(jié)合片段。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫綴合物，其用于治療癌癥。
14.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求13所述的免疫綴合物以及至少一種賦形劑和/或藥學(xué)上可接受的載體。
【文檔編號】C07K16/28GK103998468SQ201280053260
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2012年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月3日
【發(fā)明者】C·博-拉沃爾, L·格奇, N·布泰 申請人:皮埃爾法布雷醫(yī)藥公司