專利名稱：一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中草藥有效成分的提取方法，尤其涉及一種從川西獐芽菜植物中提取高純度利膽、抗炎有效成分(龍膽苦苷、獐芽菜苦苷)的方法。
背景技術：
川西獐芽菜(Swertia mussotii Franch)屬龍膽科獐芽菜屬植物，是藏醫(yī)藥治療肝膽系統(tǒng)疾病的常用藥材，泛稱“藏茵陳”的一種。研究資料表明，川西獐芽菜中主要化學成分為含三萜類(如齊墩果酸)、酮類、芒果苷、龍膽苦苷、獐芽菜苦苷、當要素等成分< 中華本草〉藏藥卷(M) 2002,68-69。龍膽苦苷、獐芽菜苦苷具有促進胃液分泌、抗菌、利膽及抗炎等作用梁向艷、田瓊等，中成藥，2006，28(4) :548-552；同時對各種原因?qū)е碌母螕p傷、膽囊炎、膽管阻塞具有良好的治療作用。目前，提取龍膽苦苷和獐芽菜苦苷的方法主要有微波提取，回流提取，超聲提取， 冷浸提取等方法，提取溶劑有甲醇以及乙醇水等。微波提取、超聲提取法及溶劑甲醇多使用于有效成分含量分析方面張興旺，陶燕鐸等，中國野生植物資源，2010，29(2) 38-40 ；孫菁，陳桂琛等，分析試驗室，2006，25 (5) =28-30],不適合大生產(chǎn)。在分離純化方面，多使用乙醇水系統(tǒng)提取才謙，劉濤等，中成藥，2003，25 (4) ,211-212 ；王良貴，時珍國醫(yī)國藥，2007， 18(11) :2723-2724，大孔樹脂法分離。綜合考慮生產(chǎn)實際，本發(fā)明采用回流提取、大孔樹脂分離、乙醇水作為提取和洗脫溶劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種工藝簡單、安全性良好的從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法， 包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末用質(zhì)量濃度為50 80%的乙醇溶液按1 5 1 20的固液質(zhì)量比在60 85°C下回流提取2 4次，每次1 4小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑；(2)將所述提取液稀釋至質(zhì)量濃度為10 30 %，得到混濁液，該混濁液靜置6 48小時后，過濾，得到澄清溶液；(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為85 95%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫， 使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將所述IOOg 50kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為1. 0 32. 5cm 的層析柱中形成樹脂柱；所述大孔吸附樹脂與所述乙醇的質(zhì)量體積比為1 5 1 15;(4)將所述步驟(2)所得的澄清溶液以0. 5 1. OBV/h的流速流過所述步驟(3) 所得的樹脂柱，并保留吸附1 4h ；(5)將所述步驟⑷所得的樹脂柱依次用水、質(zhì)量濃度為10 75%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；
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(6)將所述洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和
獐芽菜苦苷。所述步驟(1)中的干燥川西獐芽菜植物粉末是指長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段，或?qū)⒏稍锎ㄎ麾坎酥参锶莘鬯楹蟮玫降拈L度< 5mm的粉末。所述步驟(2)中混濁液靜置是指采用室溫條件下靜置或采用1 4°C冷藏靜置。所述步驟(5)中乙醇溶液洗脫的流速為0. 5 1. OBV/h。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明以川西獐芽菜植物全草為原料，以親水性溶劑——乙醇溶液回流提取， 并利用對水溶性成分具有選擇性吸附作用的大孔樹脂進行分離和富集，從而得到含量大于 70%的有效成分——龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。2、由于本發(fā)明所用溶劑為親水性溶劑，因此，具有良好的安全性。3、由于本發(fā)明采用回流提取、大孔樹脂分離、乙醇水作為提取和洗脫溶劑，因此， 工藝簡單、重復性良好，適于工業(yè)化生產(chǎn)。4、本發(fā)明設備投資小、操作方便，且成本低廉。
具體實施例方式實施例1 一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末——長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液按1 5的固液質(zhì)量比(kg/kg)在60°C下采用TN-100提取回流濃縮機組(浙江華聯(lián)制藥機械股份有限公司)回流提取2次，每次1小時，經(jīng)過濾后， 合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為10%，得到混濁液，該混濁液在室溫條件下靜置6 小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為95%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將IOOg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為1. Ocm的層析柱中形成樹脂柱； 大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 15(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 5BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附lh。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為10%的乙醇溶液以 0. 5BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上?；畚鼍軆x器有限公司)濃縮后，在 85°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為73. 89% 和 2. 14%。實施例2 —種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末——長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液按1 20的固液質(zhì)量比(kg/kg)在85°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取4次，每次4小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為30%，得到混濁液，該混濁液在室溫條件下靜置48小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為90%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將IOkg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為IOcm的層析柱中形成樹脂柱 ’大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 8(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以1. OBV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附4h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為20%的乙醇溶液以 1. OBV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為74. 95% 和 2. 31%。實施例3 —種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末——長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液按1 10的固液質(zhì)量比(kg/kg)在75°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取3次，每次2小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為15%，得到混濁液，該混濁液在室溫條件下靜置 12小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為92%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將20kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為IOcm的層析柱中形成樹脂柱 ’大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 5(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 8BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附2h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為30%的乙醇溶液以 0. 8BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為79. 76% 和 2. 39%。實施例4 一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥)11西獐芽菜植物粉末——將干燥)11西獐芽菜植物全草粉碎后得到的長度彡5mm的粉末用質(zhì)量濃度為70%的乙醇溶液按1 15的固液質(zhì)量比(kg/kg)在80°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取2次，每次3小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為22 %，得到混濁液，該混濁液在4°C冷藏靜置24小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為91%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將5kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為5cm的層析柱中形成樹脂柱；大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 9(g/ml)。
(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 6BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附3h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為40%的乙醇溶液以 0. 6BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為78. 62% 和 2. 35%。實施例5 —種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥)11西獐芽菜植物粉末——將干燥)11西獐芽菜植物全草粉碎后得到的長度彡5mm的粉末用質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液按1 12的固液質(zhì)量比(kg/kg)在65°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取4次，每次1小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為28 %，得到混濁液，該混濁液在4°C冷藏靜置36小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為94%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將35kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為18cm的層析柱中形成樹脂柱 ’大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 14(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 9BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附4h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為50%的乙醇溶液以 0. 9BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為78. 23% 和 2. 30%%o實施例6 —種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末——將干燥川西獐芽菜植物全草粉碎后得到的長度彡5mm的粉末用質(zhì)量濃度為75%的乙醇溶液按1 18的固液質(zhì)量比(kg/kg)在70°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取3次，每次3小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為26 %，得到混濁液，該混濁液在;TC冷藏靜置30小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為88%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將15kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為IOcm的層析柱中形成樹脂柱 ’大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 9(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 7BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附4h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液以0. 8BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為76. 91 % 和 2. 14%。實施例7 —種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末——長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段用質(zhì)量濃度為83%的乙醇溶液按1 8的固液質(zhì)量比(kg/kg)在72°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取4次，每次1小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為20 %，得到混濁液，該混濁液在1 ！冷藏靜置20小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為85%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將12kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為IOcm的層析柱中形成樹脂柱；大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 13(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以0. 5BV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附lh。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為70%的乙醇溶液以
0.5BV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為74. 26% 和 2. 37%。實施例8 一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末用質(zhì)量濃度為65%的乙醇溶液按1 10的固液質(zhì)量比(kg/kg)在80°C下采用TN-100提取回流濃縮機組回流提取2次，每次4小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑。(2)將提取液稀釋至質(zhì)量濃度為18%，得到混濁液，該混濁液在2°C冷藏靜置40小時后，過濾，得到澄清溶液。(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為89%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將50kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為32. 5cm的層析柱中形成樹脂柱； 大孔吸附樹脂與乙醇的質(zhì)量體積比為1 7(g/ml)。(4)將步驟(2)所得的澄清溶液以1. OBV/h的流速流過步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附4h。(5)將步驟(4)所得的樹脂柱先用水洗脫，然后用質(zhì)量濃度為75%的乙醇溶液以
1.OBV/h的流速洗脫，收集洗脫液。(6)將洗脫液經(jīng)N-1000D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，在60°C溫度下干燥至恒重后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。該有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷經(jīng)高效液相色譜法測定，含量分別為75. 98% 和 2. 32%。
權利要求
1.一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末用質(zhì)量濃度為50 80%的乙醇溶液按1 5 1 20 的固液質(zhì)量比在60 85°C下回流提取2 4次，每次1 4小時，經(jīng)過濾后，合并提取液并回收溶劑；(2)將所述提取液稀釋至質(zhì)量濃度為10 30%，得到混濁液，該混濁液靜置6 48小時后，過濾，得到澄清溶液；(3)將非極性大孔吸附樹脂用質(zhì)量濃度為85 95%的乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將所述IOOg 50kg濕樹脂轉(zhuǎn)入內(nèi)徑為1. 0 32. 5cm的層析柱中形成樹脂柱；所述大孔吸附樹脂與所述乙醇的質(zhì)量體積比為1 5 1 15;(4)將所述步驟(2)所得的澄清溶液以0.5 1. OBV/h的流速流過所述步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附1 4h;(5)將所述步驟(4)所得的樹脂柱依次用水、質(zhì)量濃度為10 75%的乙醇溶液洗脫， 收集洗脫液；(6)將所述洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。
2.如權利要求1所述的一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，其特征在于 所述步驟(1)中的干燥川西獐芽菜植物粉末是指長度< 5mm的干燥川西獐芽菜植物全草寸段，或?qū)⒏稍锎ㄎ麾坎酥参锶莘鬯楹蟮玫降拈L度< 5mm的粉末。
3.如權利要求1所述的一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，其特征在于 所述步驟(2)中混濁液靜置是指采用室溫條件下靜置或采用1 4°C冷藏靜置。
4.如權利要求1所述的一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，其特征在于 所述步驟(5)中乙醇溶液洗脫的流速為0. 5 1. OBV/h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法，該方法包括以下步驟(1)將干燥川西獐芽菜植物粉末用乙醇溶液回流提取，經(jīng)過濾，合并提取液并回收溶劑；(2)將所述提取液稀釋得到混濁液，該混濁液靜置后，過濾，得到澄清溶液；(3)將非極性大孔吸附樹脂用乙醇溶液溶脹后經(jīng)水洗脫，使其逐漸過渡至水相，得到濕樹脂；將所述濕樹脂轉(zhuǎn)入層析柱中形成樹脂柱；(4)將所述步驟(2)所得的澄清溶液流過所述步驟(3)所得的樹脂柱，并保留吸附1～4h；(5)將所述步驟(4)所得的樹脂柱依次用水、乙醇溶液洗脫，收集洗脫液；(6)將所述洗脫液經(jīng)濃縮、干燥后，即得棕黃色或黃色粉末狀有效成分龍膽苦苷和獐芽菜苦苷。本發(fā)明工藝簡單、重復性良好，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H17/04GK102503996SQ20111037457
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月22日 優(yōu)先權日2011年11月22日
發(fā)明者于瑞濤, 梅麗娟, 畢宏濤, 邵赟, 陶燕鐸, 高婷婷 申請人:中國科學院西北高原生物研究所