專利名稱：一種利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，活性多肽和免疫核糖核酸(iRNA)主要用于該動(dòng)物病毒性疾病的預(yù)防和治療。
背景技術(shù)：
近年來，隨著人民群眾生活水平的提高，畜禽類食品需求量逐年增加，從而帶動(dòng)了養(yǎng)殖業(yè)的空前發(fā)展。隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，畜禽類的疾病也在增加，個(gè)體用藥量越來越大，飼養(yǎng)成本逐漸提高，造成養(yǎng)殖效益下滑。由于西藥危害和產(chǎn)品藥殘而帶來的食品安全問題，越來越引起國(guó)人的高度關(guān)注。如此下去，必將嚴(yán)重影響到該行業(yè)持續(xù)健康地發(fā)展。面對(duì)這種嚴(yán)峻的形勢(shì)，我們公司組織科研人員，并在相關(guān)專家的指導(dǎo)下，發(fā)明生產(chǎn)出一種活性多肽制劑，用于畜禽類動(dòng)物疾病的防治，既無藥物殘留和毒副作用，也無藥物依賴性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，利用先進(jìn)的細(xì)胞裂解技術(shù)，能夠安全有效地濾除各種細(xì)菌和蛋白質(zhì)等抗原，最大限度地提取高純度、高活性的有效成份，這種高純度的活性多肽制劑保留其上一代曾經(jīng)受到的防疫及得過疾病后服藥的全部信息，攜帶或傳遞給下一代畜禽個(gè)體，接收后的個(gè)體即不再罹患原來已患過的疾病，從而實(shí)現(xiàn)治療和預(yù)防的目的。本發(fā)明的方法采用以下步驟
1去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪； 2稱量清洗精確稱量出去除脂肪后原料，用純化水清洗2 3遍； 3 粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應(yīng)比例混合，用膠體磨將其研磨數(shù)分鐘，制成勻漿；脾臟與純化水的重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；
4超微粉碎將勻漿經(jīng)過細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行超微破碎，破碎后的溶液裝入滅菌后的容器
中；
5滅活按破碎液總量的0. 2%加甲醛溶液，36 38 °C滅活； 6凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫(kù)冷凍后解凍；
7離心分離將解凍的勻漿置2V，以3600r/min離心15分鐘，去除沉淀，取上清液
8過濾層析先將上清液經(jīng)過粗濾，再利用層析柱進(jìn)行層析，并收集層析液； 9精濾將層析液用2 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，然后用截留分子量為12000道爾頓超濾膜進(jìn)行精濾；
10配制將精濾后的溶液移入配液罐中，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)PH至6. 8 7. 5 之間，混勻；
11分裝定量分裝，加蓋密封；活性多肽含量不低于1. 8毫克/毫升，核糖核酸含量不低于60微克/毫升；
12保存在_28°C條件下冷凍保存。
由于動(dòng)物新型免疫抑制性疾病，導(dǎo)致傳統(tǒng)疫苗免疫效力不足或失效，給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了極大損失。大量實(shí)驗(yàn)證明活性多肽配合疫苗使用可以顯著提高疫苗的免疫效力， 同時(shí)可以提高動(dòng)物對(duì)這些免疫抑制疾病的抵抗能力?；钚远嚯倪€可以治療動(dòng)物病毒和輔助性治療細(xì)菌性疾病，增強(qiáng)動(dòng)物的免疫能力，用于病毒性疾病的治療能夠克服傳統(tǒng)藥物副作用大、療效不佳的缺點(diǎn)，而且運(yùn)用基因工程方法生產(chǎn)的活性多肽，可以大大降低生產(chǎn)成本， 獲得良好的市場(chǎng)性價(jià)比。
利用活體宰殺后的脾臟、血液作為原料，采用生物提取工藝精制而成。本產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝先進(jìn)、科學(xué)，從原料的粉碎到制成成品，整個(gè)工藝過程均是在超凈環(huán)境和常溫以下的溫度中進(jìn)行，工藝中使用了先進(jìn)的細(xì)胞裂解技術(shù)，有效地減少了半成品在反復(fù)凍融過程中活性蛋白核苷鏈被分解而失活的機(jī)會(huì)，改良層析、過濾等技術(shù)的應(yīng)用，能夠安全有效地濾除各種細(xì)菌和蛋白質(zhì)等抗原，最大限度地提取高純度、高活性的有效成份。這種高純度的活性多肽制劑保留其上一代曾經(jīng)受到的防疫及得過疾病后服藥的全部信息，攜帶或傳遞給下一代畜禽個(gè)體，接收后的個(gè)體即不再罹患原來已患過的疾病，從而實(shí)現(xiàn)治療和預(yù)防的目的。本產(chǎn)品具有以下優(yōu)點(diǎn)
1.是一種活性多肽，屬低分子可透析成分，可用于治療和預(yù)防多種畜禽類疾病，并可在臨床上大量應(yīng)用，開拓了畜禽類疾病防治的新途徑；
2.本產(chǎn)品可單獨(dú)使用，也可以與藥物、抗體甚至疫苗同時(shí)使用；可以口服，也可以注射，具有使用方便、效果快的特點(diǎn)，且無任何應(yīng)激；
3.本品所用原料(血液、脾臟)不經(jīng)過處理將會(huì)嚴(yán)重污染周圍環(huán)境，而將這些原料經(jīng)過先進(jìn)生產(chǎn)工藝處理后變廢為寶，能夠創(chuàng)造極大的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和環(huán)境效益；
4.本項(xiàng)目的投產(chǎn)將解決以下突出問題普通藥物的殘留和毒副作用問題；養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展問題；增加產(chǎn)品附加值，促進(jìn)循環(huán)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展問題。
具體實(shí)施例方式下面為本發(fā)明利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，其步驟如下
1去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪； 2稱量清洗精確稱量出去除脂肪后原料，用純化水清洗2 3遍； 3 粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應(yīng)比例混合，用膠體磨將其研磨數(shù)分鐘，制成勻漿；脾臟與純化水重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；
4超微粉碎將勻漿經(jīng)過細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行超微破碎，破碎后的溶液裝入滅菌后的容器
中；
5 滅活按破碎液總量的0. 2%加甲醛溶液(甲醛溶液的重量百分比為35 40%)， 36 38°C滅活；
6凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫(kù)冷凍后解凍；
7離心分離將解凍的勻漿置2°C，以3600r/min離心15分鐘，去除沉淀，取上清液
8 過濾層析先將上清液經(jīng)過粗濾，再利用層析柱進(jìn)行層析，并收集層析液；層析柱主要技術(shù)為
權(quán)利要求
1. 一種利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，其特征在于采用以下步驟(1)去除脂肪取畜禽類脾臟，去除原料中的脂肪；(2)稱量清洗精確稱量出去除脂肪后原料，用純化水清洗2 3遍；(3)粗粉碎將脾臟與血液和純化水按相應(yīng)比例混合，用膠體磨將其研磨數(shù)分鐘，制成勻漿；脾臟與純化水的重量比為1 :2，脾臟與血液的重量比為1 :5 ；(4)超微粉碎將勻漿經(jīng)過細(xì)胞破碎機(jī)進(jìn)行超微破碎，破碎后的溶液裝入滅菌后的容器中；(5)滅活按破碎液總量的0.2%加甲醛溶液，36 38°C滅活；(6)凍融將滅活的勻漿，置_38°C冷庫(kù)冷凍后解凍；(7)離心分離將解凍的勻漿置2V，以3600r/min離心15分鐘，去除沉淀，取上清液備用；(8)過濾層析先將上清液經(jīng)過粗濾，再利用層析柱進(jìn)行層析，并收集層析液；(9)精濾將層析液用2μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，然后用截留分子量為12000道爾頓超濾膜進(jìn)行精濾；(10)配制將精濾后的溶液移入配液罐中，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6. 8 7. 5之間，混勻；(11)分裝定量分裝，加蓋密封；活性多肽含量不低于1. 8毫克/毫升，核糖核酸含量不低于60微克/毫升；(12)保存在條件下冷凍保存。
全文摘要
本發(fā)明利用動(dòng)物血液和脾臟分離提取活性多肽和免疫核糖核酸的方法，是利用先進(jìn)的細(xì)胞裂解技術(shù)，以健康畜禽類脾臟、血液為原料，經(jīng)過原料脂肪的去除、細(xì)胞破碎、滅活、凍融、離心、粗濾、層析、精濾、配置、分裝制備的活性多肽口服溶液。本品分子量小，完全不具抗原性，應(yīng)用后不刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，不會(huì)被抗體中和。能增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能，提高機(jī)體抗感染能力；不被胰蛋白酶、DNA酶、RNA酶所破壞，應(yīng)用效果良好；活性高，臨床用量小，見效快；使用安全，無毒副作用，無藥物殘留。不僅可用于預(yù)防，也可用于病毒感染引起的疾病的治療。
文檔編號(hào)C07K1/36GK102167726SQ20111004113
公開日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2011年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月21日
發(fā)明者夏雪, 蔣士策, 蔣明達(dá), 虞文洲 申請(qǐng)人:山東省莘縣金鑫畜禽有限公司