專利名稱：一種藍萼甲素的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥提取領(lǐng)域，具體涉及一種以藍萼香茶菜藥材為原料制備高純度藍 萼甲素的方法。
背景技術(shù)：
藍萼甲素為藍萼香茶菜的活性成分，藍萼甲素具有顯著的藥理活性，藍萼甲素可 抑制卡西霉素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的兔血小板血 栓素A2生成，并同時升高前列腺素E2，能顯著抑制ADP，AA, PAF等誘導(dǎo)的兔血小板聚集， 顯著升高血小板內(nèi) cAMP 7ΚΨ (參見Zhang B, Long K. Effects of glaucocalyxin A on aggtegation and cAMP levels of rabbit platelets in vitro. Acta Pharmacologica Sinica 1993,14(4) :347.)藍萼甲素具有細胞毒作用，對艾氏腹水癌有一定抑制作用，體 內(nèi)對S180實體瘤抑制率達30.4% (10mg/kg，7天)，藍萼甲素對DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成具 有可逆性抑制作用，并呈劑量相關(guān)性(參見張淑香等，藍尊甲素在體外對DNA，RNA和蛋 白質(zhì)生物合成的影響藥學(xué)情報通訊1990，8(3) :238.)。藍萼甲素對A549 (人肺癌細胞)、 L0V0(人腸癌細胞)、6T-CEM(人T細胞白血病細胞)、HL_60(人白血病細胞)具有較強的 細胞毒活性，可用于制備抗癌藥物(參見陳海生等，藍萼香茶菜中二萜類化合物在制備抗 癌藥物中的應(yīng)用CN101455652-3320283)?，F(xiàn)有技術(shù)中，從藥材藍萼香茶菜中提取藍萼甲素的方法不僅步驟繁瑣，得率偏低， 普遍低于10%，而且由于采用對生物體具有毒性的溶劑，殘留的有毒溶劑不符合藥典要求， 具體包括以下步驟(1)采集藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用體積百分?jǐn)?shù)85% 95% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑，至每毫升 溶劑含原藥材3 IOg ；(2)用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次， 合并氯仿層并濃縮，得到氯仿萃取液；(3)向步驟(2)所得氯仿萃取液中加入硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層 析；以氯仿甲醇200 1或氯仿甲醇100 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲 素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑；(4)以無水乙醇或甲醇反復(fù)結(jié)晶，得藍萼甲素，測試純度，計算得率。采用上述技術(shù)方案所得藍萼甲素的純度一般在90%以上，但得率一般為7% 9%，而且過程中使用了有毒的溶劑，氯仿、甲醇，并且殘留的有毒溶劑會影響藍萼甲素作為 藥物的使用，不符合藥典要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種藍萼甲素的提取方法，在提高純度和得率的同時，避免使 用有毒的溶劑，使提取的藍萼甲素符合藥典要求。
為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種藍萼甲素的提取方法，提取、硅 膠柱層析洗脫色素和雜質(zhì)、純化步驟，具體包括以下步驟(1)采集原藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用體積百分?jǐn)?shù)75 80% 乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2 3小時，合并提取液，減壓除去部分溶劑， 得濃縮提取液；(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入硅膠并攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層 析以硅膠柱體積為1體積份，首先以2 3份體積份的洗脫液A洗脫脂溶性色素，再以4 6份體積份的洗脫液B洗脫雜質(zhì)，最后以10 15份體積份的洗脫液C洗脫；收集洗脫液， 濃縮后放置，析出晶體；其中，所述洗脫液A為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=8 1 ；所述洗脫液B為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=4 1 ；所述洗脫液C為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚乙酸 乙酯=2:1;(3)無水乙醇重結(jié)晶，得藍萼甲素晶體。上述技術(shù)方案中，步驟(1)中，減壓除去的部分溶劑可以回收再循環(huán)使用；除去部 分溶劑的量取決于濃縮提取液的濃度，濃縮提取液的濃度為濃縮提取液的體積原藥材 的質(zhì)量=Iml 3 4g ；例如，原藥材的質(zhì)量為1200g，則濃縮提取液的體積對應(yīng)為300 400ml ο由于上述技術(shù)方案運用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點藍萼香茶菜藥材(經(jīng)高效液相法測得藥材中藍萼甲素含量在0. )經(jīng)本方法得 到的藍萼甲素的純度在95 100%，純度高，適于制備各種劑型，得率在10%以上，得率高， 方法的重現(xiàn)性強，按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶劑殘留， 并且適用的有機溶劑無毒性，符合2010版藥典要求。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述實施例一取藍萼香茶菜地上部分10kg，經(jīng)粉碎，在常壓回流提取裝置中，用75%乙醇回流 提取2次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮后的體積為 3300毫升，加入1650克硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；硅膠柱體積為17600毫 升，以52800毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脫脂溶性色素，再以105600毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脫雜質(zhì)，最后以264000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脫，收集洗脫 液，濃縮至20毫升，放置，析晶，最后以無水乙醇20毫升重結(jié)晶，得藍萼甲素1.5克，其純度 為96.0%，得率15%，并且按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶 劑殘留。實施例二取藍萼香茶菜地上部分10kg，經(jīng)粉碎，在常壓回流提取裝置中，用80%乙醇回流 提取3次，每次回流提取3小時，合并提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮后的體積為 3250毫升，加入1600克硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；硅膠柱體積為18000毫升，以54000毫升的石油醚乙酸乙酯8 1洗脫脂溶性色素，再以108000毫升的石油醚 乙酸乙酯4 1洗脫雜質(zhì)，最后以270000毫升的石油醚乙酸乙酯2 1洗脫，收集洗脫 液，濃縮至20毫升，放置，析晶，最后以無水乙醇20毫升重結(jié)晶，得藍萼甲素1.4克，其純度 為95.6%，得率14%，并且按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶 劑殘留。以下實施例為采用現(xiàn)有技術(shù)的對比實施例實施例三取藍萼香茶菜地上部分1kg，經(jīng)粉碎，在常壓回流提取裝置中，用85%乙醇回流提 取2次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮后的體積為250 毫升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合并 氯仿層并濃縮至10毫升，加入20克硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；氯仿甲醇 200 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑，以無水乙 醇反復(fù)結(jié)晶，得藍萼甲素0. 07克，其純度為90 %，得率7 %。實施例四藍萼香茶菜地上部分1kg，經(jīng)粉碎，在常壓回流提取裝置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮后的體積為100毫 升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合并氯 仿層并濃縮至10毫升，加入20克硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；氯仿甲醇 100 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液回收溶劑，以甲醇反 復(fù)結(jié)晶，得藍萼甲素0. 09克，其純度為92 %，得率9 %。實施例五藍萼香茶菜地上部分1kg，經(jīng)粉碎，在常壓回流提取裝置中，用95%乙醇回流提取 3次，每次回流提取2小時，合并提取液，減壓回收溶劑濃縮提取液，濃縮后的體積為100毫 升，先用等體積的石油醚萃取三次，石油醚層棄去，水層再用等體積氯仿萃取三次，合并氯 仿層并濃縮至15毫升，加入30克硅膠攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；以氯仿洗脫色 素，再以氯仿甲醇200 1洗脫，以薄層層析對照，收集含有藍萼甲素的洗脫液，將洗脫液 濃縮，加入十倍量的甲醇，放置，過濾，以甲醇重結(jié)晶，得藍萼甲素0. 07克，其純度為96%， 得率7%。
權(quán)利要求
一種藍萼甲素的提取方法，提取、硅膠柱層析洗脫色素和雜質(zhì)、純化步驟，其特征在于，具體包括以下步驟(1)采集原藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用體積百分?jǐn)?shù)75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小時，合并提取液，減壓除去部分溶劑，得濃縮提取液；(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入硅膠并攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析以硅膠柱體積為1體積份，首先以2～3份體積份的洗脫液A洗脫脂溶性色素，再以4～6份體積份的洗脫液B洗脫雜質(zhì)，最后以10～15份體積份的洗脫液C洗脫；收集洗脫液，濃縮后放置，析出晶體；其中，所述洗脫液A為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1；所述洗脫液B為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；所述洗脫液C為石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按體積比，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1；(3)無水乙醇重結(jié)晶，得藍萼甲素晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述藍萼甲素的提取方法，其特征在于步驟(1)中，減壓除去的部 分溶劑的量取決于濃縮提取液的濃度，濃縮提取液的濃度為濃縮提取液的體積原藥材 的質(zhì)量=Iml 3 4g。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥提取領(lǐng)域，具體涉及一種以藍萼香茶菜藥材為原料制備高純度藍萼甲素的方法，包括以下步驟(1)采集原藥材藍萼香茶菜地上部分并粉碎，在常壓下，用75～80％乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小時，合并提取液，減壓回收溶劑，得濃縮提取液(2)向步驟(1)所得濃縮提取液中加入硅膠并攪拌均勻，減壓干燥，進行硅膠柱層析；(3)無水乙醇重結(jié)晶，得藍萼甲素晶體。經(jīng)本方法得到的藍萼甲素的純度在95～100％，純度高，適于制備各種劑型，得率在10％以上，得率高，方法的重現(xiàn)性強，按照2010版藥典附錄中有機溶劑殘留測定方法測定，無有機溶劑殘留，并且適用的有機溶劑無毒性，符合2010版藥典要求。
文檔編號C07C45/79GK101914002SQ201010264658
公開日2010年12月15日 申請日期2010年8月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月27日
發(fā)明者吳雙慶, 孫群, 張健, 徐乃玉, 沈曉丹 申請人:蘇州大學(xué);蘇州利元醫(yī)藥科技有限公司