專利名稱：：一種從露水草中提取蛻皮激素的方法及其蛻皮激素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于植物有效成分提取分離
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及從露水草中提取蛻皮激素的方法及其用該方法制備得到的蛻皮激素。
背景技術(shù)：
：露水草(Cyanotis，arachnoidea，C，B，Clarke)為鴨跖草科蘭耳草屬多年生植物，露水草又名珍珠露水草，分布在云南、臺(tái)灣、廣東等地。其性辛，微苦，具有祛風(fēng)活絡(luò)，利濕消腫的功效。蛻皮激素是從露水草中提取得到的主要含有一類具有昆蟲蛻皮活性的天然甾體化合物，其中最主要的成分為P-蛻皮激素。目前P-蛻皮激素按獸藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為DB53/獸藥034-2000，其測(cè)定方法為紫外分光光度法。蛻皮激素作用于人體有促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，排除體內(nèi)的膽固醇，降血脂，抑制血糖上升等生理活性，民間用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在蠶業(yè)上，用于促使桑蠶齡期縮短，促進(jìn)吐絲結(jié)繭；在養(yǎng)殖業(yè)上，對(duì)蝦、蟹的養(yǎng)殖上也廣泛運(yùn)用；在化妝品中，蛻皮激素用為特殊添加劑也得到應(yīng)用；蛻皮激素加入化妝品中，可防止皮膚干燥，使皮膚更加細(xì)嫩。蛻皮激素能影響昆蟲從孵化的幼蟲到成蟲的全部發(fā)育階段，因而它控制或殺死農(nóng)業(yè)害蟲，現(xiàn)已將它作為第3代農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)和應(yīng)用；蛻皮激素對(duì)農(nóng)作物的生理過程也有某些影響，在農(nóng)作物豐產(chǎn)助劑方面也有很好的開發(fā)應(yīng)用前景?，F(xiàn)有技術(shù)中提取蛻皮激素常有以下三種方法1、水浸提露水草，浸液經(jīng)過濾、減壓濃縮、制膏，制得水膏后，用乙醇冼脫水膏中的糖分等雜質(zhì)，乙醇洗脫液經(jīng)過濾、減壓濃縮、制膏，所制得的乙醇膏再用工業(yè)乙酸乙酯萃取(以下簡(jiǎn)稱常規(guī)方法l)。2、用乙醇浸提露水草，在常壓下，浸液經(jīng)過濾、減壓濃縮、制膏，所得到的乙醇膏再用工業(yè)乙酸乙酯萃取(以下簡(jiǎn)稱常規(guī)方法2)，常規(guī)方法1和2源于文獻(xiàn)楊俊峰.植物蛻皮激素的提取方法究.化學(xué)，1991(7):335-336。3、現(xiàn)有的大生產(chǎn)方法多為將露水草的水提液上大孔吸附樹脂，乙醇洗脫濃縮液，用乙醇_乙酸乙酯萃取的工藝(以下簡(jiǎn)稱常規(guī)方法3)。這些工藝所得蛻皮激素的收率都很低。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)中蛻皮激素的收率低的技術(shù)缺陷。本發(fā)明的目的之一是提供一種從露水草中提取蛻皮激素的方法，該方法能提高蛻皮激素的收率。本發(fā)明的另目的之一是提供一種蛻皮激素，所述的蛻皮激素是用本發(fā)明方法制備得到。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)在于萃取劑用正丁醇_乙酸乙酯混合溶劑，并且使用的比例適當(dāng)，該萃取劑與水分層很好，萃取完全，且萃取前使用堿調(diào)pH，使酸性雜質(zhì)、色素成鹽而不被正丁醇_乙酸乙酯混合溶劑萃取，從而與蛻皮激素分離，再進(jìn)一步用陰離子交換樹脂除雜，最終提高蛻皮激素收率和純度。其技術(shù)方案如下3—、一種從露水草中提取蛻皮激素的方法，按以下步驟進(jìn)行(1)取露水草原料，用水煎煮，用水量與露水草投料量的比為10L:0.5kglkg，或用1%_95%的甲醇或1%-95%的乙醇提取，所述甲醇或乙醇的用量與露水草投料量的比為5L10L:lkg，煎煮次數(shù)或提取次數(shù)為23次，煎煮獲得的液體或提取液過濾，并減壓濃縮至相對(duì)密度1.051.20的液體，其液體稱為減壓濃縮液；(2)將獲得的減壓濃縮液用堿調(diào)pH至610，其液體稱為調(diào)pH后的濃縮液；(3)將調(diào)pH后的濃縮液用正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑萃取，所述的混合溶劑中，按體積比，正丁醇乙酸乙酯為4:60.5:9.5;所述的混合溶劑用量為調(diào)pH后的濃縮液的13倍，萃取次數(shù)為13次。(4)萃取得到的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層用飲用水或純化水洗滌，所述的飲用水或純化水的用量為調(diào)pH后的濃縮液的13倍，洗滌次數(shù)為12次；(5)用飲用水或純化水洗滌后的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層減壓濃縮至相對(duì)密度為1.21.3的流浸膏，加入50%95%甲醇或50%95%乙醇溶解稀釋，獲得的液體稱為稀釋液，所述的50%95%甲醇或50%95%乙醇的用量為所述的流浸膏的1050倍。(6)將稀釋液過強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂，用50%95%甲醇或50%95%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，并減壓干燥即得所述的蛻皮激素。在上述方法中，步驟(1)中所述的露水草原料，可以是新鮮的露水草或干燥的露水草。在上述方法中，步驟(1)中所述的提取，為冷浸提取、溫浸提取或熱回流提取。在上述方法中，步驟(2)中所述的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀。在上述方法中，步驟(6)中所述的強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂為201X2型陰離子交換樹脂、201X4型陰離子交換樹脂、201X7型陰離子交換樹脂、201X8型陰離子交換樹脂或7170型陰離子交換樹脂；或?yàn)?01X2型陰離子交換樹脂、201X4型陰離子交換樹脂、201X7型陰離子交換樹脂、201X8型陰離子交換樹脂、7170型陰離子交換樹脂的兩種或兩種以上型號(hào)的陰離子交換樹脂的任意組合的陰離子交換樹脂。二、一種蛻皮激素，所述的蛻皮激素是用上述從露水草中提取蛻皮激素的方法制備得到。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果1、用上述現(xiàn)有技術(shù)的常規(guī)方法1或常規(guī)方法2，均由于蛻皮激素水溶性很好，在乙酸乙酯中的溶解度差，故用乙酸乙酯萃取蛻皮激素極不完全，收率很低，而用常規(guī)方法3所用的乙醇-乙酸乙酯混合溶劑萃取蛻皮激素，由于乙醇能與水或乙酸乙酯互溶，導(dǎo)致乙醇有很大部分分配于水中，一部分分配于乙酸乙酯中，使大量蛻皮激素分配于含大量乙醇的水層，使乙醇_乙酸乙酯層萃取蛻皮激素很不完全，收率很低，而本發(fā)明用正丁醇_乙酸乙酯萃取蛻皮激素，正丁醇微量分配于水中，分層好，萃取完全，解決了現(xiàn)有工藝萃取很不完全，收率低的問題。實(shí)施例表明，取用干燥的露水草時(shí)，發(fā)明方法的收率在2.01%2.15%，而常規(guī)方法的收率為0.77%0.85%，發(fā)明方法收率比常規(guī)方法提高1.16%1.38%。單用正丁醇作萃取劑時(shí)所得到的蛻皮激素雜質(zhì)含量高、蛻皮激素純度低為48.3%，而本發(fā)明萃取得的蛻皮激素純度均大于90%，比單用正丁醇作萃取劑時(shí)所得到的蛻皮激素的純度提高41.7%以上。2、本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，解決了傳統(tǒng)方法乙酸乙酯用量大的問題，整個(gè)工藝溶劑用量小，易于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式通過下面的具體實(shí)施例，可以進(jìn)一步清楚的了解本發(fā)明，但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。以下各實(shí)施例中無(wú)論含水量多少的干燥露水草或新鮮露水草的用量均取100kg。純化水為蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其他適宜的方法制得供藥用的水，不含任何附加劑。標(biāo)準(zhǔn)來源為《中國(guó)藥典》2000年版二部附錄XVI。實(shí)施例1實(shí)施例9為使用本發(fā)明方法的實(shí)施例，除表1和表2所列具體措施有所不同外，其余方法均與實(shí)施例1相同，不再贅述(詳見表1和表2)。實(shí)施例10和實(shí)施例11為對(duì)照實(shí)施例。實(shí)施例l本發(fā)明的實(shí)施例之一本發(fā)明的一種從露水草中提取蛻皮激素的方法按以下步驟進(jìn)行，本發(fā)明所提供的蛻皮激素也按下述方法獲得(1)取含水量為7%的干燥露水草100kg，加入1000L水，加水量與露水草的比為10L:lkg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，過濾，減壓回收水液至相對(duì)密度1.10，獲得的液體稱為減壓濃縮液。(2)獲得的減壓濃縮液用化學(xué)純的20X碳酸鈉調(diào)pH至8，其獲得的液體稱為調(diào)pH后的濃縮液；(3)用工業(yè)級(jí)的正丁醇和工業(yè)級(jí)的乙酸乙酯混合溶劑萃取上述調(diào)ra后的濃縮液，所述的混合溶劑中，按體積比，正丁醇乙酸乙酯=2:s，所述的混合溶劑的用量為調(diào)ra后的濃縮液的2倍，萃取3次。(4)萃取得到的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層用飲用水洗滌2次，所述飲用水的用量為調(diào)ra后的濃縮液的2倍。(5)用飲用水洗滌后的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層減壓濃縮至相對(duì)密度1.25的流浸膏，加入85%甲醇溶解稀釋，獲得的液體稱為稀釋液，85%甲醇用量是流浸膏的20倍。(6)稀釋液過201X7型陰離子交換樹脂，用85%甲醇洗脫，洗脫液濃縮，并減壓干燥，得蛻皮激素2.15Kg，蛻皮激素含量按獸藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為DB53/獸藥034-2000，按該標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的用紫外分光光度法及其檢測(cè)條件測(cè)定其中蛻皮激素含量，得到蛻皮激素含量為91.3%，收率為2.15%。表1本發(fā)明實(shí)施例1-4具體措施的區(qū)別<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例10對(duì)照11、常規(guī)方法1:取干燥露水草100kg(含水量7X)，加入1000kg水，加水量與露水草的比為10L:lkg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，過濾，減壓回收水液至相對(duì)密度1.25，獲得水膏，加入95%乙醇除水膏中的糖分等雜質(zhì)，乙醇上清液經(jīng)過濾，減壓濃縮至相對(duì)密度1.IO，所得的乙醇濃縮膏再用3倍量于濃縮膏的工業(yè)乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯層減壓濃縮至有沉淀析出，靜置，過濾，沉淀濃縮干燥，得蛻皮激素0.82Kg，蛻皮激素含量為92.1%，收率0.82%。蛻皮激素含量按獸藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為DB53/獸藥034-2000，其測(cè)定方法為紫外分光光度法。2、常規(guī)方法2:取干燥露水草(含水量10%)100kg，加入500kg70X乙醇，加乙醇量與露水草的比為5L:lkg，熱回流2次，每次提取2h，合并提取液，過濾，減壓回收提取液至相對(duì)密度l.15，所得的乙醇濃縮膏再用3倍量于濃縮膏的工業(yè)乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯層減壓濃縮至有沉淀析出，靜置，過濾，沉淀濃縮干燥，得蛻皮激素0.77Kg，蛻皮激素含量為91.7%，收率0.77%。蛻皮激素含量按獸藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為DB53/獸藥034-2000，其測(cè)定方法為紫外分光光度法。3、常規(guī)方法3:取干燥露水草100kg(含水量7%)，加入1000kg水，加水量與露水草的比為10L:lkg，煎煮2次，每次提取2h，合并提取液，過濾，減壓回收水液至400Kg過濾，濾液用200KgAB-8大孔吸附樹脂吸附，先用600Kg飲用水洗脫，再用400Kg80%乙醇洗脫，乙醇洗脫液減壓濃縮至相對(duì)密度1.IO，所得的乙醇濃縮膏再用3倍量于濃縮膏的工業(yè)乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯層減壓濃縮至有沉淀析出，靜置，過濾，沉淀濃縮干燥，得蛻皮激素0.85Kg，蛻皮激素含量為92.3%，收率0.85%。蛻皮激素含量按獸藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，其標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為DB53/獸藥034-2000，其測(cè)定方法為紫外分光光度法。實(shí)施例11對(duì)照2為進(jìn)一步證明本發(fā)明的創(chuàng)造性和優(yōu)點(diǎn)，我們?cè)诖藢?shí)施例只用正丁醇作為萃取劑作為對(duì)照實(shí)驗(yàn)。本實(shí)施例除所用萃取劑用正丁醇代替實(shí)施例1步驟(3)所用的正丁醇和乙酸乙酯的混合萃取劑外，其余操作步驟、試劑及用量等均與實(shí)施例l相同，不再贅述。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果為單用正丁醇作萃取劑時(shí)所得到的蛻皮激素雜質(zhì)含量高、蛻皮激素純度低僅為48.3%，而實(shí)施例1萃取得的蛻皮激素純度為91.3%，比單用正丁醇作萃取劑時(shí)所得到的蛻皮激素的純度提高43%。本發(fā)明實(shí)施例與實(shí)施例10的蛻皮激素收率對(duì)比<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上實(shí)施例還表明1、正丁醇和乙酸乙酯均可以是工業(yè)級(jí)或化學(xué)純或分析純的產(chǎn)品或者這些品級(jí)的產(chǎn)品的任意組合，并不影響提取蛻皮激素的收率。2、用新鮮的露水草或干燥的露水草為原料均不影響提取蛻皮激素的收率。3、所述的堿，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀可以是工業(yè)級(jí)或化學(xué)純或分析純及其任意組合，并不影響提取蛻皮激素的收率。只要能將pH調(diào)到所要求的pH值即可，因此，所述的堿，如氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀的濃度大小也不影響提取蛻皮激素的收率。權(quán)利要求一種從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于(1)取露水草原料，用水煎煮，用水量與露水草投料量的比為10L∶0.5kg～1kg，或用1％-95％的甲醇或1％-95％的乙醇提取，所述甲醇或乙醇的用量與露水草投料量的比為5L～10L∶1kg，煎煮次數(shù)或提取次數(shù)為2～3次，煎煮獲得的液體或提取液過濾，并減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.20的液體，其液體稱為減壓濃縮液；(2)將獲得的減壓濃縮液用堿調(diào)pH至6～10，其液體稱為調(diào)pH后的濃縮液；(3)將調(diào)pH后的濃縮液用正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑萃取，所述的混合溶劑中，按體積比，其正丁醇∶乙酸乙酯為4∶6～0.5∶9.5；所述的混合溶劑用量為調(diào)pH后的濃縮液的1～3倍，萃取次數(shù)為1～3次。(4)萃取得到的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層用飲用水或純化水洗滌，所述的飲用水或純化水的用量為調(diào)pH后的濃縮液的1～3倍，洗滌次數(shù)為1～2次；(5)用飲用水或純化水洗滌后的正丁醇和乙酸乙酯混合溶劑層減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2～1.3的流浸膏，加入50％～95％甲醇或50％～95％乙醇溶解稀釋，獲得的液體稱為稀釋液，所述的50％～95％甲醇或50％～95％乙醇的用量為所述的流浸膏的10～50倍。(6)將稀釋液過強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂，用50％～95％甲醇或50％～95％乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮，并減壓干燥即得所述的蛻皮激素。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于步驟(1)中所述的露水草原料是新鮮的露水草。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于步驟(1)中所述的露水草原料是干燥的露水草。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于步驟(1)中所述的提取，為冷浸提取、溫浸提取或熱回流提取。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于步驟(2)中所述的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法，其特征在于步驟(6)中所述的強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂為201X2型陰離子交換樹脂、201X4型陰離子交換樹脂、201X7型陰離子交換樹脂、201X8型陰離子交換樹脂或7170型陰離子交換樹脂；或?yàn)?01X2型陰離子交換樹脂、201X4型陰離子交換樹脂、201X7型陰離子交換樹脂、201X8型陰離子交換樹脂、7170型陰離子交換樹脂的兩種或兩種以上型號(hào)的陰離子交換樹脂的任意組合的陰離子交換樹脂。7.由權(quán)利要求1至6中任一所述的從露水草中提取蛻皮激素的方法制備得到的蛻皮激素。全文摘要本發(fā)明公開一種從露水草中提取蛻皮激素的方法及其蛻皮激素，屬于植物有效成分提取分離
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明取露水草用水煎煮，用水量∶露水草為10L∶0.5～1kg，或用1-95％的甲醇或乙醇提取，其用量∶露水草為5L～10L∶1kg，經(jīng)過濾并減壓濃縮至相對(duì)密度1.05～1.20的液體，用堿調(diào)pH至6～10，再用正丁醇∶乙酸乙酯為4∶6～0.5∶9.5的混合溶劑萃取，經(jīng)洗滌，并減壓濃縮至相對(duì)密度為1.2～1.3的流浸膏，加50～95％甲醇或乙醇溶解稀釋后過強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂，經(jīng)洗脫、減壓濃縮并減壓干燥即得所述的蛻皮激素。發(fā)明方法比常規(guī)方法的收率提高1.16～1.38％。文檔編號(hào)C07J9/00GK101735299SQ201010039119公開日2010年6月16日申請(qǐng)日期2010年1月5日優(yōu)先權(quán)日2010年1月5日發(fā)明者呂小波,周敏,李文,李明杰,武正才,黃春球申請(qǐng)人:云南植物藥業(yè)有限公司