專利名稱：一種以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物提取技術(shù)，具體涉及一種以黃連須根為原料提 取黃連生物堿的工藝。
背景技術(shù)：
黃連味苦，性寒，有瀉火、解毒、清熱、燥濕的功能，《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上 品。石柱為我國黃連主產(chǎn)區(qū)，石柱黃連完成GAP規(guī)范化栽培基地驗(yàn)收，獲得國家地理標(biāo) 志性產(chǎn)品。石柱黃連收獲黃連時副產(chǎn)大量的黃連須根。現(xiàn)代藥物化學(xué)研究結(jié)果表明，黃 連須根的活性成分(生物堿)組成與黃連類似，也含有小檗堿、藥根堿、黃連堿和巴馬 汀等(馮敏等，味連》其副產(chǎn)物有效成分和氨基酸含量的研究.中藥材，2005,28 ( 9 ): 753-754 ),具有較好的利用價值?，F(xiàn)代藥理學(xué)和臨床研究結(jié)果表明，黃連生物堿具有抗 菌、降血脂和降血糖等生理活性。具有較好的開發(fā)利用價值。
目前，對黃連素的提取工藝報(bào)道較多，常用提取工藝技術(shù)包括中國專利申請?zhí)?96105233.3、 91105606. 8等報(bào)道的工藝，它們的工藝過程為將原料( 一般是三顆針或者 黃柏)用硫酸溶液浸泡，提取液用石灰中和，中和液加入氯化鈉沉淀(粗級產(chǎn)品)，初級 產(chǎn)品溶于水再精制等；但是，以黃連須根為原料提取小檗堿的工藝技術(shù)尚未見報(bào)道。到 目前為止，關(guān)于藥根堿的提取方面的文獻(xiàn)報(bào)道較少，馮艷明等報(bào)道了一種"從生產(chǎn)鹽酸 黃連素的母液中提取分離鹽酸藥根堿"的方法，具體包括將生產(chǎn)黃連素的母液用氫氧 化鈉中和后，進(jìn)行減壓濃縮，冷卻結(jié)晶，活性炭脫色，上聚酰胺層析柱，氨水分步洗脫， 減壓濃縮后結(jié)晶，丙酮和乙醇中重結(jié)晶等步驟(馮艷明等，從生產(chǎn)鹽酸黃連素的母液中 提取分離鹽酸藥根堿，中國中藥雜志，1989,14 ( 1 ): 29 );但是，從黃連須根中提取 藥根堿的技術(shù)尚未見報(bào)道。黃連堿的生產(chǎn)工藝更少，蔣偉哲報(bào)道的"制備色譜系統(tǒng)從巖 黃連中分離巖黃連堿"的方法是唯一能夠奪閱到的關(guān)于黃連堿的制備技術(shù)(蔣偉哲等， 制備色譜系統(tǒng)從巖黃連中分離巖黃連堿。中草藥，2006, 37 ( 7 ): 1017 );以黃連須根 為原料提取黃連堿的工藝技術(shù)尚未見報(bào)道。
關(guān)于從黃連須根中同時提取藥根堿單體、小檗堿單體、及黃連復(fù)合生物堿等的工藝 技術(shù)，尚未見報(bào)道。
綜上所述，盡管提取黃連素的各種工藝技術(shù)非常多，也非常成熟，但是，提取的原 料主要是三顆針或者黃柏；提取藥根堿和黃連堿的工藝技術(shù)報(bào)道很少。以黃連須根為原料，同時提取藥根堿單體、小檗堿單體和黃連復(fù)合生物堿的聯(lián)產(chǎn)工藝技術(shù)，尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提取黃連生物堿的提取方法，它以黃連須為原料， 提取藥根堿單體、小檗堿單體和黃連復(fù)合生物堿。 本發(fā)明方法包括
1) 、原料準(zhǔn)備
將黃連須去除泥沙，晾干或者不晾干直接作為加工的原料。
2) 、提取
將原料加入到浸泡池或者提取釜中，加入3-15倍體積且濃度為0. 05 ~1%的硫酸水 溶液，在10 10(TC下保溫提取0. 1~48小時，得第一次提取液；將提取后的殘?jiān)俅斡?3 ~ 15倍體積且濃度為0. 05 ~ 1°/。的硫酸水溶液在10 ~ IO(TC下保溫提取0. 1 - 48小時；第 三、四次提取采用與第二次提取相同的方法，分別得到第三、四次提取液；第一次和第 二次提取液用于生產(chǎn)產(chǎn)品，第三次提取液作為下一批料的第一次提取的浸泡液使用，第 四次提取液作為下 一 批料的第二次提取的浸泡液使用；
3) 、提取液中和沉淀
將第一次和第二次提取液合并，然后用石灰乳綜合到溶液的PH為4-10,靜止沉淀 3~48小時。過濾分出上清液備用。沉淀丟棄。
4) 、上柱洗滌
上清液按照每分鐘0. 001 ~ 0. 1倍柱子的速度上柱。純化柱的填料為陽離子交換樹脂。 上柱完成后(樹脂吸附飽和)，用io倍體積的水充分洗滌樹脂。
5) 、分步洗脫
水洗滌后的樹脂，用0. 1-2mole/L濃度的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液(pH=9. 0 )洗 脫樹脂上的藥根堿；然后換用0.1-2mole/L的氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗滌樹脂到中 性；最后，用2倍樹脂體積0. 01 ~ 2mole/L的硫酸溶液洗脫小檗堿等生物堿。
6) 、分步處理
藥根堿組分和復(fù)合生物堿組分分別加入溶液量0. W的活性炭室溫下脫色30分鐘。過 濾后，上清液分別濃縮到生物堿含量為5%左右。
7) 、分級沉淀
藥根堿溶液在攪拌下，按照溶液體積加入10~20°/。的比例逐步加入氯化鈉，放置12-48小時，至充分結(jié)晶為止，過濾得到藥根堿單體。復(fù)合生物堿溶液，在攪拌下按照溶液 體積加入2 ~ 5%的比例逐步加入氯化鈉，放置12 - 48小時，過濾得到小檗堿；母液在攪拌下，繼續(xù)補(bǔ)加母液體積20%比例的氯化鈉和0. 1~3%的硫酸鋅，放置24 - 48小時，至
充分結(jié)晶為止，過濾得到復(fù)合生物堿。 8)、烘干
過濾并洗滌后的沉淀分別烘干即為藥根堿、小檗堿和黃連復(fù)合生物堿產(chǎn)品。藥根堿 含量達(dá)到90%以上，小檗堿含量達(dá)到90°/。以上，黃連復(fù)合生物堿總堿含量達(dá)到5(W以上。
本發(fā)明黃連須根得到充分利用，得到的產(chǎn)品多，可以滿足不同領(lǐng)域的需求；本工藝 技術(shù)的生產(chǎn)成本低，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的產(chǎn)品(藥根堿)可以作為抗菌、降糖、促胃動力等藥品的原料藥，也可以 作為其他產(chǎn)品原料之用；小檗堿可以作為抗菌、降糖、降血脂藥物使用；黃連復(fù)合生物 堿可以作為黃連的濃縮產(chǎn)品使用。 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)
① 、本工藝技術(shù)以黃連須為原料，屬于資源綜合利用范圍，產(chǎn)品成本低廉，加工過
程簡單，易于制備。
② 、本工藝技術(shù)資源利用充分，同時獲得藥根堿單體、小檗堿單體和黃連復(fù)合生物
堿三個產(chǎn)品，大大降低了生產(chǎn)成本，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
③ 、本工藝技術(shù)經(jīng)過一次分離即可獲得含量為90。/。以上的藥根堿和小檗堿產(chǎn)品，如
果采用重結(jié)晶一次，可以獲得95。/。以上含量產(chǎn)品。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:
1公斤黃連須根，加入3升ly。的硫酸溶液，升溫到IO(TC回流提取0. 1小時，過濾， 得第一次提取液；殘?jiān)儆?升r/。的硫酸溶液升溫到IO(TC提取，得到第二次提取液， 按照第二次提取的方法再重復(fù)提取兩次，分別得到第三和第四次提取液；合并第一次和 第二次提取液(三次提取和四次提取用于下一批原料的處理)；將合并液用石灰乳中和到 溶液的pH-4，靜止分層3小時，過濾；上清液按照每分鐘0.001倍樹脂體積的速度上陽 離子交換樹脂，吸附飽和后，用10倍量自來水充分洗滌(洗滌速度與上柱速度一樣)； 然后用0. lmole/L濃度的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液(pH=9. 0 )洗脫樹脂上的藥根堿(薄 層層析監(jiān)測藥根堿洗脫完全為止)；然后換用0.1mole/L的氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗 滌樹脂到中性；最后，用2倍樹脂體積0. 01mole/L的硫酸溶液洗脫小檗堿等生物堿；藥 根堿和復(fù)合生物堿溶液分別用0. ly。的活性炭室溫下攪拌脫色30分鐘，過濾；濾液濃縮到 溶液含生物堿5%左右；藥根堿溶液中加入10y。氯化鈉，沉淀放置12小時，過濾、洗滌、 50-7(TC下烘干，得到藥根堿單體；復(fù)合生物堿溶液攪拌下加入2%的氯化鈉，靜止12小時，過濾，洗滌，50 7(TC下烘干，得到小檗堿單體；小檗堿生產(chǎn)母液中補(bǔ)加20%的氯 化鈉和0.iy。的硫酸鋅，充分?jǐn)嚢韬箪o止24小時，過濾，洗滌，50 7(TC下烘干，得到黃 連復(fù)合生物堿。藥根堿含量90%,小檗堿含量90%,黃連復(fù)合生物堿含量50%。 實(shí)施例2
1公斤黃連須根，加入15升0. 05%的硫酸溶液，室溫下浸泡24小時后，過濾，得 第一次提取液；殘?jiān)儆肐O升O. 05%的硫酸溶液提取，得到第二次提取液，按照上第二 次提取方法再重復(fù)提取兩次，分別得到第三和第四次提取液；合并第一次和第二次提取
液(三次提取和四次提取用于下 一批原料的處理)；合并液用石灰乳中和到溶液的pH=i o,
靜止分層24小時，過濾；上清液按照每分鐘O. l倍樹脂體積的速度上陽離子交換樹脂， 吸附飽和后，用10倍量自來水充分洗滌(洗滌速度與上柱速度一樣)；然后用2mole/L 濃度的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液(pH=9. 0)洗脫樹脂上的藥根堿(薄層層析監(jiān)測藥根 堿洗脫完全為止)；然后換用2mole/L的氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗滌樹脂到中性；最 后，用2倍樹脂體積2mole/L的硫酸溶液洗脫小檗堿等生物堿；藥根堿和復(fù)合生物堿溶 液分別用0. ly。的活性炭室溫下攪拌脫色30分鐘，過濾；濾液濃縮到溶液含生物堿5%左 右；藥根堿溶液中加入20%氯化鈉，沉淀放置24小時，過濾、洗滌、50 7(TC下烘干， 得到藥根堿單體；復(fù)合生物堿溶液攪拌下加入5%的氯化鈉，靜止24小時，過濾，洗滌， 50 7(TC下烘干，得到小檗堿單體；小檗堿生產(chǎn)母液中補(bǔ)加2(W的氯化鈉和3 /。的硫酸鋅， 充分?jǐn)嚢韬箪o止48小時，過濾，洗滌，50-7(TC下烘干，得到黃連復(fù)合生物堿。藥根堿 含量90°/。，小檗堿含量9(W，黃連復(fù)合生物堿含量50%。 實(shí)施例3
1公斤黃連須根，加入10升0. 4%的硫酸溶液，升溫到60'C回流提取1小時，過濾 得第一次提取液；殘?jiān)儆?0升0.4%的硫酸溶液升溫到6(TC提取，得到第二次提取液， 按照第二次提取方法再重復(fù)提取兩次，分別得到第三和第四次提取液；合并第一次和第 二提取液(三次提取和四次提取用于下一批原料的處理)；合并液用石灰乳中和到溶液的 pH=6，靜止分層12小時，過濾；上清液按照每分鐘0. 01倍樹脂體積的速度上陽離子交
換樹脂，吸附飽和后，用10倍量自來水充分洗滌(洗滌速度與上柱速度一樣)；然后用 lraole/L濃度的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液(pH=9. 0)洗脫樹脂上的藥根堿(薄層層析監(jiān) 測藥根堿洗脫完全為止)；然后換用lmole/L的氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗滌樹脂到中 性；最后，用2倍樹脂體積lmole/L的硫酸洗脫小檗堿等生物堿；藥根堿和復(fù)合生物堿 溶液分別用0. 1°/ 的活性炭室溫下攪拌脫色30分鐘，過濾；濾液濃縮到溶液含生物堿5°/。 左右；藥根堿溶液中加入15%氯化鈉，沉淀放置48小時，過濾、洗滌、50-7(TC下烘干， 得到藥根堿單體；復(fù)合生物堿溶液攪拌下加入3%的氯化鈉，靜止48小時，過濾，洗滌，50 7(TC下烘干，得到小檗堿單體；小檗堿生產(chǎn)母液中補(bǔ)加20%的氯化鈉和1%的硫酸鋅， 充分?jǐn)嚢韬箪o止48小時，過濾，洗滌，50 7(TC下烘干，得到黃連復(fù)合生物堿。藥根堿 含量90%,小檗堿含量90%,黃連復(fù)合生物堿含量50%。 實(shí)施例4
l公斤黃連須根，加入8升0.2%的硫酸溶液，室溫下浸泡12小時后，過濾得第一 次提取液；殘?jiān)儆?升0.2%的硫酸溶液提取，得到第二次提取液，按照第二次提取方 法再重復(fù)提取兩次，分別得到第三和第四次提取液；合并第一次和第二提取液(三次提 取和四次提取用于下一批原料的處理)；合并液用石灰乳中和到溶液的PH=8,靜止分層 IO小時，過濾；上清液按照每分鐘0. 03倍樹脂體積的速度上陽離子交換樹脂，吸附飽和 后，用IO倍量自來水充分洗滌(洗滌速度與上柱速度一樣)；然后用0.5mole/L濃度的 碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液(PH=9. 0)洗脫樹脂上的藥根堿(薄層層析監(jiān)測藥根堿洗脫 完全為止)；然后換用0.5mole/L的氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗滌樹脂到中性；最后， 用2倍樹脂體積0. 5mole/L洗脫小檗堿等生物堿；藥根堿和復(fù)合生物堿溶液分別用0. 1% 的活性炭室溫下攪拌脫色30分鐘，過濾；濾液濃縮到溶液含生物堿5%左右；藥根堿溶液 中加入18%氯化鈉，沉淀放置20小時，過濾、洗滌、50 7(TC下烘干，得到藥根堿單體； 復(fù)合生物堿溶液攪拌下加入4%的氯化鈉，靜止20小時，過濾，洗滌，50-7(TC下烘干， 得到小檗堿單體；小檗堿生產(chǎn)母液中補(bǔ)加20%的氯化鈉和0. 5%的硫酸鋅，充分?jǐn)嚢韬箪o 止30小時，過濾，洗滌，50 7(TC下烘干，得到黃連復(fù)合生物堿。藥根堿含量90 / ,小 檗堿含量90%,黃連復(fù)合生物堿含量50%。
權(quán)利要求
1、一種以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法，本方法以黃連須為原料，采用硫酸溶液浸泡提取藥根堿、小檗堿和黃連復(fù)合生物堿，所述方法包括1)、原料準(zhǔn)備將黃連須根去除泥沙，晾干或者不晾干直接作為加工的原料；2)、提取將原料加入到浸泡池或者提取釜中，加入3～15倍體積且濃度為0.05～1％的硫酸水溶液，在10～100℃下保溫提取0.1～48小時，得第一次提取液；將提取后的殘?jiān)俅斡?～15倍體積且濃度為0.05～1％的硫酸水溶液在10～100℃下保溫提取0.1～48小時，得第二次提取液；第三、四此提取采用與第二次提取相同的方法，分別得到第三、四次提取液；第一次和第二次提取液用于生產(chǎn)產(chǎn)品，第三次提取液作為下一批料的第一次提取的浸泡液使用，第四次提取液作為下一批料的第二次提取的浸泡液使用；3)、提取液中和沉淀將第一次和第二次提取液合并，用石灰乳中和，然后靜止沉淀，過濾分出上清液備用，沉淀丟棄；4)、上柱洗滌上清液按照每分鐘0.001～0.1倍柱子的速度上柱，純化柱的填料為陽離子交換樹脂，上柱完成后即樹脂吸附飽和后，用水充分洗滌樹脂；5)、分步洗脫將水洗滌后的樹脂，用碳酸鈉—碳酸氫鈉緩沖溶液洗脫樹脂上的藥根堿，得到藥根堿組分；然后換用氫氧化鈉洗脫色素；再用水洗滌樹脂到中性；最后，用硫酸溶液洗脫小檗堿等生物堿，得到總生物堿組分；6)、分步處理將藥根堿組分和復(fù)合生物堿組分分別加入溶液量0.1％的活性炭室溫下脫色30分鐘；過濾后，藥根堿和總生物堿脫色液分別濃縮到生物堿含量為5％左右；7)、分級沉淀藥根堿濃縮溶液在攪拌下加入氯化鈉，放置12～48小時，至充分結(jié)晶為止，過濾得到藥根堿單體；復(fù)合生物堿濃縮溶液在攪拌下加入氯化鈉，放置12～48小時，過濾得到小檗堿；提取小檗堿后的母液在攪拌下，繼續(xù)補(bǔ)加氯化鈉和硫酸鋅，放置24～48小時，至充分結(jié)晶為止，過濾得到復(fù)合生物堿；8)、烘干藥根堿沉淀、小檗堿沉淀和總生物堿沉淀分別過濾，沉淀用適量水洗滌后烘干即為藥根堿、小檗堿和黃連復(fù)合生物堿產(chǎn)品。其中藥根堿含量達(dá)到90％以上，小檗堿含量達(dá)到90％以上，黃連復(fù)合生物堿總堿含量達(dá)到50％以上。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法，其特征在于 用所述步驟4)用石灰乳綜合到溶液的pH為4-10,靜止沉淀的時間為3"M8小時。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法，其特征 在于所述步驟5)用陽離子樹脂吸附黃連總生物堿。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法，其特征 在于所述步驟6 )在樹脂上洗脫藥根堿是采用0. 1 ~ hole/L濃度且PH=9. 0的碳酸鈉一碳 酸氫鈉緩沖溶液；用0. 1 ~ 2mole/L的氫氧化鈉洗脫色素除雜；用0. 01 ~ 2moie/L的硫酸 溶液洗脫陽離子樹脂上的小檗堿等黃連生物堿。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿提取方法，其特征 在于所述步驟8 )復(fù)合生物堿濃縮溶液在攪拌下是按照溶液體積2 - 5'/。的比例逐步加入氯化鈉，選擇性地沉淀出其中的小檗堿；提取小檗堿后的母液繼續(xù)補(bǔ)加母液體積20%比例的氯化鈉和0. 1 ~ 3%的硫酸鋅，提取黃連總生物堿。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種以黃連須根為原料聯(lián)產(chǎn)黃連生物堿的提取工藝技術(shù)，其工藝流程如下黃連須根——加入適量0.05～1％的硫酸浸泡——中和沉淀除雜——上陽離子分離柱——分步洗脫——分組分脫色——回收溶劑——分步沉淀結(jié)晶——烘干——藥根堿單體、小檗堿單體、黃連復(fù)合生物堿。本工藝藥根堿和小檗堿單體的含量在90％以上，復(fù)合生物堿總堿含量50％以上。提取工藝中，經(jīng)過中和除雜的操作步驟，提高上柱分離的效率；分步洗脫實(shí)現(xiàn)生物堿單體的分離；產(chǎn)品經(jīng)過上柱分級分離，實(shí)現(xiàn)了生物堿的分離。
文檔編號C07D455/00GK101429197SQ20081023336
公開日2009年5月13日 申請日期2008年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月17日
發(fā)明者葉小利, 李學(xué)剛 申請人:西南大學(xué)