專利名稱：高純度丹酚酸b、制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種一種從中藥材丹參中提取并分離丹酚酸B的方法及丹酚酸 B的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhizaBge)，為多年生草本植物，具有祛瘀 止痛，活血通經(jīng)，清心除煩的功效。現(xiàn)代臨床中，廣泛將其用于預(yù)防和治療心 腦血管疾病，腎病，肝病等。因提取物中成分復(fù)雜，難于向世界推廣。
丹酚酸B是從丹參中分離得到的一種水溶性的酚酸類物質(zhì)，其分子式為 C36H3。016，分子量為718.614，結(jié)構(gòu)式為
臨床醫(yī)學(xué)證明，丹酚酸B具有保護(hù)心臟、心血管等功能。 現(xiàn)有技術(shù)中的丹酚酸B的提取和分離方法，是將藥材粉碎成末或微波破壁 或浸提或煎提，進(jìn)一步通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂、聚酰胺層析等方法獲得。現(xiàn)有技術(shù) 的不足是得到的丹酚酸B純度都低于92%,獲得92%以上丹酚酸B的步驟非 常多，成本非常高，無(wú)法用于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種丹酚酸B的新制備方法，得到的丹酚酸B，純度 高，成本低適合工業(yè)化生產(chǎn)。
上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)高純度丹酚酸B的制備方法，其組成包括提取、聚酰胺層析、收集，
a. 所述的提取是將中藥材丹參粉碎，第一次在去離子水100度的條件下加 入粉碎的丹參提取l小時(shí)，用丹參重量5倍量的水，然后在PH1—7.0的條件下 提取2—4次，每次時(shí)間40分鐘，用丹參重量3倍量的水；
b. 所述的聚酰胺層析是提取液過(guò)濾后上聚酰胺預(yù)柱，先用水除雜,，再以低 濃度的CI—C5的低級(jí)醇除雜，以高濃度的CI—C5的低級(jí)醇解吸，分段收集 含丹酚酸B的組分，減壓濃縮，濃縮液再用聚酰胺層析柱層析，以高濃度的 CI--C5的低級(jí)醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓濃縮，調(diào)PH值；
c. 所述的收集是將b的提取液立刻過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集含丹酚B的 組分，減壓濃縮，冷凍干燥，得到高純度的丹酚酸B。
所述的高純度丹酚酸B的制備方法，在a、 b、 c、步驟中要用PH值調(diào)節(jié) 物質(zhì)將PH值調(diào)節(jié)至1~6.5。
所述的高純度丹酚酸B的制備方法，所述的C1"C5的低級(jí)醇為乙醇，所 述的低濃度的C1~C5的低級(jí)醇為10—80%,所述的高濃度的C1一C5的低級(jí) 醇為80—99.99%，所述的PH值調(diào)節(jié)物質(zhì)為無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸或酸性氨基酸或其 混合物或氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉。
所述的高純度丹酚酸B的制備方法，所述的步驟b和c的聚酰胺層析的過(guò) 程中，通過(guò)薄層層析或HPLC檢測(cè)方法，檢測(cè)解吸液中丹酚酸B的含量。
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制備治療心腦血管疾病、腎病、肺炎、 肺心病、胰腺炎、糖尿病、頸椎病、眼底血管性疾病、眼底神經(jīng)性疾病、偏頭 痛、慢性胃炎、眩暈、骨傷科疾病、老年癡呆癥的藥物方面的應(yīng)用。
一種高純度丹酚酸B,是以權(quán)利要求1-8的方法制備得到的。
本發(fā)明的有益效果
在現(xiàn)有的技術(shù)中，含有丹酚酸B的藥品都作為中藥存在，一般的丹酚酸B的 含量都在80%以下，剩余的20%的成分都說(shuō)不清楚，也導(dǎo)致了臨床應(yīng)用時(shí)產(chǎn)品的 質(zhì)量不穩(wěn)定，副作用大，容易導(dǎo)致不良反應(yīng).
而本發(fā)明從植物中提取到單體，明確了有效藥物成分，減少了毒副作用，為 丹酚酸B西藥化生產(chǎn)提供了可行之路.本發(fā)明采用的溶劑價(jià)格低廉，基本無(wú)毒，降低了藥品成本。工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備投
資少，得到的丹酚酸B的純度高，并且確定的工藝路線適合工業(yè)化生產(chǎn)。 本發(fā)明的
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:
取丹參藥材lOOOg粉碎，加去離子水在100'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 丹參重量5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用丹參重 量3倍的水。提取液濾過(guò)，調(diào)PH至3,使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，, 再用10%的乙醇除雜，80%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的組分，減壓回收。所得 溶液再用聚酰胺層析柱層析，用95%的乙醇解吸，得到含丹酚酸B的成分，分 段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，調(diào)PH至4.8。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠 柱，分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到高純度的 丹酚酸B。
實(shí)施例2:
取丹參藥材1500g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在？114.8的條件下煎提3次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至2使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用30%的乙醇除 雜，90%乙醇解吸。收集含丹酚酸B的組分，減壓回收。所得溶液再用聚酰胺層析 柱層析，用卯％的乙醇解吸，得到含丹酚酸B的成分，分段收集純度大于98% 的部分，減壓濃縮，調(diào)PH至5。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于 98.5%的部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到高純度的丹酚酸B。
實(shí)施例3
取丹參藥材2000g粉碎，加去離子水在100'C微沸的條件下加熱提取1小 時(shí)，用5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。 提取液過(guò)濾，調(diào)PH至4，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用50%的乙 醇除雜，用95%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇.所得產(chǎn)物 再用聚酰胺層析柱層析，用95%的乙醇解吸，分段收集純度大于98%的部分， 減壓濃縮，調(diào)PH至4.8。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的 部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到高純度的丹酚酸B。. 實(shí)施例4:
取丹參藥材1500g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至3.5，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用60%的乙 醇除雜，用無(wú)水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇.所得產(chǎn)物再 用聚酰胺層析柱層析，用95%的乙醇解吸，分段收集純度大于98.5%的部分， 減壓濃縮，調(diào)PH至4.0。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的 部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到純度為99.2%的丹酚酸8。
實(shí)施例5:
取丹參藥材lOOOg粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提4次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至4.5,使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用40%的乙 醇除雜，用無(wú)水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇。所得產(chǎn)物 再用聚酰胺層析柱層析，用卯％的乙醇解吸，分段收集純度大于98.5%的部分， 減壓濃縮，調(diào)PH至5.0。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的 部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到純度為99。/。的丹酚酸B。
實(shí)施例6:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至4.8，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%的乙 醇除雜，用無(wú)水乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇.所得產(chǎn)物再 用聚酰胺層析柱層析，用無(wú)水乙醇解吸，分段收集純度大于98%的部分，減壓 濃縮，調(diào)PH至5.5。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分, 減壓濃縮，冷凍干燥后，得到純度為98.7%的丹酚酸8。
實(shí)施例7:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在100。C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至2，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%的乙醇除雜，用80%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇。所得產(chǎn)物 再用聚酰胺層析柱層析，用無(wú)水乙醇解吸，分段收集純度大于98%的部分，減壓 濃縮，調(diào)PH至6.0。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分， 減壓濃縮，冷凍干燥后，得到純度為99。/。的丹酚酸B。 實(shí)施例8:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在IOOC的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至3，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%的乙 醇除雜，用80%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇。所得產(chǎn) 物再用聚酰胺層析柱層析，用95%乙醇解吸，分段收集純度大于98%的部分， 減壓濃縮，得到的溶液用2%的NaOH調(diào)PH為6。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分 段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，立即冷凍干燥，得到純度為98.3% 的丹酚酸B。
實(shí)施例9:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至3，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用50%的乙 醇除雜，用60%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇.所得產(chǎn)物 再用聚酰胺層析柱層析，用95%乙醇解吸，分段收集純度大于98%的部分，減 壓濃縮，得到的溶液用2%的NaOH調(diào)PH為6。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段 收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，立即冷凍干燥，得到純度為98.6%的 丹酚酸B。
實(shí)施例10:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在100。C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至3.1，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%的乙 醇除雜，用70%的乙醇解吸，收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇.所得產(chǎn)物 再用聚酰胺層析柱層析，用95%乙醇解吸，分段收集純度大于99%的部分，減
8壓濃縮，得到的溶液用2%的NaOH調(diào)PH為6。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段 收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，立即冷凍干燥，得到純度為99.3%的 丹酚酸B。
實(shí)施例11:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在100'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至3.1，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，用10%的乙醇 除雜，再用20%的乙醇除雜，再用50%的乙醇除雜，用95%乙醇解吸，分段收 集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙醇。所得產(chǎn)物再用聚酰胺層析柱層析，用95% 乙醇解吸,分段收集純度大于99%的部分，減壓濃縮，得到的溶液用2%的NaOH 調(diào)PH為6。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃 縮，立即冷凍干燥，得到純度為99.3%的丹酚酸8。
實(shí)施例12:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至4，使用聚酰胺柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%、 30%、 60%的乙醇除雜，用95%乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓回收乙 醇。所得產(chǎn)物再用聚酰胺層析柱層析，用無(wú)水乙醇解吸，分段收集純度大于98% 的部分，減壓濃縮，得到的溶液用2W的NaOH調(diào)PH為6。濃縮液過(guò)葡聚糖凝 膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，立即冷凍干燥，得到純度 為98.3%的丹酚酸8。
實(shí)施例13:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在100C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在PH4.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至2，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用10%、 30%、 60%的乙醇除雜，用PH3無(wú)水乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓回 收乙醇。所得產(chǎn)物再用聚酰胺層析柱層析，用90%乙醇解吸，分段收集純度大 于98%的部分，減壓濃縮，調(diào)PH至5.5。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，，冷凍干燥后，得到純度為98.7%的丹酚酸8。 實(shí)施例14:
取丹參藥材1500g粉碎，加去離子水在IOO'C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 5倍的水，然后在？114.8的條件下煎提3次，每次40分鐘，用3倍的水。提取 液過(guò)濾，調(diào)PH至2，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)，再用20%、 30%、 60%的乙醇除雜，用90%的乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓回收 乙醇。所得產(chǎn)物再用聚酰胺層析柱層析，用95%乙醇解吸，分段收集純度大于 98%的部分，減壓濃縮，調(diào)PH至5。濃縮液過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集純度大 于98.5%的部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到高純度的丹酚酸B。
實(shí)施例15:
取丹參藥材1000g粉碎，加去離子水在IOO"C的條件下加熱提取1小時(shí)，用 丹參重量5倍的水，然后在？114.8的條件下煎提2次，每次40分鐘，用丹參重 量3倍的水。提取液濾過(guò)，調(diào)PH至3，使用聚酰胺預(yù)柱層析，以水洗脫去雜質(zhì)， 再用10%、 20%、 70%的乙醇除雜，用95%的乙醇解吸，分段收集含丹酚酸B 的組分，減壓回收乙醇。所得產(chǎn)物再用聚酰胺層析柱層析，用95%乙醇解吸， 分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，調(diào)PH至4.8。濃縮液過(guò)葡聚糖凝 膠柱，分段收集純度大于98.5%的部分，減壓濃縮，冷凍干燥后，得到高純度 的丹酚酸B。
實(shí)施例16:
以上的制作方法制做的丹酚酸B在制備治療心腦血管疾病、腎病、肺炎、 肺心病、胰腺炎、糖尿病、頸椎病、眼底血管性疾病、眼底神經(jīng)性疾病、偏頭 痛、慢性胃炎、眩暈、骨傷科疾病、老年癡呆癥的藥物方面的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種高純度丹酚酸B的制備方法，其組成包括提取、聚酰胺層析、收集，其特征是a.所述的提取是將中藥材丹參粉碎，第一次在去離子水100度的條件下加入粉碎的丹參提取1小時(shí)，用丹參重量5倍量的水，然后在PH1-7.0的條件下提取2---4次，每次時(shí)間40分鐘，用丹參重量3倍量的水；b.所述的聚酰胺層析是提取液過(guò)濾后上聚酰胺預(yù)柱，先用水除雜，，再以低濃度的C1---C5的低級(jí)醇除雜，以高濃度的C1---C5的低級(jí)醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓濃縮，濃縮液再用聚酰胺層析柱層析，以高濃度的C1---C5的低級(jí)醇解吸，分段收集含丹酚酸B的組分，減壓濃縮，調(diào)PH值；c.所述的收集是將b的提取液立刻過(guò)葡聚糖凝膠柱，分段收集含丹酚B的組分，減壓濃縮，冷凍干燥，得到高純度的丹酚酸B。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是在a、 b、 c、步驟中要用PH值調(diào)節(jié)物質(zhì)將PH值調(diào)節(jié)至1~6.5。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是所述的 C1一C5的低級(jí)醇為乙醇，所述的低濃度的C1~C5的低級(jí)醇為10—80%,所 述的高濃度的C1~C5的低級(jí)醇為80—99.99%，所述的PH值調(diào)節(jié)物質(zhì)為無(wú)機(jī) 酸或有機(jī)酸或酸性氨基酸或其混合物或氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是所述的 C1~C5的低級(jí)醇為乙醇，所述的低濃度的C1一C5的低級(jí)醇為10—80%，所 述的高濃度的C1~C5的低級(jí)醇為80—99.99%，所述的PH值調(diào)節(jié)物質(zhì)為無(wú)機(jī) 酸或有機(jī)酸或酸性氨基酸或其混合物或氫氧化鈉或碳酸鈉或碳酸氫鈉。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是所述 的步驟b和c的聚酰胺層析的過(guò)程中，通過(guò)薄層層析或HPLC檢測(cè)方法，檢測(cè)解吸 液中丹酚酸B的含量。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是所述的步 驟b和c的聚酰胺層析的過(guò)程中，通過(guò)薄層層析或HPLC檢測(cè)方法，檢測(cè)解吸液中丹酚酸B的含量。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的高純度丹酚酸B的制備方法，其特征是所述的步 驟b和c的聚酰胺層析的過(guò)程中，通過(guò)薄層層析或HPLC檢測(cè)方法，檢測(cè)解吸液中 丹酚酸B的含量。
8. —種以上的制作方法制做的丹酚酸B在制備治療心腦血管疾病、腎病、 肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、頸椎病、眼底血管性疾病、眼底神經(jīng)性疾病、 偏頭痛、慢性胃炎、眩暈、骨傷科疾病、老年癡呆癥的藥物方面的應(yīng)用。
9. 一種髙純度丹酚酸B，其特征是以權(quán)利要求l-7的方法制備得到。
全文摘要
高純度丹酚酸B、制備方法及應(yīng)用?，F(xiàn)有技術(shù)中的丹酚酸B的提取和分離方法，是將藥材粉碎成末或微波破壁或浸提或煎提，進(jìn)一步通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂、聚酰胺層析等方法獲得?，F(xiàn)有技術(shù)的不足是得到的丹酚酸B純度都低于92％，獲得92％以上丹酚酸B的步驟非常多，成本非常高，無(wú)法用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明組成包括提取、聚酰胺層析、收集。本發(fā)明應(yīng)用于治療心腦血管疾病、腎病、肺炎、肺心病、胰腺炎、糖尿病、頸椎病、眼底血管性疾病、眼底神經(jīng)性疾病、偏頭痛、慢性胃炎、眩暈、骨傷科疾病、老年癡呆癥。
文檔編號(hào)C07D307/84GK101638403SQ20081013681
公開(kāi)日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2008年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月29日
發(fā)明者苑立超 申請(qǐng)人:苑立超