專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗人il-4受體的高親和力人抗體的制作方法抗人IL-4受體的高親和力人抗體
背景技術(shù)：
：白細(xì)胞介素-4(IL-4，也稱(chēng)為B細(xì)胞刺激因子或BSF-1)最初特征在于，其響應(yīng)低濃度的針對(duì)表面免疫球蛋白的抗體，能夠刺激B細(xì)胞增殖。已證實(shí)IL-4具有廣泛的生物活性，包括刺激T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞和紅細(xì)胞的生長(zhǎng)。IL-4誘導(dǎo)靜止B細(xì)胞中II類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體分子的表達(dá)，增強(qiáng)受激B細(xì)胞對(duì)IgE和IgGl同種型的分泌。IL-4的生物活性由IL-4的特異性細(xì)胞表面受體介導(dǎo)。人IL-4受體a(hlL-4R)(SEQIDNO:l)在例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，599，卯5、5,767,065和5,840,869中有所描述。hlL-4R的抗體在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,717,072中有所描述。IL-4的生物活性由IL-4的特異性細(xì)胞表面受體介導(dǎo)。人IL-4受體a(hlL-4R)(SEQIDNO:l)在例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,599,905、5,767,065和5,840,869中有所描述。hlL-4R的抗體在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,717,072和7,186,809中有所描述。制備可用作人的治療劑的抗體的方法包括生成嵌合抗體和人源化抗體(見(jiàn)例如US6，949，245)。見(jiàn)例如WO94/02602(Abgenix公司)和US6,596,541(RegeneronPharmaceuticals)(兩者的公布均明確并入本文作為參考)，其中描述了生成能夠生產(chǎn)人抗體的非人轉(zhuǎn)基因小鼠的方法。使用抗hlL-4R的抗體的方法在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,714,146;5,985,280和6,716,587中有所描述。發(fā)明簡(jiǎn)述第一方面，本發(fā)明提供了特異性結(jié)合人白細(xì)胞介素-4受體(hlL-4R)的人抗體，優(yōu)選重組的人抗體。該人抗體的特征在于，其以高親和力與hlL-4R結(jié)合，并且能夠中和hlL-4活性。在具體實(shí)施方案中，該人抗體能夠阻斷hIL-13/hIL-13Rl復(fù)合體與hlL-4R的結(jié)合，從而抑制hIL-13的信號(hào)傳導(dǎo)。該抗體可為全長(zhǎng)(例如lgGl或IgG4抗體)或可以?xún)H包含抗原結(jié)合部分(例如Fab、F(ab，)2或scFv片段)，可以經(jīng)1奮飾以實(shí)現(xiàn)其功能性，例如消除殘留的效應(yīng)功能(Reddy等人，(2000)J.Immunol.164:1925-1933)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了以約200pM或更小的Ko特異性結(jié)合hlL-4R(SEQIDNO:l)的抗體或其抗原結(jié)合片段，如用表面等離振子共振測(cè)量。在更具體的實(shí)施方案中，該抗體或其抗原結(jié)合部分顯示小于約150pM，或小于約50pM，或小于約20pM的Ku。在多種實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段以約200pM或更小的IC5Q阻斷hlL-4活性，如用STAT6螢光素酶生物測(cè)定法測(cè)量。在更具體的實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段顯示如用螢光素酶生物測(cè)定法測(cè)量的約150pM或更小，或約100pM或更小或甚至約500pM或更小的ICs。。在多種實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段阻斷hIL-13活性，用STAT6螢光素酶生物測(cè)定法測(cè)量的ICso為約100pM或更小。在更具體的實(shí)施方案中，該抗體或抗原結(jié)合片段顯示ICso為約75pM或更小，或約50pM或更小，或甚至約20pM或更小。第二方面，本發(fā)明的抗體包含重鏈可變區(qū)(HCVR)，其選自SEQIDNO:3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291、307、323、339、355、371、387、391、395、399、403、407、411、415、419、423、427、431、435、439、443、447、451、455、459、463、467、471、475、479、483、487、491、495、499、503、507、511、515、519、523、527、531、535、539、543、547、551、555、559、563、567、571、575、579和581,或與其基本上相似的序列。第三方面，本發(fā)明的抗體包含輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其選自SEQIDNO:ll、27、43、59、75、91、107、123、130、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、389、393、397、401、405、409、413、417、421、425、429、433、437、441、445、449、453、457、461、465、469、473、477、481、485、489、493、497、501、505、509、513、517、521、625、529、533、537、541、545、549、553、557、561、565、569、573和577，或與其基本上相似的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗體片段包含HCVR和LCVR(HCVR/LCVR),所述HCVR/LCVR選自SEQIDNO:3/11、19/27、35/43、51/59、67/75、83/91、99/107、115/123、131/139、147/155、163/171、179/187、195/203、211/219、227/235、243/251、259/267、275/283、291/299、307/315、323/331、339/347、355/363、371/379、387/389、391/393、395/397、399/401、403/405、407/409、411/413、415/417、419/421、423/425、427/429、431/433、435/437、439/441、443/445、447/449、451/453、455/457、459/461、463/465、467/469、471/473、475/477、479/481、483/485、487/489、491/493、495/497、499/501、503/505、507/509、511/513、515/517、519/521、523/525、527/529、531/533、535/537、539/541、543/545、547/549、551/553、555/557、559/561、563/565、567/569、.571/573、575/577、579/59和581/59。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體或抗體片段包含選自SEQIDNO:51/59、259/267、275/283、291/299、579/59或581/59的HCVR/LCVR。第四方面，本發(fā)明提供編碼HCVR的核酸分子，其中該核酸分子為核苷酸序列，其選自SEQIDNO:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、2卯、306、322、338、354、370、386、3卯、394、398、402、406、410、414、418、422、426、430、434、438、442、446、450、454、458、462、466、470、474、478、482、486、4卯、494、498、502、506、510、514、518、522、526、530、534、538、542、546、550、554、558、562、566、570、574、578和580，或與其具有至少95%同源性的基本上相同的序列。第五方面，本發(fā)明提供編碼LCVR的核酸分子，其中核酸分子為這樣的序列，其選自SEQIDNO:IO、26、42、58、74、卯、106、122、129、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、388、392、396、400、404、408、412、416、420、424、428、432、436、440、444、448、452、456、460、464、468、472、476、480、484、488、492、496、500、504、508、512、516、520、524、528、532、536、540、544、548、552、556、560、564、568、572和576，或與其具有至少95%同源性的基本上相同的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含由核苷酸序列對(duì)編碼的HCVR和LCVR，該核苷紗列對(duì)選自SEQIDNO:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386簡(jiǎn)、390/392、394/396、398/400、402/404、406/408、410/412、414/416、418/420、422/424、426/428、430/432、434/436、438/440、442/444、446/448、450/452、454/456、458/460、462/464、466/468、470/472、474/476、478/480、482/484、486/488、490/492、494/496、498/500、502/504、506/508、510/512、514/516、518/520、522/524、526/528、530/532、534/536、538/540、542/544、546/548、550/552、554/556、558/560、562/564、566/568、570/572、574/576、578/59和580/59。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體或抗體片段包含由選自SEQIDNO:50/58、258/266、274/282、290/298、578/58或580/58的核苷酸序列編碼的HCVR/LCVR。第六方面，本發(fā)明提供特異性結(jié)合hlL-4R的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段，其包含三個(gè)重鏈和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其中重鏈CDR1包含式&-X2_X3-X4-X5—X6一X7_X8(SEQIDNO:582)的氨基^f列，其中X'-GIy;X2=Tyr或Phe;X3=Thr或I;X4=Phe;X、Asn或Arg;X6=Ser;X7=Tyr;X8=Gly;重鏈CDR2包含式Xi-X2_X3—X4一X5—X6一X7—X8(SEQIDNO:583)的氨基酸序列，其中^-Ile，x2-Ser或Arg，x3-Thr或Tyr,X4=Tyr或Asp，X5=Asn或Gly，X6=Gly或Ser，X7=Lys或Asn,X8=Thr;重鏈CDR3包含式Xi-X2-X3_X4—X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18_X19-X20-X21(SEQIDNO:584)的氨基斷列，其中X1=Ala或Val，X2=Argi^Lys，X3=Asp或Glu,x4:Gly或Glu,X5=Ala或Arg，X6=Arg或Ser，X7=lie或Gly，x8:Val或Ser，x9-Val或Trp，X10=Ala或Phe，X"-Gly或Asp，X^:Thr或Pro，X。-Thr或缺失，X14=Pro或缺失，X15=Tyr或缺失，X"-Tyr或缺失，X"-Tyr或缺失，X"-Gly或缺失，X19=Met或缺失，X^-Asp或缺失，X"-Val或缺失；輕鏈CDR1包含式X1—X2—X3—X4—X5—X6(SEQIDNO:585)的氨基酸序列，其中X'二Gln，X2=AspiSlAla，X3=Ile，X4=SerilAsn，X5=Asn或Ile，X^Trp或Phe;輕鏈CDR2包含式X1-X2-X3(SEQIDNO:586)的氨基酸序列，其中X"Ala或Val，X^Ala或Thr，X3=Ser;和輕鏈CDR3包含式X1—X2—X3-X4—X5—X6—X7—X8—X9(SEQIDNO:587)的氨基酸序列，其中X1=Gln，X2=Gln，X3=Ala或Tyr，X4=Asn,X5=Ser,x6-Phe或His，X7=Pro，x8-Ile或Trp，X9=Thr。第七方面，本發(fā)明提供包含重鏈CDR3和輕鏈CDR3的抗體或抗原結(jié)合片段，其中重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361和377;輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369和385。在優(yōu)選實(shí)施方案中，重鏈和輕鏈CDR3選自序列對(duì)SEQIDNO:57和65;265和273;281和289;及297和305。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供人抗體或抗體片段，其包含重鏈CI)R1結(jié)構(gòu)域，該CDR1結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、181、197、213、229、245、261、277、293、309、325、341、357和373，或與其基本上相似的序列；重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，該CDR2結(jié)構(gòu)選自SEQIDNO:7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、183、199、215、231、247、263、279、295、311、327、343、359和375，或與其基本上相似的序列；重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該CDR3結(jié)構(gòu)i或選自SEQIDNO:9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361和377，或與其基本上相似的序列；輕鏈CDR1結(jié)構(gòu)域，該CDR1結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365和381，或與其基本上相似的序列；輕鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，該CDR2結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367和383，或與其基本上相似的序列；和輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該CDR3結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369和385，或與其基本上相似的序列。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段包含重鏈CDRSEQIDNO:53、55、57和輕鏈CDRSEQIDNO:61、63、65;重鏈CDRSEQIDNO:261、263、265和輕鏈CDRSEQIDNO:269、271、273;重鏈CDRSEQII)NO:277、279、281和輕鏈CDRSEQIDNO:285、287、289;重鏈CDRSEQIDNO:293、295、297和輕鏈CDRSEQIDNO:301、303、305。第八方面，本發(fā)明提供了抗體或抗原結(jié)合片段，其包含來(lái)自HCVR的三個(gè)CDR和來(lái)自LCVR的三個(gè)CDR，其中HCVR/LCVR選自51/59、579/59、581/59、259/267、275/283和291/299。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含重鏈和輕鏈CDR3的人抗體或抗體片段，其中重鏈CDR3由核苷#列編碼，該核苷酸序列選自SEQIDNO:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360和376;輕鏈CDR3由核苷酸序列編碼，該核苷酸序列選自SEQIDNO:16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368和384。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供人抗體或抗體片段，其包含重鏈CDR1結(jié)構(gòu)域，該重鏈CDR1結(jié)構(gòu)域由選自SEQIDNO:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356和372的核苷酸序列，或與其具有至少95%同源性的基本上相同的序列編碼；重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，該重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域由選自SEQIDNO:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358和374的核苷酸序列，或與其具有至少95%同源性的基本上相同的序列編碼；重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域由選自SEQIDNO:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360和376的核苷酸序列，或與其具有至少95%同源性的基本上相似的序列編碼；輕鏈CDR1結(jié)構(gòu)域，該輕鏈CDR1結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364和380的核苷酸序列，或與其具有至少95。/。同源性的基本上相似的序列編碼；輕鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，該輕鏈CDR2結(jié)構(gòu)域由選自SEQIDNO:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、l卯、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366和382的核苷酸序列，或與其具有至少95%同源性的基本上相似的序列編碼；和輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，該輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域由選自SEQIDNO:16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368和384的核苷酸序列，或與其具有至少95%同源性的基本上相似的序列編碼。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段包含由核苷酸序列SEQIDNO:52、54、56編碼的重鏈CDR和由核苷酸序列SEQIDNO:60、62、64編碼的輕鏈CDR;由核苷酸序列SEQIDNO:260、262、264編碼的重鏈CDR和由核苷酸序列SEQIDNO:268、270、272編碼的輕鏈CDR;由核苷酸序列SEQIDNO:276、278、280編碼的重鏈CDR和由核苷酸序列SEQIDNO:284、286、288編碼的輕鏈CDR;由核苷酸序列SEQIDNO:292、294、296編碼的重鏈CDR和由核苷酸序列SEQIDNO:300、302、304編碼的輕鏈CDR。本發(fā)明包括具有修飾的糖基化模式的抗hlL-4R抗體。在一些應(yīng)用中，除去不期望的糖基化位點(diǎn)的修飾、或在寡糖鏈上缺乏巖藻糖部分的抗體，可以用于例如增加抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒作用(ADCC)功能(見(jiàn)Shield等人，(2002)JBC277:26733)。在其它應(yīng)用中，可以進(jìn)4亍半乳糖基化4奮飾以改變補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(CDC)。第九方面，本發(fā)明提供攜帶本發(fā)明的核酸分子的重組表達(dá)載體，和已包含有這樣載體的宿主細(xì)胞，以及通過(guò)培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞制備本發(fā)明抗體或抗原結(jié)合片段的方法。宿主細(xì)胞可以是原核或真核細(xì)胞，優(yōu)選宿主細(xì)胞是大腸桿菌細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如CHO細(xì)胞。第十方面，本發(fā)明提供包含特異性結(jié)合hlL-4R的重組人抗體和可接受的載體的組合物。第十一方面，本發(fā)明提供用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分抑制hlL-4活性的方法。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體還阻斷hlL-13/hlL-13Rl復(fù)合體與hlL-4R的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包含令hlL-4R與本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分相接觸，從而抑制hlL-4或hIL-4/hIL-13活性。在另一實(shí)施方案中，該方法包含對(duì)患有病癥的人受試者施用本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分，所述病癥可以通過(guò)抑制hlL-4或hIL-4/hIL-13活性得到改善。所治療的病癥是可以通過(guò)消除、抑制或降低hlL-4或hIL-4/hIL-13活性而得到好轉(zhuǎn)、改善、抑制或預(yù)防的任何疾病或病癥。本發(fā)明還包括權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段在生產(chǎn)藥物中的用途，所述藥物用于減輕或抑制人類(lèi)中IL-4介導(dǎo)的疾病或病癥。用本發(fā)明的抗體或抗體片段治療的IL-4介導(dǎo)的或相關(guān)的病癥包括例如關(guān)節(jié)炎(包括膿毒性關(guān)節(jié)炎)、皰滲樣病(herpetiformis)、慢性特發(fā)性蕁麻滲、硬皮病、肥大性瘢痕、惠普爾病、良性前列腺增生、肺病癥、如輕微、中度或嚴(yán)重哮喘、炎性病癥如炎性腸病、變態(tài)反應(yīng)、川崎氏病、鐮狀細(xì)胞病、丘-斯綜合征、格雷夫斯氏病、先兆子癇、干燥綜合征、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征、自身免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自身免疫性葡萄膜炎、肺結(jié)核和腎病。通過(guò)閱讀以下詳細(xì)說(shuō)明，其它目的和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見(jiàn)。附圖簡(jiǎn)述圖l(A-C).用基于OCTETTM的相繼結(jié)合測(cè)定法產(chǎn)生的抗體結(jié)合鐠圖評(píng)估。圖1(A)為柱形圖，表示當(dāng)暴露于結(jié)合的抗原的一級(jí)抗體為對(duì)照抗體時(shí)所得到的結(jié)果。圖1(B)暴露于結(jié)合的抗原的一級(jí)抗體為VAB16F3-1。圖1(C)暴露于結(jié)合的抗原的一級(jí)抗體為VAK5H4-4。二級(jí)抗體1=對(duì)照；2=VX4E7-9;3=VX3F7畫(huà)6;4-VAB16G畫(huà)l;5=VAB16F3-1;6=VAB15C8-17;7=VAB11G8-1;8=VAB10C1-5;9=VAB10G8-19;10=VAB8G10-1;ll=VAB7B9-3;12=VAB6C10-14;13=VAB5C5-11;14=VAB3B4-10;15=VAB4D5-3;16=VAB1H1-2;17=VAK5H4隱4;18=VAK7G8-5;19=VAK8G11-13;20=VAK9C6-11;21=VAK10G6畫(huà)7;22=VAK11D4-1;23=VAK12Bll-9;24=VAK10G12-5?？招臈l形表示一級(jí)抗體的結(jié)合水平，實(shí)心條形表示二級(jí)抗體的額外結(jié)合。發(fā)明詳述在描述本發(fā)明的方法之前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于所描述的具體方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@些方法和條件可以改變。還應(yīng)理解本文使用的術(shù)語(yǔ)目的僅在于說(shuō)明具體的實(shí)施方案，而非限制性的，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅由隨附的權(quán)利要求書(shū)限定。除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)用語(yǔ)的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的相同。盡管在對(duì)本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中，可以使用與本文所描述的相似或等同的任何方法和材料，現(xiàn)仍對(duì)優(yōu)選方法和材料加以說(shuō)明。定義本文中使用的術(shù)語(yǔ)"人IL4R，，(hlL-4R)，旨在指特異性結(jié)合白細(xì)胞介素-4(IL-4)的人細(xì)胞因子受體IL-4Ra(SEQIDNO:l)。術(shù)語(yǔ)"人白細(xì)胞介素-13"(hlL-13)指特異性結(jié)合IL-13受體的細(xì)胞因子，"HL-13/hlL-13Rl復(fù)合體"指hIL-13與hlL-13Rl復(fù)合體結(jié)合形成的復(fù)合體，該復(fù)合體結(jié)合hlL-4受體以起始生物活性。本文中使用的術(shù)語(yǔ)"抗體"，旨在指免疫球蛋白分子，其包含四條多肽鏈用二硫鍵互聯(lián)的兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈。各重鏈包含重鏈可變區(qū)(本文中縮寫(xiě)為HCVR或VH)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域CH1、CH2和CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(本文中縮寫(xiě)為L(zhǎng)CVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個(gè)結(jié)構(gòu)域(CL1)。VH和VL區(qū)還可以再細(xì)分為高度可變區(qū)，稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，分散在更保守的、稱(chēng)為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域中。各VH和VL由三個(gè)CDR和四個(gè)FR組成，從氨基端到羧基端以下列順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。本文中使用的術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"(或簡(jiǎn)單的"抗體部分"或"抗體片段")，指保留了與抗原(例如hlL-4R)特異性結(jié)合能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。已證實(shí)抗體的抗原結(jié)合功能可以由全長(zhǎng)抗體的片段完成。術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"所涵蓋的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，為由VL、VH、CL1和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab，)2片段，為包含由鉸鏈區(qū)的二硫鍵連接的兩個(gè)F(ab)，片段的二價(jià)片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成；(iv)Fv片段，由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成，(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature241:544-546)，由VH結(jié)構(gòu)域組成；和(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域VL和VH由分離的基因編碼，可以用重組方法將它們連接起來(lái)，使用合成接頭可以將它們制成單個(gè)連續(xù)鏈，其中VL和VH區(qū)配對(duì)形成單價(jià)分子(稱(chēng)為單鏈Fv(scFv);見(jiàn)例如，Bird等人，(1988)Science242:423-426;和Huston等人，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-5883)。這樣的單鏈抗體也旨在涵蓋于術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"中。單鏈抗體的其它形式，如雙抗體，也涵蓋于其中(見(jiàn)例如Holliger等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA卯:6444-6448)。本文中使用的"中和"或"阻斷"抗體，旨在指這樣的抗體，其與hIL-4R的結(jié)合導(dǎo)致對(duì)hlL-4和/或hIL-13生物活性的抑制。這樣的對(duì)hlL-4和/或hIL-13生物活性的抑制可以通過(guò)測(cè)量本領(lǐng)域中已知的hlL-4和/或hIL-13生物活性的一個(gè)或多個(gè)指標(biāo)來(lái)評(píng)估，如hlL-4和/或IL-13誘導(dǎo)的細(xì)胞活化和hlL-4與hlL-4R的結(jié)合(見(jiàn)下文的實(shí)施例)。"CDR"或互補(bǔ)決定區(qū)為分散在更保守的、稱(chēng)為構(gòu)架區(qū)(FR)的區(qū)域中的高度可變區(qū)。在本發(fā)明的抗ML-4R抗體或片段的不同實(shí)施方案中，F(xiàn)R可以與人種系序列相同，或可以經(jīng)過(guò)天然或人工4務(wù)飾。本文中使用的術(shù)語(yǔ)"表面等離振子共振"指這樣的光學(xué)現(xiàn)象，其允許例如4吏用BIAcoreTM系統(tǒng)(PharmaciaBiosensorAB),通過(guò)檢測(cè)生物傳感器基質(zhì)中的蛋白質(zhì)濃度變化來(lái)分析蛋白質(zhì)的實(shí)時(shí)相互作用。術(shù)語(yǔ)"表位"為抗原決定簇，其與抗體分子可變區(qū)中稱(chēng)為互補(bǔ)位的特定抗原結(jié)合位點(diǎn)相互作用。單個(gè)抗原可以有不止一個(gè)表位。表位可以是構(gòu)象表位或線性表位。構(gòu)象表位由來(lái)自線性多肽鏈的不同區(qū)段的空間上并列的氨基酸產(chǎn)生。線性表位由多肽鏈中相鄰的氨基酸殘基產(chǎn)生。在某些情況下，表位可以包括抗原上的糖類(lèi)、磷酰基或磺?；糠?。當(dāng)指核酸或其片段時(shí)，術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)同一性"或"實(shí)質(zhì)上同一"表明，當(dāng)以適當(dāng)?shù)暮塑账岵迦牖蛉笔?，與另一核酸(或其互補(bǔ)鏈)進(jìn)行最佳比對(duì)時(shí)，用任何眾所周知的序列同一性算法，如下文討論的FASTA，BLAST或Gap測(cè)定，核苷酸堿基的核苷酸序列同一性為至少約95%，更優(yōu)選至少約96%、97%、98%或99%。當(dāng)用在多肽上時(shí)，術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)相似性"或"實(shí)質(zhì)上相似"指當(dāng)兩個(gè)肽序列用如GAP或BESTFIT程序使用默認(rèn)空位權(quán)重進(jìn)行最佳比對(duì)時(shí)，具有至少95%的序列同一性，甚至更優(yōu)選至少98%或99%的序列同一性。優(yōu)選不相同的殘基位置的差別是保守氨基酸取代。"保守氨基酸取代"指氨基酸殘基被具有相似化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏7jc性)的側(cè)鏈(R基團(tuán))的另一氨基酸殘基所取代。一般而言，保守氨基酸取代不會(huì)實(shí)質(zhì)上改變蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)。在兩個(gè)或多個(gè)氨基酸序列與彼此的差別在于保守取代的情況下，序列同一性百分比或相似性程度可以由于取代的保守性而向上校正。做此調(diào)整的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。見(jiàn)例如Pearson(1994)MethodsMol.Biol.24:307-331。側(cè)鏈具有相似化學(xué)性質(zhì)的氨基酸組的例子包括(l)脂肪族側(cè)鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；(2)脂肪族羥基側(cè)鏈絲氨酸和蘇氨酸；(3)含酰胺的側(cè)鏈天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)堿性側(cè)鏈賴(lài)氨酸、精氨酸和組氨酸；(6)酸性側(cè)鏈天冬氨酸和谷氨酸，和(7)含硫側(cè)鏈半胱氨酸和甲硫氨酸。優(yōu)選的保守氨基酸取代組為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴(lài)氨酸-精氨酸，丙氨酸-纈氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，和天冬酰胺-谷氨酰胺。可選地，保守替換為在Gonnet等人，(1992)Science256:144345中公開(kāi)的PAM250對(duì)數(shù)似然性矩陣具有正值的任何改變。"適度保守性"替換為在PAM250對(duì)數(shù)似然矩陣中具有非負(fù)值的任何改變。多肽的序列相似性，也稱(chēng)為序列同一性，通常用序列分析軟件進(jìn)行測(cè)定。蛋白質(zhì)分析軟件使用對(duì)包括保守氨基酸取代的多種取代、缺失和其它修飾賦值的相似性測(cè)量方法來(lái)匹配相似序列。例如，GCG軟件包含程序如Gap和Bestfit，可用于以缺省參數(shù)測(cè)定密切相關(guān)的多肽之間的序列同源性或序列同一性，所述多肽如來(lái)自不同物種生物的同源多肽，或野生型蛋白和其突變蛋白。見(jiàn)例如GCG版本6.1。還可用FASTA以缺省或推薦的參數(shù)比較多肽序列，GCG版本6.1.中的程序FASTA(例如，F(xiàn)ASTA2和FASTA3)提供查詢(xún)和搜索序列之間最佳重疊區(qū)域的比對(duì)和序列同一性百分比(Pearson(2000)，同前)。當(dāng)用本發(fā)明的序列與包含大量來(lái)自不同生物序列的數(shù)據(jù)庫(kù)相比較時(shí)，另一優(yōu)選算法是計(jì)算機(jī)程序BLAST,特別是BLASTP或TBLASTN，使用缺省參數(shù)。見(jiàn)例如Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.215:403-410和Altschul等人，(1997)NucleicAcidsRes.25:3389402。人抗體的制備產(chǎn)生人抗體的方法包括例如VeloclmmuneTM(RegeneronPharmaceuticals)、XenoMouseTM技術(shù)(Green等人,(1994)NatureGenetics7:13-21;Abgenix公司)、"微小基因座(minilocus)"方法和噬菌體展示(見(jiàn)，例如，US5,545,807，US6,787,637)。VeloclmmuneTM技術(shù)(US6,596,541)包含產(chǎn)生針對(duì)選定抗原的高特異性完全人抗體的方法?？梢杂帽绢I(lǐng)域已知的任何方法免疫嚙齒類(lèi)動(dòng)物(見(jiàn)例如Harlow和Lane(1988)，同前；Malik和Lillehoj(1994)Antibodytechniques,AcademicPress,CA)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，將hIL-4R抗原與佐劑直接施用于小鼠以刺激免疫反應(yīng)，該小鼠包含編碼人Ig重鏈可變區(qū)和k輕鏈可變區(qū)的DNA基因座(VelocImmuneTM，RegeneronPharmaceuticals,Inc.;US6,596,541)，所述佐劑為例如完全和不完全弗氏佐劑、MPL+TDM佐劑系統(tǒng)(Sigma)、或RIBI(胞壁酰二肽)(見(jiàn)O，Hagan(2000)VaccineAdjuvant,HumanPress,NJ)。佐劑通過(guò)將抗原隔離在局部藥庫(kù)可防止多肽的快速擴(kuò)散，且可包含能刺激宿主免疫反應(yīng)的因子。VelocImmuneTM技術(shù)包括建立轉(zhuǎn)基因小鼠，其基因組包含人重鏈和輕鏈可變區(qū)，其與小鼠內(nèi)源性恒定區(qū)基因座有效連接，從而小鼠響應(yīng)抗原刺激產(chǎn)生包含人可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的抗體。分離編碼抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的DNA，與編碼人重鏈和輕鏈恒定區(qū)的DNA有效連接。而后DNA在能夠表達(dá)完整人抗體的細(xì)胞中表達(dá)。在具體實(shí)施方案中，細(xì)胞為CHO細(xì)胞?？贵w可在治療上用于阻斷配體-受體相互作用或抑制受體組分相互作用，而不是通過(guò)補(bǔ)體結(jié)合(補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性)(CDC)和參與抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)殺死細(xì)胞。抗體的恒定區(qū)對(duì)抗體結(jié)合補(bǔ)體和介導(dǎo)細(xì)胞依賴(lài)性細(xì)胞毒作用的能力十分重要。因此，可依據(jù)是否期望抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒作用而選擇抗體的同種型。人免疫球蛋白可以以與鉸鏈區(qū)異質(zhì)性相關(guān)的兩種形式存在。在一種形式中，免疫球蛋白分子包含約150-160kDa的穩(wěn)定的四條鏈結(jié)構(gòu)，其中二聚體通過(guò)鏈間的重鏈二硫鍵結(jié)合在一起。在第二種形式中，二聚體不通過(guò)鏈間的二硫鍵連接，并且形成約75-80kDa的分子，其包含共價(jià)偶聯(lián)的輕鏈和重鏈(半抗體)。即使在親和純化之后，也極其難以分離這些形式。第二種形式在多種完整IgG同種型中出現(xiàn)的頻率是由于但不限于與抗體的鉸鏈區(qū)同種型相關(guān)的結(jié)構(gòu)差異。事實(shí)上，人IgG4鉸鏈的鉸鏈區(qū)中單個(gè)氨基酸取代可顯著減少第二種形式的出現(xiàn)(Angal等人，(1993)MolecularImmunology30:105),減少至使用人IgGl鉸鏈時(shí)通常觀察到的水平。本發(fā)明包含在鉸鏈、CH2或CH3區(qū)具有一個(gè)或多個(gè)突變的抗體，其在例如制備中可期望提高期望抗體形式的產(chǎn)量。本發(fā)明的抗體優(yōu)選用VeloclmmuneTM技術(shù)制備。用目的抗原攻擊這樣的轉(zhuǎn)基因小鼠其中內(nèi)源免疫球蛋白的重鏈和輕鏈可變區(qū)被替換為相應(yīng)的人可變區(qū)，從表達(dá)抗體的小鼠中回收淋巴細(xì)胞(如B細(xì)胞)。淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞系融合以制備永生的雜交瘤細(xì)胞系，篩選和選擇這樣的雜交瘤細(xì)胞系，以鑒定生產(chǎn)特異于目的抗原的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。可分離重鏈和輕鏈可變區(qū)的編碼DNA，與重鏈和輕鏈的期望的同種型恒定區(qū)相連?？稍诩?xì)胞中，如CHO中制備這樣的抗體蛋白。備選地，編碼抗原特異性嵌合抗體或輕鏈和重鏈可變區(qū)的DNA可直接從抗原特異性淋巴細(xì)胞中分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因小鼠包含多達(dá)18種有功能的人可變重鏈基因和12種有功能的人可變k輕鏈基因。在另一實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因小鼠包含多達(dá)39種人可變重鏈基因和30種人可變k輕鏈基因。在又一實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因小鼠包含多達(dá)80種人可變重鏈基因和40種人可變k輕鏈基因。一般而言，本發(fā)明的抗體具有非常高的親和力，通過(guò)與固定在固相或處在溶液中的抗原的結(jié)合測(cè)定，通常具有Kd約10力到約10"2M。首先，分離具有人可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的高親和力嵌合抗體。如下文所述，表征并選擇具期望特征的抗體，所述特征包括對(duì)hlL-4R的結(jié)合親和力、阻斷hlL-4與hlL-4R的結(jié)合的能力、和/或?qū)θ祟?lèi)蛋白質(zhì)的選擇性。用期望的人恒定區(qū)替換小鼠恒定區(qū)，以產(chǎn)生本發(fā)明的完全人抗體，例如野生型或修飾的IgG4或IgGl(例如，SEQIDNO:588,589，5卯)。盡管選擇的恒定區(qū)可才艮據(jù)具體用途有所不同，但高親和力的抗原結(jié)合和靶特異性特征位于可變區(qū)中。表位作圖和相關(guān)技術(shù)為篩選與特定表位結(jié)合的抗體，可使用常規(guī)交叉封閉測(cè)定法(cross-blockingassay)，如在Antibodies:ALaboratoryManual1988ColdSpringHarborLaboratory(Harlow和Lane編著)中描述的方法。其它方法包括丙氨酸掃描突變體、肽印跡(Reineke(2004)MethodsMolBiol248:443-63)、或肽切割分析。此外，可使用諸如表位切除、表位提取和抗原的化學(xué)1'務(wù)飾(Tomer(2000)ProteinScience:9:487-496)等方法。修飾輔助分型(Modification-AssistedProfiling)(MAP)，也稱(chēng)為基于抗原結(jié)構(gòu)的抗體分型(AntigenStructure-basedantibodyProfiling)(ASAP)，是根據(jù)各抗體與經(jīng)化學(xué)或酶促修飾的抗原表面結(jié)合特點(diǎn)的相似性，將大量針對(duì)相同抗原的單克隆抗體(mAb)加以分類(lèi)的方法(美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2004/0101920)。各種類(lèi)可反映與另一種類(lèi)表示的表位明顯不同或部分重疊的獨(dú)特的表位。此技術(shù)能夠快速過(guò)濾遺傳上相同的抗體，從而表征可以集中于遺傳上不同的抗體。當(dāng)用于雜交瘤篩選時(shí)，MAP可幫助鑒定具有期望特征的稀有雜交瘤克隆?？墒褂肕AP將本發(fā)明的hIL-4R抗體分類(lèi)為結(jié)合不同表位的抗體組?？捎糜诟淖児潭乖慕Y(jié)構(gòu)的物質(zhì)有酶，如蛋白水解酶和化學(xué)試劑?？乖鞍卓晒潭ㄓ谏飩鞲衅餍酒砻婊蚓郾揭蚁┲樯?。后者可用例如多路LuminexTM檢測(cè)法(multiplexLuminexTMdetectionassay)(盧明內(nèi)斯公司(LuminexCorp.)，美國(guó)德州)處理。由于具有可處理多達(dá)100種不同類(lèi)型小珠的多路分析容量，LuminexTM提供了幾乎無(wú)限的具有多種修飾的抗原表面，使得抗體表位分型的分辨率高于生物傳感器測(cè)定法。治療性給藥和劑型根據(jù)本發(fā)明的治療實(shí)體的施用可以用摻入制劑中以提供改善的轉(zhuǎn)移、遞送、耐受性等性質(zhì)的適合載體、賦形劑和其它試劑實(shí)現(xiàn)。許多適合的劑型可在所有藥劑師均知的如下處方集中找到Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(2003,20版，LippincottWilliams&Wilkins)。這些劑型包括，例如，粉劑、糊劑、軟膏劑、膠凍劑、蠟類(lèi)、油類(lèi)、脂類(lèi)、含脂類(lèi)(陽(yáng)離子或陰離子)的嚢泡(如LIPOFECTINTM)、DNA綴合物、無(wú)水吸收糊劑、水包油乳劑和油包水乳劑、碳蠟(多種分子量的聚乙二醇)乳化劑、半固體凝膠劑、和含碳蠟的半固體混合物。只要制劑中的活性成份不由于配制失活，且制劑對(duì)于給藥途徑是生理相容和耐受的，那么任何上述混合物均可適合根據(jù)本發(fā)明的治療和療法。關(guān)于藥劑師所熟知的賦形劑和載體的額夕卜"f言息，也見(jiàn)Powell等人,"Compendiumofexcipientsforparenteralformulations"PDA(1998)JPharmSciTechnol.52:238-311和其中引述的文獻(xiàn)。本發(fā)明的治療分子可以用適合適應(yīng)癥的方式對(duì)患者施用，例如，腸胃外、局部或通過(guò)吸入施用。如果注射的話(huà)，拮抗劑可以通過(guò)例如，關(guān)節(jié)內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、損傷內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下路徑，通過(guò)快速濃注或連續(xù)輸注進(jìn)行施用。在疾病或損傷處的局部給藥被認(rèn)為是經(jīng)皮遞送和從植入物中持續(xù)釋放。通過(guò)吸入遞送包括，例如，鼻或口腔吸入、使用噴霧器、吸入氣霧劑形式的拮抗劑等。其它的選擇包括眼藥水；口服制劑，包括丸劑、糖漿劑、錠劑或口香糖；和局部制劑如洗劑、凝膠劑、噴霧劑和軟膏劑。給藥的具體劑量和頻率可以根據(jù)如下因素而改變，如給藥途徑、待治療的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性、病癥是急性或慢性、及患者的身材和整體狀況。適宜的劑量可以用相關(guān)領(lǐng)域中已知的方法確定，例如在可以包括劑量遞增研究的臨床試驗(yàn)中確定。本發(fā)明的治療分子可以單次或重復(fù)給藥。在具體實(shí)施方案中，抗體或抗體片段的給藥期間為至少一個(gè)月或更長(zhǎng)，例如，一個(gè)月、兩個(gè)月、或三個(gè)月、或甚至不確定的時(shí)間。對(duì)于治療慢性狀況，長(zhǎng)期治療通常最有效。然而對(duì)于治療急性狀況，較短時(shí)間的用藥，例如一至六周，可能就足夠了。一般而言，將治療劑施用直到患者對(duì)于選定的一種或多種指標(biāo)表現(xiàn)出超過(guò)基線的、醫(yī)學(xué)上相關(guān)的程度的改善。IL-4的水平可以在用本發(fā)明的治療分子治療的過(guò)程中和/或之后進(jìn)行監(jiān)測(cè)。測(cè)量IL-4血清水平的方法為本領(lǐng)域已知，例如通過(guò)ELISA等。治療用途和組合治療本發(fā)明的抗體和抗體片段可以用于治療通過(guò)降低IL-4活性能夠得到改善、抑制或好轉(zhuǎn)的疾病和病癥。這些病癥包括特征在于異?；蜻^(guò)量表達(dá)IL-4、或?qū)τ贗L-4的生產(chǎn)產(chǎn)生異常宿主反應(yīng)的病癥。用本發(fā)明的抗體或抗體片段治療的IL-4相關(guān)的病癥包括，例如，關(guān)節(jié)炎(包括膿毒性關(guān)節(jié)炎)、皰疹樣病、慢性特發(fā)性蕁麻滲、硬皮病、肥大性瘢痕、惠普爾病、良性前列腺增生、肺病癥如哮喘(輕微、中度或嚴(yán)重)、炎性病癥如炎性腸病、變態(tài)反應(yīng)、川崎氏病、鐮狀細(xì)胞病、丘-斯綜合征、格雷夫斯氏病、先兆子癇、干燥綜合征、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征、自身免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自身免疫性葡萄膜炎、肺結(jié)核、特應(yīng)性皮炎、潰瘍性結(jié)腸炎、纖維癥和腎病(見(jiàn)U.S.7,186,809)。本發(fā)明包含組合治療，其中抗IL-4R抗體或抗體片段與第二治"物質(zhì)組合給藥。共同給藥和組合治療不限于同時(shí)給藥，但包括這樣的治療方案，其中抗IL-4R抗體或抗體片段在療程中給藥至少一次，該療程包含對(duì)患者施用至少一種其它的治療物質(zhì)。第二治療物質(zhì)可以是另一種IL-4拮抗劑如另一種抗體/抗體片段、或可溶細(xì)胞因子受體、IgE拮抗劑、抗哮喘藥物(皮質(zhì)類(lèi)固醇、非類(lèi)固醇類(lèi)物質(zhì)、P激動(dòng)劑、白三烯拮抗劑、黃噤呤、氟替卡松、沙美特羅、沙丁胺醇)，其可以通過(guò)吸入或其它適當(dāng)方法遞送。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗IL-4R抗體或抗體片段可以與IL-1拮抗劑如利納西普(rilonacept)，或IL-13拮抗劑一起施用。第二物質(zhì)可以包括一種或多種白三烯受體拮抗劑以治療病癥如過(guò)敏性炎性疾病，例如，哮喘和過(guò)敏。白三烯受體拮抗劑的例子包括但不限于孟魯司特、普侖司特和扎魯司特。第二物質(zhì)可以包括細(xì)胞因子抑制劑如TNF(依那西普，ENBRELtm)、IL-9、IL-5或IL-17拮抗劑中的一種或多種。實(shí)施例下列實(shí)施例意在為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明的方法和組合物的完整公開(kāi)和說(shuō)明，而不是限制發(fā)明人所認(rèn)為的本發(fā)明的范圍。就使用的數(shù)字(例如，量、溫度等)而言，已盡力確保精確，但應(yīng)說(shuō)明有一定實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另有說(shuō)明，份為重量份，分子量為平均分子量，溫度為攝氏度，壓力等于或接近大氣壓。實(shí)施例1.產(chǎn)生抗人IL-4受體的人抗體將包含編碼人Ig重鏈可變區(qū)和k輕鏈可變區(qū)的DNA基因座(VelocImmuneTM，RegeneronPharmaceuticals,Inc.;美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,596,541)的小鼠用人IL-4R(hlL-4R，SEQIDNO:l)免疫。hlL-4R的施用是通過(guò)直接注射佐劑中的純化抗原，或通過(guò)提供DNA質(zhì)粒中的hlL-4R的DNA序列間接進(jìn)行，該DNA質(zhì)粒包含hIL-4R基因，并用宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)機(jī)器表達(dá)hIL-4R以在體內(nèi)生產(chǎn)抗原多肽。為得到最佳的免疫反應(yīng)，隨后每3-4周對(duì)動(dòng)物進(jìn)行增強(qiáng)免疫，每次增強(qiáng)的10天后采血用于評(píng)估抗-抗原反應(yīng)的進(jìn)程。當(dāng)小鼠的免疫反應(yīng)達(dá)到最大時(shí)，收獲表達(dá)抗體的B細(xì)胞，與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤。通過(guò)篩選雜交瘤或轉(zhuǎn)染細(xì)胞的條件培養(yǎng)基在特異性、抗原結(jié)合親和力和阻斷hlL-4與hlL-4R結(jié)合中的功效來(lái)選擇具期望功能的單克隆抗體(說(shuō)明如下)。顯示期望的抗原結(jié)合親和力、功效、和/或阻斷hlL-4與hlL-4R結(jié)合的能力的選定抗體包括(HCVR/LCVR):VX4E7-9(SEQIDNO:3/ll;387/389;391/393);VX3F7國(guó)6(SEQIDNO:19/27;395/397;399/401);VAB16G1-1(SEQIDNO:35/43;403/405;407/409);VAB16F3-1(SEQIDNO:51/59、411/413、415/417、579/59和581/59);VAB15C8-17(SEQIDNO:67/75、419/421、423/425);VAB13A1-6(SEQIDNO:83/91、427/429、431/433);VAB11G8-1(SEQIDNO:99/107、435/437、439/441);VAB10G8-19(SEQIDNO:115/123、443/445、447/449);VAB10C1-5(SEQIDNO:131/139、451/453、455/457);VAB8G10-1(SEQIDNO:147/155、459/461、463/465);VAB7B9-3(SEQIDNO:163/171、467/469、471/473);VAB6C10-14(SEQIDNO:179/187、475/477、479/481);VAB5C5國(guó)11(SEQIDNO:195/203、483/485、487/489);VAB3B4-10(SEQIDNO:211/219、491/493、495/497);VAB4D5-3(SEQIDNO:227/235、499/501、503/505);VAB1H1-2(SEQIDNO:243/251、507/509、511/513);VAK5H4-4(SEQIDNO:259/267、515/517、519/521);VAK7G8-5(SEQIDNO:275/283、523/525、527/529);VAK8G11-13(SEQIDNO:291/299、531/533、535/537);VAK9C6-11(SEQIDNO:307/315、539/541、543/545);VAK10G6-7(SEQIDNO:323/331、547/549、551/553);VAK11D4-1(SEQIDNO:339/347、555/557、559/561);VAK12B11-9(SEQIDNO:355/363、563/565、567/569);和VAK10G12曙5(SEQIDNO:371/379、571/573、575/577)。實(shí)施例2.抗原結(jié)合親和力測(cè)定用實(shí)時(shí)生物傳感器表面等離振子共振測(cè)定法(BIAcoreTM2000)測(cè)定選定抗體與hlL-4R的結(jié)合親和力(Ko)。簡(jiǎn)言之，抗體^皮捕獲在山羊抗小鼠(GAM)IgG多克隆抗體表面上以形成被捕獲的抗體表面，該多克隆抗體表面經(jīng)由GAMIgG與BIAcoreTM芯片的直接化學(xué)偶聯(lián)形成。將多種濃度(范圍為12.5nM到0.625nM)的單體hlL畫(huà)4R(R&DSystems)或二聚體hlL-4R-hFc注入到被捕獲的抗體表面上。實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)抗原與抗體的結(jié)合和結(jié)合的復(fù)合體的解離。用BIA評(píng)估軟件進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析以確定平衡解離常數(shù)(Kd)和解離速率常數(shù)。BIA評(píng)估軟件還用于計(jì)算抗原/抗體復(fù)合體解離的半壽期(U。結(jié)果在表I中顯示。對(duì)照完全人抗IL-4R抗體(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)7,186，809;SEQIDNO:10和12)。動(dòng)力學(xué)分析的結(jié)果顯示選定抗體包括能夠以低于1nM的Ku與二聚體受體結(jié)合的高親和力抗體。還測(cè)試了抗hlL-4R抗體與小鼠或猴(食蟹猴(A^c"oi/Mdcw/"Ws))IL-4R的結(jié)合親和力。選定的抗體(1)不與小鼠1L-4R交叉反應(yīng)；(2)不與猴IL-4R結(jié)合或以非常低的親和力與猴IL-4R結(jié)合。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>還使用基于ELISA的溶液竟?fàn)帨y(cè)定法評(píng)估抗體-抗原結(jié)合親和力。簡(jiǎn)言之，抗體(i或3.3ng/ml的純化蛋白質(zhì))與抗原蛋白(單體或二聚體)O到10網(wǎng)/ml范圍的系列稀釋液預(yù)混合。然后抗體和抗原混合物溶液在室溫孵育2到4小時(shí)以達(dá)到結(jié)合平衡。然后用定量夾心式ELISA測(cè)定混合物中的游離抗體。簡(jiǎn)言之，MaxisorpTM96孔板(VWR公司，西切斯特市，賓州)用處于PBS中的2i!g/mlhlL-4R-hFc蛋白質(zhì)包被，4。C過(guò)夜，然后用BSA封閉非特異性結(jié)合。然后將抗體-抗原混合物溶液轉(zhuǎn)移至包被的MaxisorbTM板，之后孵育一小時(shí)。然后用洗滌液洗滌平板，用HRP-綴合的山羊抗小鼠IgG多克隆抗體試劑(JacksonImmunoResearch)檢測(cè)板上結(jié)合的抗體，或用HRP-綴合的山羊抗人IgG多克隆抗體試劑(JacksonImmunoResearch)檢測(cè)對(duì)照抗體，用比色底物如BDOptEIATM(BDBiosciencesPharmingen乂>司，圣地亞哥，力口州)顯影。用1M磷酸或硫酸停止反應(yīng)之后，記錄450nm的吸光度，用GraphPadTMPrism軟件分析數(shù)據(jù)。用4參數(shù)擬合分析(fourparameterfitanalysis)信號(hào)對(duì)溶液中抗原濃度的依賴(lài)性，并報(bào)告為IC50，即在溶液中不存在抗原的情況下，令來(lái)自抗體樣品的信號(hào)減少50%所需的抗原濃度。依上述測(cè)定ICso，在表2中進(jìn)行總結(jié)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗體片段顯示如用ELISA溶液竟?fàn)帨y(cè)定法測(cè)量的，二聚體hIL-4R的IC5o為約20pM或更小，單體hIL-4R的IC5。為約150pM或更小，或約100pM或更小。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例3.對(duì)hlL-4和hlL-4R相互作用的抑制如下所述，用BIAcoreTMhlL-4阻斷測(cè)定法篩選選定抗體阻斷hlL-4與hlL-4R結(jié)合的能力，用如下述定量hlL-4阻斷免疫測(cè)定法測(cè)定效力。結(jié)果在表3中進(jìn)行總結(jié)。用表面等離振子共振測(cè)定抗體阻斷hlL-4與hlL-4R受體結(jié)合的能力。用固定在CM-5上的山羊抗人IgG多克隆抗體捕獲純化的hlL-4R-hFc分子至濃度為260RU，以制備受體包被的表面。然后將人IL-4(0.25m1，50nM)注入到受體包被的表面上，記錄結(jié)合的hlL-4的量(笫一次注入hlL-4)。然后用3MMgCl2脈沖及隨后的條件緩沖液除去結(jié)合的hlL-4。然后將純化的抗hlL4R抗體注入到受體表面上，隨后以同樣濃度第二次注入hlL-4(第二次注入hlL-4)。表3中報(bào)告了由于預(yù)形成的抗體和受體復(fù)合體而導(dǎo)致的hlL-4的結(jié)合降低的百分比。為進(jìn)一步評(píng)價(jià)阻斷hlL-4與hlL-4R結(jié)合的能力，進(jìn)行了定量免疫測(cè)定。簡(jiǎn)言之，25pMhlL-4R-Fc溶液與范圍在50nM到OnM的抗體蛋白系列稀釋液預(yù)混合，然后在室溫孵育一小時(shí)。用hlL-4R特異性?shī)A心式ELISA測(cè)定游離hlL-4R-Fc(未結(jié)合抗體)的濃度。通過(guò)將生物素化的hIL-4(0.5照/ml)結(jié)合在鏈霉抗生物素蛋白包被的96孔板上制備hlL-4R的檢測(cè)板。將預(yù)結(jié)合的抗體-抗原樣品轉(zhuǎn)移到hlL-4包被的檢測(cè)板上。室溫孵育一小時(shí)后，洗滌檢測(cè)板，用HRP綴合的山羊抗hFc多克隆抗體檢測(cè)板上結(jié)合的hlL-4R-hFc，用比色底物如BDOptEIATM(BDBiosciencesPharmingen公司，圣地亞哥，加州)顯影。用1M磷酸或硫酸停止反應(yīng)之后，記錄450nm的吸光度，用GraphPadTMPrism軟件分析數(shù)據(jù)。IC50測(cè)定為令可檢測(cè)的IL-4R-hFc與板上結(jié)合的hlL-4之間的結(jié)合減少50%所需的抗體量。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗體片段顯示，如用ELISA測(cè)量，阻斷25pMhlL-4R的IC5{)小于約50pM，或小于約40pM，或小于約30pM，或小于約20pM。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實(shí)施例4.體外中和hlL-4的生物效應(yīng)文獻(xiàn)中廣泛記載了IL-4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(例如，見(jiàn)Hebenstreit等人，2006CytokineGrowthFactorRev.l7(3):173-88,2006的綜述)。IL-4可以刺激兩種受體復(fù)合體，I型和II型。I型受體復(fù)合體由IL-4與IL-4R結(jié)合和隨后用共有y鏈異二聚化形成。備選地，IL4/IL4R復(fù)合體可以與IL-13受體1異二聚化形成II型受體復(fù)合體。I型和II型復(fù)合體都主要通過(guò)STAT6傳導(dǎo)信號(hào)。因此，如下文所述評(píng)估選定抗體阻斷經(jīng)STAT6的信號(hào)傳導(dǎo)的能力。建立對(duì)hlL-4和hIL-13高度敏感的細(xì)胞系。HEK293細(xì)胞用人STAT6和STAT6螢光素酶報(bào)道質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，在生長(zhǎng)培養(yǎng)基(DMEM，10%FBS，L-谷氨酰胺，青霉素，鏈霉素)中維持。當(dāng)在STAT6轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入10pMhlL-4時(shí)，得到強(qiáng)烈的IL-4受體介導(dǎo)的反應(yīng)。為進(jìn)行hlL-4反應(yīng)的生物測(cè)定，細(xì)胞在測(cè)定培養(yǎng)基中洗滌一次(OptimemI(Gibco公司)加0.1%FBS)，以lxl04個(gè)細(xì)胞/孔(96孔板)于80pl測(cè)定培養(yǎng)基中鋪板。在測(cè)定培養(yǎng)基中連續(xù)稀釋純化的抗體(終濃度范圍為20nM至0),將10pl各試驗(yàn)抗體與10hIL-4(10pM恒定終濃度)一起加入細(xì)胞中。細(xì)胞在37。C，5。/oC02孵育6小時(shí)。用螢光素酶測(cè)定法(PromegaBiotech)測(cè)量細(xì)胞反應(yīng)程度。結(jié)果在表4中顯示。也用人成紅血細(xì)胞細(xì)胞系TF1,或修飾的、過(guò)表達(dá)U-13Ra的TF1細(xì)胞系(TF1/A12)確認(rèn)依賴(lài)IL-4的生物活性的體外抑制。在此生物測(cè)定法中，在96孔板的各孔中的RPMI1640培養(yǎng)基中接種20,000個(gè)細(xì)胞，該培養(yǎng)基含10。/。FBS、2mML-谷氨酰胺、青霉素和鏈霉素。加入25pl濃度范圍在0到50nM(終濃度)的純化抗體，同時(shí)加入25plhlL-4重組蛋白至終濃度50pM(對(duì)于細(xì)月包系TF1),或20pM(對(duì)于細(xì)胞系TF1/A12)。令細(xì)胞在37。C生長(zhǎng)3天，用CCK8試劑盒(Dojindo，日本)測(cè)定最終細(xì)胞計(jì)數(shù)。表4中報(bào)告了抗體阻斷TF-1細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，其以減少50%的細(xì)胞增殖所需的抗體濃度表示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>實(shí)施例5.體外中和hIL-13的生物效應(yīng)由于已證實(shí)IL-4R通過(guò)與IL-13/IL-13R復(fù)合體的結(jié)合調(diào)節(jié)IL-13的活性，在上述的HEK293STAT6螢光素酶測(cè)定法的j，務(wù)改方法中測(cè)試選定抗體阻斷IL-13活性的能力，所述修改為用40pMhIL-13替換10pMIL-4。并且在上述TF-1細(xì)胞系測(cè)定法中，用150pM的hIL-13，在0-50nM抗體存在下評(píng)估抗體阻斷hIL-13活性的效力。結(jié)果于表5中顯示。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>實(shí)施例6.抗體結(jié)合譜圖的評(píng)估通過(guò)測(cè)定抗體(與其抗原結(jié)合)對(duì)于一組不同抗體隨后與相同抗原結(jié)合的能力可以具有的影響，可以建立抗體結(jié)合譜圖。例如，抗原可以固定在支持物上以形成抗原包被的表面，可以用抗體飽和抗原包被的表面，而后可以將被抗體飽和的抗原包被的表面暴露于一組其它抗體。該組其它抗體與被抗體飽和的抗原表面結(jié)合的程度即提供了抗體結(jié)合i普?qǐng)D。使用基于()CTETTM的相繼結(jié)合測(cè)定法產(chǎn)生抗體結(jié)合譜圖。簡(jiǎn)言之，24個(gè)鏈霉抗生物素蛋白高結(jié)合FA生物傳感器(ForteBio公司，門(mén)羅-帕克，加州)的組首先與抗原即2照/ml生物素-hlL-4R-hFc在30。C孵育10min以達(dá)到飽和，結(jié)合的抗原的量測(cè)定為由于結(jié)合的蛋白質(zhì)造成的生物層的厚度(nm)變化，其通過(guò)波長(zhǎng)移動(dòng)直接進(jìn)行測(cè)量。結(jié)合了生物素-hlL-4R-hFc的生物傳感器而后與50pg/ml的一級(jí)抗體(對(duì)照抗體)在30。C孵育15min以達(dá)到飽和，結(jié)合的對(duì)照抗體的量測(cè)定為生物層厚度(nm)變化。而后各結(jié)合了對(duì)照抗體的傳感器與50pg/ml的24種不同的抗hlL-4R抗體的組中的其中之一(二級(jí)抗體)在30。C孵育15min，結(jié)合的二級(jí)抗體的量測(cè)定為生物層厚度變化。用VAB16F3-1或VAK5H4-4抗hlL-4R抗體作為一級(jí)抗體重復(fù)同樣的測(cè)定法。結(jié)果于圖1A-C中顯示。并且用蛋白質(zhì)印跡評(píng)估選定的抗hlL-4R抗體(數(shù)據(jù)未顯示)。簡(jiǎn)言之，hlL-4R單體(每泳道200ng)和mflL-4RHis-標(biāo)記的單體(每泳道200ng)用還原和非還原樣品緩沖液在SDS-PAGE凝膠上進(jìn)行電泳。將4塊單獨(dú)的凝膠分別轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，每張膜各自暴露于四種一級(jí)抗體之一抗HismAb(Qiagen公司)、VAB16F3-1、VAK5H4-4或抗hlL畫(huà)4R對(duì)照抗體，用HRP綴合的山羊抗mlgG或抗hlgG(Pierce公司)作為二級(jí)抗體。全部三種抗hlL-4R抗體均識(shí)別非還原形式的hlL-4R。只有VAB16F3-1和VAK5H4-4檢測(cè)到還原形式的hlL-4R。沒(méi)有一種抗hlL-4R抗體檢測(cè)到猴IL-4R。權(quán)利要求1.特異性結(jié)合hIL-4R(SEQIDNO1)的抗體或其抗原結(jié)合片段，用表面等離振子共振測(cè)量KD為約200pM或更小，優(yōu)選約150pM或更小。2.權(quán)利要求l所述的抗體或抗原結(jié)合片段，包含重鏈可變區(qū)(HCVR)，其選自SEQIDNO:3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291、307、323、339、355、371、387、391、395、399、403、407、411、415、419、423、427、431、435、439、443、447、451、455、459、463、467、471、475、479、483、487、491、495、499、503、507、511、515、519、523、527、531、535、539、543、547、551、555、559、563、567、571、575、579和581;和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其選自SEGIDNO:ll、27、43、59、75、91、107、123、130、155、m、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、389、393、397、401、405、409、413、417、421、425、429、433、437、441、445、449、453、457、461、465、469、473、477、481、485、489、493、497、501、505、509、513、517、521、625、529、533、537、541、545、,549、553、557、561、565、569、573和577。3.權(quán)利要求1或2所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含HCVR/LCVR對(duì)，所述HCVR/LCVR對(duì)選自SEQIDNO:3/11、19/27、35/43、51/59、67/75、83/91、99/107、115/123、131/139、147/155、163/171、179/187、195/203、211/219、227/235、243/251、259/267、275/283、291/299、307/315、323/331、339/347、355/363、371/379、387/389、391/393、395/397、399/401、403/405、407/409、411/413、415/417、419/421、423/425、427/429、431/433、435/437、439/441、443/445、447/449、451/453、455/457、459/461、463/465、467/469、471/473、475/477、479/481、483/485、487/489、491/493、495/497、499/501、503/505、507/509、511/513、515/517、519/521、523/525、527/529、531/533、535/537、539/541、543/545、547/549、551/553、555/557、559/561、563/565、567/569、571/573、575/577、579/59和581/59。4.權(quán)利要求3所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其優(yōu)選包含選自SEQIDNO:5固、259/267、275/283、291/299、579/59或581/59的HCVR/LCVR。5.權(quán)利要求l所述的抗體或抗原結(jié)合片段，包含重鏈CDR1，其包含式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEQIDNO:582)的氨基,列，其中X'-Gly，x2-Tyr或Phe，X3=Thrill,X4=Phe，x5二Asn或Arg,X6=Ser，X7=Tyr,X8=Gly;重鏈CDR2，其包含式X1-X2—X3—X4—X5—X6—X7—X8(SEQIDNO:583)的氨基,列，其中^-Ile，X2=Ser或Arg，x3二Thr或Tyr，X4=Tyr或Asp,X5=Asn或Gly，X6=Gly或Ser，X7=Lys或Asn,X8=Thr;重鏈CDR3，其包含式X1—X2—X3—X4—X5—X6—X7—X8—X9-X10—x"一XU_XU—x"—X5_x"一X17——X,9一X2C一x"(seQIDNO:584)的氨基酸序列，其中X1=Ala或Val，X2=Arg_^Lys,X3=Asp或Glu,x4^Gly或Glu，X5=Ala或Arg,X6=Arg或Ser，X7=lie或Gly,x8-Val或Ser，x9-Val或Trp，X10=Ala或Phe，X"-Gly或Asp,X12=Thri^Pro，X'3:Thr或缺失，X14=Pro或缺失，X15=Tyr或缺失，X"-Tyr或缺失，X"^^Tyr或缺失，X"-Gly或缺失，X19=Met或缺失，X2Q-Asp或缺失，X"-Val或缺失；輕鏈CDR1，其包含式X1—X2—X3-X4—X5-X6(SEQIDNO:585)的氨基酸序列，其中X!:Gln，X2=AspilAla，X3=Ile，x4-Ser或Asn，X、Asn或Ile，X6=Trp或Phe;輕鏈CDR2，其包含式X1-X2—X3(SEQIDNO:586)的氨基酸序列，其中X1=AlailVal，x2:Ala或Thr，X3=Ser;和輕鏈CDR3，其包含式X1—X2-X3—X4—X5—X6—X7—X8—X9(SEQII)NO:587)的氨基紗列，其中X1=Gin,X2=Gln，X3=Ala或Tyr，X4=Asn，X5=Ser，X6=Phe或His,X7=Pro,X8=lie或Trp，X9=Thr。6.權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含重鏈CDR3和輕鏈CDR3,其中重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361和377;輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域選自SEQIDNO:17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369和385。7.權(quán)利要求6所述的抗體或抗原結(jié)合片段，還包含重鏈CDR1結(jié)構(gòu)域，其選自SEQIDNO:5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、181、197、213、229、245、261、277、293、309、325、341、357和373;重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，其選自SEQIDNO:7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、183、199、215、231、247、263、279、295、311、327、343、359和375;輕鏈CDR1結(jié)構(gòu)域，其選自SEQIDNO:13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365和381;和輕鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，其選自SEQIDNO:15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367和383。8.權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含來(lái)自HCVR和LCVR序列的CDR，其中所述HCVR/LCVR序列選自51/59、579/59、581/59、259/267、275/283和291/299。9.分離的核酸分子，其編碼前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。10.包含權(quán)利要求9所述的核酸序列的載體。11.用于產(chǎn)生特異性結(jié)合IL-4受體的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段的宿主-載體系統(tǒng)，其在適當(dāng)宿主細(xì)胞中包含權(quán)利要求10所述的載體。12.權(quán)利要求11所述的宿主-載體系統(tǒng)，其中所述宿主細(xì)胞為選自大腸桿菌或CHO細(xì)力包之一的原核或真核細(xì)胞。13.產(chǎn)生抗IL-4R抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，包括在允許產(chǎn)生所述抗體或其片段的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求11或12所述的宿主-載體系統(tǒng)的細(xì)胞，并回收表達(dá)的抗體或片段。14.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段在生產(chǎn)藥物中的用途，所述藥物用于減輕或抑制人類(lèi)中IL-4介導(dǎo)的疾病或病癥。15.治療疾病或病癥的方法，其中通過(guò)施用;f又利要求1至9任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，通過(guò)消除、抑制或降低人白細(xì)胞介素-4(hlL-4)活性使所述疾病或病癥得到好轉(zhuǎn)、改善或抑制。16.4又利要求15所述的方法，其中所述疾病或病癥選自關(guān)節(jié)炎、皰滲樣病(herpetiformis)、慢性特發(fā)性蕁麻滲、硬皮病、肥大性瘢痕、惠普爾病、良性前列腺增生、肺病癥、炎性病癥、變態(tài)反應(yīng)、川崎氏病、鐮狀細(xì)胞病、丘-斯綜合征、格雷夫斯氏病、先兆子癇、干燥綜合征、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征、自身免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自身免疫性葡萄膜炎、肺結(jié)核和腎病。全文摘要本發(fā)明提供與人白細(xì)胞介素4受體α(hIL-4Rα)結(jié)合的分離的人抗體或其抗體片段，用表面等離振子共振測(cè)量的親和常數(shù)(K_D)小于200pM。文檔編號(hào)C07K16/28GK101522716SQ200780036872公開(kāi)日2009年9月2日申請(qǐng)日期2007年10月2日優(yōu)先權(quán)日2006年10月2日發(fā)明者A·拉菲克,D·M·阿倫茨,E·希,J·A·溫莎,J·H·馬丁,J·L·費(fèi)爾赫斯特,K·J·波博斯基,M·托里斯,N·J·帕帕多普洛斯,R·W·萊伊迪遲,S·史蒂文斯,T·T·黃,W·R·米庫(kù)爾卡申請(qǐng)人:瑞澤恩制藥公司