專利名稱：肽擬似化合物及生物活性衍生物的制備的制作方法
肽擬似化合物及生物活性衍生物的制備 本發(fā)明涉及具有氮雜雙環(huán)垸烴結構的新型環(huán)狀肽擬似化合物，以及整
聯(lián)蛋白av(53和av卩5拮抗劑的制備，其可用于例如治療改變的血管生成現(xiàn) 象。本發(fā)明還涉及所述環(huán)狀肽擬似化合物及其生物活性衍生物官能團的轉(zhuǎn) 化方法。
背景技術：
生物活性肽通過其與受體和酶的相互作用包括在許多生理過程中。然 而，由于代謝穩(wěn)定性差、排泄過快和對特定受體的選擇性低，肽類并不被 認為是理想的藥物。有效的變通方法包括設計能夠在受體水平模擬天然肽 的作用的肽類似物(肽擬似)[(a) Kahn, M.(編者).肽二級結構擬似 re,raAe^o" SympoWa./w-iV/W No. 50 1993, 49, 3433-3689 。 (b) Gante， J.
CAem., ￡>ig/. 1994， 33， 1699-1720。 (c) Olson， G, L.、 Bolin， D.
R,、 Bonner, M. P.、 B6s, M.、 Cook, C. M.、 Fry, D. C.、 Graves, B. J.、 Hatada, M.、 Hill, D.E.、 Kahn，M.、 Madison， V. S.、 Rusiecki， V. K.、 Sarabu, R.、 Sepinwall， J.、 Vincent， G. P.、 Voss, M. E. J. C/zew. 1993， 36, 3039-3049。 (d) Kitagawa, O.、 Velde, D. V.、 Dutta, D.、 Morton, M.、 Takusagawa, F、 AubS, J. Jm. CAem. 5bc. 1995， 117, 5169-5178。 (e) Giannis, A.、 Kolter, T. C7wm.; /W. Ec/.五"g/. 1993, 32， 1244。 (f) Aube，丄re/raAed廠o"
/"-iVWNo. 50, 2000, 56, 9725-9842]。
我們在肽二級結構擬似研究中已合成了特定的6,5-和7,5-氮雜雙環(huán)烷 烴氨基酸[(a) Colombo, L.、 Di Giacomo, M.、 Scolastico, C.、 Manzoni, L.、 Belvisi, L.、 Molteni, V. r"raAed簡丄欲1995, 36, 625; (b) Colombo, L.、 Di Giacomo, M.、 Belvisi， L.、 Manzoni, L、 Scolastico, C. G"zz. CTn'm. iY. 1996, 126, 543; (c) Colombo, L.、 Di Giacomo, M.、 Brusotti, G,、 Sardone, N.、 Angiolini， M. 、 Belvisi, L. 、 Maffioli， S. 、 Manzoni, L. 、 Scolastico, C.
7fe加W簡1998, 5《5325-5336; (d) Angiolini， M.、 Araneo， S.、 Belvisi, L.、 Cesarotti， E.、 Checchia，A.、 Crippa, L.、 Manzoni, L、 Scolastico, C. / Og. C/iew. 2000, 2571-2581; (e) Manzoni, L.、 Colombo, M.、 May, E.、 Scolastico, C. r"ra/^順2001, 57, 249; (f) Belvisi, L 、 Colombo, L.、 Colombo, M.、 Di Giacomo， M.、 Manzoni, L、 Vodopivec, B.、 Scolastico, C. T"ra/W簡2001, 57, 6463; (g) EP 1 077 218; (h) Colombo, L.、 Di Giacomo, M.、 Vinci, V.、 Colombo, M.、 Manzoni, L.、 Scolastico, C. JWra/ e(iraw， 2003, 59, 4501-4513; (i) Manzoni, L.、 Colombo, M.、 Scolastico, C. r"ra/ efl^ow
2004, 45, 2623-2625; (1) Belvisi, L. 、 Colombo, L. 、 Manzoni, L.、 Potenza, D.、 Scolastico, C. 2004, 1449-1471 。
這些結構可被認為是Ala-Pro和Phe-Pro 二肽單元的構象限制類似物 [(a) Belvisi, L.、 Bernardi，A.、 Manzoni， L.、 Potenza, D.、 Scolastico, C. Og. CTz價.2000, 2563-2569; (b) Gennari, C.、 Mielgo, A.、 Potenza, D.、 Scolastico, C.、 Piarulli, U.、 Manzoni, L. ￡wr. CAew. 1999, 379]。
這些具有雜烷基取代基的分子的功能化成為受關注的目標，因為側鏈
可通過與受體本身的疏水或親水位點相互作用而增強肽與受體的結合力。 這種體系的另一個優(yōu)點是其可能與不同的藥效(pharmac叩horic)基團結合， 由此可構建具有不同生物學性質(zhì)和活性的化合物庫。我們在肽二級結構擬 似研究中已合成了某些已被雜烷基附加基團功能化了的6,5-和7,5-氮雜雙環(huán) 烷烴氨基酸[(a) Artale， E.、 Banfi, G.、 Belvisi， L、 Colombo, L.、 Colombo, M.、 Manzoni， L.、 Scolastico, C. r"ra力^/ra"， 2003, 59， 6241-6250; (b) Bracci, A. 、 Manzoni, L. 、 Scolastico, C. Sy威a^'5 2003, 2363-2367; (c) Bravin, F. M. 、 Busnelli， G. 、 Colombo, M. 、 Gatti， F. 、 Manzoni, L. 、 Scolastico, C. 一Ae^， 2004， 353; (d) Manzoni, L.、 Belvisi, L.、 Colombo, M.、 Di Carlo, E. 、 Forni， A. 、 Scolastico, C. r"raW應丄饑2004，化6311 -6315]。
而且，與出現(xiàn)在未取代的構象限制的二肽擬似物中的情況類似[Bdvisi, L.、 Bernardi, A.、 Checchia, A.、 Manzoni， L.、 Potenza, D.、 Scolastico, C.、 Castorina， M.、 Cupelli， A.、 Giannini， G.、 Carminati, P.、 Pisano, C. Org. 2001， 3, 1001, C. Scolastico、 L. Manzoni、 G. Giannini. Brit.英國專利申請2004. GB 2395480]，這些雜垸基取代的內(nèi)酰胺可被結合到包含RGD序列的
環(huán)狀假肽(擬似肽)中。
這些分子可以選擇性地靶向到過度表達特定受體的那些組織(例如與血
管生長有關的上皮細胞)中，因此能夠用于抑制血管生成以及選擇性地控制 任意結合于內(nèi)酰胺環(huán)上的取代基的任何藥物的釋放[Arap, W.、 Pasqualini, R.、 Ruoslahti, E. 5W置e, 1998, 279, 377]。
文獻中報導的低原子數(shù)"骨架"使得有必要設計與合成新型構象限制的 二肽擬似物，用雜-取代的側鏈使其功能化以與各種受體相互作用。
發(fā)明描述
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)特定構象限制的氮雜雙環(huán)[X.Y.0]垸烴滿定這種技術應用的特 征要求。具體地說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有構象限制的高絲氨酸-脯氨酸二肽單元結 構可用作藥物，特別是具有對av(33和av卩5整聯(lián)蛋白的拮抗活性的藥物。
因此，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物、其鹽、 外消旋混合物、單一的對映體、單一的非對映體及其任何比例的混合物；
(I)
其中
n的值是1或2;
R,是H、 (d-C4)直鏈或支鏈烷基或保護基； R2是H或保護基；
X是N3、 -NH-R3、 -N(R3)2、 -NAlkR3、 -NH-C0-R3、 -NH-CS-R3、 -NH-CO-NHR3、 -NH-CS-NHR3或
<formula>formula see original document page 8</formula>
其中 Alk = (CrC4)直鏈或支鏈烷基
R3 = H、保護基、 一種生物活性分子。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明的目的是式(Ia)和(Ib)所示化合物
R一 R，HN
(la) (lb)
其中n、 R,、 112和X的定義如上，楔形和虛線鍵表示取代基分別位于平面 的上方與下方。
根據(jù)本發(fā)明，術語"(C,-C4)垸基"指含有1-4個碳原子的直鏈或支鏈、 飽和或不飽和的烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔 丁基。然而，如果適用于本發(fā)明的反應條件，也可使用含有更高碳原子數(shù) 的烷基取代基。
根據(jù)本發(fā)明，術語"保護基"指適用于保護其所結合的官能團的保護基 團，特別是氨基官能團或羧基官能團。合適的保護基包括例如芐基、芐氧 羰基、垸基或芐基酯，或者其他本領域技術人員熟知的通常用于這些官能 團的保護的取代基，例如常規(guī)手冊(例如T. W. Green，有機合成中的保護 基(Wiley, N.Y. 1981))中描述的那些。
本說明書中，"生物活性分子"是指可用作藥物或者"靶向"分子、診斷 用分子或者甚至糖等的任何分子。
所述生物活性分子可直接與式(I)化合物結合，或者通過容許或促進結 合的合適的間隔物與式(I)化合物結合，并且可任選地釋放到作用位點。
根據(jù)本發(fā)明，式(1)、 (Ia)和(Ib)化合物的鹽同時包括有利于本發(fā)明化 合物分離或結晶的與無機酸或有機酸的鹽，以及形成生理學或藥學上可接 受的鹽的那些，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硫酸二氫 鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、草酸鹽等。
根據(jù)本發(fā)明，式(1)、 (Ia)和(Ib)化合物的鹽還包括生理學或藥學上可 接受的季銨鹽。
所述鹽按照本領域技術人員熟知的技術加以制備。
當存在一個游離羧基(R2=H)時，本發(fā)明化合物的鹽還包含和有機堿或 者無機堿形成的鹽，例如堿金屬或堿土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽，或 者和胺例如氨丁三醇(氨基丁三醇)形成的鹽、或者精氨酸鹽、賴氨酸鹽或 其它任何生理學或藥學上可接受的胺的鹽。
根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明的目的是式(1)、 (Ia)和(Ib)的化合 物，其中n是L R，是芐氧羰基、R2是叔丁基、X是N3或NH2。
根據(jù)另一個優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明的目的是式(1)、 (Ia)和(Ib)的化 合物，其中n是2、 R,是芐氧羰基、R2是叔丁基、R3是N3或NH2。
本說明書詳細描述了這些化合物的合成方法，附圖
中報告的合成流程 作為參考。
根據(jù)本發(fā)明，式(1)、 (Ia)和(Ib)的化合物可按照下面描述的方法加以制備。
具體地說，通式(Ia) 6,5-反式-和(Ib) 6,5-順式-稠合的化合物可以按照流 程1概括的合成方法制備(其中n=l)，包括下列步驟
a) 氫化化合物1或化合物2的異噁唑垸，例如用MeOH中的H2、
Pd/C;
b) 用合適的保護基(例如Cbz、 Boc等)保護胺基團；
c) 通過Mitsunobu反應或其它任何已知方法(例如先轉(zhuǎn)化成甲磺酸 鹽，再用疊氮化鈉親核取代)將游離羥基基團轉(zhuǎn)化為疊氮化物，獲 得式6、 9的化合物；
d) 通過Staudinger反應或者氫化的方法還原疊氮基團為氨基基團，獲 得化合物7和10。
通式(Ia) 7,5-反式和(Ib) 7,5-順式稠合的化合物可以按照流程2概括的 合成方法進行制備(其中11=2)，包括下列步驟
a) 氫化化合物3或化合物4的異噁唑垸，例如用MeOH中的H2、
Pd/C;
b) 用合適的保護基(例如Cbz、 BOC等)保護胺基團；
c) 通過Mitsunobu反應或其它任何已知方法(先轉(zhuǎn)化成甲磺酸酯，再用
疊氮化鈉親核取代)將羥基基團轉(zhuǎn)化為疊氮化物，獲得式12、 15的化合物；
d)通過Staudinger反應或者氫化的方法還原疊氮基團為氨基基團，獲 得化合物13和16。
通過本領域技術人員所知的合適反應(click chemistry),可將所需要的
生物活性分子或生物上重要的化合物(例如糖)結合到引入疊氮基團后所得的 內(nèi)酰胺6、 9、 12和15上。
或者此外，衍生自內(nèi)酰胺7、 10、 13和16的酰胺或硫代酰胺基團(當 X = NH-CO-R3或NH-CS-R3時的化合物)可與合適的取代基或者已知的間隔 物相結合，例如按照本領域技術人員已知的方法和異氰酸酯或者異硫氰酸 酯反應獲得脲或硫脲(例如形成當X = -NH-CO-NHR3、 -NH-CS-NHR3時的 化合物)。
實施例參見本說明書的實驗部分。
三環(huán)起始化合物1-4 (n=l和n=2，附圖l)可按照流程A-起始產(chǎn)物的制 備中描述的方法制備。
本發(fā)明式(1)、 (Ia)和(Ib)的化合物可用作可能復制活性位點的肽殘基 的骨架和側鏈的構象的構象限制的骨架，并且可被用于制備生物活性化合 物。
將藥物或其他生物重要分子與這種系統(tǒng)結合的需求與其使具有官能團
的分子形成生物學穩(wěn)定的鍵的可能性相關，例如含有氮，可以例如氨基或 酰胺基團、疊氮或三唑的形式呈現(xiàn)。
流程6-9涉及糖、熒光素和生物素與通式(I)的化合物之間通過點擊化 學(click chemistry)結合的實施例。流程8涉及作為實施例用到的一個連接 子的制備。
為了達到這種目的，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)下文中報導的特定的通式(n)的新化
合物滿足這種類型技術應用的特征要求。具體地說，已發(fā)現(xiàn)具有通式(II)的 化合物可用作藥物，尤其是具有對ocv(33和ocv(35整聯(lián)蛋白的拮抗活性的藥 物，特別是上面提到的衍生自式(I)、 (Ia)和(Ib)的化合物轉(zhuǎn)化的那些化合 物，其中引入了肽序列RGD。
因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明的目的是式(II)的新化合物、其鹽、外
消旋混合物、單一的對映體、單一的非對映體及其任何比例的混合物-
<formula>formula see original document page 12</formula>
其中
n的值是l或2，
R4和Rs共同構成序列Asp-Gly-Arg，
X是N" -NH-R6、 -N(R6)2、 -NAlkR6、 -NH-C0-R6、 -NH-CS-R6、 -NH-CO-NHR6、 -NH-CS-NHRe或
<formula>formula see original document page 12</formula>其中
Alk=(C,-C4)直鏈或支鏈垸基
R6 = H、保護基、 一種生物活性化合物。
根據(jù)一個優(yōu)選的方面，本發(fā)明涉及式(IIa)和(IIb)的化合物
r5hS1 R5hn (Ha) (nb)
其中n、 FU、 Rs和X的定義如上，楔形和虛線鍵表明取代基分別位于平面 的上方與下方。
肽序列Asp-Gly-Arg可以羧基基團與氨基酸精氨酸結合、以及氨基基 團與天冬氨酸結合的方式有利地結合到化合物(11)、 (IIa)和(lib)上。
上面提供的關于式(I)的化合物的可變?nèi)〈?垸基等)及其鹽的詳細描 述也可用于式(II)、 (IIa)和(IIb)的化合物。
因此，正如關于式(I)的化合物所述，X可代表氨基殘基、酰胺殘基、 脲、硫脲，所述殘基可有利地被取代。
通過適應性改變上面描述的式(I)、 (Ia)和(Ib)的化合物可引入Asp-Gly-Arg鏈，其方法包含下列步驟
- 當112是保護基時，通式(I)化合物羧基基團的化學選擇性脫保 護反應以及與合適保護的Arg-Gly二肽縮合；
- 通過催化氫化的方法還原噁唑烷；
- 通過酯交換反應將甘氨酸甲酯轉(zhuǎn)化為芐酯，然后通過催化氫化 同時脫除甘氨酸的保護基和天冬氨酸的氨基基團；
- 縮合劑介導的分子內(nèi)環(huán)合，然后脫除氨基酸側鏈的保護基。 官能團保護和脫保護反應可按照已知的技術進行。 按照包含下列步驟(流程4-5)的方法，由此可獲得化合物(IIa)和
(IIb):
- 按照已知方法將化合物17、 18、 19、 20的羥基基團轉(zhuǎn)化為相應 的疊氮化物，例如通過Mitsunobu反應或先甲磺?；儆茂B氮化 鈉親核取代，獲得化合物21、 23、 25、 27;
- 然后通過催化氫化或者Staudinger反應的方法還原；
- 采用已知的反應通過偶聯(lián)反應的方式轉(zhuǎn)化為相應的酰胺；
- 通過已知反應的方式任選地結合生物重要分子；
- 然后脫除氨基酸側鏈保護基，獲得式22、 24、 26、 28的化合 物。
通過本領域技術人員所知的合適反應(click chemistry)可將引入疊氮基 團后所得的化合物21、 23、 25和27與所需的生物活性分子或生物重要化 合物(例如糖)結合。
或者甚至可在前面所制備化合物的胺基團上結合合適的取代基或己知 的間隔物，從而例如按照已知的方法和異氰酸酯或者異硫氰酸酯反應獲得 脲或硫脲(即，形成X = -NH-CO-NHR3、 -NH-CS-NHR3的化合物)。
實施例和這些反應的細節(jié)參見本說明書的實驗部分。
根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明的目的是以糖、熒光素、生物素和 脂肪側鏈功能化的式(11)、 (IIa)和(IIb)的化合物，其中n是1以及X是疊 氮化物、胺、戊?；０泛腿?。 根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，本發(fā)明的目的是以糖、熒光素、生物素和
脂肪側鏈功能化的式(n)、 (IIa)和(IIb)的化合物，其中n是2以及X是疊 氮化物、胺、戊?；０泛腿?。
官能團保護和脫保護反應可按照己知的技術進行，例如在本說明書的 實驗部分中描述的那些。
流程4和5報告了從通式(I)化合物開始制備戊酰基酰胺的流程。
流程4報告了 6,5-和7,5-順式化合物的制備。
流程5報告了 6,5-和7,5-反式化合物的制備。
流程10-12報告了從通式(I)化合物的疊氮化物開始制備功能化的三唑。
2003年10月30日提交的意大利專利申請N。 MI2003A 002102中提供
了不同化合物、甚至結構類似的化合物的這種制備的詳情，公眾在本申請 公開之日可獲得該申請說明書。
式(11)、 (IIa)和(lib)化合物具有令人感興趣的藥理學性質(zhì)，尤其是對 av卩3和av(35整聯(lián)蛋白的拮抗效果，并且顯示出令人感興趣的抗血管生成 活性。
因此，本發(fā)明的另一個目的是式(11)、 (IIa)和(lib)化合物在制備診斷 用尤其是可用于對av(53和av卩5整聯(lián)蛋白的拮抗活性的藥物和/或化合物上 的應用。
更具體地說，本發(fā)明涉及通式(n)、 (IIa)和(lib)化合物在制備用于治 療改變的血管生成現(xiàn)象及腫瘤轉(zhuǎn)移過程、視網(wǎng)膜病、急性腎損傷和骨質(zhì)疏 松癥中可能遇到的現(xiàn)象的藥物中的應用。
為了評估通式(n)、 (IIa)和(lib)化合物對avp3和av(35整聯(lián)蛋白的活
性的影響，采用已知方法進行了生物試驗，這些方法在文獻[C. C. Kumar、
H. Nie 、 C. P. Rogers 、 M. Malkowski 、 E. Maxwell 、 J. J. Catino 、 L
Armstrong, J.尸/z謹aco/. 1997, 283, 843]中也有描述，例如在專
禾寸申請EP 1 077218中報導的一種。
在這些測試中，本發(fā)明的某些代表性化合物已顯示出令人感興趣的生 物學和藥理學活性。
關于按照本發(fā)明的藥物用途，通式(n)、 (IIa)和(lib)化合物、其藥學 上可接受的鹽、外消旋混合物、單一的對映體、單一的非對映體及其任何 比例的混合物可按照本領域技術人員熟知的常規(guī)技術有利地配制成藥物組 合物。
因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及含有作為活性成分的至少一種通式 (11)、 (IIa)和(lib)化合物、其藥學上可接受的鹽、外消旋混合物、單一的 對映體、單一的非對映體及其任何比例的混合物，以及一種或多種可能的 藥學上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明的組合物可按照制藥領域技術人員熟知的常規(guī)技術進行制備。
為了獲得理想的預防或治療效果，活性成分的劑量可有利地以單位劑 量的形式給藥，每日一次或多次。顯然，日劑量由開藥物處方的保健專業(yè) 人員根據(jù)所弓I入的生物活性分子進行選定。
如同已提到的，式(11)、 (IIa)和(lib)化合物可以和各種藥物結合，例 如對腫瘤病理有活性的細胞毒類藥物，或者是用于診斷的合適的配體。
事實上，為增強蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-受體相互作用，本發(fā)明化合 物的功能化的側鏈(-X取代基)己被選定用作引入藥理學重要基團的位點。因此，例如在式(n)、 (IIa)禾Q (lib)化合物中，可采用X所含的氮殘基 使與藥物或診斷用化合物的結合易于進行。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及式(11)、 (IIa)和(lib)化合物作為藥物傳送 和釋放介質(zhì)的應用。
因此，結合于式(11)、 (IIa)或(lib)化合物的藥物可被傳送到理想的作 用位點以實現(xiàn)其藥理學活性。
將上述式(11)、 (IIa)或(lib)化合物與細胞毒素和抗腫瘤藥物結合，構 成本發(fā)明的一個有利方面。
現(xiàn)將本發(fā)明以實施例的方式從實驗角度進行描述，但這些實施例是純 粹說明性的，無限制性。
實驗部分
一般測試如標示的那樣，在CDC13中、于200 (或300, 400)和50.3(或75.4, 100.6) MHz分別記錄！H-和^C-NMR譜圖?；瘜W位移值以ppm表 示，偶合常數(shù)以Hz表示。-旋光強度采用Perkin-Elmer 241型號旋光儀進 行測定。-薄層色譜法(TLC)采用Merck F-254板進行。快速色譜法采用 Macherey-Nagel 60， 230-400目硅膠進行。溶劑的無水化按照標準方法進 行，要求無水條件的反應在氮氣或氬氣氛圍下進行。含有終產(chǎn)品的溶液用 Na2SO4干燥，過濾后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮。
采用Briiker Avance-400儀器，在標示溶劑中于400 MHz和100.6 MHz 分別記錄！H-和13C-NMR譜圖?；瘜W位移值和偶合常數(shù)分別以ppm和Hz 表示。旋光強度采用Perkin-Elmer 241型號旋光儀測定。薄層色譜法(TLC) 采用Merck F-254板進行?？焖偕V法采用Macherey-Nagel 60， 230-400目 硅膠進行。溶劑的無水化按照標準方法進行，要求無水條件的反應在氬氣 氛圍下進行。FAB+光譜法采用VG 7070 EQ-HF分光光度計進行。ESI+質(zhì)光 譜法采用Bruker Esquire 3000+分光光度計進行。
得自1,3二極環(huán)化的化合物的功能化(流程1、流程2、流程7和流程9)
實施例1:游離氨基基團的保護
在室溫及氬氣氛圍下，將TEA (184 pi, 1.33 mmol)、 Cbz-Cl (95 pl， 0.61 mmol)和最終的DMAP (15 mg， 0.126 mmol)依次加入到產(chǎn)品5或14 (0.51 mmol)的無水DCM (5 ml)溶液中。持續(xù)攪拌溶液約18小時。然后加入 DCM (5 ml)并用NH4C1 (2 x 5ml)洗滌。有機相用Na2S04干燥，濃縮至 干，所得粗產(chǎn)品經(jīng)快速色譜法(AcOEt/ETP 7:3— 8:2)純化后獲得所需的產(chǎn) 品，呈白色泡沫(60%-78%)。
化合物5-Cbz
產(chǎn)率78%。 [a]D22 = -13.7 (c = 1.0, CHCl3)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 5 1.48 (s, 9H, C(Cf/3)3)， 1.6 (m, 1H, //-5), 1.7 (m, 1H, //-7), 2.06 (m, 1H //-8), 2.2 (m， 1H, //-8), 2.23 (m， 1H, //-7)， 2.3 (m, 1H, //-5), 2.75 (m, 1H, //-4), 2.92 (bs， 1H, 0//)， 3.6 (dd， 1H,沉HOH), 3.71 (m, 1H,沉HOH), 3.72 (m, 1H, H-6), 4.38 (t， 1H, //-3)， 4.48 (d, 1H,朋),5.15 (dd, 2H, C//2Ph), 6.0 (d, 1H，
Ni/Cbz)， 7.28-7.42 (m, 5H,芳族質(zhì)子)。13C NMR (100.6 MHz, CDC13): S 171.7, 168.1, 156.7, 136.4, 128.5, 128.8, 127.9， 82.4, 66.9, 63.5, 58.9, 55.7, 52.1, 37.9, 32.5, 32.0, 31.6, 29.7, 29.2， 27.9. MS [FAB+]: 419.3 [M+l]+。元素分析計 算值C22H3oN206: C 63.14， H 7.23, N 6.69;實測值C 62.16, H 7.25, N 6.67。
化合物14-Cbz
產(chǎn)率60%。 [a]D22 = -25.5 (c = 1.0, CHCl3)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 5 1.48 (s, 9H, C(C/73)3), 1.51 (m, 1H, 1.53 (m, 1H, //-4), 1.75 (m, 1H， //-5), 1.83 (m, IH, if-6), 1.98 (m, 1H, //-9), 2.0 (m, 1H, //-5), 2.2 (m， 1H, //-9), 2.25 (m, 1H， T/-8), 2.33 (m， 1H， Z/-8), 3.4 (t, 1H, //CHOH), 3.72 (d， 1H, O//), 3,82 (d, 1H, //CHOH), 4.03 (t, 1H, 4.42 (dd, 1H, F-3)， 4.5 (d, 1H, //-10)， 5.15 (dd， 2H, Ci/2Ph), 6.48 (d, 1H， NZ/Cbz), 7.31-7.43 (m， 5H,芳族質(zhì)子)。3C 畫R (跳6 MHz, CDC13): S 170.5, 170.3, 158.0, 136.0， 128.6， 128.2, 128.1， 81.6， 67.5, 64.5， 61.0， 58.7, 55.5, 42.5， 33.9， 32.1, 30.9， 29.7, 29.3， 28.0， 27.2。 MS [ESI+]: 433.3 [M+H]+ 455.3 [M+Na]+。元素分析計算值C23H32N206: C 63.87, H 7.46, N 6,48 ;實測值C 63.85， H 7.47, N 6.47。
實施例2:疊氮化衍生物的合成
在室溫及氬氣氛圍下，將MsCl (846 pl， 0.59 mmol)和TEA (165 pi, 1.18 mmol)依次加入到產(chǎn)品5-Cbz或14-Cbz (0.29 mmol)的無水DCM (4 ml)溶
液中。持續(xù)攪拌溶液約45分鐘。然后加入DCM并用NH4C1洗滌。有機相 用Na2S04干燥，濃縮至干，所得粗產(chǎn)品溶解于DMF(3.2ml)中。在室溫及 氬氣氛圍下，加入NaN3 (154 mg， 2.37 mmol)。于80。C持續(xù)攪拌下反應約 18小時。然后蒸發(fā)DMF至干，粗產(chǎn)品溶解于CH2Cl2中并用1120洗滌。有 機相用Na2S04干燥，濃縮至干，所得粗產(chǎn)品經(jīng)快速色譜法(AcOEt/ETP 7:3) 純化后獲得所需產(chǎn)品，呈白色泡沫(76%-90%)。
化合物6
產(chǎn)率76%。 [a]D22 = +19.0 (c = 1.0， CHCI3). ^-麗R (400 MHz,
CDC13): 5 1.48 (s, 9H, C(C//3)3), 1.61 (m, 1H, H隱5), 1.72 (m, 1H， //-7), 2.08 (m, 1H, H-8), 2.14 (m, 1H, H-8), 2.24 (m, 1H, T/-7), 2.31 (m, 1H， i/-5), 2.9 (m, 1H， //-4), 3.28 (dd, 1H， J= Hz, 7/CHN3), 3.48 (dd, 1H， /fCHN3), 3.7 (m, 1H, //-6)， 4.31 (t， 1H， //-3), 4.39 (d, IH, i/-9)， 5.15 (s， 2H, C//2Ph), 6.0 (bs, 1H,冊Cbz)， 7.28-7.42 (m, 5H,芳族質(zhì)子)。。C NMR (100.6 MHz, CDC13): 5 170.4, 166.7, 156.1, 136.3, 128.5, 128.1, 127.9, 81.9, 67.0, 59.0, 55.3, 55.8, 52.6, 35.4, 32.3, 31.8， 29.2, 28.0. MS [ESI+]: 444.3 [M+H]+。元素分析計算值C22H29N505: C 59.58, H 6.59, N 15.79;實測值C 59.57, H 6.58, N 15.81 。
化合物15
產(chǎn)率90%。 [a]D22 = -13.8 (c = 1.0， CHCI3). 'H-NMR (400 MHz， CDC13): 5 1.48 (s, 9H， C(C//3)3), 1.5 (m, 1H， 1.68 (m， IH, i/-4), 1.70 (m， IH, H-6)， 1.72 (m, IH, H8), 1.82 (m, 1H， T/-5), 1.98 (m, IH,朋),2.13 (m, IH,
2.21 (m, IH, //-9), 2.34 (m， IH, //-8), 3.26 (dd， IH, J= 18.9 Hz, J= 12.1 Hz: //CHN3), 3.65 (dd, IH, //CHN3), 4.09 (t, 1H， J= 9.0 Hz, //-7)， 4.42 (dd, IH, 4.46 (dd, 1H， J= 8.7 Hz, J= 2.0 Hz， //-10), 5.12 (dd, 2H, J= 15.7 Hz, J= 12.2 Hz， C//2Ph), 6.08 (d， IH, J= 7.18 Hz,麗Cbz), 7.3-7.42 (m， 5H,芳族質(zhì)子)。 NMR (100.6 MHz， CDC13): 5 170.5， 169.7, 156.6, 136.3, 128.5, 128,1， 81.6, 67丄 60.9， 58.3， 55.9, 53.7, 40.9， 33.3, 31.9, 31.5， 28.0, 27.2。 MS [ESI+]: 448.2 [M+H]+, 480.2 [M+Na]+。元素分析計算值C23H31N505: C 60.38, H 6.83， N 15.31;實測值C 60.36, H 6.84, N 15.32。
實施例3:疊氮化物衍生物的還原
在室溫及氬氣氛圍下，將1M Me3P的甲苯(51 pi, 0.051 mmol)溶液加 入到產(chǎn)品6或15 (0.034 mmol)的無水DCM (350 溶液中。約2小時后， 在反應完全的基礎上，加入DCM (1 ml)和H20 (1 ml)，混合物攪拌約10分
鐘。然后分離兩相。有機相用N32S04干燥，蒸發(fā)至干。
化合物7產(chǎn)率93%。 [a]D22 = -13.9 (c = 1.0, CHCl3)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 5 1.47 (s, 9H, C(Ci/3)3), 1.55 (m, 1H, i/-5), 1.72 (m, 1H, i/-7), 2.07 (m， 1H, 2.16 (m, 1H, 2.21 (m, 1H, //-7), 2.30 (m, 1H, //-5)， 2.68 (m， 1H, //-4)， 2.72-2.97 (m, 2H, Ci/2NH2), 3.73 (m, 1H， //-6), 4.31 (t, 1H, //-3), 4.41 (d, 1H, 5.15 (s， 2H, Cf/2Ph), 6.4 (d， 1H, N//Cbz), 7.23-7.42 (m, 5H,芳族質(zhì) 子)。腹R (100.6 MHz, CDCI3): 5 170.8, 168.1, 156.4, 136.6, 128.5, 128.0， 127.9, 81.8, 67.8, 58.9, 55.6, 53.0, 32.5, 32.0, 29.7, 29.3, 28.0。 MS [ESI+]:
418.4 [M+H]+。元素分析計算值C22H3iN305: C 63.29, H 7.48, N 10.06;實 測值C 63.27, H 7.47， N 10.08。
化合物16
產(chǎn)率76%。 [a]D22 = -14.5 (c = 1.0, CHC13)。 'H-薩R (400 MHz, CDC13): 5 1.45 (s, 9H， C(C//3)3), 1.5 (m, 1H, /f-5), 1.53 (m, 1H, if-4), 1.65 (m, 1H, 7/-6)， 1.72 (m, 1H, H8), 1.81 (m, 1H， i/-5), 1.98 (m, 1H, T/-9), 2.14 (m,H， i/-6)， 2.21 (m, 1H， i/-9), 2.33 (m, 1H, //-8), 2.83 (bs， 2H, Cf/2NH2), 4.08 (t, 1H， J= 9.0 Hz, Tf-7), 4.41 (m, 1H, //-3)， 4.47 (d, 1H, J= 8.5 Hz, //-10), 5.13 (dd, 2H， J= 15.7 Hz, J= 12,2 Hz, Ci/2Ph), 6,16 (d, 1H, J= 7.0 Hz, NHCbz), 7.28-7.42 (m， 5H，芳族質(zhì)子)。13C NMR (100.6 MHz， CDC13): 5 170.6， 156.8, 136.2， 128,5， 128.0, 81.5, 67.0, 60.8, 58,3， 56.3, 44.4, 33.7, 32.0, 31.3, 28.0, 27.2。 MS [ESI+]:
432.5 [M+H]+。元素分析計算值C23H33N305: C 64.02, H 7.71, N 9.74;實測 值C 64.04, H 7.72, N 9.73。
實施例4:通過"點擊反應"結合
抗壞血酸鈉溶液0.9 M (44 0.04 mmol, 0.4 mol eq)和Cu(OAc)2 0.3 M (67 pi, 0.02 mmol, 0.2 mol eq)溶液分別加入到疊氮化物6或15 (0.1 mmol) 與合適的炔基(alkinyl)衍生物(0.1 mmol)于H20/t-BuOH 1:1 (500 pi)的溶液
中。反應混合物于室溫下攪拌約18小時。反應完全后，用CH2Cl2(2mLx 3)提取化合物31或33，有機相用NaHC03飽和溶液(5 mL x l)和鹽水(5 mLxl)洗滌。有機相經(jīng)Na2S04干燥后減壓蒸發(fā)。至于化合物32、 34、 42-45，反應結束后減壓蒸發(fā)溶劑。粗產(chǎn)品用硅膠快速色譜法純化。
化合物31
柱洗脫劑EtOAc/ETP9:l
產(chǎn)率80%。 [oc]d22 = - 9.2 (c = 1.0, CHCl3)。丄H NMR (400 MHz, CDCI3): S 1.45 (m, 1H, //-5), 1.48 (s， 9H, C(C//3)3), 1.66 (m, 1H, //-7)， 1.96 (s, 3H, OC//3), 1.98 (s, 3H, OC//3), 2.01 (s, 3H, OC//3), 2.08 (s, 3H， OC//3), 2.13 (m, 1H, //-8), 2.15-2.22 (m, 2H, //-8, //-5), 2.23 (m, 1H， //-7), 2.29 (m, 1H， //-4): 3.6-3.73 (m, 2H， T/-6, //-5 Glc)， 4.06 (dd, 1H, J = 2.0 Hz, J = 12.0 Hz, //-6 Glc)， 4.20 (dd, 1H, J = 4.4 Hz, J = 12.0 Hz， i/-6 Glc)， 4.27 (m, 1H, 7f-3), 4.35 (m, 1H， i/_9), 4.43 (dd, 1H, J = 4.4 Hz, J = 13.7 Hz， //-CH-N), 4.60 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Glc), 4.47 (d， 1H， J = 12.4 Hz, //-CH-0), 4.84 (d, 1H, J = 12.4 Hz, //-CH-0): 4.93 (m, 1H, 2 Glc)， 5.01 (m， 1H, Glc), 5.02-5.15 (m， 3H, 77-3 Glc, C//2Ph)， 6.0 (m, 1H,麗Cbz)， 7.22-7.33 (m, 5H，芳族質(zhì)子)，7.48 (s， 1H， //三 唑)。13c NMR (100.6 MHz, CDC13): 5 170.7, 170.4, 169.4, 169.3, 166.5, 156.0, 143.7, 136.2, 128.6， 128.2， 128.1, 124.1, 99.6, 82.3, 72.8， 71.9, 68.4， 67.1, 62.7, 61.9， 58.8, 55.0， 53.0, 51.1， 36.8, 32.5， 30.3, 29.1, 28.0, 20.8, 20.6。 MS [ESI+]: 計算值C39H51N5015: 829.34;實測值852.4 [M+Na]+。元素分析計算值 C39H51N50i5: C 56.45, H 6.19, N 8.44;實測值C 56.46， H 6.20， N 8.56。
化合物33
柱洗脫劑EtOAc/ETP9:l
產(chǎn)率84%。 [a]D22 = -46.9 (c = 1.0, CHCl3)。 & NMR (400 MHz, CDCI3): S 1.39 (m, 1H, i/-6), 1.45 (s， 9H, C(C//3)3), 1.65 (m, 1H, //陽8), 1.69 (m, 1H, //-6), 1.95 (m, 1H, i/-9), 1.99 (s， 3H， OC//3)， 2.00 (s, 3H， OCf/3), 2.03 (s, 3H: OC//3), 2.09 (s， 3H, OC//3),2.12-2.25 (m, 2H， H4, H-9), 2.31 (m, 1H, //-8), 3.64 (m， 1H， //-5 Gc)， 4.07 (m，H, J7-7), 4.16 (dd， 1H， J = 2.0 Hz, J = 9.6 Hz， //-6 Glc), 4.27 (dd, 1H, J = 4.8 Hz， J = 12.4 Hz， Glc), 4.31 (m, 1H, //-CH-N), 4.46 (dd， 1H， J= 8.8 Hz, J= 2.0 Hz, //-10), 4.51 (m, 1H， i/-3)， 4.64-4.72 (m， 2H，
樂l Glc, //-CH-N), 4.79 (d, 1H, J = 12.4 Hz, /f-CH-O), 4.92 (d, 1H, J = 12.4 Hz, //-CH-O), 5.01 (dd， 1H, J - 0Hz, J = 8 Hz, T/-2 Glc), 5.07-5.16 (m, 3H, //-4 Glc, C//2Ph), 5.20 (t， 1H, J = 9 Hz， i/-3 Glc)， 6,17 (m， 1H， N/fCbz)， 7.20-7.31 (m, 5H 芳族質(zhì)子)，7.40 (s, 1H, 三唑)。13c菌R (100.6 MHz， CDC13): 5 170.6, 170.4, 170,2， 169.4, 169,3, 169.1, 168.4, 156.9, 144.0, 136.1， 128.6, 128.2, 128,1: 123.7， 99.9， 81.7， 72.8， 71.9, 71.2， 70.7, 68.4， 673, 62.9, 61.9, 60.9, 60.4, 58.2, 56.1， 53.4, 52.0, 41.5, 32.9, 31.9, 30.8, 29.7, 28.0, 27.1， 20.7, 20.6。 MS [ESI+]: 計算值C40H53N5O15: 843.35;實測值866.2 [M+Na]+。元素分析計算值 C4oH53N5Oi5: C 56.93, H 6.33, N 8.30;實測值C 56.95, H 6.34, N 8.32。
化合物32
柱洗脫劑CHCl3/MeOH9:l
產(chǎn)率74%。 [a]D22 = -10.8 (c = 1.0, CHCl3)。 ！H NMR (400 MHz, CD3OD): S 1.49 (s, 9H, C(Cif3)3), 1.53 (m， 1H, //-5), 1.66 (m, 1H, /f-7), 1.98 (s, 1H, //陽5), 2,01 (m, 1H， //-8), 2.13 (m, 1H, //-7), 2.18 (m, 2H, 7/-8)， 2.98 (m, 1H, //-4), 3.22 (t, 1H, J = 8.0 Hz, //-2 Glc), 3.25-3.33 (m， 2H, //-4 Glc, //-5 Glc), 3.35 (m, 1H, //-3 Glc), 3.66-3.74 (m, 2H， //-6，樂6 Glc), 3.89 (dd， 1H, J = 0 Hz, J = 12.0 Hz， i/-6 Glc), 4.28-4.42 (m, 3H, //-9, if-CH扁N, Glc), 4.50-4.57 (m, 2H, //-3, //-CH-N)， 4-77(d, 1H, J = 12.4 Hz, Tf-CH-O)， 4.95 (d, 1H, J = 12.4 Hz， //-CH-O), 5.13 (s, 2H, C迅Ph)， 7.27-7.42 (m, 5H，芳族質(zhì)子)，7.98 (s, 1H， //三 唑)。13c NMR (100.6 MHz, CD3OD): 5 174.4, 167.4， 157.1, 144.4, 136.7, 128.1, 127.7, 127.6, 124.6, 102.2, 81.9, 76.7, 76.6, 73.7, 70.3， 66.7， 61.6, 61.4, 59.0, 57,5, 51.7， 50.9, 38.2, 31.3, 28.9, 28.0, 26.8 。 MS [ESI+]: i十算^直 C3lH43N50ii:661.30;實測值684.3 [M+Na]+ 。 元素分析計算值 C3lH43N50ii: C 56.27, H 6.55， N 10.58;實測值C 56.26, H 6.56， N 10.59。
化合物34
柱洗脫劑CHCl3/MeOH9:l
產(chǎn)率72%。 [a]D22 = -49.2 (c = 1.0, CHCl3)。丄H NMR (400 MHz,
CD3OD): S 1.43 (m, 1H, //-6), 1.44 (s, 9H， C(C//3)3), 1.58 (m, 2H, 2 //-5), 1.75 (m, 1H, /f-8), 1.80 (m, 1H, if-6), 1.93 (m, 1H, /f-9), 2.18-2.34 (m, 4H, H4, /f-8， //-9)， 3.21 (dd， 1H， J - 0Hz， J = 7.8 Hz, i/陽2 Glc), 3.27-3.33 (m， 2H, //-4 Glc, //-5 Glc), 3.35 (m， 1H, //-3 Glc) 3.68 (dd, 1H, J = 5.1 Hz, J = 11.9 Hz, //-6 Glc), 3.90 (dd， 1H， J = 0 Hz， J = 11.9 Hz, //-6 Glc), 4.16 (m, 1H， //-7), 4.36 (m， 1H， //-CH-N)， 4.37 (m, 1H, Glc)， 4.40 (dd, 1H, Zf-lO), 4.56 (m, 1H, //陽3)， 4.63 (dd， 2H, J = 4.3 Hz, J = 13.7 Hz， iZ-CH-N)， 4.76 (d, 1H， J = 12.6 Hz, //-CH-0), 4.95 (d, 1H, J = 12.5 Hz, iZ-CH墨O)， 5.13 (s, 2H, Ci/2Ph)， 7.24-7.42 (m, 5H，芳族 質(zhì)子)，7.95 (s, 1H, F三唑)。13C NMR (100.6 MHz, CD3OD): S171.2, 170.0, 157.2, 144.5, 136.7, 128.1, 127.7, 127.6, 124,5, 102.3, 81.5， 76.7, 76.6, 73.6, 70.2， 66.6, 61.6, 61.4, 61.0, 57.8, 56.0, 51.6, 39.8, 31.5, 31.1, 29.1, 26.8, 26.6。 MS [ESI+]:計算值C32H45N5011: 675.31,實測值676.2 [M+H]+, 698.3 [M+Na]+。元素分析計算值C32H45N5011:C 56.88, H 6.71, N 10.36;實測值 C 56.86 H 6.70, N 10.35。
化合物42
柱洗脫劑CHCl3/MeOH9:l
產(chǎn)率80%。 [a]D22 = - 4.1 (c = 1.0, MeOH)。 1h NMR (400 MHz, CD3OD): 5 1.28 (m, 2H, C巧生物素)，1.31 (s, 9H， C(Cf/3)3)， 1.39 (m, 1H,樂5), 1.42 (m, 1H, //CH生物素)，1.43-1.52 (m, 3H, if-7， C迅生物素)，1.53-1.67 (m, 5H, 2 NCH2C//2CH20連接子，//CH生物素)，1.78-1.87 (m， 2H， //-5， 1.92-2.07 (m, 4H, //-8, C//2生物素)，2.56 (d, 1H, J = 12.8 Hz, S//CH生物 素)，2.76 (dd, 1H, J = 12.8 Hz, J = 4.8 Hz, S/fCH生物素)，2.82 (m, IH, //-4), 3.05 (m, IH, S#C-生物素)，3.10 (m, 2H, C//2N連接子)，3.18 (m， 2H, C//2N連 接子)，3.33-3.45 (m, 4H, C//20連接子)，3.40-3.45 (m， 4H， C恥連接子), 3.45-3.505 (m, 4H, C//20連接子)，3.53 (m, IH, i/-6), 3.98 (s， 2H, COC /20連 接子)，3.94 (s， 2H, COCi/20連接子)，4.12-4.18 (m， 2H， NC//生物素，朋), 4.22 (m, 1H， H-CH-N), 4.30-4.41 (m, 5H， //-CH-N, NC//生物素，
NC//2C=), 4.95 (s， 2H, C//2Ph), 7.10-7.27 (m, 5H,芳族質(zhì)子)，7.74 (s， IH, if三 唑)。NMR (100.6 MHz, CD3OD): 5 174.4, 174.3， 170.2, 170.0, 167.2， 164.6, 157.0， 136.6， 128.0, 127.6, 127.4, 81.4, 70.1， 70.0, 69.7, 68.7, 68.5, 66.5, 61.9， 60.1, 58.9, 57.4, 55.6， 51.5, 50.8, 39.6, 38.1， 36.3, 36.2， 35.4, 33.8, 31.3， 29.3, 29.0, 28.9, 28.8, 28.3, 28.0, 27.9, 26.8， 25.4 。 MS [ESI+]: C49H74N10O13S: 1042.52;實測值1043.7 [M+H]+, 1065.7 [M+Na]+。元素 分析計算值C49H74N10Oi3S: C 56.41, H 7.15, N 13.43;實測值C 56.43, H 7.14, N 13.45。
化合物44
柱洗脫劑CHCl3/MeOH9:l
產(chǎn)率50%。 [ot]D22 = -3.83 (c = 1.0， MeOH)。 NMR (400 MHz， CD3OD): 5 1.21-1.34 (m， 12H, Ci/2生物素，i/-6, C(C//3)3), 1.36-1.52 (m, 5H, 2
//CH生物素，C7/2生物素)，1.53-1.79 (m, 7H, HCH生物素#-6， //-8, 2 NCH2C//2CH20連接子)，1,77 (m, 1H, //-9), 1.99-2.18 (m, 5H, //-4， Ci/2生物 素//-8,別)，2.55 (d, 1H, J = 12.8 Hz, S/fCH生物素)，2.77 (dd, 1H， J = 12.8 Hz， J = 4.8 Hz, S//CH生物素)，3.05 (m, 1H, 生物素)，3.10 (m, 2H, C//2N 連接子)，3.18 (m, 2H, C//2N連接子)，3.32-3.40 (m, 4H, C//20連接子)，3.40-3.45 (m， 4H， C/f20連接子)，3.45-3.50 (m, 4H, C//20連接子)，3.89 (s, 2H, COC砂連接子)，3.94 (s, 2H, COC樂O連接子)，3.99 (m， 1H， //-7), 4.14 (m, 1H, NC//生物素)，4.18 (m, 1H, if-CH-N)， 4,23 (m， 1H, //-10), 4.30-4.37 (m, 3H, NC/f生物素，NCH2C=), 4.39 (m， 1H, i/-3), 4.45 (m, 1, //-CH-N), 4.97 (s, 2H, C//2Ph), 7.10-7.27 (m, 5H,芳族質(zhì)子)，7.75 (s， 1H, i/三唑)。NMR (100.6 MHz, CD3OD): 5 174.4, 171.1， 170.2, 170.0, 169.9, 164.6, 157.0, 136.6, 128.0, 127.6, 127.5, 81,4, 70.0, 69.7, 68.5, 68.4, 66.5, 61.9, 60.9, 60.1， 57.7, 55.8: 55,5, 51.6, 39.6, 39.5, 36.3， 36.2, 35.4, 33.8, 31.5, 31.4, 31.0, 29.2， 29.0, 28.9, 28.3, 28.0, 26,7， 26.5, 25.4。 MS [ESI+]:計算值C5oH76N10013S: 1056.53,實 測值1057.8 [M+H]+。元素分析計算值C50H76N10O13S: C 56.80, H 7.25, N 13.25;實測值C 55.81, H 6.24, N 13.24。
化合物43 (異構體混合物)
柱洗脫劑CHCl3/MeOH 8:2— CHCl3/MeOH/H20 60:35:5 產(chǎn)率91%。 iH NMR (400 MHz, CD3OD): 5 1.46 (s, 9H， C(C//3)3), 1.52 (m, 1H, //-5), 1.64 (m, 1H， i/-7)， 1.74 (m, 2H， NCH2C//2CH20), 1.82 (m, 1H, //-5), 1.87-2.04 (m, 3H, NCH2C^2CH20, //-8)， 2.12 (m, 1H, //-7), 2.18 (m， 1H, 7/-8)， 2.93 (m, 1H, 3.32 (m, 2H, Ci/2N連接子)，3.45-3.58 (m， 6H, C朋連 接子，C砂連接子)，3.59-3.70-3.45 (m， 9H, C//20連接子，//-6), 4.03 (s, 2H, COC砂連接子)，4.09 (s, 2H, COC砂連接子),4.29 (m， 2H, Z/-9), 4.35 (m, 1H, Zf-CH-N)， 4.41-4.55 (m， 4H, //-3, Zf-CH-N， NO/2C=), 5.11 (s, 2H, 0/2Ph), 6.63-6.62 (m, 2H,芳族質(zhì)子熒光素)，6.66-6.S0 (m， 4H,芳族質(zhì)子，熒光素), 7.26-7.42 (m, 5H,芳族質(zhì)子Ph), 7.83 (s, 1H， i/三唑)，8.05-8.18 (m， 2H,芳族 質(zhì)子，熒光素)，8.45 (m, 1H，芳族質(zhì)子，熒光素)。13C NMR (100.6 MHz, CD3OD): 5 172.8, 171.5, 168.8, 130.8, 129.5, 129.1, 128.9, 103.7, 83.3, 71.5, 71.4, 71.3, 71.2， 70.3, 70.0, 68.0, 60.4, 59.0, 52.9, 52.2, 39,6, 39.0， 37.6, 35.2, 32.7, 30.4， 30.2, 29.4。 MS [ESI+]:計算值C60H70N8O17: 1175.49;實測值 1176.5 [M+H]+。元素分析計算值C60H70N8O17: C 61.32, H 6.00， N 9.53;實 測值C 61.33, H 6.01， N 9.55。
化合物45
柱洗脫劑CHCl3/MeOH 8:2— CHCl3/MeOH/H20 60:35:5 產(chǎn)率92%。 lH NMR (400 MHz, CD3OD): 5 1.37 (m, 1H， //-6)， 1.43 (m, 9H， C(Ci/3)3)， 1.54 (m， 2H, 2 //-5), 1.64-1.84 (m, 5H, if-6, //-8, NCH2Cif2CH20 連接子)，1.86-1.98 (m, 2H, //-9, NCH2HCf/CH20), 2.14-2.30 (m, 3H, //-8, /f-9)， 3.30 (m， 2H, Cif2N連接子)，3.43 (m, 2H, Ci/2N連接子)，3.45-3.57 (m, 4H， CH20連接子)，3.58-3.70 (m, 8H, C//20連接子)，4,03 (s, 2H， COC//20連 接子)，4.08 (s, 2H, COCi/20連接子)，4.11 (m, 1H, //陽7), 4.32 (m, 1H， //-CH-N) 4,39 (m, IH, Z/-10), 4.47 (s， 2H, NCif20), 4.53 (m， 1H, //-3), 4.58 (m, 1, CH-N), 5.11 (s, 2H， Ci/2Ph)， 6.52-6.60 (m， 2H,芳族質(zhì)子，熒光素)，6.66-6.76 (m， 4H,芳族質(zhì)子，熒光素)，7.22-7.41 (m, 5H,芳族質(zhì)子Ph)， 7.81 (s, IH, 三
唑)，8.05-8.20 (m, 2H，芳族質(zhì)子，熒光素)，8.44 (m, 1H,芳族質(zhì)子，熒光素)。
NMR HETCOR (400 MHz, CD3OD): S 132.9, 129.3, 128.7, 127.8， 127.6， 127.5， 125.8, 125.3, 124.3, 123.5, 113.9, 102.3, 69.9, 69.6， 69.4, 68.9, 68.4， 66,5, 60.8, 57.6, 55.9, 51.5， 39.6, 37.65, 36.2, 33.8， 31.5, 31.4, 31.0, 29.0, 28.9, 26.7， 26.6。 MS [ESI+]:計算值C61H72N80n: 1189.5;實測值1190.2 [M+H]+， 1212.2 [M+Na]+。元素分析計算值C6lH72N8017: C 61.61, H 6,10, N 9.42; 實測值C 61.60, H 6.11, N 9.43。
含有RGD序列的環(huán)五肽酰胺的制備(流程4、流程5、流程11和流程12) 實施例h疊氮化物衍生物的合成
在室溫及氬氣氛圍下，將MsCl (8.5 nl, 0.11 mmol)和TEA (30 (il， 0.22 mmol)依次加入到產(chǎn)品17-20 (0.055 mmol)的無水DCM (700 pl)溶液中。 持續(xù)攪拌溶液約30分鐘。然后蒸發(fā)溶劑至干，用硅膠(CH2CVMeOH9:l)過 濾粗產(chǎn)品。所得粗產(chǎn)品溶解于DMF (550 中，于室溫及氬氣氛圍下，加 入NaN3 (36 mg, 0.55 mmol)。在8(TC持續(xù)攪拌下反應約18小時，然后蒸發(fā) DMF至干。粗產(chǎn)品溶解于CH2Cl2中并用1120洗滌。有機相用Na2S04脫 水，蒸發(fā)至干，所得粗產(chǎn)品經(jīng)快速色譜法(CH2Cl2/iPrOH 9:1 — 8:2)純化后 獲得所需的產(chǎn)品，呈白色泡沫(30%-75%)。
化合物21
產(chǎn)率62%(白色固體)。[oc]d22 = -6.3 (c = 1.0, CHC13)。 'H NMR (400 MHz,丙酮-D6): 5 1.23 (s, 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.38 (s, 9H, C(Cf/3)3), 1.44 (m, 1H, if卩Arg), 1.47 (m, 1H, //-7), 1.49 (m, 1H， //-8), 1.51 (m, 1H,鄰Arg), 1.60 (m, 1H, /fy Arg), 1.72 (m, 2H， Ci/2CH2Ar Pmc), 1.74 (m， 1H, i/-5), 1.80 (m, 1H, 所Arg), 2.02 (s, 3H, C/f3 Pmc), 2.1 74 (m， 1H, 7f-5), 2.12 (m， 1H, //-4)， 2.18 (m: 1H， //-7)， 2.3 (m， 1H, //-8)， 2.48 (s， 3H, C//3 Pmc), 2.50 (s， 3H, C//3 Pmc), 2.54 (m, 2H, CH2C//2Ar Pmc), 2.60 (m, 1H, Asp), 2.91 (m， 1H, //卩Asp), 3.17 (m, 1H, Arg)， 3,19 (m， 1H， C^2N3)， 3.23 (m， 1H, //5 Arg), 3.48 (m， 1H, C/f2N3), 3.6 (m， 1H， //a Gly), 3.8 (m, 1H， //a Gly), 4.0 (m, 1H, //-6), 4.17 (m， 1H, //-9)，
4.4 (m, 1H, i/-3), 4.63 (m, 1H, //a Arg), 4.72 (m， IH, //a Asp), 6.14 (bs, IH, (N//)2C=H/￥), 6.37 (bs, 2H, (N/^)2C=N//), 7.32-7.48 (m, 2H, N//Arg, NZ/雙環(huán)), 7.8 (bs, 1H，麗Gly), 8.12 (bs, IH, N// Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz, 丙酮-D6): 5 67.5, 54.8, 51.8, 51.4, 50.2, 49.4, 45.8, 40.1， 39.9, 34.7, 32.8, 31.8, 31.5, 30.2, 28.1, 27.2, 26.8, 25.2, 21.3， 18.5, 17.5, 12.1。 MS [FAB+]:計算值 C40H59N O1()S: 885.42,實測值886 [M + H]+。分析計算值C4oH59NnOK)S: C 54.22, H 6.71, N 17.39;實測值C 54.20, H 6.72, N 17.37。
化合物23
產(chǎn)率30% (白色固體)。[a]D22 = -65.15 (c = 1.0，丙酮)。!H NMR (400 MHz,丙酮-D6): 5 1.18 (s， 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.3 (s, 9H, C(C7f3)3), 1.44 (m, IH, 77-8), 1.45 (m， 3H, //-6， i/y Arg), 1.5 (m, IH, //(3 Arg), 1.57 (m, IH, Arg), 1.62 (m, IH, i/-4), 1.65 (m, IH, //-5), 1.7 (m, 2H, C/f2CH2Ar Pmc), 1.73 (m, 2H， i/-5, //-9)， 1.95 (m, IH, i/-9)， 1.96 (s， 3H, C//3 Pmc), 1.98 (m, IH, T/-6), 2.13 (m, IH, //-8), 2.46 (s, 3H， C//3 Pmc), 2.48 (s, 3H, C巧Pmc), 2.55 (m， 2H, CH2C//2Ar Pmc)， 2.7 (m， IH, Asp), 2.78 (m， 1H， if(3 Asp), 3.07 (m, IH, i/CHN3), 3.11 (m， 2H,說Arg), 3.56 (m, IH, i/CHN3), 3.63 (m， IH, i/a Gly)， 3.87 (m, IH, //-7), 3.93 (m， IH, /fa Gly), 4.33 (m, 1H， Ha Asp)， 4.35 (m， IH, 3), 4.42 (m, IH, //a Arg), 4.64 (m, IH,樂10 ), 6.25 (bs, IH, (N/^C-N//), 6.36 (bs， 2H， (N/f)2C=N/^), 7.46 (m, IH, N//雙環(huán))，7.77-7.9 (m, 2H, N// Gly, 藩Arg), 8.05 (bs, IH, N/f Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz,丙酮-D6): S
61.2, 58.9, 53.5, 53.3, 53.1, 51.4, 43.6, 40.3, 39.6, 36.3， 33.3, 33.1, 31.6, 28.7,
27.3, 26.9, 26.1, 25.8, 25.5, 21.0， 18.0, 16.9, 11.4。 MS [ESI+]:計算值 C4!HwNuO,。S: 899.43,實測值900.9 [M + H]+。分析計算值C4,HwNnO!oS: C 54.71, H 6.83, N 17.12;實測值C 54.73, H 6.82, N 17.11 。
化合物25
產(chǎn)率60% (白色固體)。[a]D22 = -65.83 (c = 1.15, CHC13)。 NMR (400 MHz,丙酮-D6): 5 1.27 (m, 1H，樂5), 1.30 (s, 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.45 (s，
9H, C(Cf/3)3), 1,52 (m, 1H， i/卩Arg), 1.59 (m, 1H, 77-7), 1.60 (m, 1H, ify Arg)， 1.62 (m, 1H, //(3 Arg)， 1.81 (m, 2H, C//2CH2Ar Pmc), 1.98 (m, 1H, T/y Arg)， 2.0 (m, 1H, //-8), 2.1 (s, 3H, Ci/3 Pmc), 2.38 (m, 1H，仏5), 2.42 (m， 1H， //-7), 2,43 (m, 1H， //陽8), 2.56 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.58 (s, 3H， C坊Pmc), 2.6 (m, 1H,鄰 Asp), 2.62 (m, 2H, CH2C//2Ar Pmc), 2.9 (m, 1H,樂4), 2.95 (m, 1H, Hp Asp), 3.19 (m， IH,說Arg), 3.25 (m, IH,說Arg), 3.37 (m， 2H, C//2N3), 3.62 (d, IH, J =13.3 Hz， i/a Gly)， 4.1 (m, IH, i/-6), 4.12 (m, IH, //a Gly), 4.25 (m, 2H, i/-9)， 4.39 (m, IH, 7f陽3), 4.6 (m, IH, //a Arg), 4.67 (m, IH, i/a Asp), 6.12 (bs, IH, (N/^)2C=N//), 6.35 (bs， 2H, (Ni/)2C=N/^， 7.32-7.48 (m， 2H, N//Arg, Nif雙環(huán)): 7.82 (bs， IH,冊Gly), 8.1 (bs， 1H，麗Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz, 丙酮-D6): 5 62.5, 55.7, 53.4， 51.2, 42.7, 40.6, 40.3, 36.3， 35.5, 34.9, 33.4, 33.3， 30.0,28.4,28.3,27.5,26.0,22.1,20.8， 17.9, 16.7, 13.2, 11.4。 MS [FAB+]:計算 值C4oH59NuO,。S: 885.42,實測值886 [M + H]+。分析計算值C4oH59NuO,oS: C 54.22, H 6.71, N 17.39;實測值C 54.21， H 6.73, N 17.38。
化合物27
產(chǎn)率75%(白色固體)。[a]D22 =-35.74 (c= 1.2, CHC13)。 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 5 1.32 (s, 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.46 (s, 9H, C(C/f3)3), 1.48 (m, IH,
1.5 (m, IH, Hp Arg), 1.60 (m, 1H， Arg)， 1.62 (m, 1H， 7/(3 Arg), 1.65 (m: IH, //陽5)， 1.7 (m, IH, //-4), 1.73 (m, IH, i/-8), 1.82 (m, 2H, C7f2CH2Ar Pmc), 1.96 (m, IH, Arg), 2.02 (m, IH, i/-9), 2.1 (m, IH, if-5), 2.11 (s, 3H， C//3 Pmc)， 2.21 (m， 1H， 2.23 (m, IH, 2.45 (m， IH,鄰Asp), 2.56 (s， 3H, C//3 Pmc)， 2.58 (s, 3H, Ci/3 Pmc), 2.64 (m, 2H, CH2Q^2Ar Pmc), 2.87 (m， IH, F卩Asp)， 3.18 (m， 2H,說Arg), 3.22 (m, IH, ifCHN3), 3.53 (d, IH, J = 13.0 Hz， 7/a Gly)， 3.62 (m, IH, i/CHN3), 4.24 (m, IH, T/-7), 4.26 (m, IH, 7/a Gly)， 4.41 (m, 2H, //-10 ), 4.59 (m, IH, //a Arg)， 4.61 (m， IH, i/-3), 4.96 (m, IH, i/a Asp), 6.32 (bs， 3H, (N//)2C=N/f), 7.46-7.58 (m, 3H, N/ZGly, N//Arg, N/Z雙環(huán))，7.9 (bs, IH, N/f Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz, CDC13): 5 63.4, 58.9, 55.0, 53,8, 51.9, 49.7， 44.3, 40.5, 39.3, 35.2, 33.0, 32.5, 32.6， 31.2, 28.0， 27.8, 26.7，
25.3, 21.3, 18.6， 17.3， 11.9。 MS [FAB+]:計算值C4,H"NuOoS: 899.43，實測 值901 [M + H]+。分析計算值CnHeNuOK)S: C 54.71, H 6.83, N 17.12;實測 值C 54.70, H 6.83， N 17.11。
實施例2:疊氮基團的氫化
將催化量的C-Pd 10%加入到產(chǎn)品21、 23、 25或27 (0.03 mmol)的 MeOH(lml)溶液中。懸浮液在氫氣氛圍下持續(xù)攪拌約4小時。然后用硅藻 土床過濾反應混合物，將收集的有機相蒸發(fā)至干，未經(jīng)進一步純化直接用 于下一步反應。
實施例3:酰胺合成
在室溫及氬氣氛圍下，將戊酰氯(6.5 ^， 0.054 mmol)禾CI TEA (15 ^， 0.11 mmol)依次加入到產(chǎn)品21-NH2、 23-NH2、 25-NH2或27-NH2 (0.027 mmol)的無水DCM (700 pi)溶液中。持續(xù)攪拌溶液約1.5小時。然后蒸發(fā) 溶劑至干，粗產(chǎn)品經(jīng)快速色譜法(CH2Cl2/iPrOH 85:15)純化后獲得所需的產(chǎn) 品，呈白色泡沫(40%-57%)。
化合物22-PG
產(chǎn)率40% (白色固體)。[a]D22 = -83.1 (c = 0.48，丙酮)。'H NMR (400 MHz,丙酮-D6): 5 0.9 (t, 3H, J = 7.4 Hz, COCH2CH2CH2C^3), 1.32 (s, 6H， C(CH3)2 Pmc), 1.35 (m, 2H, COCH2CH2C7f2CH3)， 1.45 (s, 9H, C(C//3)3), 1.54 (m, 2H, Arg)， 1.55 (m， 2H， COCH2Q72CH2CH3), 1.6 (m, 1H， T/-5), 1.62 (m， 1H， Z/pArg), 1.8 (m, IH, //-7), 1.85 (m， 2H, C//2CH2Ar Pmc), 1.9 (m, IH, //p Arg), 1.92 (m, 1H， T/-8), 2.08 (m, IH, 2.1 (s, 3H, Cif3 Pmc), 2.12 (m, 2H， COC//2CH2CH2CH3), 2.19 (m, IH, //-7), 2.20 (m， IH, //-8), 2.24 (m, IH, //-4), 2.57 (s, 3H, Ci/3 Pmc)， 2.59 (s， 3H， CF3 Pmc), 2.67 (m, 2H， CH2Cf/2Ar Pmc), 2.78(m, IH, if卩Asp), 2.82 (m, IH, i/CHNHCO), 2.84 (m， IH, /f(3 Asp), 3.27 (m: 2H,說Arg), 3.48 (m, IH, Gly)， 3.57 (m, IH, i/CHNHCO), 3.69 (m， IH, 6), 4.14 (m, IH, /fa Gly)， 4.18 (m， 1H， 7/-9)， 4.43 (m， IH, //a Arg), 4.62 (m, 1H://-3), 4.8 (m, 1H, //a Asp), 6.5 (m, 3H, (Ni/)2C=N//)， 7.08 (m， 1H， Ni/CO(CH2)3CH3), 7.12 (bs， 1H, N//Arg), 7.88 (m， 1H, Ni/Asp)， 8.0 (bs, 1H, N/f雙環(huán))，8.4 (bs, 1H， Nif Gly)。 13C NMR HETCOR (400 MHz,丙酮-D6): 5 61.9, 60.5, 51.7, 51.3, 50.5， 45.1， 40.5， 40.4, 40.1, 37.7, 36.4， 32.9, 31.7, 30.8, 30.7, 28.2,28.0, 27.6, 26.4, 25.9, 22.5， 21.6, 18.6, 17.1, 16.6, 11.8。 MS [FAB+]: 計算值C4sH69N90uS: 943.48,實測值944 [M + H]+, 966 [M + Na]+。分析計 算值(34^6^90 8: C 57.25, H 7.37, N 13.35;實測值C 57.23, H 7.36, N 13.36。
化合物24-PG
產(chǎn)率40% (白色固體)。[a]D22 = -15.9 (c = 1.0,丙酮)。NMR (400 MHz,丙酮匿D6): S 0.9 (t, 3H, J = 7.4 Hz, COCH2CH2CH2C//3)， 1.31 (s， 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.33 (m, 2H， COCH2CH2C//2CH3), 1.47 (s, 9H， C(C//3)3)， 1.49 (m， 1H, i/y Arg), 1.51 (m, 1H, Fp Arg), 1.6 (m, 1H, //丫 Arg), 1.62 (m, 2H, COCH2C//2CH2CH3), 1.65 (m, 1H, //-6), 1.67 (m, 1H， //-5), 1.69 (m, 1H, //-4)， 1.71 (m， 1H,樂8), 1.76 (m, 2H, C//2CH2Ar Pmc), 1.79 (m, 1H， //-6), 1.96 (m， 2H,樂5, i/畫9), 2.07 (m, 1H,鄰Arg), 2.1 (s, 3H, C巧Pmc), 2.13 (m, 2H， COC//2CH2CH2CH3), 2.35 (m, 1H, //-8), 2.38 (m， 1H, //陽9), 2.53 (m, 1H, //(3 Asp), 2.57 (s， 3H, C//3 Pmc), 2.59 (s， 3H, C//3 Pmc), 2.68 (m， 2H, CH2C//2Ar Pmc)， 2.95 (m, 1H， //(3 Asp), 3.07 (m, 1H， //CHNHCO), 3.21 (m， 2H，說Arg)， 3.38 (d, 1H, J = 14.3 Hz, /fa Gly), 3.64 (m, 1H, //CHNHCO), 4.25 (m, 1H, //-7), 4.31 (m， 1H, //a Gly)， 4.41 (m, 1H， i/-3), 4.46 (m， 1H, i7-10), 4.52 (m, 1H, //a Arg), 4.83 (m, 1H, /fa Asp)， 6.32 (bs, 1H, (N//)2C=N//)， 6.5 (bs, 2H, (N^)2C=N/^), 7.12 (m, 1H, N//CO(CH2)3CH3), 7.3 (m, 1H,麗Gly)， 7.49 (m, 1H, N// Arg) 7.60 (m, 1H, N//雙環(huán))，8.02 (m, 1H， N/f Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz,丙酮-D6): 5 62.0， 59.4, 55.9, 51.8, 50.0, 43.9, 41.1, 40.5, 39.5, 35.7， 35.0, 33.1, 32.7, 32.2, 31.5, 27.8, 27.7, 27.4, 27.1, 26.2， 26.0， 22.3, 21.0， 18.0, 16.8， 13.5, 11.6。 MS [FAB+]:計算值C46H^N90,S: 957.5,實測值: 958 [M + H]+。分析計算值C46H"N90uS: C 57.66, H 7.47, N 13.16;實測值C 57.69, H 7.46, N 13.15。 化合物26-PG
產(chǎn)率54% (白色固體)。[a〗D22 = -84.4 (c = 0.75，丙酮)。'H NMR (400 MHz,丙酮-D6): S 0.9 (t, 3H, J = 7.3 Hz, COCH2CH2CH2C//3), 1.3 (m, 2H, COCH2CH2c92ch3), 1.32 (s, 6h, C(CH3)2 Pmc), 1.34 (m， 1H, //-5), 1.45 (s， 9h, C(C//3)3), 1.5 (m, 1H, //y Arg, //(3 Arg), 1.54 (m, 2H, COCH2C//2CH2CH3), 1.6 (m， 1H, i/y Arg), 1.63 (m, 1H, //-7), 1.85 (m， 2H， Ci/2CH2Ar Pmc)， 2.0 (m, 1H, i/-8), 2.08 (m, 1H, //卩Arg)， 2.1 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.12 (m， 2H, COCf/2CH2CH2CH3), 2.4 (m, 1H, 7^-7), 2.43 (m, 1H, //-8， //-5)， 2.56 (m, 1H, i/(3 Asp), 2.57 (s, 3H, Cf/3 Pmc), 2.59 (s, 3H， C//3 Pmc), 2.68 (m, 2H, CH2C/f2Ar Pmc), 2.74 (m， 1H， i/-4), 3.01 (dd, 1H, J = 16.6 Hz, J = 7.0 Hz,鄰Asp), 3.12 (m, IH, i/CHNHCO), 3.19 (m, 1H，沉HNHCO)， 3.21 (m, 2H,說Arg), 3.43 (d,〗H, J = 14.2 Hz， //a Gly), 4.17 (m, 1H， 4.2 (m, IH, //a Gly)， 4.25 (m, IH, //-9), 4.3 (m, IH, 77-3)， 4.55 (m, IH, //a Arg), 4.58 (m, IH, /fa Asp), 6.32 (bs, IH, (N//)2ON//)， 6,48 (bs, 2H, (N/f)2ONi7), 6.67 (m, IH, N//CO(CH2)3CH3), 7.33 (m, IH, Ni/雙環(huán))，7.42 (m, IH, N/ZArg), 7.58 (m， 1H， N/ZGly), 8.032 (m, IH, N/7 Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz,丙酮-D6): 5 62.5, 55.7, 53.4, 51.2， 42.7, 40.6, 40.3, 36.3, 35.5, 34.9, 33.4, 33,3, 33.4, 30.0， 28.4, 28.3, 27.5, 26.0, 22.1, 20.8, 17.9， 16.7, 13.2, 11.4。 MS [FAB+]:計算值C4sH69N90nS: 943.48,實 測值944 [M + H]+, 966 [M + Na]+。分析計算值C45H69N90nS: C 57.25, H 7.37， N 13.35;實測值C 57.26, H 7.36, N 13.34。
化合物28-PG
產(chǎn)率57%(白色固體)。[a]D22 =-13.78 (c= 1.02，丙酮)。'H NMR (400 MHz,丙酮-D6): S 0.92 (t, 3H, J = 7.4 Hz， COCH2CH2CH2Cff3), 1.32 (s， 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.34 (m, 2H, COCH2CH2C//2CH3), 1.45 (s， 9H, C(Cf/3)3), 1.48 (m, 1H5 Z/y Arg), 1.50 (m, IH, //p Arg), 1.58 (m, IH, Arg), 1.6 (m， 2H, COCH2C//2CH2CH3)， 1.62 (m， IH, //-6), 1.65 (m， IH, Z/-5), 1.67 (m， IH, //-4)，
I. 7 (m, 1H， //-8), 1.75 (m, 2H, Cif2CH2Ar Pmc), 1.78 (m, 1H, i/-6), 1.97 (m, 2H,
i/-9), 2.06 (m, 1H, //|3 Arg)， 2.1 (s, 3H， Ci/3 Pmc), 2.12 (m, 2H, COC//2CH2CH2CH3), 2.33 (m, IH, 2.38 (m， IH, //-9), 2.54 (m, IH,
Asp), 2.56 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.58 (s， 3H, C//3 Pmc), 2.67 (m， 2H, CH2Ci/2Ar Pmc), 2.94 (m, IH, //p Asp), 3.05 (m， IH, //CHNHCO), 3.2 (m， 2H,說Arg), 3.37 (d, IH, J = 14.3 Hz， ifa Gly)， 3.65 (m, IH, i/CHNHCO), 4.24 (m, IH, i/-7), 4.3 (m, IH, //a Gly), 4.4 (m， IH, //-3)， 4.45 (m, IH, H-10), 4.5 (m, 1H， i/a Arg): 4.85 (m, IH, Asp), 6.33 (bs, 1H， (N^)2C=N^0， 6.48 (bs, 2H， (N//)2C=N^)， 7.13 (m, IH, N//CO(CH2)3CH3), 7.27 (m, IH, N/f Gly), 7.48 (m, IH, N//Arg) 7.61 (m, IH, N/Z雙環(huán))，8.04 (m， IH, N//Asp)。 13C NMR HETCOR (400 MHz, 丙酮-D6): 5 63.1, 59.2， 55.7, 51.7, 49.9, 43.6, 40.8, 40.3, 39.6， 35.9, 34.8, 33.0， 32.6, 32.2, 31.4， 27.8, 27.7， 27.5, 27.3, 26.1, 26.0, 22.1, 21.0, 17.9, 16.9, 13.3，
II. 4. MS [FAB+]:計算值C46H7,N90uS: 957.5,實測值958 [M + H]+。分析計 算值C46H"N90"S: C 57.66, H 7.47， N 13.16;實測值C 57.67, H 7.48， N 13.14。
實施例4:通過"點擊反應"結合
將抗壞血酸鈉溶液0.9 M (44 pi, 0.04 mmol, 0.4 mol eq)和di Cu(OAc)2 0.3 M (67 pl， 0.02 mmol， 0.2 mol eq)溶液分別加入到疊氮化物25 (0.1 mmol) 與合適的炔基衍生物(0.1 mmol )于H20/t-BuOH 1:1 (500 pi)的溶液中。將 反應混合物室溫攪拌約18小時。反應完全后，減壓蒸去溶劑，經(jīng)硅膠快速 色譜法分離出產(chǎn)品。
化合物46
產(chǎn)率67%(白色固體)。[a]D22 =-70.5 (c = 0.89, MeOH)。 NMR (400 MHz, CD3OD): S 1.31 (s， 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.44 (m， IH, W丫 Arg), 1.48 (s, 9H, C(C/f3)3), 1.51 (m， IH, //卩Arg)， 1.56 (m, IH, Arg), 1.6-1.7 (m, 2H, i/-5 /f-7): 1.84 (t， 2H, J = 6.8 Hz, C//2CH2Ar Pmc), 1.87 (m， 1H， 2.06 (m, IH, if|3 Arg), 2.1 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.32-2.46 (m, 3H, i/-5， i/-7, //-8)， 2.55 (s, 3H, C//3
Pmc), 2.56 (s, 3H, C//3 Pmc)， 2.59 (m, 1H, //(3 Asp),2.67 (7， 2H, J = 6.8 Hz， CH2C//2Ar Pmc), 3.06 (dd, 1H, J = 16.6 Hz, J = 7.2 Hz, //(3 Asp), 3.14-3.22 (m, 2H,說Arg)， 3.26 (m, 1H, //國2 Glc) 3.30-3.34 (m, 3H， i/-4, T/-4 Glc, //-5 Glc), 3.38 (m, 1H, Glc), 3.47 (d, IH, J = 13.9 Hz, //a GIy), 3.7 (m, 1H, //-6 Glc), 3.91 (d, IH, J = 10.8, i/-6 Glc), 4.01 (m, 1H， //扁6)， 4.16 (dd, 1H， J = 6.5 Hz, J = 11.0 Hz, /f-9)， 4,27 (d, IH, J = 14.4 Hz, //a Gly), 4.3 (m, IH, HCH-N) 4.35-4.46 (m, 3H, i/-3， //-I Glc, HCH-N), 4.47 (m, 1H， Asp), 4.55 (m， IH, i/a Arg), 4.83 (m, 1H， 0//CH-), 4.93 (d, IH, J = 12.9 Hz, OWCH隱)，8.02 (s, IH, 三 唑)。13C NMR (100.6 MHz, CD3OD): S 174.3 172.4， 172.0, 171.4, 170.7, 168.8, 156.6, 153.3， 144.4, 135.1， 134.7, 133.4, 125.2, 123.5, 118.0, 101.6, 80.8, 76.6, 76.5， 73.6, 70.3, 62.3, 61.4， 55.5, 53.0, 51.5, 51.3, 51.0, 41.7, 40.2, 36.5, 34.5， 33.0, 32.4, 32.2, 30.1, 27.6， 27.0， 25.6, 21.0, 17.5，6.4， 10.9。 MS [ESI+]:計算 值C^HnNuC^S: 1103.5，實測值1104.5 [M + H]+, 1126.5 [M + Na]+。分析 計算值C49H73N 016S: C 53.3, H 6.66, N 13.95;實測值C 53.28, H 6.64, N 13.92。
化合物48
產(chǎn)率81%(白色固體)。[a]D22 =-73,3 (c = 0.92，丙酮)。]H NMR (400 MHz,丙酮扁d6): S 0.98 (t, 3H, J = 7.2 Hz, C//3), 1.35 (m, IH, //-5)， 1.37 (s, 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.42 (m, 2H， C/f2), 1.5 (s, 9H, C(C^3)3), 1.54 (m, 2H, i/(3 Arg, 所Arg)， 1.58 (m, IH, if丫 Arg)， 1.65 (m, 1H， if-7), 1.67 (m, 2H, C//2), 1.9 (t, 2H, J = 6.8 Hz, C//2CH2Ar Pmc), 2.07 (m, 1H， if-8), 2.12 (m, 1H，鄰Arg), 2.15 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.26 (m， 1H， //-5)， 2.40-2.49 (m, 2H， //-7,樂8)， 2.62 (s, 3H, C//3 Pmc)， 2.64 (s, 3H， C//3 Pmc), 2.65-2.76 (m， 5H, CH2C//2Ar Pmc, C//2, //卩Asp), 3.07 (dd, 1H， J = 16.8 Hz, J = 6.8 Hz, F卩Asp), 3.26 (m, 2H,說Arg), 3.34 (m， 3H, 4), 3.53 (d, 1H， J = 14.0 Hz, //a Gly), 4.11 (m, IH, i/CH-N), 4.22-4.31 (m, 2H, i/a Gly ), 4.34 (m, IH, if-9), 4,48 (m, IH, if-3)， 4.52 (m， IH, 4.62 (m, IH, 7/a Arg)， 4.65 (m, 1H， //a Asp)， 6,43 (bs, IH, N//胍), 6.58 (bs, 2H， N/Z胍)，7.42 (d, IH, J = 4.0 Hz, N/7骨架)，7.59 (d, IH, J = 8.8 Hz,麗Arg), 7.66 (d, 1H， J = 8.0 Hz, N//Gly), 7.76 (s, 1H， #三唑)，8.50 (d, 1H, J =7.6 Hz, NF Asp)。 13C NMR (100.6 MHz,丙酮-d6): 5 174.2 172.2, 171.8, 170.8， 169.4， 157.1, 153.5, 148.1, 135.8， 135.7, 135.2, 123.8， 122.4, 118.5, 80.7, 74.0， 63.2, 56.2, 54.0, 52.2, 52.0, 51.7, 43.5, 41.1, 37.3, 35.5, 33.8， 33.6, 33.2, 32.2, 30.5, 28.0, 26.8, 26.7， 26.6, 25.7, 22.6, 21.7, 18.6, 17.5, 13.9, 12.0。 MS [ESI+]:計算值C46H69NnO!oS: 967.49,實測值968.5 [M + H]+。分析計算值 C46H69N O10S: C 57.07, H 7.18, N 15.91;實測值C 57.08, H 7.20， N 15.92。
化合物50
產(chǎn)率62%(白色固體)。[a]D22 =-26.5 (c= 1.06, MeOH)。 NMR (400 MHz, CD3OD): S 1.3 (s， 6H, C(CH3)2 Pmc), 1.36-1.52 (m， 14H, //-5， /fy Arg, C//2生物素，C(C//3)3, //(3 Arg, Arg), 1.53-1,67 (m, 5H, //y Arg, ZfCH 生物素，C//2生物素)，1.71 (m, 1H, i/CH生物素)，1.72 (m， 2H, NCH2C//2CH20連接子)，1.78 (m, 2H, NCH2C/f2CH20連接子)，1.82 (m， 2H, C//2CH2Ar Pmc), 1.87 (m, 1H, //-8)， 2.04 (m, 1H, //(3 Arg), 2.08 (s, 3H, Ci/3 Pmc), 2.18 (m， 2H， C//2生物素)，2.27-2.44 (m, 3H, //陽5,樂7,樂8)， 2.54 (s， 3H， Cf/3 Pmc)， 2.56 (s, 3H, C//3 Pmc), 2.57 (m， 1H, i/卩Asp), 2.63-2.72 (m, 3H， CH2C//2Ar Pmc， SFCH生物素)，2.91 (dd, 1H， J = 12.7 Hz, J = 5.0 Hz, S/fCH 生物素)，3.04 (dd， 1H, J = 16.7 Hz, J = 7.3 Hz,邵Asp), 3.12-3.27 (m， 5H， 2說 Arg, 7f-4， 生物素，C//2N連接子)，3.33 (m, 2H, C//2N連接子)3.41 (d,
1H, J = 14.3 Hz， //a Gly), 3.47-3.55 (m, 4H， C//20連接子)，3.56-3.66 (m， 8H, C//20連接子)，3.98 (m, 1H， i/-4), 4.06 (s, 2H, COC瑪O連接子)，4.11 (s， 2H， COC//20連接子)，4.13 (m, 1H， //-9)， 4.17-4.32 (m， 3H, i/CH-N, /fa Gly, NC/f 生物素)，4,33-4.55 (m, 5H， i/-3, FCH-N, //a Arg, //a Asp, NCff生物素)，7.40 (m， 1H, N# Asp), 7.80 (s, 1H， //三唑)。13C NMR (100.6 MHz,丙酮-d6): 5 175.6， 173.7, 173.5, 172.7， 172.1, 170.2, 158.0, 154.7， 146.1, 136.5, 136.1, 134.9, 125.5, 124.9, 119.4, 82.2, 74.9， 71.6, 71.5, 71.3, 70.0, 69.9, 63.7, 63.4, 61.6， 57.1， 56.8, 54.4, 52.8， 52.5, 43.3， 41.6, 41.1， 37.9， 37.8， 37.7, 36.9， 35.9, 35.2, 34.4, 33.8， 33.6, 31.5， 30.8， 30.5， 30.4, 29.8， 29.6, 29.0, 28.4, 27.1, 27.0, 26.9, 22.4,
19.0, 17.9, 12.3。 MS [ESI+]:計算值(:671^4^601882: 1484.72，實測值1485.9 [M + H]+， 743.6 [M + 2H]2+。分析計算值(367!1104]^1601882: C 54.16, H 7.06, N 15.08;實測值C 54.14, H 7.05, N 15.06。
實施例5:五肽終產(chǎn)品的脫保護
將CF3COOH/苯甲硫醚/l，2-乙二硫醇/苯甲醚90:5:3:2 (1 ml)溶液加入到 產(chǎn)品22誦PG、 24誦PG、 26-PG、 28國PG、 46、 48、 50或52 (0.015)中。所述
混合物保持攪拌約2小時。然后將溶劑蒸發(fā)至干，粗產(chǎn)品溶解于H20中并 用iPr20洗滌(兩次)。水相蒸發(fā)至干。
化合物22
產(chǎn)率99% (白色固體)。[oc]D22 = -67.75 (c = 0.72， MeOH)。 'H NMR (400 MHz, D20): 5 0.84 (t, 3H， J = 7.4 Hz, NHCH2CH2CH2C/f3), 1.26 (m, 2H, NHCH2CH2C//2CH3), 1.42 (m, 1H, H-5)， 1.5 (m， 2H, i/y Arg), 1.53 (m, 2H, NHCH2C//2CH2CH3), 1.64 (m, 1H, Arg), 1.72 (m, 1H， //-7), 1.82 (m， 1H, //(3 Arg)， 1.95 (m, 1H， //-8)， 2.14 (m, 1H, //-5), 2.2 (m, 2H, NHCf/2CH2CH2CH3), 2.23 (m, 1H, //-7)， 2.25 (m， 1H, //-8)， 2.36 (m, 1H, if-4), 2.79 (m, 2H, //(3 Asp), 3.07 (m, 1H, /fCHNHCO), 3.17 (m, 2H，說Arg), 3.24 (m, 1H, //CHNHCO), 3.56 (d, 1H, J = 14.3 Hz， i/a Gly), 3.66 (t, 1H, J = 10.4 Hz, //-6), 4.04 (d， 1H, J =14.3 Hz,漁Gly), 4.26 (d, 1H, J = 10.1 Hz， //-9)， 4.3 (m, 1H, i/a Arg), 4.63 (m, 1H, //a Asp), 4.74 (m, 1H， i/-3)。 13C NMR HETCOR (100.6 MHz， D20): S 613, 59.9, 51.8, 51.7， 49.7, 44.5, 40.4, 39.8， 38,0, 36.9, 35.6, 30.8, 29.0, 28.9, 27.7, 27.3, 24.3, 21.5, 12.8。 MS [ESI+]:計算值C29H44N9Ch。 735.32,實測 值:622 [M -TFA]+。分析計算值C29H44N9Cho: C 47.34， H 6.04, N 14.93;實測 值C 47.35, H 6.04, N 14.91。
化合物24
產(chǎn)率98%(白色固體)。[a]D22 =-22.5 (c= 1.0, MeOH)。 'H NMR (400 MHz, D20): S 0.84 (t, 3H, J = 7.3 Hz, NHCH2CH2CH2C^3), 1.25 (m, 2H,
NHCH2CH2C//2CH3)， 1.50 (m, 2H, NHCH2C /2CH2CH3), 1.53 (m, 1H,歷Arg), 1.55 (m, IH, i/-6)， 1.6 (m, 2H, i/卩Arg, if-5), 1.73 (m, 1H， 1.83 (m, IH, 6), 1.85 (m, IH, 1.91 (m, IH, /fy Arg), 1.94 (m, IH, //-5), 2.01 (m， 2H, 7/|3 Arg, i/-9), 2.22 (m， 2H， NHC//2CH2CH2CH3), 2.26 (m, IH, //-8), 2.41 (m， IH, T/-8), 2,75 (dd, 1H， J = 17.0 Hz, J = 6.7 Hz, //卩Asp), 3.01 (m, 1H， ZfCHNHCO), 3.05 (m, IH, //(3 Asp), 3.18 (m, 2H,說Arg), 3.4 (dd, IH, J = 14.0 Hz, J = 3.9 Hz, i/CHNHCO), 3.5 (d, IH, J = 14.5 Hz, i/a Gly), 4.2 (m， IH,樂7), 4.25 (d, IH, J = 14.5 Hz, //a Gly), 4.4 (dd, IH, J = 8.8 Hz， J = 4.7 Hz, i/-10), 4.45 (dd, IH, J = 10.6 Hz, J = 4.2 Hz, //a Arg), 4.58 (m, IH, if-3)， 4.67 (dd, IH, J = 7.6 Hz, i/a Asp)。 13C NMR HETCOR (100.6 MHz, D20): 5 62.9, 59.5, 55.0, 52.0， 50.8, 43.2, 41.6, 40.1, 38.3, 36.0, 33.5, 32.0, 31.9, 30.8, 27.7， 27.5, 27.5, 25.7, 21.6, 12.4。 MS [ESI+]:計算值(3301146 3>19010: 749.33，實測值:636,7 [M -TFA]+。分析計算值0:30114^^9010: C 48.06, H 6.18, N 16.81;實測值C 48,04， H6.17,N 16.82。
化合物26.
產(chǎn)率99%(白色固體)。[a]D22 =-64.9 (c = 0.68, MeOH)。 'H NMR (400 MHz, D20): 5 0,83 (t, 3H, J = 7.3 Hz, NHCH2CH2CH2C//3), 1.19 (m, IH, //-5), 1.23 (m, 2H, NHCH2CH2C//2CH3), 1.45 (m, 2H, i/y Arg), 1.48 (m, 2H, NHCHsCi^CH^H^, 1.5 (m, IH, i/p Arg), 1.55 (m， IH, T/-7), 1.60 (m, IH, 5), 1.63 (m, IH, Z/-7) 1.85 (m, IH,界8), 2.05 (m, 1H，邵Arg), 2.15 (t, 2H, J = 7.4 Hz, NHCi/2CH2CH2CH3), 2.42 (m, 2H, C//2NHCO)， 2.45 (m, IH, 2.72 (dd, IH, J = 17 Hz, J = 7.1 Hz，鄰Asp), 2.76 (m， IH, T/-4), 3.06 (dd, IH, J = 17 Hz， J = 7.1 Hz,鄰Asp)， 3.15 (m, 2H,挑Arg), 3.48 (d, IH, J = 14.6 Hz, //a Gly), 3.98 (m, IH, //-6), 4,25 (m, 2H， 77-9, //a Gly), 4.36 (t, 1H， J = 7.0 Hz, i/-3), 4 5 (t, IH, J = 7.2 Hz, ifa Asp), 4.57 (dd, 1H， J = 10.1 Hz, J = 3.4Hz, //a Arg)。 13CNMR (100.6 MHz, D20): S 177.7, 174.8, 174.5, 174.0, 173.0, 171.6， 170.2, 62.1, 56.0, 52.9, 51.6, 51.3, 42.3, 40.3, 40.1, 35.8, 35.6, 33.2， 32.8, 32.6, 30.1, 27.5, 26.9, 24.3， 21.6, 13.0。 MS [ESI+]:計算值(^29114^^9010: 735.32,實
測值622 [M -TFA]+。分析計算值029^^^9010: C 47.34, H 6.04, N 14.93; 實測值C 47.33, H 6,05, N 14,92。
化合物28
產(chǎn)率99%(白色固體)。[a]D22 =-12.6 (c= 1.0, MeOH)。 'H NMR (400 MHz, D20): 5 0.85 (t, 3H, J = 7.3 Hz, NHCH2CH2CH2C7/3)， 1.25 (m, 2H， NHCH2CH2C//2CH3)， 1.51 (m, 2H, NHCH2C//2CH2CH3), 1.52 (m, 1H, //y Arg), 1.54 (m, 1H, 7f-6)， 1.62 (m, 2H，鄰Arg, i/-5), 1.75 (m, 1H, //-4), 1.82 (m, 1H, //-6), 1.84 (m， 1H, H-8), 1.9 (m, 1H, Arg), 1.93 (m, 1H, //-5), 2.0 (m, 2H, i/J3 Arg, //-9), 2.2 (m, 2H, NHC//2CH2CH2CH3)， 2.22 (m, 1H, //-8)， 2.4 (m, 1H， //-8), 2.73 (dd， 1H, J = 17.0 Hz, J = 6.7 Hz, H卩Asp), 3.0 (m, 1H, FCHNHCO), 3.04 (m, 1H, //卩Asp), 3.15 (m， 2H，說Arg)， 3.42 (dd， 1H， J = 14.0 Hz， J = 3.9 Hz,沉HNHCO), 3.47 (d, 1H， J = 14.5 Hz, //a Gly), 4.17 (m, 1H， //-7), 4.22 (d, 1H， J = 14.5 Hz, i^a Gly)， 4.39 (dd, 1H, J = 8.8 Hz， J = 4.7 Hz， 7/-10), 4.46 (dd, IH, J = 10.6 Hz, J = 4.2 Hz, //a Arg), 4.56 (m, 1H, //陽3)， 4.65 (dd, 1H, J = 7.6 Hz, T/a Asp)。 13C NMR HETCOR (100.6 MHz, D20): 562.8, 59.3, 55.2, 51.8, 50.6, 43.0， 41.4， 40.0, 38.1, 35.7， 33.2, 31.8, 31.7, 30.5, 27.4, 27.3, 27.0, 25.5， 21,4， 12.8。 MS [ESI十]:計算值<:301146 31^010: 749.33,實測值:636.7 [M陽 TFA]+。分析計算值C3oH46F3N90)o: C 48.06, H 6.18, N 16.81;實測值C 48.05, H6.19,N 16.83。
化合物47
產(chǎn)率99%(白色固體)。[a]D22 =-69.0 (c = 0.76, MeOH)。 !H NMR (400 MHz, D20): 5 1.33 (m， 1H， //-5), 1.5 (m, 2H， Arg), 1.56 (m， IH, 7/(3 Arg)， 1.63 (m, IH, //-7)， 1.82 (m， 1H， //-8), 2.02 (m, IH, /fp Arg)， 2.33-2.46 (m， 3H, i/-5, i/-7, 7/-8)， 2.67 (dd, IH, J = 16.9 Hz, J = 7.0 Hz， F(3 Asp), 3.01 (dd, IH, J =16.9 Hz, J = 7.0 Hz, H卩Asp), 3.14 (m， 2H,說Arg)， 3.20-3.29 (m, 2H, //-4, //-2 Glc), 3.33 (m， IH,界5 Glc), 3.37-3.45 (m， 2H, Glc, Glc), 3.48 (d, IH, J = 14.7 Hz， //a GIy), 3.67 (dd， IH, J = 6.1 Hz, J = 12.5 Hz, Glc), 3.85
(dd, 1H, J = 1.8 Hz， J = 12.5 Hz, //匿6 Glc), 4.0 (m, 1H, //-6), 4.17-4.3 (m, 3H, i/CH-N, Fa Arg, i/-9)， 4.37-4.44 (m， 3H, i/CH-N, //a Asp, //-3)， 4.48 (d， 1H， J =8.0 Hz， Glc), 4.55 (m, 1H, //a Arg), 4.79 (d, 1H， J = 126.0 Hz, 0//CH-), 4.93 (d, 1H, J = 126.0 Hz, 0//CH-)， 7,51 (m, 1H, N/7 Asp), 8.01 (s, 1H， 7/三 唑)。13C NMR (100.6 MHz, D20): 5 174,9， 174.8， 174.0, 173.0， 171.6, 169.2, 156.7， 143.6, 126.0, 101.4, 76.0, 75.8, 73.0, 69.7, 62.2, 61.9, 60.8, 58.5, 55.8, 54.3， 52.9， 51.6, 51.5, 51.3, 46.7, 42.4, 40.4, 36.2, 33.3, 32.7, 32.2, 30.0, 27.0, 24.4。 MS [ESI+]:計算值CwHpNuC^: 781.34,實測值782.5 [M + H]+。分 析計算值C33H4SF3Nu015: C 44.25, H 5.40, N 17.20;實測值C 44.27, H 5.41, N 17.22。
化合物49
產(chǎn)率99%(白色固體)。[a]D22 =-68.3 (c = 0,77, MeOH)。 ！H NMR (400 MHz, D20): 0.82 (m, 3H, CA), S 1.17-1.33 (m, 3H，界5, C//2)， 1.42-1.66 (m， 5H, 2//y Arg, F卩Arg, C//2, T/-7), 1.83 (m, 1H, //-8), 2.0 (m, 1H, Hp Arg), 2.3-2.46 (m, 3H,仏5， if-7， //-8)， 2.66 (m， 1 H, Cif2), 2.68 (m, 1H, 7/|3 Asp), 2.99 (m, 1H,邵Asp)， 3.13 (m, 2H，說Arg)， 3.24 (m， 1H, 77-4)， 3.46 (d， 1H, J = 14.7 Hz, /fa Gly), 3.99 (m, 1H，界6), 4.1-4.29 (m， 3H, i/CH-N, //a Arg, 77-9), 4.31-4.43 (m， 3H, 7/CH-N, Asp， i/-3), 4.54 (m, 1H, //a Arg)， 7.52 (m, 1H, N/7 Asp), 7.80 (s, 1H, Z/三唑)。3C NMR (100.6 MHz, D20): S 174.6, 174.0， 173.9, 173.0 171.6, 170.8, 169.1, 156.7, 148.1, 124.4, 62.2, 55.8, 52.9， 51.8， 51.6, 51.2， 42.4, 40.4， 36.3, 36.1， 33.2, 32.7, 32.2, 30.6, 30.2, 30.0, 27.0, 24.4, 23.7, 21.4， 13.0。 MS [ESI+]:計算值C2sH43Nn07: 645.33，實測值646.2 [M + H]+。分析計算值 C^oHmFsNuCV C 47.43, H 5.84， N 20,28;實測值C 47.42, H 5.83, N 20.26。
化合物51
產(chǎn)率99%(白色固體)。[a]D22 =-27.3 (c = 0.67, MeOH)。 'H NMR (400 MHz, D20): 5 1.25-1.41 (m, 3H， //-5， C〃2生物素)，1.45-1.67 (m, 8H, 2 Ci72生 物素，2//y Arg, //(3 Arg， i/-7), 1.6S-1.79 (m， 4H， NCH2Cf/2CH20連接子)，1.83(m, 1H, i/-8), 2.02 (m， 1H,鄰Arg), 2.18 (t, 2H， J = 7.2 Hz， C//2生物素)，2.33-2.46 (m, 3H, //-5, i/-7, /f-8), 2.64 (dd, 1 H， J = 16.8 Hz, J = 6.8 Hz, //(3 Asp), 2.69 (dd， 1H, J = 13.2 Hz, J = 4.8 Hz, S/fCH生物素)，3.01 (dd, 1H， J = 16.8 Hz, J = 7.6 Hz,邵Asp), 3.14 (m, 2H,說Arg)， 3.19 (m, 2H， Cft^N連接子)，3.22-3.30 (m， 4H, //-4, S//C-生物素，Cif2N連接子)，3.47 (m, 1H， Ha Gly), 3.48-3.55 (m， 4H, C樂O連接子)，3.56-3.65 (m， 9H, C仏O連接子)，3.99 (m, 1H, 6)， 4.07 (s, 2H, COC柳連接子)，4.12 (s, 2H, COC7/20連接子)，4.16 (m, 1H， 7/—9)， 4.20-4.30 (m, 2H， //CH-N, //a Gly), 4.33-4.43 (m, 4H, i/CH-N， //a Asp, //-3, N77C生物素)，4.47 (s, 2H, NC//2C=) 4.52-4.58 (m, 2H, //a Arg, Ni/C生 物素)，7.49 (m, 1H,脅Asp)， 7.87 (s, 1H, //三唑)。13C NMR (100.6 MHz, D20): 5 174.6, 174.7, 173.9, 172.9, 171.7,71.6, 171.5, 169.2, 144.4, 124.5, 70.0， 69.9, 69.6, 69.4， 68.5， 68.4, 62.1， 62.2, 55.7， 55.4, 52.9， 51.6, 51.4, 51.3， 42.3, 40.4， 39.7， 36.3, 36.2， 36.1， 35.5, 33.9, 33.4， 32.7， 32.2, 30.0, 28.3， 27.7, 27.0, 25.2， 24.4。 MS [ESI+]:計算值(349!178>4160153: 1162.56，實測值1163.6 [M + H]+, 582.4 [M + 2H]2+。分析計算值(351}17^3>^160173: C 47.96, H 6.23, N 17.54; 實測值C 47,97, H 6.24, N 17.56。
化合物53 (異構體混合物)
產(chǎn)率99% (黃色固體)。!H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 U4 (m, 1H, //-5), 1.3-1.53 (m, 4H, 2//y Arg, //(3 Arg， 1.66 (m, 2H, NCH2C /2CH20連 接子)，1.71 (m, 1H, //-8), 1.79 (m， 2H, NCH2C//2CH20連接子)，1.96-2.08 (m, 2H,鄰Arg， T/-7), 2.20 (m, 1H， 2.24 (m, 1H, 7f-8)， 2.52 (m， 1 H,鄰Asp), 2.94 (m, 1H,鄰Asp)， 3.03-3.20 (m, 3H，說Arg， //-4), 3.24 (m, 2H， C//2N連接 子)，3.30 (m, 1H, i/a Gly), 3.34-3.56 (m, 14H, C迅N連接子，Ctf20連接子)， 3.92 (s， 2H, COCi/20連接子)，3.93 (m， 1H, ifCH-N ), 3.96 (s, 2H， COC柳連 接子)，3.99-4.09 (m, 2H, if-6， //a Gly), 4.16 (m， 1H,朋),4.26-4.44 (m, 6H, 7/CH-N, NC//20, //a Asp, //a Arg), 651-6.62 (m, 4H, H芳族熒光素)， 6.7 (m， 2H, H芳族熒光素)，7.27 (m, 1H, N/7骨架)，7.36 (m, 1H, H芳族熒光 素)，7.53 (m, 1H,麗Gly)， 7.58 (m, 3H， NH胍)，7.66 (s, 1H， H芳族熒光素)，
7.92 (s, 1H, //三唑)，8.02 (m, 1H,麗Asp), 8.07 (m， 1H， H芳族熒光素)，8.16 (m, 1H, H芳族熒光素)，8.24 (m， 1H, H芳族熒光素)，8.44 (s, 1H, H芳族熒 光素)，8.53 (m, 1H, N/ZArg), 8.65 (m, 1H, Nif連接子)，8.80 (m, 1H， Ni/連接 子)，9.93 (m, 1H， NF連接子)，10.18 (m, 1H, COO/^). 13C NMR (100.6 MHz, DMSO-d6): S 173.2, 172.6, 170.9, 170.8， 170.5, 169.5， 169.4, 168.6, 168.5, 168.3, 168.2, 168.0, 167.8, 164.6, 159.6, 156.5, 151.8, 144.6, 140.8, 136.3， 134.6 129.2， 129.1, 128.1， 126.4， 124.8, 124.2， 123.6, 123.2， 122.2, 112.6, 109.1， 102.2: 70.2， 70.1， 69.8, 69.7, 69,6, 69.6, 69.4, 68.1， 61.9, 54.8, 52.6, 52.5, 51.1, 50.7, 50.3, 42.6, 36.8, 36.7, 36.1, 35.6, 35.5, 33.8, 33.7, 33.5, 32.8， 32.2, 29.5, 29.2, 29.1, 27.8, 25.3。 MS [ESI+]:計算值(36(^74:^4019: 1294.53,實測值1295,6 [M + H]+, 64S.3 [M + 2H]2+。分析計算值(362117^3^4021: C 52,84, H 5.36， N 13.91;實測值C 52.85， H 5.35, N 13.91 。
流程1
試劑和條件i) H2, Pd/C; ii) Cbz-Cl, TEA, DCM (78%); iii) MsCl, TEA: DCM; iv) NaN3， DMF， 80 °C, (76%兩步)；v) Me3P， H20， DCM (99%)。
<formula>formula see original document page 39</formula>試劑和條件i) H2， Pd/C; ii) Cbz-Cl, TEA, DCM (80%); iii) MsCl, TEA, DCM; iv) NaN3, DMF, 80 °C, (85%兩步)；v) Me3P, H20， DCM (98%)。
流程2
<formula>formula see original document page 40</formula>試劑和條件i) H2, Pd/C; ii) Cbz-Cl, TEA, DCM (75%); iii) MsCl, TEA, DCM; iv) NaN3, DMF, 80 °C, (80%兩步)；v) Me3P， H20， DCM (98%)。
<formula>formula see original document page 40</formula>試劑和條件i) H2, Pd/C; ii) Cbz-Cl, TEA, DCM (60%); iii) MsCl, TEA, DCM; iv) NaN3, DMF, 80 °C, (90%兩步)；v) Me3P, H20, DCM (99%)。
流護<formula>formula see original document page 40</formula>
試劑和條件i) TFA, DCM; ii) NH2Arg(Pmc)GlyOMe, DIC, HOBt; iii) H2, Pd/C; iv) CbzNHAsp(tBu)OH, DIC, HOBt; v) BnOH, Ti(OiPr)4; vi) H2, Pd/C; vii) HATU, HOAt, DIPEA。
流程4
6,5-c"的合成
17 '氾u 21 'tBu 22
i式劑和條件:i) MsCl， TEA, DCM; ii) NaN3, DMF， 80°C, (62%兩步)；iii) H2, Pd-C 10%， MeOH, iv) C5H9C0C1, TEA, DCM (40%兩步)；v)TFA/苯甲硫 醚/l,2-乙二硫醇/苯甲醚90:5:3:2。
7，5-c&.合成
1B tBu '舊u
23
試劑和條件i) MsCl, TEA, DCM; ii) NaN3, DMF, 80°C, (60%兩步)；iii) H2, Pd-C 10%, MeOH, iv) C5H9C0C1， TEA, DCM (43%兩步)；v)TFA/苯甲硫 醚/l,2-乙二硫醇/苯甲醚90:5:3:2。
流護
'王
的合成
'co
HO
\、、、'
、0
,Pmc i, ii Xrg -
、N
'co
、0
,Pmc川，iv, v 'Afg -*■
、N
'co
HN、
Gly 、Asp匸 19舊u
N3 H。\ Gly 25、舊u
、0
Arg
c5h9cohn hS! Gly 、AspZ 26
試劑和條件i) MsCl, TEA, DCM; ii) NaN3, DMF, 80°C， (60%兩步)；iii) H2， Pd-C 10%， MeOH, iv) C5H9C0C1, TEA, DCM (54%兩步)；v)TFA/苯甲石」 醚/l，2-乙二硫醇/苯甲醚90:5:3:2。
流
7，5々rara白勺合成
H〇-
Pmc i, ii
,pmc m, w, v 個rg *"
H。\ Gly 2了 舊u
C5H9COHN—、
試劑和條件i) MsCl, TEA, DCM; ii) NaN3, DMF, 80°C, (75%兩步)；iii) H2, Pd-C 10%; MeOH， iv) C5H9C0C1, TEA, DCM (57%兩步)；v)TFA/苯甲石 醚/l，2-乙二硫醇/苯甲醚90:5:3:2。
流
流程6
"\、
CO"Bu
n = 1, n=2
n= 2, R = Ac n= 2, R = H n= 1, R = Ac n= 1, R = H
42
流程6:假肽和炔丙基2,3,4，6-四-0-乙?；?l3-D-葡萄糖的1,3-二極環(huán) 加成。試劑和條件(a)Na-抗壞血酸,Cu(OAc)2,氾uOH/H20 1:1。
流程7
32 n= 1, R = H 74%
34 n= 2, R - H 72%
試劑和條件6或15,炔丙基2,3,4,6-四-0-乙酰基-P-D-葡萄糖或炔丙基 p-D-葡萄糖，Na-抗壞血酸，Cu(OAc)2, uOH/H20 1:1。
流程8.熒光素和生物素與連接子結合<formula>formula see original document page 44</formula>
試劑和條件(a)炔丙基胺，HBTU, DIPEA， CH2C12 (97%); (b) TFA, CH2C12; (c) 38， TEA, THF; (78%兩步)(d) 39, HBTU， DIPEA, CH2C12; (60%
兩步)。
流程9
C02ffiu a
C02ffiu
42n=l， R-連接子-生物素 80% 43n=l， 11=連接子-熒光素 9]%
N
3、、
C〇2fBu
NHCbz
15 n=2
R
N、 ，N 、N
44n = 2， R二連接子-生物素 50°/。 45n=2， R二連接子-熒光素 92%
試劑和條件6或15和40或41， Na-抗壞血酸，Cu(OAc)2, BuOH/H20
1:1。 <formula>formula see original document page 46</formula><formula>formula see original document page 47</formula>試劑和條件(a) 25, n-己炔,Na-抗壞血酸，Cu(OAc)2， ？BuOH/H20 1:1 i式劑和條件(a) 25, 40, Na-抗壞血酸，Cu(OAc)2, ffiuOH/H20 1:1。
<formula>formula see original document page 48</formula>
流程12
試劑和條件(a) 25, 41, Na-抗壞血酸，Cu(OAc)2, ^BuOH/H20 1:1
<formula>formula see original document page 48</formula>流程A
起始產(chǎn)品的制備
<formula>formula see original document page 49</formula>試劑和條件HC104, AcOtBu, 0°C; ii.大孔樹脂A-21, ClCOCOOMe，-20°C; iii. LiBH4, THF, 0°C; iv. (COCl)2， DMSO， TEA, CH2CI2, -60°C; v. Bn-NH-OHHCl， NaHCO3, EtOH/H^O, 80°C; vi.
權利要求
1.通式(I)的化合物、其鹽、外消旋混合物、單一的對映體、單一的非對映體及其任何比例的混合物id="icf0001" file="S200680013640XC00011.gif" wi="59" he="22" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n的值是1或2；R1是H、(C1-C4)烷基或保護基；R2是H或保護基；X是N3、-NH-R3、-N(R3)2、-NAlkR3、-NH-CO-R3、-NH-CS-R3、-NH-CO-NHR3、-NH-CS-NHR3或id="icf0002" file="S200680013640XC00012.gif" wi="20" he="18" top="5" left = "5" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中Alk＝(C1-C4)直鏈或支鏈烷基R3＝H、保護基、生物活性分子。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有序列RGD的新型環(huán)狀肽擬似化合物，所述化合物用于制備αvβ3和αvβ5整聯(lián)蛋白的適當功能化的拮抗劑，旨在例如治療改變的血管生成現(xiàn)象，或制備診斷上有用的化合物。
文檔編號C07D471/04GK101184755SQ200680013640
公開日2008年5月21日 申請日期2006年3月3日 優(yōu)先權日2005年3月3日
發(fā)明者C·斯科拉斯蒂科, D·阿洛西奧, L·曼佐尼 申請人:米蘭學習大學