專利名稱：：用作抗癌劑的5-(1，3-二芳基-1h-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-多唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，制備它的方法和用作抗癌劑的含有它作為活性成分的組合物。
背景技術(shù)：
：CDC25B是一種磷酸酶，其在細(xì)胞分裂期間在決定G2/M相轉(zhuǎn)變中發(fā)揮了重要作用。抑制CDC25B的活性阻礙了細(xì)胞分裂，因此導(dǎo)致了細(xì)胞死亡；即，這與抗癌作用有關(guān)。在多數(shù)腫瘤中都可見CDC25B過度表達(dá)，包括胃癌(Jpn.J.CancerRes.1997,88,9947)、結(jié)腸癌(ExpCellRes.1998,240,236，Lab.Invest.2001，81，465)、肺癌(CancerRes.1998，58，4082)、腦癌和喉癌(CancerRes.1997，57，2366)、乳腺癌(CancerStatisticsinJapan1997FoundationforPromotionofCancerResearch,Tokyo,Jpn.)等。在CDC25B過度表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠中觀察到乳腺的異常增殖(Oncogene1999,18，4561)。據(jù)才艮道，當(dāng)用致癌物(9，10-二甲基-l，2-苯并蒽)治療轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)容易誘導(dǎo)乳腺癌。因此，CDC25B是開發(fā)抗癌劑的一個(gè)重要靶標(biāo)。即，我們將期望開發(fā)能抑制CDC25B并對正常細(xì)胞有很小毒性的抗癌劑。EP379979Al公開了能用作腺苷拮抗劑的5-(取代-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮)衍生物，其中吡唑基團(tuán)在漆唑5-位上有吡唑并吡咬結(jié)構(gòu)。曰本專利No.55029804公開了5-(取代-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮)衍生物的卣化銀，其中吡唑基團(tuán)在噻唑5-位上有吡唑酮結(jié)構(gòu)，其被用作能抑制模糊和光敏劑中光電效應(yīng)的染料。發(fā)明公開本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-瘞唑烷-2，4-二酮衍生物對CDC25B具有選擇性的抑制活性，對類似的其他砩酸酶具有選擇性并且具有抗癌活性，從而完成了本發(fā)明。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了制備5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了用作抗癌劑的包含5-(1，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物。圖1顯示了使用人腫瘤模型測定幾種侯選抑制劑對抗CDC25B的體內(nèi)抗癌作用。最佳方式本發(fā)明提供了下式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞甲基)-盡唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽X是氫、d-C4烷基、CVC4卣代烷基、囟原子、未被取代或被d-C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4囟代烷氧基、C3-C4烯氧基、CrC4?；Vdo環(huán)烷基烷氧基、CVd。環(huán)烷氧基、羥基、氰基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、囟原子、d-C4烷氧基、Q-C4烯氧基、C2-C4?；⑶杌蛳趸?；其中n是l-5的整數(shù)；和R是氫、d-C4烷基、C2-d烯基、C3-C4炔基、CVC4卣代烷基、CVC4烷氧基烷基或節(jié)基。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在式1中，X是d-C4烷基、d-C(卣代烷基、卣原子、未被取代或被d-C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4卣代烷氧基、C3-do環(huán)烷基烷氧基、Qrde環(huán)烷氧基、羥基、QrC4烯氧基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、卣原子、d-C4烷氧基、CVC4烯氧基、C2C4?；?、氰基或硝基；n是l-3的整數(shù)；和R是氫、d-C4烷基、d-C4鹵代烷基、CrC4烷氧基烷基或芐基。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在式1中，X是異丙基、三氟甲基、叔丁基、溴、氯、碘、乙基、曱氧基、乙氧基、丙氧基、芐氧基、烯丙氧基、環(huán)丙基曱氧基、環(huán)戊氧基、羥基、氟甲氧基、被乙基羧基取代的甲氧基或硝基；Y是氫、曱基、乙基、氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、氰基或硝基；n是l-3的整數(shù)；和R是氫、甲基、乙基、propano、丙基、丙烯基、丙炔基、d-C4氟烷基、爺基或千氧基。在本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，在式1中，X是曱氧基或硝基，其中2-位被溴、氯、甲氧基或硝基取代，4-位被三氟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丙炔氧基、氟曱氧基、碘、千氧基或烯丙氧基取代，3-位和5-位被異丙基、叔丁基、溴、碘、甲氧基、乙氧基、丙氧基、環(huán)丙基曱氧基、環(huán)戊氧基羥基或乙基羧基取代；Y是氫、曱基或乙基；n是1-3的整數(shù)；和R是氫、曱基、乙基、丙基、丙烯基、丙炔基、芐氧基、鈉、芐基或被乙基羧基取代的甲氧基。在式l中，X可以在苯基的1-位至5-位上，優(yōu)選在2-位、3-位、4-位或5-位上。Y可以在1-位至5-位上，優(yōu)選在l-位、2-位或3-位上。在本發(fā)明的最優(yōu)選實(shí)施方案中，式1所示化合物是5-[3-(2-氯-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-硝基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-3-曱基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-三氟甲基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-瘞唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-氯-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2，4-二酮、5-[3-(3-氯-4-丙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜噢唑烷-2，4-二酮、5-3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2,4-二酮、5-[3-(3-溴-4-丙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基_3-曱基-瘞唑烷-2，4-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。除非另有說明，在此術(shù)語"烷基"指的是直鏈或支鏈的具有l(wèi)-4個(gè)碳原子的飽和烴基。除非另有說明，在此術(shù)語"卣素"或"鹵，，指的是卣原子，其包括氟、氯、溴、碟和氟。除非另有說明，在此術(shù)語"烷氧基"指的是O-烷基("烷基，，的定義同上)。除非另有說明，在此術(shù)語"烯基，，指的是具有雙鍵并具有2-4個(gè)碳原子的不飽和烴基。除非另有說明，在此術(shù)語"炔基，，指的是具有三鍵并具有3或4個(gè)碳原子的不飽和烴基。除非另有說明，在此術(shù)語"?；?指的是衍生自脂肪羧酸的芳?；?，例如乙?；⒈；?。除非另有說明，在此術(shù)語"環(huán)烷基烷氧基"指的是具有3-10個(gè)碳原子的基團(tuán)，其中烷氧基與飽和經(jīng)環(huán)相連。除非另有說明，在此術(shù)語"環(huán)烷氧基"指的是具有3-IO個(gè)碳原子的基團(tuán)，其中氧與飽和烴環(huán)相連。除非另有說明，在此術(shù)語"烯氧基"指的是具有3或4個(gè)碳原子的基團(tuán)，其中氧與具有雙鍵的不飽和烴相連。除非另有說明，在此術(shù)語"卣代烷基，，指的是其中氫原子被卣原子取代的烷基(如上定義)。除非另有說明，在此術(shù)語"卣代烷氧基"指的是其中氫原子被卣原子取代的烷氧基(如上定義)。本發(fā)明還提供了式1所示化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。上述鹽可以通過相關(guān)領(lǐng)域的已知方法制備。上述藥學(xué)上可接受的鹽可以是任何藥學(xué)上可接受的鹽，例如有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽和酒石酸鹽，堿金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，或銨鹽。本發(fā)明還提供了制備式1所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，所述方法包括使下式2所示化合物與下式3所示化合物反應(yīng)，得到下式4所示化合物；由式4所示化合物的維爾斯邁爾-哈克(Vilsmeier-Haack)反應(yīng)得到下式5所示化合物；并且使式5所示化合物與噻唑-2，4-二酮反應(yīng)，得到式l所示化合物，其中R是H,或使產(chǎn)物與下式6化合物反應(yīng)，得到式l所示化合物，其中R如下所述其中X、Y、n和R如上所定義；和Z是離去基團(tuán)，其是卣原子，例如氯、溴和碘、甲苯磺酰氧基或甲烷磺酰氧基。本發(fā)明的制備方法可以通過以下方案1表示。[方案IINaOHaq.(d)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>a:乙酸或苯甲酸b:醇，例如甲醇和乙醇，水或有機(jī)溶劑c:無水二曱基甲酰胺(MMF)/三氯氧磷(POCl3)，亞硫酰氯或草酰氯d:氫氧化鈉溶液e:弱酸鹽，例如乙酸鹽和苯曱酸鹽，或弱堿，例如吡啶、胺和苯胺f:有機(jī)溶劑，例如苯和甲苯g:無機(jī)堿，例如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣和碳酸銫，或有機(jī)堿，例如三乙胺和p比咬h:二曱基甲酰胺(DMF)，四氫呋喃(THF)，丙酮，水或其他有機(jī)溶劑。首先，使式2的取代苯乙酮與式3的取代肼反應(yīng)，得到式4的腙衍生物。醇例如甲醇或乙醇、水或其他有機(jī)溶劑可以在這個(gè)反應(yīng)中用作溶劑。優(yōu)選的是，使用醇例如甲醇或乙醇。對于催化劑，可以使用小量的弱酸如乙酸或苯甲酸。然后，使用無水二甲基甲酰胺(DMF)作為溶劑，三氯氧磷(POCl3)、亞硫酰氯或草酰氯，優(yōu)選三氯氧磷作為催化劑，將式4的腙衍生物轉(zhuǎn)化為式5的3-芳基-吡啶基-吡唑-4-曱醛衍生物。接下來，使式5的吡唑甲醛與噻唑烷-2，4-二酮反應(yīng)得到式1的化合物，其中R是H。在這個(gè)反應(yīng)中可以使用苯、甲苯或其他有機(jī)溶劑。優(yōu)選的是，使用苯或甲苯作為溶劑。對于催化劑，可以使用乙酸和哌咬的混合物，或可以單獨(dú)使用弱酸鹽例如乙酸鹽和苯曱酸鹽，或弱堿例如吡啶、胺和苯胺。優(yōu)選的是，使用乙酸和哌啶的混合物。產(chǎn)物可以與式的鹽化合物在堿存在下反應(yīng)，以便得到式1的化合物，其中R不是H。在這個(gè)反應(yīng)中，可以使用二曱基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)、丙酮、水或其他有機(jī)溶劑。優(yōu)選的是，使用二曱基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)作為溶劑。至于堿，可以使用無機(jī)堿如碳酸鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀和碳酸銫，或有機(jī)堿如三乙胺和吡咬。優(yōu)選的是，使用碳酸鉀或碳酸鈉。本發(fā)明還提供了含有式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-蓉唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分的抗癌劑。因?yàn)槭?的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物具有抑制CDC25B磷酸酶的活性，其中該磷酸酶在細(xì)胞分裂期的G2/M相轉(zhuǎn)化中發(fā)揮了重要作用，所以其能有效抑制細(xì)胞分裂。同樣，其在人體內(nèi)對其他磷酸酶有選擇性，并且已經(jīng)證實(shí)在異種移植的棵鼠中能有效破壞人癌細(xì)胞。因此，含有式1所示化合物作為活性成分的抗癌劑或藥物組合物可以通過加入藥學(xué)上可接受的無毒載體、修飾劑、填充劑等而制成口服給藥的制劑，例如片劑、膠囊劑、錠劑、糖漿劑和乳劑。式1所示化合物的給藥劑量可以隨患者的年齡、體重、性別或健康狀況、給藥類型和疾病嚴(yán)重度而變化。10-400mg/天的劑量是體重為約70kg成人的正?？山邮芰??；衔锟梢砸惶旖o予一次或幾次，如醫(yī)師或藥劑師所開處方?jīng)Q定。以下，通過附加實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說明。然而以下實(shí)施例僅用于理解本發(fā)明，它們并不被解釋為對本發(fā)明范圍的限制。實(shí)施例l:制備5-3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基1-塞唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)58)(1)制備(3，，5'-二氟甲氧基)苯乙酮(式2)將(3'，5'-二羥基)苯乙酮(1.00g，6.57mmol)溶解在30mL無水二曱基曱酰胺中。加入碳酸鉀(2.00g，14.45mmol)和碘化鉀(10.91mg，6.57xio-2mmol)，并在80。C下回流1小時(shí)。冷卻到55-60。C后，緩慢逐滴加入氯二氟乙酸甲酯(1.75mL，16.43mmol)并將混合物攪拌30分鐘。在70-80。C下回流3小時(shí)后，將混合物緩慢冷卻到室溫。加入乙酸乙酯(30mL)并用水洗滌混合物(lOmLx2次)。有機(jī)層進(jìn)一步用2N鹽酸溶液(IOmLx3次)和鹽水(IOmLx2次)洗滌。分離有機(jī)層，用無水疏酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮。剩余物通過硅膠色i普(正己烷/乙酸乙酯=10:l)純化得到1.13g(68%)目標(biāo)產(chǎn)物。iH匪R(200MHz，CDC13)62.61(s，3H)，6.58(t,2H,J=74Hz)，7.14(s，1H)，7.55(s,1H)。(2)制備(3'，5'-二氟曱氧基)苯乙酮的苯腙(式4)將(3'，5'-二氟甲氧基)苯乙酮(1.0g，3.97mmol)溶解在20mL無水乙醇中。力口入苯肼(0.39mL，3.97mmol)和催化劑冰醋酸(ll.OOjiL,0.20mmo1)，并在室溫下攪拌混合物3小時(shí)。加入乙酸乙酯(20mL)并用水(IOmLx3次)和鹽水(IOmLx2次)洗滌混合物。有才幾層用無水減<酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮得到1.29g(95。/。)目標(biāo)產(chǎn)物。(3)制備3-(3'，5，-二氟曱氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-曱醛(式5)將三氯氧磷(0.45mL，7.02mol)加入到2mL的無水二甲基甲酰胺中并在0。C下攪拌混合物1小時(shí)。將溶解在5mL無水二曱基甲酰胺中的(3，，5'-二氟甲氧基)苯乙酮的苯腙(1.2g，3.51mmol)緩慢逐滴加入并在70-80。C下攪拌該混合物6小時(shí)。用水水冷卻到0。C后，緩慢逐滴加入30%氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)到7-8。過濾得到的固體并用水洗滌(10mLx3次)。干燥濾出的固體得到0.94g(70。/。)目標(biāo)產(chǎn)物。，HNMR(200MHz,CDC13)36.63(t，2H，J=74Hz)，7.02(s，1H),7.44(d，1H，J=7.5Hz)，7.54(t，2H,J=7.8Hz)，7.63(s,2H),7.79(d,2H，J=8.1Hz)，8.55(s,1H)，10.06(s，1H)。(4)制備5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基I-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)58)將3-(3，5-二氟甲氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-羧基醛(0.50g，1.31mmol)和噢唑烷-2，4-二酮(153.00mg，1.31mmol)加入到20mL的無水曱苯中。加入冰醋酸(3.70nL，6.55xl(T2mmol)和哌。定(7.80jiL，7.86x1(^mmol)作為催化劑并回流12小時(shí)并且使用Dean-Stark捕獲器(trap)除去水。冷卻到室溫后，攪拌6小時(shí)。過濾得到的固體并用二乙基醚洗滌(IOmLx3次)。干燥得到的過濾固體得到0.56g(89%)目標(biāo)產(chǎn)物。iH匪R(200MHz,CDC13)37.24(t，2H，J=74Hz),7.37(s，III),7.41-7.55(m，2H)，7.61(t,2H，J=2.8Hz)，8.06(d，2H，J-7.2Hz)，8.79(s，1H)，12.61(br，1H，NH)。實(shí)施例2:制備5-3-(3,5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-3-甲基-漆唑烷-2，4-二S同(化合物編號(hào)59)將5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基I-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)58，0.10g,0.21mmol)溶解在l.OmL無水二曱基甲酰胺中。在氮保護(hù)氣氛下加入碳酸鈉(26.50mg，0.25mmol)并在10分鐘后加入硤甲烷(20.00nL,0.32mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時(shí)。反應(yīng)完成后加入水。得到的固體用水洗滌(10mLx3次)。干燥固體得到90.0mg(87%)目標(biāo)產(chǎn)物。iH醒R(200MHz，CDCl3)63.26(s,3H)，6.61(t,2H，J=74Hz)，7.03(s，1H)，7.30(s，1H)，7.42(t,1H，J=7.4Hz)，7.54(t,2H，J=7.8Hz)，7.78(d，2H，J=8.1Hz),7.87(s，1H)，8.19(s，1H)。實(shí)施例3:制備5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜3-乙基-漆唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)60)將5-[3-(3，5-二氟-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)58，0.10g，0.21mmol)溶解在1.0mL無水二甲基甲酰胺中。在氮保護(hù)氣氛下加入碳酸鈉(26.5mg，0.25mmol)并在10分鐘后加入溴乙烷(23.90nL,0.32mmo1)。在室溫下攪拌混合物4小時(shí)。反應(yīng)完成后加入水。得到的固體用水洗滌(10mLx3次)。干燥固體得到85.3mg(80%)目標(biāo)產(chǎn)物。'HNMR(200MHz，CDC13)31.29(t,3H,J=7.5Hz),3.83(q，2H，J=7.0Hz)，6.61(t,2H，J-74Hz),7.03(s，1H)，7.31(s，1H)，7.42(t，1H，J=7.5Hz)，7.54(t,2H,J-7.5Hz)，7.79(d，2H，J=9.0Hz)，7.86(s，1H),8.19(s，1H)。實(shí)施例4:制備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)77)(1)制備(3'-溴-4'-乙氧基)苯乙酮的苯腙(式4)將(3，-溴-4'-乙氧基)苯乙酮(4.00g，16.45mmol)溶解在100mL無水乙醇中。加入苯肼(2.14g，19.75mmol)和催化劑水醋酸(9.16jiL，0.16mmol)，并在室溫下攪拌該混合物5小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)完成后，加入50mL乙酸乙酯并用2N鹽酸溶液萃取該溶液(30mLx3次)，并用鹽水洗滌(30mLx2次)。有機(jī)層用無水硫酸鎂干燥得到3.9g(74.3%)白色固體狀目標(biāo)產(chǎn)物。(2)制備3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-曱醛(式5)將三氯氧磷(3.13mL，33.6mmol)加入到2mL無水二曱基曱酰胺中并在0。C氮保護(hù)氣氛下攪拌該混合物1小時(shí)。緩慢逐滴加入溶解在5mL無水二曱基曱酰胺中的(3'-溴-4'-乙氧基)苯乙酮的苯腙(3.90g,11.7mmol)并在70-80。C下攪拌該混合物6小時(shí)。用冰水冷卻到0。C后，緩慢逐滴加入300/。氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)到7-8。用水洗滌得到的固體(IOmLx3次)并干燥得到2.10g(48.4%)目標(biāo)產(chǎn)物。力醒R(300MHz，CDC13)".52(t,3H，J=6.92Hz)，4.19(q，2H，J=6.92Hz)，7.0(d,1H，J=8.55Hz)，7.4-8.15(m,7H),8.52(s，1H),10.04(s，1H)。(3)制備5-3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基卜漆唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)77)將3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-甲醛(0.50g，1.35mmol)和噻唑烷-2,4-二酮(158.40mg，1.35mmol)加入到20mL無水甲苯中。力口入冰醋酸(3.81nL，6.75x10—2mmol)和派咬(8.04jiL，8.10x10-2mmol)作為催化劑并回流3小時(shí)并且使用Dean-Stark捕獲器除去水。冷卻到室溫后，攪拌該混合物6小時(shí)。所得固體用二乙基醚(10mLx3次)洗滌并干燥得到0.52g(82%)目標(biāo)產(chǎn)物。實(shí)施例5:制備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-3-甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)78)將5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)77,0,10g，0.21mmol)溶解在1.00mL無水二甲基甲酰胺中。在氮保護(hù)氣氛下加入氫化鈉(12.74mg，0.32mmol)并在5分鐘后加入碘甲烷(19.78nL，0.32mmol)。在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，加入10mL水并用二氯甲烷萃取該溶液(10mLx2次)。有機(jī)層用鹽水洗涂并用無水硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑。產(chǎn)物用硅膠色譜純化(正己烷/乙酸乙酯=4:1)得到48mg(46.7%)黃色固體狀目標(biāo)產(chǎn)物。，HNMR(300MHz,CDC13)".53(t，3H，J=7.2Hz),3.25(s,3H)，4.19(q，2H，J=7.0Hz)，7.0(d，1H,J=8.4Hz),739-7.55(m，4H)，7.78(d，2H,J=7.8Hz)，7.92(d，2H，J-2.1Hz)，8.17(s，1H)。實(shí)施例6:制備5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞曱基卜3-乙基-噻唑烷-2，4-二酮(化合物編號(hào)79)將5-[3-(3-溴-4-乙氧基-苯基)-l-苯基-lH-吡唑-4-基亞甲基-噻唑烷-2，4陽二酮(化合物編號(hào)77，0.10mg，0.21mmol)溶解在1.00mL無水二甲基甲酰胺中。在氮保護(hù)氣氛下加入氫化鈉(12.74mg，0.32mmol)并在5分鐘后加入溴乙烷(23.72jiL,0.32mmol)。室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，加入lOmL水并用二氯曱烷萃取該溶液(lOmLx2次)。有機(jī)層用鹽水洗滌并用無水硫酸鎂干燥。減壓除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠色鐠純化(正己烷/乙酸乙酯=4:1)得到52mg(49.2%)黃色固體狀目標(biāo)產(chǎn)物。力匪R(300MHz,CDC13)51.28(t，3H，J=7.2Hz)，1.53(t，3H，J=7.1Hz)，3.82(q，2H，J=7.2Hz)，4.18(q，2H，J=6.9Hz)，7.00(d，1H，J=8.7Hz)，7.39(t,1H，J=7.4Hz)，7.49-7.55(m，3H)，7.78(d,2H，J=7.8Hz)，7.89(d，2H，J=16.8Hz)，8.16(s，1H)。下表la-lp給出的化合物以類似于實(shí)施例1-6的方法制備得到。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表lb<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表lc<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表Id<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表le<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表If<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表11<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表lo<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表IP<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>實(shí)施例7:制備含有式1所示化合物作為活性成分的劑型式1的化合物取決于用途能被制成各種劑型。下文給出了含有式1的化合物作為活性成分的劑型的實(shí)例，其并不限制本發(fā)明的范圍。劑型1:片劑(直接壓制)將5.0mg活性成分過篩并與14.1mg乳糖、0.8mg交聚維酮USNF和0.1mg硬脂酸鎂混合。將混合物壓制成片。劑型2:片劑(濕法制粒)將5.0mg活性成分過篩并與16.0mg乳糖和4.0mg淀粉混合。加入溶解在純水中的0.3mg聚山梨酯80并將混合物制粒。干燥后，將顆粒過篩并與2.7mg二氧化硅膠體和2.0mg硬脂酸鎂混合。將顆粒壓成片。劑型3:粉末劑和膠嚢劑將5.0mg活性成分過篩并與14.8mg乳糖、10.0mg聚乙烯吡咯烷酮和0.2mg硬脂酸鎂混合。使用適當(dāng)?shù)难b置將混合物填充到5號(hào)明膠膠嚢中。實(shí)施例8:CDC25B酶測定表達(dá)CDC25B的催化區(qū)(aa378-566)并在大腸桿菌中誘導(dǎo)成為GST融合蛋白，其被用作酶原。酶測定在96孔板中進(jìn)行，將每孔最終的反應(yīng)體積調(diào)節(jié)到200nL。加入溶解在DMSO中的170fiL緩沖液(30mMTris緩沖液，pH8.5，75mMNaCl，0.67mMEDTA,1mMDTT)、20jiL(0.2pg)CDC25B酶和10jiL^皮測化合物，這樣終濃度就為ljig/mLCDC25B和20jimFDP。室溫下培養(yǎng)1小時(shí)后進(jìn)行測定。臨測定前將FDP和DTT加入到緩沖溶液中，這樣就能保持新鮮的狀態(tài)。培養(yǎng)1小時(shí)后，在485nm(激發(fā))和538nm(發(fā)射)處測定由酶反應(yīng)產(chǎn)生的熒光。處理被測化合物使終濃度為10jim以便篩出顯示較高抑制活性的一個(gè)，從中測定ICs。值。對篩過的化合物進(jìn)行處理使終濃度為1、2、5和10nm以便獲得。/。抑制值。如果抑制效果低(在20nm時(shí)小于50%)，那末就將化合物的濃度提高到20jim并獲得。/o抑制值和IC5。值。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>實(shí)施例9:細(xì)J包毒性測定(1)培養(yǎng)癌細(xì)胞A549、HT29和MCF-7用于測定抗癌活性。癌細(xì)胞來自美國國立癌癥研究所(NationalCancerInstitute(NCI))并通過韓國化學(xué)工藝研究所(KoreaResearchInstituteofChemicalTechnology(KRICT))培養(yǎng)，其來源于人腫瘤細(xì)胞系。細(xì)胞在5。/。C02孵育器中于37。C下進(jìn)行恒溫恒濕培養(yǎng)，使用用5%胎牛血清加強(qiáng)的RPMI1640培養(yǎng)介質(zhì)。3-4天接種一次。PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)溶液，其中溶解了0.25%胰島素和3mm反-l，2-二氨基環(huán)己烷-N，N，N，N-四乙酸(CDTA),被用于分離細(xì)胞。(2)活性測定使用SRB(磺酰羅丹明B)測定法，其發(fā)展于1989年通過NCI測定藥物的體外抗癌活性。細(xì)胞用胰島素-CDTA溶液分離并置于96孔微量培養(yǎng)板(Falcon)中，每孔約2xl(^個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞在<:02孵育器中培養(yǎng)24小時(shí)并被加入到培養(yǎng)板的底部。使用抽吸器除去培養(yǎng)介質(zhì)后，在包含細(xì)胞的每個(gè)孔中加入在培養(yǎng)介質(zhì)中被稀釋的化合物78、化合物79和對照藥物多柔比星，對數(shù)劑量(logdose)為6當(dāng)量，3次，每次100mL。將細(xì)胞培養(yǎng)多于48小時(shí)。如果需要的話，使用二曱亞砜(DMSO)溶解化合物。在加入到細(xì)胞前，將稀釋的化合物溶液經(jīng)0,22mL過濾器過濾。培養(yǎng)48小時(shí)后，從每個(gè)孔中除去培養(yǎng)介質(zhì)，并加入lOOmLlO。/o三氯乙酸(TCA)。將培養(yǎng)板保持在4。C1小時(shí)從而將細(xì)胞固定在板中。然后，用水洗滌培養(yǎng)板5-6次，以便完全除去任何殘留的TCA,并在室溫下干燥。向千燥的培養(yǎng)板中加入染色溶液，其中在每個(gè)孔內(nèi)將0.4。/。SRB溶解于100mLl%乙酸溶液中。染色30分鐘后，用1%乙酸溶液洗滌培養(yǎng)板5-6次以除去沒有和細(xì)胞結(jié)合的SRB。染色的細(xì)胞培養(yǎng)板在室溫下進(jìn)行千燥。然后，在每孔中加入100mL10mm不含緩沖劑的trisma堿溶液，并用濃度滴定板振蕩器將培養(yǎng)板振搖10分鐘以洗脫染料。然后，使用酶標(biāo)儀(microplatereader)在520nm下測定吸收率。為了對化合物的抗癌效果進(jìn)行定量，我們計(jì)算了每種情況下的細(xì)胞數(shù)，這些情況是加入藥物(Tz)，細(xì)胞用不含藥物的培養(yǎng)介質(zhì)培養(yǎng)48小時(shí)(C)，并且細(xì)胞在含有藥物的培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)48小時(shí)(T)?？拱┗钚酝ㄟ^以下方程式1和2計(jì)算。方程式1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>方程式2T-Tz抗癌活性=-x100(如果Tz<T)藥物對抗癌細(xì)胞生長的抑制作用通過數(shù)據(jù)回歸獲得，使用了Lotus軟件，以％抑制表示。結(jié)果列于下表3中。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>如表3所示，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物對一些癌細(xì)胞有細(xì)胞毒性，包括A-549(非小細(xì)胞肺癌)、HT29(肝癌)和MCF-7(乳腺癌)。實(shí)施例IO:使用人肺瘤模型比較一些侯選CDC25B抑制劑的體內(nèi)抗癌效果為了驗(yàn)證本發(fā)明化合物的抗癌作用，我們在6-8周大的雄性棵鼠腹壁中皮下注射C33A人子宮癌細(xì)胞系。當(dāng)腫瘤長到約50-80mm3大小時(shí)，分別將化合物78、作為陰性對照的0.2%吐溫80給予到腹腔中。使用順鉑(4mg/kg)作為陽性對照，其被廣泛地用作臨床實(shí)驗(yàn)的抗癌劑。每次給予的劑量是0.25mL，每日一次，連續(xù)給予7天。肺瘤體積通過以下方程式3計(jì)算，通過測徑器測量長短軸。方程式3腫瘤體積-(短軸，mm)2x(長軸，mm)x0.523結(jié)果示于圖1中。如圖所示，化合物78顯示了可與順柏比擬的抗癌活性，但并沒有顯示任何負(fù)面反應(yīng)，例如由順柏的毒性所導(dǎo)致的活動(dòng)減少或缺乏食欲。因此，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物能被用作低毒性的有較小副作用的抗癌劑。工業(yè)實(shí)用性從以上說明中能明顯地看出，式1所示的5-(l，3-二芳基-lH-吡唑-4-基亞曱基)-瘞唑烷-2，4-二酮衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽對CDC25B顯示了較好的抑制活性，其中CDC25B是一種磷酸酶，其在細(xì)胞分裂期間決定G2/M相轉(zhuǎn)變中發(fā)揮了重要作用。此外，鑒于其較小的副作用，例如活動(dòng)減少和缺乏食欲，它們能被用作低毒性的抗癌劑。盡管參考了優(yōu)選實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將能意識(shí)到由此產(chǎn)生的各種變形和替代都不背離本發(fā)明的精神和范圍，如所述權(quán)利要求所示的那樣。權(quán)利要求1.下式1所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(1)其中X是氫、d-C4烷基、d-C4卣代烷基、卣原子、未被取代或被C廠C4烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-Ct卣代烷氧基、OC4烯氧基、CVC4?；3-d。環(huán)烷基烷氧基、CVd。環(huán)烷氧基、羥基、氰基或硝基；Y是氫、d-C4烷基、卣原子、d-C4烷氧基、C3-C4烯氧基、C2-C4酰基、氰基或硝基；n是l-5的整數(shù)；和R是氫、d-C4烷基、CrC4烯基、CVC4炔基、C廣C4鹵代烷基、CrC4烷氧基烷基或千基。2.根據(jù)權(quán)利要求1的式1所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X是d-C4烷基、d-C4卣代烷基、卣原子、未被取代或被d-Ct烷基羧基取代的d-C4烷氧基、d-C4卣代烷氧基、Qrd。環(huán)烷基烷氧基、CVd。環(huán)烷氧基、羥基、CVC4烯氧基或硝基；Y是氫、C「C4烷基、g原子、C廣C4烷氧基、CVC4烯氧基、C2-C4?；⑶杌蛳趸?；n是l-3的整數(shù)；和R是氫、C廣C4烷基、d畫Ct鹵代烷基、Q-C4烷氧基烷基或千基。3.制備下式1所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，所述方法包括使下式2所示化合物與下式3所示化合物反應(yīng)，得到下式4所示化合物；通過維爾斯邁爾-哈克反應(yīng)使式4所示化合物轉(zhuǎn)化為下式5所示化合物；和使式5所示化合物與噻唑-2，4-二酮反應(yīng)，得到式1所示化合物，其中R是H，或使產(chǎn)物與下式6所示化合物反應(yīng)，得到式l所示化合物，其中R如下所述R—Z(6)其中X、Y、n和R如權(quán)利要求1中所定義；和Z是離去基團(tuán)。4.抗癌組合物，其含有藥學(xué)有效量的下式1所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(l)其中X、Y、n和R如權(quán)利要求1中所定義。全文摘要本發(fā)明涉及5-(1，3-二芳基-1H-吡唑-4-基亞甲基)-噻唑烷-2，4-二酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，制備它的方法和用作抗癌劑的含有它作為活性成分的組合物。文檔編號(hào)C07D417/06GK101146804SQ200680009465公開日2008年3月19日申請日期2006年2月3日優(yōu)先權(quán)日2005年3月24日發(fā)明者千惠慶,盧載成,孫范碩,宋寶干,徐珉庭,李啟炯,金亨來,金侊祿,金政基申請人:韓國化學(xué)研究院