專利名稱：20-環(huán)烷基，26,27-烷基/鹵代烷基維生素D₃化合物及其使用方法
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本申請要求2004年9月24日提交的美國臨時專利申請序列號60/612,732的優(yōu)選權，其公開以其整體通過引用并入本文。
背景技術：
自從Mellanby于1920年(Mellanby，E.(1921)Spec.Rep.Ser.Med.Res.Council(GB)SRS 614)發(fā)現(xiàn)維生素D(膽骨化醇)以來，它在高等動物的生物系統(tǒng)中的重要性就是公認的。在1920-1930年間，維生素D正式分類為″維生素″，它是骨骼正常發(fā)育以及維持鈣磷平衡所必需的。
涉及維生素D3代謝的研究始于血漿代謝物25-羥基維生素D3[25(OH)D3](Blunt，J.W.等人(1968)Biochemistry 63317-3322)和激素活性型1α，25(OH)2D3(Myrtle，J.F.等人(1970)J.Biol.Chem.2451190-1196；Norman，A.W.等人(1971)Science 17351-54；Lawson，D.E.M.等人(1971)Nature 230228-230；Holick，M.F.(1971)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 68803-804)的發(fā)現(xiàn)和化學表征。維生素D內分泌系統(tǒng)概念的形成既依賴于腎臟在以謹慎地調節(jié)方式而產生1α，25(OH)2D3的關鍵作用中的正確評價(Fraser，D.R.和Kodicek，E(1970)Nature 288764-766；Wong，R.G.等人(1972)J.Clin.Invest.511287-1291)，還依賴于腸內1α，25(OH)2D3(VD3R)的核心受體的發(fā)現(xiàn)(Haussler，M.R.等人(1969)Exp.Cell Res.58234-242；Tsai，H.C.和Norman，A.W.(1972)J.Biol. Chem.2485967-5975)。
維生素D內分泌系統(tǒng)的運行依賴于以下方面首先，肝臟(Bergman，T.和Postlind，H.(1991)Biochem.J.276427-432；Ohyama，Y.和Okuda，K.(1991)J.Biol.Chem.2668690-8695)和腎臟(Henry，H.L.和Norman，A.W.(1974)J.Biol.Chem.2497529-7535；Gray，R.W.和Ghazarian，IG.(1989)Biochem.J.259561-568)以及多種其它組織中存在的細胞色素P450酶影響維生素D3轉化成生物活性代謝物例如1α，25(OH)2D3和24R，25(OH)2D3；其次，血漿維生素D結合蛋白(DBP)的存在對這些疏水性分子選擇性轉運和遞送至維生素D內分泌系統(tǒng)的各種組織部位的影響(Van Baelen，H.等人(1988)AnnNY Acad.Sci 53860-68；Cooke，N.E.和Haddad，J.G.(1989)Endocr.Rev.10294-307；Bikle，D.D.等人(1986)J.Clin.Endocrinol.Metab.63954-959)；以及第三，廣泛存在于各種靶組織的立體選擇性受體與激動劑1α，25(OH)2D3相互作用產生對該開環(huán)甾類激素所必需的特異性生物反應(Pike，J.W.(1991)Annu.Rev.Nutr.11189-216)。迄今為止，有證據(jù)表明，1α，25(OH)2D3(VD3R)的核心受體存在于30種以上組織和癌細胞系中(Reichel，H.和Norman，A.W.(1989)Annu.Rev.Med.4071-78)。
維生素D3及其激素活性型是公知的鈣磷平衡的調節(jié)劑。已經(jīng)知道，這些化合物刺激以下中的至少一種小腸鈣磷吸收、骨礦物質流動和腎臟中鈣的貯留。此外，發(fā)現(xiàn)特異性維生素D受體存在于30種以上組織中，這驗證了維生素D3是一種除了它對鈣/骨平衡的經(jīng)典作用之外的多向性調節(jié)劑。能夠將維生素D3氧化成其活性型的酶例如25-OHD-1α-羥化酶與在若干組織例如骨、角質化細胞、胎盤及免疫細胞中的特異性受體的組合存在，提出了1α，25(OH)2D3的旁分泌作用。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，維生素D3激素和活性代謝物能夠調節(jié)正常細胞和惡性細胞的細胞增殖和分化(Reichel，H.等人(1989)Ann.Rev.Med.4071-78)。
已知維生素D3及其代謝物的活性，更多的注意力集中到這些化合物的合成類似物的開發(fā)。這些類似物大部分包括在A環(huán)、B環(huán)、C/D環(huán)以及主要的在側鏈上的結構修飾(Bouillon，R.等人，EndocrineReviews 16(2)201-204)。盡管迄今為止開發(fā)的大多數(shù)維生素D3類似物包括在側鏈上的結構修飾，少數(shù)研究已報道了A環(huán)非對映異構體的生物學模式(Norman，A.W.等人J.Biol.Chem.268(27)20022-20030)。此外，已經(jīng)研究了甾族化合物的生物酯化作用(Hochberg，R.B.，(1998)Endocr Rev.19(3)331-348)，而且維生素D3的酯類是已知的(WO97/11053)。
此外，盡管在開發(fā)合成類似物方面付出了巨大的努力，維生素D及其結構類似物的臨床應用，受到由這些化合物施用于已知維生素D化合物的適應癥和應用的個體后所產生的不期望的副作用的限制。
發(fā)明概述 本發(fā)明涉及下式的維生素D3化合物
其中B是單鍵、雙鍵或三鍵；X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；R1是羥基或鹵素；R2、R3和R6各自獨立地是氫、C1-C4烷基、羥基烷基或鹵代烷基，條件是當B是三鍵或者R2和R3與C20一起形成C3-C6環(huán)烷基時，R6不存在；R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基；及其藥學可接受的酯、鹽和前體藥物。
因此，一方面，本發(fā)明提供了式I的維生素D3化合物
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵；X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2； R1是羥基或鹵素； R2和R3與C20一起形成C3-C6環(huán)烷基； R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基； R6是氫、C1-C4烷基、羥基烷基或鹵代烷基，條件是當B是三鍵時R6不存在；和 其藥學可接受的酯、鹽和前體藥物。
另一方面，所述的方法提供了改善鈣磷代謝脫調節(jié)的方法。該方法包括向個體施用治療有效量的式I的維生素D3化合物，以便改善鈣磷代謝脫調節(jié)。
另一方面，本發(fā)明提供了調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在細胞中表達的方法。所述的方法包括將所述的細胞與一定量的式I的維生素D3化合物接觸，以有效地調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在細胞中的表達。
再另一方面，本發(fā)明提供了在個體中治療ILT3-相關障礙的方法。所述的方法包括向個體施用一定量的式I的維生素D3化合物，以有效地調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子的表達，從而在個體中治療ILT3-相關障礙。
更另一方面，本發(fā)明提供了在個體中誘導免疫耐受的方法。所述的方法包括向個體施用一定量的式I的維生素D3化合物，以有效地調節(jié)ILT3表面分子的表達，從而在個體中誘導免疫耐受。
再一方面，本發(fā)明提供了在個體中抑制移植排斥的方法。所述的方法包括向個體施用一定量的式I的維生素D3化合物，以有效地調節(jié)ILT3表面分子的表達，從而在個體中抑制移植排斥。
在再另一種實施方案中，本發(fā)明提供了在需要的個體中預防或治療膀胱功能障礙的方法，其通過施用有效量的式I的維生素D3化合物，從而在所述的個體中預防或治療膀胱功能障礙。
再另一方面，本發(fā)明提供了用于治療維生素D3相關疾病的包裝化配方。所述的包裝化配方包括藥物組合物，其包括式I的維生素D3化合物和藥學可接受的載體，包裝了用于治療維生素D3相關疾病的說明書。
另一方面，本發(fā)明提供了用于治ILT-3相關障礙的包裝化配方。所述的包裝化配方包括藥物組合物，其包括式I的維生素D3化合物和藥學可接受的載體，包裝了用于治療ILT3-相關障礙的說明書。
再一方面，本發(fā)明提供了通過抗原呈遞細胞調節(jié)免疫抑制活性的方法。所述的方法包括將抗原呈遞細胞與一定量的式I的維生素D3化合物接觸，以有效地調節(jié)ILT3表面分子表達，從而通過所述的抗原呈遞細胞調節(jié)免疫抑制活性。
再另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物。所述的組合物包括有效量的式I的維生素D3化合物和藥學可接受的載體。
附圖簡要說明 參考以下非限制性實施例，并參考以下附圖，對本發(fā)明進一步描述如下，其中

圖1顯示在膀胱狀細胞中存在維生素D受體(VDRs)； 圖2顯示骨化三醇(維生素D3的活性型)有效地抑制膀胱狀細胞的基礎生長； 圖3顯示在As4.1細胞中的腎素抑制作用；和 圖4顯示在As4.1細胞中的腎素抑制作用的劑量響應。
發(fā)明詳述 1、定義 在進一步描述本發(fā)明之前，并且為了使本發(fā)明更容易地理解，為方便起見，首先對一些術語在此定義并收集于此。
所述的術語″施用(administration)″或″施用(administering)″包括將所述的維生素D3化合物(類)導至個體的途徑以執(zhí)行它們的預期功能，可以使用的施用途徑的實例包括注射(皮下的、靜脈內的、胃腸外的、腹膜內的、鞘內的)、經(jīng)口、吸入、經(jīng)直腸和經(jīng)皮。當然，該藥物制劑是以適合于各種施用途徑的形式給予。例如，這些制劑是以片劑或膠囊劑的形式、注射劑、吸入劑、洗眼劑、軟膏劑、栓劑等施用，通過注射、輸注或吸入施用；洗液或軟膏劑局部施用；以及栓劑經(jīng)直腸施用。經(jīng)口施用是優(yōu)選的。注射劑可以推注或連續(xù)輸注。根據(jù)施用途徑，所述的維生素D3化合物可以用所選擇的材料包衣或包陷于其中，以保護它避開自然條件，該自然條件可以不利地影響它實現(xiàn)預期功能的能力。所述的維生素D3化合物可以單獨施用，或者與上述任一種另一藥物結合、或與藥學可接受的載體結合、或與兩者結合而施用。維生素D3化合物可以在施用所述的其它藥物之前、與所述的藥物同時或施用所述的藥物之后施用。此外，該維生素D3化合物還可以以前體形式施用，該前體形式在體內轉化成其活性代謝物或更有效的代謝物。
所述的術語″烷基″是指飽和脂肪族基團的基，包括直鏈烷基、支鏈烷基、環(huán)烷(脂環(huán)族的)基、烷基取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基取代的烷基。所述的術語烷基進一步包括烷基，其可進一步包括取代一個或多個碳氫化合物主鏈的碳的氧、氮、硫或磷原子，例如氧、氮、硫或磷原子。在優(yōu)選的實施方案中，直鏈或支鏈烷基在其主鏈中具有30個或更少的碳原子(例如，C1-C30的直鏈、C3-C30的支鏈)，優(yōu)選26個或更少，更優(yōu)選20個或更少，再更優(yōu)選4個或更少。同樣，優(yōu)選的環(huán)烷基在其環(huán)結構中具有3-10個碳原子，并且更優(yōu)選在其環(huán)結構中具有3、4、5、6或7個碳。
此外，整個說明書和權利要求書中的所述術語烷基意欲包括″未取代的烷基″和″取代的烷基″，其中的后者是指烷基部分，其具有在碳氫化合物主鏈的一個或多個碳上取代氫的取代基。該取代基可以包括，例如，鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧化物、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸鹽/酯、膦酸基(phosphonato)、次膦酸基(phosphinato)、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亞胺基、硫氫基、烷基硫代基、芳基硫代基、硫代羧化物、硫酸化物、磺酸化物、氨磺酰基、亞磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或者芳香族或雜芳香族的部分。本領域技術人員可理解，如果合適，在碳氫化合物鏈上取代的該部分其本身可被取代。環(huán)烷基可以進一步被取代，例如被上述取代基取代?！逋榛蓟宀糠质且粋€被芳基(例如，苯甲基(芐基))取代的烷基。所述的術語″烷基″還包括在長度和可能的取代基方面類似于上述烷基的不飽和脂肪族基團，但其分別含有至少一個雙鍵或三鍵。
除非碳數(shù)另有說明，如在此使用的″低級烷基″表示如以上定義的烷基，但在其主鏈結構中具有1至10個碳，更優(yōu)選1至6個，最優(yōu)選1至4個碳原子。低級烷基的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、己基、庚基、辛基等。在優(yōu)選的實施方案中，所述的術語″低級烷基″包括在其主鏈上具有4個或較少碳原子的直鏈烷基，例如，C1-C4烷基。
所述的術語″烷氧基烷基″、″多氨基烷基″和″硫代烷氧基烷基″是指如上述的烷基，其進一步包括取代碳氫化合物主鏈的1個或多個碳的氧、氮或硫原子，例如，氧、氮或硫原子。
所述的術語″烯基″和″炔基″是指在長度和可能的取代基方面類似于上述烷基的不飽和脂肪族基團，但其分別含有至少一個雙鍵或三鍵。例如，本發(fā)明著重于氰基和炔丙基。
所述的術語″抗原″包括引起免疫應答的物質。本發(fā)明耐受性被誘導的抗原，其外源性產生可與或不與宿主相關。例如，本發(fā)明的方法可用于對″自身抗原″誘發(fā)耐受性。自身抗原是身體的一種正常成分，其與自身抗體反應。本發(fā)明還包括對″異型抗原″誘發(fā)耐受性。異型抗原是指一種僅發(fā)現(xiàn)于物種的一些成員中的抗原，例如血型物質。同種異體移植物是給予遺傳學上相同物種不同成員的移植物。同種異體移植物因T淋巴細胞對組織相容性抗原的免疫應答而被排斥。本發(fā)明的方法還提供了對″異種抗原″誘發(fā)耐受性。異種抗原是因不同物種間的差異引起的免疫反應的物質。為此，異種移植物是從一種物種的成員移植至不同物種的成員的移植物。異種移植物通常在少數(shù)幾天內由抗體和細胞毒T淋巴細胞對組織相容性抗原而被排斥。
所述的術語″抗原呈遞細胞″或″APC″包括一種能夠向例如T輔助細胞呈遞抗原的細胞?？乖蔬f細胞包括B淋巴細胞、輔佐細胞或非淋巴細胞，例如樹突狀細胞、表皮黑素細胞和單核吞噬細胞，其有助于通過向輔助T淋巴細胞呈遞抗原而誘發(fā)免疫應答。本發(fā)明的抗原呈遞細胞優(yōu)選是來自骨髓的，并且包括，但不限于樹突狀細胞、巨噬細胞、單核細胞。本發(fā)明的APC可從骨髓、血液、胸腺、表皮、肝臟、胎兒肝臟或脾臟中分離。
所述的術語″抗腫瘤藥″和″抗增殖藥″在此可替換使用，并且包括具有抑制維生素D3-應答細胞增殖的功能特征的藥物，例如，抑制具有該特征的贅生物的發(fā)展或進展，特別是造血贅生物。
如此處使用的所述的術語″芳基″，是指芳基的基，包括5-和6-元單環(huán)芳香族基團，其可以包括0～4個雜原子，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、苯并 唑、苯并噻唑、三唑、四唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪和嘧啶等。芳基還包括多環(huán)稠合的芳香族基團，例如萘基、喹啉基、吲哚基等。這些在環(huán)結構上具有雜原子的芳基還可以指″芳基雜環(huán)基″、″雜芳基″或″雜芳族化合物″。芳族環(huán)可以在一個可多個環(huán)位置被如上述的取代基取代，該取代基例如鹵素、羥基、烷氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧化物、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、磷酸鹽/酯、膦酸基、次膦酸基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞胺基、硫氫基、烷基硫代基、芳基硫代基、硫代羧化物、硫酸化物、磺酸化物、氨磺?；?、亞磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或者芳香族或雜芳香族的部分。芳基還可以與不是芳香族的脂環(huán)族或雜環(huán)的環(huán)稠合或橋接，從而形成多環(huán)(例如，四氫萘)。
所述的術語″自身免疫性疾病″或″自身免疫性障礙″是指免疫系統(tǒng)侵襲宿主的自身組織的疾病。在自身免疫性疾病中，患者的免疫耐受系統(tǒng)不能識別自身的抗原，并且這種耐受性喪失的結果是，造成免疫系統(tǒng)對表達抗原的組織產生影響。免疫耐受障礙包括，但不限于，1型胰島素依賴型糖尿病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、皮炎、腦膜炎、血栓性血小板減少性紫癜、斯耶格倫氏綜合征(Sjogren′ssyndrome)、腦炎、眼色素層炎、眼色素層視網(wǎng)膜炎(uveoretinitis)、白細胞粘附缺陷、類風濕性關節(jié)炎、風濕熱、萊特爾氏綜合征(Reiter′ssyndrome)、牛皮癬關節(jié)炎、進行性全身性硬化癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、天皰瘡、類天皰瘡、壞死性脈管炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化癥、紅斑狼瘡、多發(fā)性肌炎、結節(jié)病、肉芽腫病、血管炎、惡性貧血、CNS炎性障礙、抗原-抗體復合介導的疾病、自身免疫性溶血性貧血癥、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)、格雷夫斯病(Graves disease)、習慣性自然流產、雷諾氏綜合征(Reynard′s syndrome)、腎小球腎炎、皮肌炎(dermatornyositis)、慢性活動性肝炎、腹部疾病、AIDS的自身免疫性并發(fā)癥、萎縮性胃炎、強直性脊柱炎和阿狄森氏病(Addison′sdisease)。
術語維生素D3的″生物活性″包括在應答細胞中由維生素D3化合物引起的所有活性。它包括由這些化合物引起的基因性或非基因性活性(Gniadecki R.和Cabverley MJ.(1998)Pharmacology&Toxicology82173-176；Bouillon，R.等人(1995)Endocrinology Reviews 16(2)206-207；Norman A.W.等人(1992)J.甾族化合物Biochem MoI Biol41231-240；Baran D.T.等人(1991)J.Bone Miner Res.61269-1275；Caffrey J.M.和Farach-Carson M.C.(1989)J.Biol.Chan.26420265-20274；Nemere I.等人(1984)Endocrinology 1151476-1483)。
″膀胱功能障礙″意思是與逼尿肌過度活動伴發(fā)的膀胱疾病，例如，臨床性BPH或膀胱活動過度。在本發(fā)明的上下文中，″膀胱功能障礙″不包括膀胱癌。
所述的術語″骨代謝″包括對骨結構的形成和退化的直接或間接作用，例如骨形成、骨吸收等，其可以最終地影響血清中鈣磷濃度。該術語還意欲包括本發(fā)明化合物對骨細胞的作用，例如破骨細胞和成骨細胞，其可依次導致骨形成和退化。
所述的術語″鈣磷平衡″是指細胞內和細胞外的鈣磷濃度的細微平衡，其由細胞、組織、器官或系統(tǒng)中的鈣磷濃度的波動而觸發(fā)的。起因于對本發(fā)明化合物的直接或間接應答的鈣水平的波動也意欲包含于這些術語中。
所述的術語″癌″是本領域公認的，并且是指上皮或內分泌組織的惡性腫瘤，包括呼吸系統(tǒng)癌、胃腸系統(tǒng)癌、生殖泌尿系統(tǒng)癌、睪丸癌、乳腺癌、前列腺癌、內分泌系統(tǒng)癌和黑素瘤。示例性的癌包括由子宮頸、肺、前列腺、膀胱、乳腺、頭和頸、結腸和卵巢組織形成的那些。所述的術語還包括癌肉瘤，例如，其包括癌性和肉瘤性組織的惡性腫瘤?！逑侔迨侵府a生于腺組織的癌或者其中該腫瘤細胞形成可辨別的腺結構。
所述的術語″手性″是指具有鏡像體無重疊能力(non-superimposability)的特征的分子，而所述的術語″非手性″是指在其鏡像體上能重疊的分子。
所述的術語″非對映體″是指具有2個或更多個不對稱中心的立體異構體，并且它們的分子相互間不為鏡像。
所述的術語″有效量″包括一種量，其以必要的劑量和時間階段有效地達到期望的結果，例如充分治療維生素D3相關狀態(tài)，或者調節(jié)ILT3在細胞中的表達。維生素D3化合物的有效量可以根據(jù)例如疾病狀態(tài)、年齡和個體體重的因素而改變，維生素D3化合物在個體中引起期望的應答的能力。給藥方案可以調節(jié)以提供最佳的治療應答。有效量還是這樣的劑量，其中維生素D3化合物的任何毒性和有害作用(例如，副作用)不及治療有益作用有價值的。
治療有效量的維生素D3化合物(即，有效劑量)可以為約0.001～30μg/kg體重，優(yōu)選約0.01～25μg/kg體重，更優(yōu)選約0.1～20μg/kg體重，再更優(yōu)選約1～10μg/kg、2～9μg/kg、3～8μg/kg、4～7μg/kg或5～6μg/kg體重。本領域技術人員可以理解，某些因素可影響需要有效地治療個體的劑量，包括但不限于疾病或障礙的嚴重性、在先的治療、一般健康和/或個體年齡，以及其它疾病的存在。此外，用治療有效量的維生素D3化合物的個體治療可以包括單次治療，優(yōu)選的，可以包括一連串的治療。在一個實施例中，用約0.1～20μg/kg體重的維生素D3化合物治療個體，每周一次，歷經(jīng)約1～10周，優(yōu)選2～8周，更優(yōu)選約3～7周，再更優(yōu)選歷經(jīng)約4、5或6周。還可以理解，用于治療的維生素D3化合物的該有效劑量可以在特定治療過程中增加或減少。
所述的術語″對映體″是指化合物的2個立體異構體，其為相互間不能重疊的鏡像。2個對映體的等摩爾混合物稱為″外消旋混合物″或″外消旋化合物″。
所述的術語維生素D3的″基因性″活性或作用意欲包括由1α，25(OH)2D3(VD3R)的核心受體介導的那些活性，例如，靶基因的轉錄激活。
所述的術語″鹵代烷基″意欲包括如以上定義的烷基，其被鹵素單、二或多取代，例如，氟甲基和三氟甲基。
所述的術語″鹵素″指-F、-Cl、-Br或-I。
所述的術語″羥基″表示-OH。
如在此使用的，所述的術語″雜原子″表示除碳或氫以外的任何元素。優(yōu)選的雜原子是氮、氧、硫和磷。
所述的術語″平衡″是本領域公認的，表示在內環(huán)境中的靜態(tài)或恒定狀況的維持。
所述的術語″激素分泌″是本領域公認的，并且包括控制對給定激素分泌的轉錄和處理的維生素D3化合物的活性，該激素例如維生素D3應答細胞的甲狀旁腺素(PTH)(Bouillon，R.等人(1995)EndocrineReviews 16(2)235-237)。
所述的術語″高鈣血癥″或″血鈣過高活動″意欲具有其公認的臨床意義，即，鈣血清水平增加，其在個體中呈現(xiàn)以下副作用中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)抑制、肌肉無力、便秘、腹痛、食欲缺乏以及心臟舒張期的低下性松弛。高鈣血癥的癥狀表現(xiàn)為至少一種以下活動刺激而觸發(fā)腸鈣運輸、骨鈣代謝和成骨素(osteocalcin)合成(由Boullion，R.等人(1995)Endocrinology Reviews 16(2)200-257綜述)。
所述的術語″過度增殖″和″腫瘤″可互換使用，并且包括那些具有自發(fā)生長能力的細胞，即，以細胞生長迅速增殖為特征的異常的狀態(tài)或疾病。過度增殖和腫瘤的疾病狀態(tài)可分類為病理的，即，表征或構成疾病狀態(tài)，或者可分類為非病理的，即，偏離于正常但未伴發(fā)疾病狀態(tài)。該術語是指包括所有類型的癌性生長或致癌過程，轉移性組織或惡性變異性細胞、組織或器官，而不考慮組織病理學類型和侵襲階段。″病理性過度增殖″細胞出現(xiàn)于以惡性腫瘤生長為特征的疾病狀態(tài)中。非病理性過度增殖細胞的實例包括與傷口修復相關的細胞增殖。
所述的術語″免疫球蛋白樣轉錄物3″或″ILT3″是指免疫球蛋白超家族的細胞表面分子，其由抗原呈遞細胞(APC)例如單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞表達。ILT3是免疫球蛋白樣轉錄物(ILT)家庭的成員，并呈現(xiàn)出長的胞質尾區(qū)，其含有假想的免疫受體酪氨酸基抑制性基序(ITIM)。當與刺激性受體交聯(lián)時，ILT3顯示出抑制性受體行為。介導信號通路的ILT3的細胞質成分是含有SH2的磷酸酶SHP-1，其與交聯(lián)的ILT3相關。ILT3還被內在化(internalized)，并且ILT3配體有效地呈遞出特異性T細胞(見，例如，Cella，M.等人(1997)J.Exp.Med.1851743)。該候選維生素D3化合物是否調節(jié)ILT3表面分子的表達的測定，其例如可以通過與對照組比較ILT3表面分子表達，通過測定mRNA表達或者通過測定蛋白表達而完成測定。
″ILT3-相關障礙″包括與ILT3分子有相關的疾病、障礙或疾病。ILT3相關障礙包括這種障礙，即其中的ILT3活性異?；蛘呖蓮腎LT3活性調節(jié)獲益的非ILT3活性異常。在一種實施方案中，該ILT3-相關障礙是一種免疫性障礙，例如，一種自身免疫性障礙，如1型胰島素依賴型糖尿病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、皮炎、腦膜炎、血栓性血小板減少性紫癜、斯耶格倫氏綜合征、腦炎、眼色素層炎、眼色素層視網(wǎng)膜炎、白細胞粘附缺陷、類風濕性關節(jié)炎、風濕熱、萊特爾氏綜合征、牛皮癬關節(jié)炎、進行性全身性硬化癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、天皰瘡、類天皰瘡、壞死性脈管炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化癥、紅斑狼瘡、多發(fā)性肌炎、結節(jié)病、肉芽腫病、血管炎、惡性貧血、CNS炎性障礙、抗原-抗體復合介導的疾病、自身免疫性溶血性貧血癥、橋本氏甲狀腺炎、格雷夫斯病、習慣性自然流產、雷諾氏綜合征、腎小球腎炎、皮肌炎、慢性活動性肝炎、腹部疾病、AIDS的自身免疫性并發(fā)癥、萎縮性胃炎、強直性脊柱炎和阿狄森氏??；或者移植排斥，如GVHD。在本發(fā)明的某些實施方案中，ILT3相關障礙是一種免疫性障礙，如移植排斥、移植物抗宿主病和自身免疫性障礙。
所述的術語″免疫應答″包括T和/或B細胞應答，例如，細胞的和/或體液的免疫應答。本發(fā)明要求的方法可用于原發(fā)性和繼發(fā)性免疫應答。個體的該免疫應答可以通過例如測定抗體產生、免疫細胞增殖、細胞因子釋放、細胞表面標記的表達、細胞毒性等而測定。
所述的術語″免疫耐受性(immunological tolerance)″或″耐受抗原″或″免疫耐受性″包括對抗原無應答，不誘導延長的全身性免疫缺陷。因而，根據(jù)本發(fā)明，能耐受的宿主除耐受抗原外還能夠對抗原發(fā)生反應。耐受性表示在個體應答中的誘導抑制，該個體未經(jīng)過誘導耐受性過程，能夠對抗原發(fā)生免疫應答。在本發(fā)明的一種實施方案中，免疫耐受性在抗原呈遞細胞中被誘導，例如，產生于骨髓樣或淋巴樣家族的抗原呈遞細胞、樹突狀細胞、單核細胞和巨噬細胞。
所述的術語″免疫抑制活性″是指抑制正常免疫應答的過程。當淋巴細胞T和/或B克隆量減少或者其反應性被抑制時，該應答中包含擴張或分化。免疫抑制活性可以是抑制或阻斷已經(jīng)進行中的免疫應答的形式，或者可以包括防止誘導免疫應答。激活的T細胞的功能可以被抑制免疫細胞應答或者被誘導特異性耐受性而抑制，或者被二者抑制。T細胞應答的免疫抑制通常是有效的、非抗原特異性的過程，其需要連續(xù)地將T細胞暴露于抑制劑。包括在T細胞中誘導非應答性或無反應性的耐受性，其與免疫抑制的區(qū)別在于，它通常是抗原特異性的，并且在終止暴露于耐受劑(tolerizing agent)后仍然持續(xù)。操作上，耐受性可以通過在無耐受劑時，T細胞對再暴露于特異性抗原的應答缺乏而證實。
所述的術語″改善的生物學性質″是指本發(fā)明化合物的任何內在活性，其在體內增強了它的有效性。在優(yōu)選的實施方案中，該術語是指任何定性或定量的改善維生素D3化合物的治療性質，例如毒性減少，如血鈣過高活動減少。
所述的術語贅生物的″抑制生長″包括延緩、中斷、阻止或終止其生長和轉移，并且不必要表明腫瘤生長完全消失。
所述的短語″免疫應答的抑制″意欲包括減少T細胞增殖和活性，例如，減少IL2、干擾素-γγ、GM-CSF合成和分泌(Lemire，J.M.(1992)J.Cell Biochemistry 4926-31；Lemire，J.M.等人(1994)Endocrinology135(6)2813-2821；Bouillon，R.等人(1995)Endocine Review 16(2)231-32)。
所述的術語″異構體″或″立體異構體″是指具有相同化學結構，但原子和基團在空間上的排列不同的化合物。
所述的術語″白血病(leukemia)″具有其臨床含義，即，一種腫瘤性疾病，其中在細胞發(fā)育的初始階段白細胞成熟被阻止。該疾病的特征在于骨髓中白血病母細胞的數(shù)目增加，以及正常造血細胞生成的不同程度的衰竭。疾病可以是急性或慢性的。進一步地，白血病典型地分類為淋巴細胞性白血病，即其特征在于其細胞與正常淋巴細胞具有相同的特征，或者髓細胞性(或骨髓內生成性)白血病，即其特征在于其細胞具有正常粒細胞的某些特征。急性淋巴細胞性白血病(″ALL″)出現(xiàn)于淋巴組織，并且通常首先表現(xiàn)為出現(xiàn)于骨髓。急性髓細胞性白血病(″AML″)產生于骨髓造血干細胞或它們的后代。術語急性髓細胞性白血病包括數(shù)種白血病亞型原粒細胞白血病、早幼粒細胞白血病和骨髓單核細胞白血病。另外，具有紅細胞性或巨核細胞特征的白血病也稱為骨髓性白血病。
所述的術語″白血病癌″是指所有的造血或免疫系統(tǒng)的癌癥或腫瘤(血液或淋巴系統(tǒng))。急性和慢性白血病，連同其它類型的血液、骨髓細胞(骨髓瘤)和淋巴組織(淋巴瘤)的腫瘤，是造成全部癌癥死亡約10％的原因，還是造成兒童和30歲以下成人全部癌癥死亡約50％的原因。慢性骨髓性白血病(CML)還稱為慢性粒細胞性白血病(CGL)，其為一種造血干細胞的腫瘤障礙。所述的術語″白血病″是本領域公認的，并且是指一種造血器官的進行性、惡性疾病，其標志在于在血液和骨髓中的粒細胞及其前體的畸形的增殖和發(fā)育。
所述的術語″調節(jié)″是指對暴露于本發(fā)明化合物應答的細胞活性增加或減少，例如，動物中至少一個細胞亞群的抑制增殖和/或誘導分化從而達到期望的最終結果，例如治療結果。在優(yōu)選的實施方案中，該短語意欲包括導致病理性障礙的活動過度性疾病。
普通醫(yī)學意義上的所述的術語″腫瘤形成″是指″新細胞生長″，其導致對正常生長控制的應答性喪失，例如指腫瘤細胞生長?！逶錾迨侵讣毎麣v經(jīng)異常高速的生長。然而，如此處使用的，術語腫瘤形成和增生可以互換使用，如上下文所論述的，通常是指細胞經(jīng)歷異常的細胞生長速度。腫瘤形成和增生包括″腫瘤″，其可以是良性的、惡化前的或惡性的。
所述的術語″非基因性″維生素D3活性包括在應答細胞中的由維生素D3化合物引起的細胞活性(例如，穿過組織的鈣轉動)和亞細胞活性(例如，電壓門控鈣通道的開啟的膜鈣轉運，細胞內第二信使的改變)。檢測這些活性的電生理和生物化學技術是本領域已知的。特別充分地研究的非基因性活性的實例是腸內鈣轉運的快速激素性刺激，稱為″轉鈣作用(transcaltachia)″(Nemere I.等人(1984)Endocrinology 1151476-1483；Lieberherr M.等人(1989)J.Biol.Chem.26420403-20406；Wali R.K.等人(1992)Endocrinology 1311125-1133；Wali R.K.等人(1992)Am.J.Physiol.262G945-G953；WaIi R.K.等人(1990)J.Clin.Invest.851296-1303；Bolt MJ.G.等人(1993)Biochem.J.292271-276)。試驗性轉鈣作用的詳細描述提供于Norman，A.W.(1993)Endocrinology 268(27)20022-20030；Yoshimoto，Y.和Norman，A.W.(1986)Endocrinologyl 182300-2304中。鈣活動變化和第二信使系統(tǒng)是本領域公知的，并且充分地綜述于Bouillion，R.等人(1995)Endocrinology Review 16(2)200-257中，其說明書通過引用并入本文。
如此處使用的，所述的術語″獲得″包括購買、合成、分離或其它方面獲得一種或多種用于實施本發(fā)明的維生素D化合物。
如在此使用的，所述的短語″胃腸外施用″和″施用于胃腸外″表示除了腸內和局部施用以外的施用方式。通常通過注射，并且非限制性地包括，靜脈內的、肌內的、動脈內的、鞘內的、囊內的、眶內的、心內的、皮內的、腹膜內的、經(jīng)氣管的、皮下的、表皮下的、關節(jié)內的(intraarticulare)、囊下的、蛛網(wǎng)膜下的、脊柱內的和胸骨內的注射和輸注。
所述的術語″多環(huán)基″或″多環(huán)的基″是指2個或多個環(huán)狀的環(huán)的基(例如，環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基和/或雜環(huán)基)，其中2個或多個碳為兩個鄰接的環(huán)共有，例如，該環(huán)為″稠合環(huán)″。通過非鄰近原子結合的環(huán)稱為″橋接″環(huán)。多環(huán)的各個環(huán)可以被如上述的取代基取代，例如，鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧化物、烷基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸鹽/酯、膦酸基、次膦酸基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞胺基、硫氫基、烷基硫代基、芳基硫代基、硫代羧化物、硫酸化物、磺酸化物、氨磺?；喕酋０被?、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基、烷基芳基或者芳香族或雜芳香族的部分。
所述的術語″前體藥物″包括具有能在體內被代謝的部分的化合物。通常，該前體藥物在體內通過酯酶或通過其它機制被代謝成活性藥物。前體藥物的實例及其用途是本領域公知的(見，例如，Berge等人(1977)″Pharmaceutical Salts″，J.Pharm.Sci 661-19)。前體藥物可以在化合物的最終分離或純化時原位制備，或者分別通過將純化的化合物以其游離酸型或羥基與適合的酯化劑反應。羥基可以通過用羧酸處理而轉化成酯類。前體藥物部分的實例包括取代的和未取代的、分支或未分支的低級烷基酯部分，(例如，丙酸(propionoic acid)酯類)、低級烯基酯類、二低級烷基氨基低級烷基酯類(例如，二甲基氨基乙基酯)、酰氨基低級烷基酯類(例如，乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低級烷基酯類(例如，特戊酰氧基甲基酯)、芳基酯類(苯基酯)、芳基-低級烷基酯類(例如，芐基酯)、取代的(例如，用甲基、鹵素或甲氧基取代基)芳基和芳基-低級烷基酯類、酰胺類、低級-烷基酰胺類、二低級烷芳基酰胺類和羥基酰胺類。優(yōu)選的前體藥物部分是丙酸酯類和?；ヮ?。還包括在體內通過其它機制轉化成活性形式的前體藥物。
化合物的所述的術語″預防有效的抗腫瘤量″，其是指式(I)或在此另外描述的維生素D3化合物的量，其以單或多劑量施用于患者是有效的，以預防或延緩腫瘤疾病狀態(tài)發(fā)病的發(fā)生。
所述的術語″牛皮癬″具有其醫(yī)學含義，即一種疾病，其主要地使皮膚痛苦，并產生隆起、增厚、脫皮(scaling)、非斑痕化損傷。該損傷常常是邊界清楚(sharply demarcated)的紅斑性丘疹，其被重疊的有光澤的鱗屑覆蓋。該鱗屑典型地為銀色或微乳色。累及指甲而經(jīng)常導致剝蝕(pitting)、指甲分離、增厚和變色發(fā)生。牛皮癬有時與關節(jié)炎有關，并且其可以致殘。
所述的術語″毒性減小″意欲包括減小由體內施用維生素D3化合物時引起的不希望的副作用。例如，減小血鈣過高活動。
所述的術語″肉瘤″是本領域公認的，并且是指惡性的間充質細胞誘導的腫瘤。
所述的術語″開環(huán)甾族化合物″是本領域公認的，并且包括甾族化合物環(huán)結構的一個全氫環(huán)戊烷-菲環(huán)是斷開的化合物。1α，25(OH)2D3及其類似物是激素活性的開環(huán)甾族化合物。至于維生素D3，B環(huán)的9-10碳-碳鍵是斷開的，產生斷-B-甾族化合物。維生素D3的正式的IUPAC名稱是9，10-斷膽甾-5，7，10(19)-三烯-3B-醇。為方便起見，在此說明1α，25(OH)2D3的-s-反式構象異構體，其使用標準甾族化合物標記法，具有全部碳原子編號。

在此出現(xiàn)的式中，在環(huán)A上的不同取代基通過以下符號說明與甾族化合物核結合虛線(----)或(

)表示β-取向(即，在環(huán)平面以上)的取代基，楔形實線()表示α-取向(即，在分子平面以下)的取代基，或者波浪線(

)表示可以在環(huán)平面以上或以下的取代基。關于環(huán)A，應當理解，在維生素D領域中的立體化學規(guī)定是與普通化學領域相反的，在普通化學領域中，虛線表示在環(huán)A上的α-取向(即，在分子平面以下)的取代基，并且楔形實線表示在環(huán)A上的β-取向(即，在環(huán)平面以上)的取代基。如所示的，激素1α，25(OH)2D3的A環(huán)在碳1和3上含有2個不對稱中心，各含一個適當特征構型的羥基，即1α-和3β-羥基。換句話說，A環(huán)的碳1和3稱為″手性碳″或″碳中心″。
此外，立體化學交叉表示的碳-碳雙鍵也與普通化學領域相反，在普通化學領域，″Z″是指其通常所指的″順式″(同側)構象，而″E″是指其通常所指的″反式″(對側)構象。如所示的，激素1-α，25(OH)2D3的A環(huán)在碳1和3上含有2個不對稱中心，各含一個適當特征構型的羥基，即1-α-和3-β-羥基。換句話說，A環(huán)的碳1和3稱為″手性碳″或″碳中心″。兩種構型，不論順式/反式和/或Z/E，均為用于本發(fā)明化合物所考慮的。
關于手性中心的命名法，所述的術語″d″和″1″構型由IUPAC推薦所確定。如所用的所述術語，非對映體、外消旋化合物、差向異構體和對映體，這些術語將用于其正常的上下文中以描述制品的立體化學。
而且，在整個專利文獻中，維生素D化合物的A環(huán)常以如以下結構的任一通式描述
其中X1和X2定義為H或＝CH2；或者
其中X1和X2定義為H2或CH2。
盡管未出現(xiàn)任何組合約定，本領域普通技術人員可清楚地理解，式I或II均可表示A環(huán)，其中例如，X1是＝CH2并且X2定義為H2，如下
為了本發(fā)明的目的，式II將用于所有的通用結構。
所述的術語″硫氫基(sulfhydryl)″或″硫羥(thiol)″表示-SH。
所述的術語″個體″包括能夠罹患維生素D3相關狀態(tài)的有機體，或者其可以在其它方面從施用本發(fā)明維生素D3化合物中受益，該個體例如人類或非人類動物。優(yōu)選人類動物，包括罹患難或易于罹患如此處所述的維生素D3相關狀態(tài)的人類患者。本發(fā)明所述的術語″非人類動物″包括所有的脊椎動物，例如，哺乳動物，例如，嚙齒類，例如，小鼠，以及非哺乳動物例如非人類的靈長類、羊、犬、牛、雞、兩棲動物、爬行類動物等。
如在此使用的，所述的短語″全身施用″、″施用于全身″、″周圍施用″和″施用于周圍″表示維生素D3化合物(類)、藥物或其它材料的施用，以致其進入患者的全身，并且因此其歷經(jīng)代謝和其它類似過程，例如，皮下施用。
本發(fā)明的維生素D3化合物的所述術語″治療有效的抗腫瘤量″是指一種化合物的量，在抑制腫瘤維生素D3-應答細胞的生長，或在延長患有該瘤細胞的患者生存能力中，該量在單次或多次施用于患者時是有效的，以超過無該治療時所期待的效果。
所述的術語″移植排斥″是指直接抑制從其他的人類供體(同種異體移植類)或者從其他物種例如羊、豬或非人類的靈長類(異種移植物類)所移植的器官的免疫反應。因此，本發(fā)明的該方法可用于預防對從其他的人類供體(同種異體移植類)或者從其他物種(異種移植物類)所移植的器官的免疫反應。用于移植的該組織包括，但不限于，心臟、肝臟、腎臟、肺臟、胰臟、胰島、骨髓、腦組織、角質層、骨、腸、皮膚、和造血細胞。在該定義中還包括的是″移植物抗宿主病(GVHD)″，其是一種疾病，其中該移植物細胞侵入抑制宿主的免疫應答。因此，在移植骨髓或淋巴組織以治療例如急性白血病、再生障礙性貧血和酶或免疫缺陷時失配情況下，本發(fā)明的方法可用于抑制移植物抗宿主病。所述的術語″移植排斥″還包括以器官功能喪失為特征的疾病癥狀。例如，腎排斥反應的特征是血中肌酸水平升高。心臟排斥反應的特征是心內膜心肌活檢(endomyocardial biopsy)，而胰臟排斥反應的特征是血糖水平升高。肝臟排斥反應的特征是血中肝源性轉氨酶水平和膽紅素水平。腸排斥反應是通過活組織檢查測定的，而肺排斥反應是通過血氧合測定法測定的。
所述的術語維生素D受體(″VDR″)意欲包括受體的II型類別的甾族化合物/甲狀腺超家族的成員(Stunnenberg，H.G.(1993)Bio Essays15(5)309-15)，在配體缺乏時其能夠通過維生素D應答單元(VDRE)結合并反向激活(transactivate)(Damm等人(1989)Nature 339593-97；Sap等人，Nature 343177-180)。
所述的術語″VDRE″是指以正向重復半位排列組成的DNA序列。本領域已知，II型受體不結合它們的各自結合位點為同型二聚體，但需要輔助因子RXR(例如RXRα、RXRβ、RXRγ)以高親和力結合(Yu等人(1991)Cell 671251-1266；Bugge等人(1992)EMBO J.111409-1418；Kliewer等人(1992)Nature 355446-449；Leid等人(1992)EMBOJ.111419-1435；Zhang等人(1992)Nature 355441-446)。
所述的術語″維生素D3相關狀態(tài)″是一種通過施用一種或多種本發(fā)明化合物而預防、治療或另外改善的狀態(tài)。維生素D3相關狀態(tài)包括ILT3-相關障礙、以維生素D3-應答細胞的異常活性為特征的障礙、以鈣磷代謝的脫調節(jié)為特征的障礙和其它在此描述的障礙或狀態(tài)。
所述的術語″維生素D3-應答細胞″包括能夠對具有式I或其它在此描述的維生素D3化合物產生應答的任何細胞，或者是與包括過度增殖的皮膚細胞、甲狀旁腺細胞、瘤細胞、免疫細胞和骨細胞的異?；钚缘恼系K相關的細胞。這些細胞能對維生素D3活化產生應答，其通過觸發(fā)基因性和/或非基因性應答，該應答最后導致細胞增殖的調節(jié)，分化殘余物和/或其它細胞活性例如激素分泌。在優(yōu)選的實施方案中，細胞的最終應答是細胞增殖的抑制和/或特定基因的誘導分化。示例性的維生素D3應答細胞包括免疫細胞、骨細胞、神經(jīng)元細胞、內分泌細胞、瘤細胞、表皮細胞、內皮細胞、平滑肌細胞等。
關于手性中心的命名法，術語″d″和″1″構型是由IUPAC推薦定義的。至于應用的所述的術語，非對映體、外消旋化合物、差向異構體和對映體將在其正規(guī)的上下文中使用以描述制品的立體化學。
2、本發(fā)明的維生素D3化合物 本發(fā)明的維生素D3化合物的突出特征包括1，3-二羥基取代于A環(huán)、20-環(huán)丙基在側鏈以及1 6-烯雙鍵在B環(huán)。Manchand等人的美國專利6,492,353Bl描述了1，3-二羥基，20-環(huán)丙基維生素D3化合物。然而，任何特別地描述于美國專利6,492,353Bl中的該化合物被排除在所附權利要求之外。
以上式I的維生素D3化合物產生完整的1，25(OH)2D3生物活性譜，例如與特異性核心受體VDR結合、抑制在5，6-腎切除大鼠中甲狀旁腺激素水平的增加、抑制MLR細胞中INF-γ的釋放、刺激HL-60白血病細胞分化以及抑制實體瘤細胞增殖。公知的是，體內和細胞培養(yǎng)1，25-(OH)2D3歷經(jīng)由24R-羥化酶影響而引起的代謝修飾的級聯(lián)。首先形成24R-羥基代謝產物，其被氧化成24-酮中間體，然后23S-羥基化并斷裂產生完全無活性的維生素D3-23羧酸(calcitroic acid)。
為此，一方面，本發(fā)明提供了式I的維生素D3化合物
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2； R1是羥基或鹵素； R2和R3與C20一起形成C3-C6環(huán)烷基； R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基； R6是氫、C1-C4烷基、羥基烷基或鹵代烷基，條件是當B是三鍵時R6不存在；和 藥學可接受的酯類、鹽類及其前體藥物。
在一種實施方案中，R1是羥基。在另一種實施方案中，B是單鍵、雙鍵或三鍵。在另一種實施方案中，X1是CH2并且X2是H2，或者均為H2。在進一步的實施方案中，R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基，優(yōu)選烷基或三鹵代烷基，優(yōu)選甲基或三氟甲基。在另一種實施方案中，R2和R3與C20一起形成C3-C6環(huán)烷基，優(yōu)選環(huán)丙基。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了式I-a的維生素D3化合物
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和 R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
在進一步的實施方案中，X1是CH2并且X2是H2。在優(yōu)選的實施方案中，B是三鍵，并且R4和R5是烷基或鹵代烷基。優(yōu)選的，R4和R5優(yōu)選為烷基或三鹵代烷基，優(yōu)選甲基或三氟甲基。在另一種實施方案中，B是雙鍵并且R4和R5為鹵代烷基，優(yōu)選三鹵代烷基，優(yōu)選三氟甲基。在再一優(yōu)選的實施方案中，B是單鍵并且R4和R5是烷基，優(yōu)選甲基。
在另一種實施方案中，X1和X2各自是H2。在優(yōu)選的實施方案中，B是三鍵并且R4和R5是烷基或鹵代烷基。優(yōu)選的，R4和R5是烷基或三鹵代烷基，優(yōu)選甲基或三氟甲基。在另一優(yōu)選的實施方案，B是雙鍵并且R4和R5是鹵代烷基，優(yōu)選三鹵代烷基，優(yōu)選三氟甲基。在再一種實施方案中，B是單鍵并且R4和R5是烷基，優(yōu)選甲基。
本發(fā)明的其它優(yōu)選的化合物包括如下1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(1)、1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇(2)、1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(3)、1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(4)、1，25-二羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(5)、1，25-二羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇(6)、1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(7)、1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇(8)、1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇(9)和1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(10)。
本發(fā)明另外優(yōu)選的化合物包括如下1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(11)、1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(12)、1α-氟-25-羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇(13)和1α-氟-25-羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇(14)。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物概述于表1中。
表1
aX2是H2。b順式烯烴。
本發(fā)明另外優(yōu)選的化合物概述于表2中。
表2
aX2是H2。b順式烯烴。
本發(fā)明某些化合物的結構包括不對稱碳原子。相應地，產生于該不對稱的異構體(例如，所有的對映體和非對映體)包括在本發(fā)明的范圍內，除非另有說明。該異構體可以通過經(jīng)典的分離技術和/或通過立體化學控制合成而獲得基本上純凈的形式。
天然產生的或合成的異構體可以以本領域已知的多種方式分離。分離兩個對映體的外消旋混合物的方法包括使用手性固定相的色譜法(見，例如，″Chiral Liquid Chromatography，″WJ.Lough，Ed.Chapmanand Hall，New York(1989))。對映體還可以通過經(jīng)典的分離技術分離。例如，形成非對映體的鹽以及分步結晶可用于分離對映體。對于羧酸類的對映體的分離，該非對映體的鹽類可通過添加對映體純的手性堿類例如番木鱉堿、奎寧、麻黃堿、馬錢子堿等而形成。另外，非對映體的酯類可以用對映體純的手性醇例如甲醇而形成，接著分離該非對映體的酯類并水解，產生游離的、對映體富集的羧酸。對于氨基化合物的光學異構體的分離，添加手性的羧酸或磺酸類，例如樟腦磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸可以導致非對映體的鹽類的形成。
3、本發(fā)明的維生素D3化合物的用途 一方面，本發(fā)明提供了治療個體的維生素D3相關狀態(tài)的方法，包括向所述需要的個體施用有效量的本發(fā)明式I的維生素D3化合物，該式I化合物包括式Ia和Ib的化合物類，并且優(yōu)選其中的上述化合物，這樣所述的個體治療了所述的維生素D3相關狀態(tài)。
在一種實施方案中，該方法進一步包括獲得該維生素D3化合物的步驟。在另一種實施方案中，該方法進一步包括鑒別需要治療維生素D3相關狀態(tài)的個體。
在進一步的實施方案中，該維生素D3相關狀態(tài)是ILT3-相關障礙。在另一種實施方案中，該ILT3-相關障礙是免疫障礙。在另一種實施方案中，該免疫障礙是自身免疫性障礙。
在另一種實施方案中，該自身免疫性障礙選自1型胰島素依賴型糖尿病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、皮炎、腦膜炎、血栓性血小板減少性紫癜、斯耶格倫氏綜合征、腦炎、眼色素層炎、眼色素層視網(wǎng)膜炎、白細胞粘附缺陷、類風濕性關節(jié)炎、風濕熱、萊特爾氏綜合征、牛皮癬關節(jié)炎、進行性全身性硬化癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、天皰瘡、類天皰瘡、壞死性脈管炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化癥、紅斑狼瘡、多發(fā)性肌炎、結節(jié)病、肉芽腫病、血管炎、惡性貧血、CNS炎性障礙、抗原-抗體復合介導的疾病、自身免疫性溶血性貧血癥、橋本氏甲狀腺炎、格雷夫斯病、習慣性自然流產、雷諾氏綜合征、腎小球腎炎、皮肌炎、慢性活動性肝炎、腹部疾病、AIDS的自身免疫性并發(fā)癥、萎縮性胃炎、強直性脊柱炎和阿狄森氏病。
在另一種實施方案中，該免疫障礙是移植排斥。
在另一種實施方案中，該自身免疫性障礙是I型胰島素依賴型糖尿病。
在再一種實施方案中，該維生素D3相關狀態(tài)是一種以維生素D3-應答細胞的異?；钚詾樘卣鞯恼系K。在另一種實施方案中，該障礙包括過度增殖皮膚細胞的異常活性。在再一種實施方案中，所述的障礙選自牛皮癬、基底細胞癌和角化病。
在另一種實施方案中，該障礙是牛皮癬。在另一種實施方案中，用于治療牛皮癬的該維生素D3化合物具有式I-a
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和 R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
在另一種實施方案中，維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
在另一種實施方案中，該障礙包括內分泌細胞的異?；钚?。在另一種實施方案中，該內分泌細胞是甲狀旁腺細胞，并且該異常活性是甲狀旁腺激素的處理和/或分泌。
在再一種實施方案中，該障礙是繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥。
在再另一種實施方案中，該障礙包括骨細胞的異常活性。在進一步的實施方案中，障礙選自骨質疏松癥、骨營養(yǎng)不良、老年性骨質疏松癥、骨軟化癥、佝僂病、囊性纖維性骨炎和腎性骨營養(yǎng)不良。在一種實施方案中，該障礙是骨質疏松癥。在另一種實施方案中，用于治療骨質疏松癥的該維生素D3化合物具有式I-a
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和 R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
在進一步的實施方案中，用于治療骨質疏松癥的該維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，用于治療骨質疏松癥的該維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
在另一種實施方案中，該障礙是肝硬化或慢性腎臟病。
在另一種實施方案中，該障礙是高血壓。
在另一種實施方案中，該本發(fā)明化合物抑制腎素的表達，從而治療個體的高血壓。在另一種實施方案中，該用于抑制凝乳酶(rennin)表達的維生素D3化合物具有式I-a
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和 R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
在另一種實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物具有式I-b
其中 B是單鍵、雙鍵或三鍵； X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和 R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1α-氟-25-羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
在進一步的實施方案中，該用于抑制凝乳酶表達的維生素D3化合物是1α-氟-25-羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
在另一種實施方案中，該障礙是良性的前列腺肥大。
在另一種實施方案中，該障礙是腫瘤疾病。在進一步的實施方案中，該腫瘤疾病選自白血病，淋巴瘤，黑素瘤，骨肉瘤，結腸癌，直腸癌，前列腺癌，膀胱癌和肺臟、乳腺、胃腸道和生殖泌尿道的惡性腫瘤。在另一種實施方案中，該腫瘤疾病是膀胱癌。
在另一種實施方案中，該障礙是神經(jīng)元缺失。在進一步的實施方案中，該障礙是選自阿耳茨海默氏病、皮克氏病、帕金森氏病、血管疾病、亨延頓氏病和年齡相關記憶缺陷。
在另一種實施方案中，該障礙是眼色素層炎。
在另一種實施方案中，該障礙是間質性膀胱炎。
在另一種實施方案中，該障礙是以維生素D3-應答的平滑肌細胞的異常活性為特征。在一種實施方案中，該障礙是子宮肌瘤。在另一種實施方案中，該障礙是過度增殖性血管疾病，其選自高血壓誘導的血管重構、血管再狹窄和動脈粥樣硬化。在再另一進一步的實施方案中，該障礙是動脈性高血壓。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了改善鈣磷代謝脫調節(jié)的方法，包括向個體施用治療有效量的本發(fā)明化合物，以便改善鈣磷代謝脫調節(jié)。在進一步的實施方案中，該鈣磷代謝脫調節(jié)導致骨質疏松癥。
在再一種實施方案中，本發(fā)明提供了調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在細胞中的表達的方法，包括將所述細胞與有效量的本發(fā)明化合物接觸以調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在所述細胞中的表達。在另一種實施方案中，該細胞是在個體內。
在再另一種實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中治療ILT3-相關障礙的方法，包括向個體施用有效量的本發(fā)明化合物以調節(jié)該ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中治療所述的ILT3-相關障礙。在一種實施方案中，該ILT3-相關障礙是免疫障礙。在另一種實施方案中，該免疫障礙是自身免疫性障礙。在另一種實施方案中，該自身免疫性障礙是胰島素依賴型糖尿病。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中誘導免疫耐受的方法，包括向個體施用有效量的本發(fā)明化合物以調節(jié)該ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中誘導免疫耐受性。在一種實施方案中，該免疫耐受性是在抗原呈遞細胞中被誘導的。在一種實施方案中，該抗原呈遞細胞選自樹突狀細胞、單核細胞和巨噬細胞。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中抑制移植排斥的方法，包括向個體施用有效量的本發(fā)明化合物以調節(jié)該ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中抑制移植排斥。在一種實施方案中，該移植是實體器官移植。在一種實施方案中，該移植是胰島移植。在一種實施方案中，該移植是骨髓移植。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了通過抗原呈遞細胞調節(jié)免疫抑制活性的方法，包括將抗原呈遞細胞與有效量的本發(fā)明化合物接觸以調節(jié)ILT3表面分子表達，從而通過所述抗原呈遞細胞調節(jié)所述免疫抑制活性。
在進一步的實施方案中，該細胞是抗原呈遞細胞。在另一種實施方案中，抗原呈遞細胞選自樹突狀細胞、單核細胞和巨噬細胞。
在再一種實施方案中，本發(fā)明提供了在需要的個體中預防或治療膀胱功能障礙的方法，其通過施用有效量的本發(fā)明化合物，從而在所述的個體中預防或治療膀胱功能障礙。
在一種實施方案中，該膀胱功能障礙的特征在于存在膀胱肥大。在另一種實施方案中，該膀胱功能障礙是活動過度性膀胱。在另一種實施方案中，該個體是雄性動物。在另一種實施方案中，該雄性動物同時罹患BPH。在一種實施方案中，該個體是雌性動物。
在進一步的實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中該維生素D3化合物與藥學可接受的載體組合施用。
在再一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中所述的維生素D3化合物使用藥學可接受的配方向該個體施用。
在再另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中在該藥學可接受的配方向該個體施用后，所述的藥學可接受的配方向個體提供了所述維生素D3化合物持續(xù)釋放達至少4周。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中所述免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子的表達是增量調節(jié)。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中該化合物是與藥學可接受的稀釋劑或載體一起配制于藥物組合物中。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中所述的化合物是維生素D受體激動劑。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中該個體哺乳動物，優(yōu)選人。
在進一步的實施方案中，該化合物是經(jīng)口施用。在另一種實施方案中，該化合物是靜脈內施用。在另一種實施方案中，該化合物是局部施用。在另一種實施方案中，該化合物是胃腸外施用。
在再一種實施方案中，該化合物是以0.001μg-100μg/kg體重的濃度施用。
另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，包括有效量的本發(fā)明化合物和藥學可接受的稀釋劑或載體。在一種實施方案中，該有效量治療維生素D3相關狀態(tài)是有效的。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是ILT3-相關障礙。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是一種具有維生素D3-應答細胞異常活性的特征的障礙。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是膀胱功能障礙。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中所述的障礙是高血壓。
一方面，本發(fā)明提供了包裝化配方以用于治療維生素D3相關狀態(tài)，該包裝化配方包括含有本發(fā)明化合物的藥物組合物和指令說明，以用于治療維生素D3相關狀態(tài)。在一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種包裝化配方，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是ILT3-相關障礙。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了包裝化配方，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是一種具有維生素D3-應答細胞異?；钚缘奶卣鞯恼系K。在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了包裝化配方，其中所述的維生素D3相關狀態(tài)是膀胱功能障礙。
在某些實施方案中，本發(fā)明所述的方法包括向個體施用與另一種藥學活性化合物組合的治療有效量的維生素D3化合物。藥學活性化合物的實例包括已知治療自身免疫性障礙的化合物，例如，免疫抑制劑如環(huán)胞菌素A、雷帕霉素、desoxyspergualine、FK506、甾族化合物、硫唑嘌呤、抗-T細胞抗體和T細胞亞群的單克隆抗體。其它可以使用的藥學活性化合物可以在Harrison′s Principles of Internal Medicine，Thirteenth Edition，Eds.T.R.Harrison等人McGraw-Hill N.Y.，NY和Physicians Desk Reference 50th Edition 1997，Oradell New Jersey，Medical Economics Co.中找到，其全部內容通過引用明確地并入本文。該維生素D3化合物和該藥學活性化合物可以在同一藥物組合物中或在不同的藥物組合物中(同一時間或不同時間)施用于該個體。
A、過度增殖性疾病 另一方面，本發(fā)明提供了一種治療個體的以維生素D3-應答細胞異?；钚詾樘卣鞯恼系K的方法。該方法包括向該個體施用有效量的式I的或其它在此描述的維生素D3化合物的藥物組合物，從而調節(jié)了該細胞活性。
在某些實施方案中，該治療的細胞是過度增殖的細胞。如下面更詳細地描述的，本發(fā)明維生素D3化合物可用于抑制多種增生性和瘤性組織的增殖。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的維生素D3化合物可用于治療病理性和非病理性的、以不需要維生素D3-應答細胞生長為特征的增殖性疾病，例如，過度增殖的皮膚細胞、免疫細胞和具有變異細胞的組織，例如，癌、肉瘤和白血病。在其它實施方案中，該治療的細胞是異常分泌細胞，例如，甲狀旁腺細胞、免疫細胞。
由于它們的血鈣過高作用，維生素D化合物在治療過度增殖疾病中的用途受到限制。為此，本發(fā)明的維生素D3化合物可提供一種較低毒性的、當前治療方法所另選的方法。
在一種實施方案中，本發(fā)明描述了一種抑制增殖和/或誘導過度增殖皮膚細胞分化的方法，該過度增殖皮膚細胞例如表皮或上皮細胞，例如角質化細胞，該方法通過將該細胞與本發(fā)明的維生素D3化合物接觸。通常，所述的方法包括將病理性或非病理性過度增殖細胞與有效量的該維生素D3化合物接觸的步驟，以促進過度增殖細胞的分化。本方法可以在培養(yǎng)的細胞中執(zhí)行，例如，體外或離體，或者可在存在于動物個體中的細胞中執(zhí)行，例如，作為體內治療方案的一部分。該治療方案可以在人或任何其它動物個體上實現(xiàn)。
本發(fā)明的維生素D3化合物of可用于治療過度增殖皮膚障礙。示例性的障礙包括，但不限于，牛皮癬、基底細胞癌、角質化障礙和角化病。這些障礙的其它實例包括濕疹；狼瘡相關性皮膚損傷；牛皮癬關節(jié)炎；包含襯于關節(jié)囊的上皮相關細胞的過度增殖和炎癥的類風濕性關節(jié)炎；皮炎例如脂溢性皮炎和日光性皮炎；角化病例如脂溢性角化病、老年性角化病、光化性角化病、光誘導的角化病和毛囊角化?。粚こｐ畀?；瘢痕疙瘩和抗瘢痕疙瘩形成的預防；痣；疣，其包括贅肉、濕疣或尖銳濕疣和人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染例如性病疣；粘膜白斑??；扁平苔癬；和角膜炎。
在說明性實施例中，本發(fā)明的維生素D3化合物在治療例如牛皮癬的疾病中，通過向需要治療的個體施用有效量的這些化合物，可用于抑制角質化細胞的過度增殖。所述的術語″牛皮癬″具有其醫(yī)學含義，即一種疾病，其主要地使皮膚痛苦，并產生隆起、增厚、脫皮(scaling)、非斑痕化損傷。該損傷常常是邊界清楚(sharply demarcated)的紅斑性丘疹，其被重疊的有光澤的鱗屑覆蓋。該鱗屑典型地為銀色或微乳色。發(fā)生經(jīng)常累及指甲而導致剝蝕(pitting)、指甲分離、增厚和變色。牛皮癬有時與關節(jié)炎有關，并且其可以致殘。角質化細胞過度增殖是牛皮癬表皮增生以及表皮炎癥和角質化細胞分化減少的主要特征。已援引多種機理來解釋該以牛皮癬為特征的角質化細胞過度增殖。在牛皮癬的發(fā)病機理中還涉及患病的細胞免疫。
B、瘤形成 本發(fā)明還描述了抑制增殖和/或逆轉維生素D3-應答過度增殖細胞的轉變的表型的方法，該方法通過將該細胞與式I或其它在此描述的維生素D3化合物接觸。通常，所述的方法包括將病理性或非病理性過度增殖細胞與有效量的本發(fā)明的維生素D3化合物接觸的步驟，以促進過度增殖細胞的分化。本方法可以在培養(yǎng)的細胞中執(zhí)行，例如，體外或離體，或者可以在存在于動物個體中的細胞中執(zhí)行，例如，作為體內治療方案的部分。該治療方案可以在人或其它個體上實現(xiàn)。
式I或其它在此描述的維生素D3化合物可以最初在體外測定其對瘤細胞增殖的抑制作用。可使用的細胞系的實例是變異細胞，例如，人早幼粒細胞(promyeloid)白血病細胞系HL-60和人骨髓性白血病U-937細胞系(Abe E.等人(1981)Proc.Natl.Acad.Sd.USA 784990-4994；Song L.N.和Cheng T.(1992)Biochem Pharmacol 432292-2295；Zhou J.Y.等人(1989)Blood 7482-93；美國專利5,401,733；U.S.5,087,619)?；蛘撸景l(fā)明的維生素D3化合物的抗腫瘤作用可以在體內測定，其使用本領域已知的和在Bouillon，R.等人(1995)EndocrineReviews 16(2)233(表E)中概述的各種動物模型，其通過引用并入本文。例如，在本領域中測定維生素D化合物，SL小鼠常規(guī)地作為模型用于MI骨髓性白血病(Honma等人(1983)Cell Biol.80201-204；Kasukabe T.等人(1987)Cancer Res.47567-572)；乳腺癌研究可以在例如用于人MXl(ER)的裸鼠模型中進行(Abe J.等人(1991)Endocrinology 129832-837)；其它癌癥，例如，結腸癌、黑素瘤骨肉瘤可以特征性地用例如裸鼠模型，其如在(Eisman J.A.等人(1987)Cancer Res.4721-25；Kawaura A.等人(1990)Cancer Lett 55149-152；Belleli A.(1992)Carcinogenesis 132293-2298；Tsuchiya H.等人(1993)J.Orthopaed Res.11122-130)中描述的。
該主題方法還可用于抑制造血源(hematopoietic origin)的增生性/瘤性細胞的增殖，例如，起源于骨髓、淋巴或紅細胞系，或者其前體細胞。例如，本發(fā)明打算治療的各種骨髓障礙包括，但不限于，急性早幼粒細胞白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)和慢性骨髓性白血病(CML)(在Vaickus，L.(1991)Crit Rev.in Oncol./Hemotol.11267-97中綜述)。可通過主題方法治療的淋巴惡性腫瘤包括，但不限于包括B-譜系ALL和T-譜系ALL的急性成淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、幼淋巴細胞白血病(PLL)、毛樣細胞白血病(HLL)和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(Waldenstrom′smacroglobulinemia，WM)。打算通過本發(fā)明方法治療的其它形式的惡性淋巴瘤包括，但不限于非何杰金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)及其變異體、周圍T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤(ATL)、表皮T-細胞淋巴瘤(CTCL)、巨粒性淋巴細胞性白血病(large granularlymphocytic leukemia，LGF)和何杰金氏病。
在某些實施方案中，本發(fā)明的維生素D3化合物可以用于與常規(guī)癌癥化學療法組合治療。白血病和其它腫瘤的常規(guī)治療方案包括輻射、藥物或二者的組合。除了輻射，以下通常相互組合的藥物常常用于治療急性白血病長春新堿、潑尼松、甲氨蝶呤、巰嘌呤、環(huán)磷酰胺和阿糖胞苷。在慢性白血病中，例如，白消安、美法侖和苯丁酸氮芥可組合使用。所有的常規(guī)抗癌藥物毒性高，而且在進行治療的同時容易使患者在一定程度上患病。有力的治療是基于這樣的前提，即除非所有的白血病細胞均被破壞，剩余的細胞會繁殖并引起復發(fā)。
主題方法還可用于治療各種器官系統(tǒng)的惡性腫瘤，例如侵襲肺臟、乳腺、淋巴、胃腸和生殖泌尿道以及腺癌，其包括惡性腫瘤例如大多數(shù)結腸癌、腎臟細胞癌、前列腺癌和/或睪丸腫瘤、肺臟的非小細胞癌、小腸癌、食道癌和膀胱癌。
根據(jù)一般涉及變異細胞分化的維生素D3的示例，可以根據(jù)本發(fā)明方法治療的示例性實體瘤包括肉瘤和癌的維生素D3-應答表型，例如，但不限于纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤(Ewing′s tumor)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨毛膜癌、精原細胞瘤、胚胎性癌、維爾姆斯氏腫瘤(Wilms′tumor)、子宮頸癌、睪丸腫瘤、肺臟癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質瘤、星形細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質瘤、腦脊膜瘤、黑素瘤、成神經(jīng)細胞瘤和視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤。
本發(fā)明維生素D3化合物的治療有效的抗腫瘤量或預防有效的抗腫瘤量的確定，其可以容易地通過本領域熟練的醫(yī)生或獸醫(yī)(″主治臨床醫(yī)生″)，通過應用已知技術并通過在類似條件下觀察獲得的結果而實現(xiàn)。該劑量可以根據(jù)主治臨床醫(yī)生判斷的患者需要量、治療疾病的嚴重性和所使用的特定化合物而改變。在確定治療有效的抗腫瘤量或劑量和預防有效的抗腫瘤量或劑量過程中，主治臨床醫(yī)生考慮了多種因素，包括，但不限于所涉及的增生性/瘤性細胞；特定化合物的藥效學性質及其施用的方法和途徑；需要的治療時間過程；哺乳動物的物種；其大小、年齡和一般健康；所涉及的特定疾?。患膊〉某潭然蛘咚婕暗募膊乐匦?；個體患者的應答；施用的特定化合物；施用方法；施用的制品的生物利用度性質；選擇的給藥方案；合并治療的種類(即，本發(fā)明的維生素D3化合物與其它共同施用的治療劑的相互作用)；以及其它相關情況。例如，美國專利5,427,916描述了在個體患者中預測抗腫瘤治療的效果的方法，并說明了與本發(fā)明的治療方案結合的某些可以使用的方法。
可以以低于該化合物的最佳量的較小劑量開始治療。其后，該劑量可以通過小的增量增加，直至在所述條件下達到最佳效果。如果需要，為方便起見，總日劑量可以分開并在該日內分成數(shù)部分施用。本發(fā)明維生素D3化合物的治療有效的抗腫瘤量和預防有效的抗腫瘤量是期望在約0.1毫克每公斤體重每天(mg/kg/day)至約100mg/kg/日內改變的。
確定可有效地預防或治療動物例如犬類、嚙齒類腫瘤的化合物還可用于人腫瘤的治療。根據(jù)動物研究獲得的數(shù)據(jù)，治療人腫瘤的本領域技術人員將知道該化合物向人施用的劑量和途徑。通常，人施用的劑量和途徑是希望類似于動物所施用的。
需要預防治療增生性/瘤性疾病狀態(tài)的那些患者的辨認，是很好地在本領域技術人員的能力和知識之內的。對于有發(fā)生可通過本主題方法治療的腫瘤疾病狀態(tài)的風險的患者，辨認該患者的一些方法是醫(yī)學領域所理解的，例如特定疾病狀態(tài)的發(fā)展的家族史和與個體患者疾病狀態(tài)發(fā)展相關的風險因素的存在。本領域熟練的臨床醫(yī)生通過應用例如臨床試驗、身體檢查和醫(yī)學/家族史而可以容易地辨認該候選患者。
C、免疫活性 健康個體使用多種不同機理保護其本身以防異物侵入，包括物理障礙、血和組織中的吞噬細胞、稱為淋巴細胞的免疫細胞組和生血分子。所有這些機理都參與了為個體防御潛在的有害環(huán)境。存在于先前與傳染性微生物或其它外源性大分子接觸的個體中的、稱為自然或先天性免疫的一些防御機理，其不會通過該接觸而增強，并且不會在從多數(shù)外來物質之間進行區(qū)分。通過外源物質接觸誘導或刺激的、稱為后天性或特異性免疫的其它防御機理，其對不同大分子具有精確地特異性，并增加與各種特定大分子相繼接觸的強度和防御能力。誘導特異性免疫應答的物質稱為抗原(見，例如，Abbas，A.等人，Cellular andMolecular Immunology，W.B.Saunders Company，Philadelphia，1991；Silverstein，A.M.A history of Immunology，San Diego，AcademicPress，1989；Unanue A.等人，Textbook of Immunology，2nded.Williamsand Wilkens，Baltimore，1984)。
免疫系統(tǒng)的最顯著特征之一是其區(qū)分外源性抗原和自身抗原的能力。因此在各個體中的淋巴細胞能夠識別并應答多種外源性抗原，但通常對存在于個體中的潛在的抗原性物質無應答。這種免疫無反應性指稱為免疫耐受性(見，例如，Burt RK等人(2002)Blood 99768；Coutinho，A.等人(2001)Immunol.Rev.18289；Schwartz，RH(1990)Science 2481349；Miller，J.F.等人(1989)Immunology Today 1053)。
自身耐受性是一種后天性的已知經(jīng)由各個體淋巴細胞過程。其部分地因淋巴細胞通過一個它們發(fā)育的階段而發(fā)生，此時，當與由抗原呈遞細胞(APC)呈遞的抗原相遇時，導致其在稱為正或負選擇性的過程中死亡或失活(見，例如，Debatin KM(2001)Ann.Hematol.80 Suppl3B29；Abbas，A.(1991)，前述)。為此，在這一功能成熟不良的階段，潛在的自身識別淋巴細胞與自身抗原接觸，并防止發(fā)展為能夠對自身抗原產生應答的階段。當自身耐受性的誘導和維持異常出現(xiàn)時，產生自身免疫，其導致對特定抗原(類)的耐受性的喪失和隨后的宿主免疫系統(tǒng)對表達抗原(類)的宿主組織的攻擊(見，例如，Boyton RJ等人(2002)Clin.Exp.Immunol.1274；Hagiwara E.(2001)Ryumachi 41888；Burt RK等人(2992)Blood 99768)。
免疫系統(tǒng)識別自身和外源性抗原的能力還在組織移植中充當了關鍵性作用。移植的成功取決于防止宿主受體的免疫系統(tǒng)將該移植識別為外源性的，以及在某些情況下，防止該移植物將該宿主組織識別為外源性的。例如，當宿主接受骨髓移植時，該移植的骨髓可識別該新宿主為外源性的，引起移植物抗宿主病(GVHD)。因而，該宿主的生存取決于防止供體骨髓的排異反應以及宿主通過該移植物免疫反應的排異反應(見，例如，Waldmann H等人(2001)Int.Arch.Allergy Immunol.12611)。
當前，引起自身免疫性疾病和移植排斥的有害的免疫反應通過使用藥物例如甾族化合物、硫唑嘌呤、抗-T細胞抗體以及最近的對T細胞亞群的單克隆抗體而被防止或治療。免疫抑制藥例如環(huán)胞菌素A(CsA)、雷帕霉素、desoxyspergualine和FK-506也廣泛地應用。
非特異性免疫抑制劑，例如甾族化合物和對淋巴細胞的抗體，使該宿主機會性感染和腫瘤發(fā)展的風險增加。此外，許多免疫抑制藥在宿主中引起骨脫礦質(見，例如，Chhajed PN等人(2002)Indian J.ChestDis.Allied 4431；Wijdicks EF(2001)Liver Transpl.7937；KaramehicJ等人(2001)Med.Arh.55243；頒發(fā)給Beschorner WE的美國專利5,597,563和頒發(fā)給DeLuca HF等人的美國專利6,071,897)。由于與存在免疫抑制形式相關的主要缺點，需要一種新的治療免疫障礙的方法，例如，在宿主中誘導免疫耐受性。
為此，另一方面，本發(fā)明提供了調節(jié)免疫細胞活性的方法，其通過將該細胞與式I的或其它在此描述的維生素D3化合物接觸。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種在免疫細胞中抑制免疫活性的方法，其通過將病理性或非病理性免疫細胞與有效量的本發(fā)明維生素D3化合物接觸，從而抑制與缺乏該治療相關的細胞的免疫應答。本方法可以在培養(yǎng)細胞中完成，例如，體外或離體，或者可以在存在于動物個體中的細胞中完成，例如，作為體內治療方案的部分。體內治療可以在人或其它動物個體上進行。
本發(fā)明的維生素D3化合物可以最初在體外測定其對T細胞增殖和分泌活動的抑制作用，如在Reichel，H.等人，(1987)Proc.Natl.Acad.Sci USA 843385-3389；Lemire，J.M.等人(1985)J.Immunol 342032-2035中描述的?；蛘撸撁庖咭种谱饔每梢允褂帽绢I域已知以及Bouillon，R.等人(1995)Endocine Reviews 16(2)232(表6和7)概述的各種動物模型在體內測定。例如，自身免疫性障礙的動物模型，例如狼瘡、甲狀腺炎、腦炎、糖尿病和腎炎已在(Lemire J.M.(1992)J.CellBiochem.4926-31；Koizumi T.等人(1985)Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.77396-404；Abe J.等人(1990)Calcium Regulation and BoneMetabolism 146-151；Fournier C.等人(1990)Clin.ImmunolImmunopathol.5453-63；Lemire J.M.和Archer D.C.(199I)J.Clin.Invest.871103-1107；Lemire，J.M.等人，(1994)Endocrinology 135(6)2818-2821；Inaba M.等人(1992)Metabolism 41631-635；MathieuC.等人(1992)Diabetes 411491-1495；Mathieu C.等人(1994)Diabetologia 37552-558；Lillevang S.T.等人(1992)Clin.Exp.Immunol.88301-306，等)中描述。在器官移植中表現(xiàn)為免疫抑制活性的模型，例如皮膚移植、心臟移植、島移植已在Jordan S.C.等人(1988)v HerrathD(eds)Molecular，Cellular and Clinical Endocrinology 346-347；VeyronP.等人(1993)Transplant Immunol.172-76；Jordan S.C.(1988)vHerrath D(eds)Molecular，Cellular and Clinical Endocrinology 334-335；Lemire J.M.等人(1992)Transplantation 54762-763；Mathieu C.等人(1994)Transplant Proc.263128-3129中描述。
在體外確定某些試驗化合物為有效的免疫應答的抑制劑后，這些化合物可作為治療方案的部分用于體內。因此，本發(fā)明另一方面提供了抑制免疫應答的方法，包括向個體施用本發(fā)明維生素D3化合物的藥物制劑，以便抑制免疫反應例如移植排斥、自身免疫障礙和炎癥。
在一種實施方案中，本發(fā)明提供了治療個體的維生素D3相關狀態(tài)的方法，其中該維生素D3相關狀態(tài)是ILT3-相關障礙，該方法通過向個體施用有效量的本發(fā)明維生素D3化合物。在一種實施方案中，該ILT3-相關狀態(tài)是免疫障礙。在某些實施方案中，該免疫障礙是自身免疫性障礙。在特定的實施方案中，該免疫障礙是1型糖尿病。在其它實施方案中，該免疫障礙是移植排斥。
例如，本發(fā)明的該主題維生素D3化合物可在臨床狀況中用于抑制應答，該臨床狀況希望減量調節(jié)T細胞應答。例如，在移植物抗宿主病中，移植的病例、自身免疫性疾病(包括，例如，糖尿病、關節(jié)炎(包括類風濕性關節(jié)炎、幼年型類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、牛皮癬關節(jié)炎)、多發(fā)性硬化癥、腦脊髓炎、糖尿病、重癥肌無力、全身性紅斑狼瘡、自身免疫性甲狀腺炎、皮炎(包括特應性皮炎和濕疹性皮炎)、牛皮癬、斯耶格倫氏綜合征其包括干燥性角結膜炎繼發(fā)的斯耶格倫氏綜合征、斑禿、因節(jié)肢動物叮咬反應的過敏性應答、克羅恩病(Crohn′sdisease)、口瘡性潰瘍、虹膜炎、結膜炎、角膜結膜炎、潰瘍性結腸炎、哮喘、過敏性哮喘、表皮性紅斑狼瘡、硬皮病、陰道炎、直腸炎、藥疹、麻風病逆轉反應、麻風結節(jié)性紅斑、自身免疫性眼色素層炎、過敏性腦脊髓炎、急性壞死性出血性腦病、原發(fā)性雙側進行性感覺神經(jīng)性耳聾、再生障礙性貧血、單純紅細胞性貧血，原發(fā)性血小板減少癥、多軟骨炎、韋格納氏肉芽腫病(wegener′s granulomatosis)、慢性活動性肝炎、史-約綜合征(Stevens-Johnson syndrome)、原發(fā)性口炎性腹瀉、扁平苔蘚、克羅恩病、格雷夫斯眼病(Grave′s ophthalmopathy)、結節(jié)病、原發(fā)性膽汁性肝硬變、后眼色素層炎和間質性肺纖維化)。在變態(tài)反應例如特應性變態(tài)反應情況下，免疫活性的減量調節(jié)也是需要的。
本發(fā)明另一方面的提供了一種在細胞中調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子表達的方法。所述的方法包括將該細胞與有效量的式I化合物接觸以在該細胞調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子表達。在一種實施方案中，細胞是在個體中。在另一實施方案中，該調節(jié)是表達的增量調節(jié)。在其它實施方案中，該調節(jié)是表達的減量調節(jié)。
本發(fā)明相關方面提供了一種在個體中治療ILT3-相關障礙的方法。該方法包括向個體施用有效量的式I化合物以調節(jié)該ILT3表面分子的表達，從而在個體中治療該ILT3-相關障礙。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了方法和組合物以治療免疫障礙，例如，自身免疫障礙和移植排斥，例如移植物抗宿主病(GVHD)。本發(fā)明的這些實施方案是基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即本發(fā)明維生素D3化合物能夠調節(jié)細胞中免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)的表達，該細胞例如抗原呈遞細胞。
因此，本發(fā)明另一方面提供了在個體中抑制移植排斥的方法。所述的方法包括向個體施用有效量的式I化合物以調節(jié)該ILT3表面分子的表達，從而在該個體中抑制移植排斥。在一種實施方案中，該移植器官移植。在另一種實施方案中，該移植是胰島移植。在再一種實施方案中，該移植是骨髓移植。
如前面描述的，治療有效的免疫抑制量的確定，其可以容易地通過作為本領域技術人員的主治臨床醫(yī)生，通過應用已知技術并通過在類似條件下觀察獲得的結果而實現(xiàn)。在動物例如犬類、嚙齒類中確定有效的化合物可以通過本領域技術人員相應地推定到人。用于動物的起始劑量/用法可以根據(jù)先前的研究進行估計。例如，在嚙齒類中治療自身免疫障礙的本發(fā)明維生素D3化合物的劑量，其經(jīng)口或注射施用可以最初估計為0.1g/kg/日～1g/kg/日。
本領域技術人員根據(jù)動物研究獲得的數(shù)據(jù)會知道，人施用的劑量和途徑是希望類似于動物所施用的。用于人的示范性的劑量范圍是每名成人0.25～10μg/日，優(yōu)選0.5～5μg/日(美國專利4,341,774)。
D、鈣磷平衡 本發(fā)明還涉及治療個體以鈣代謝脫調節(jié)為特征的障礙的方法，該方法包括將病理性或非病理性維生素D3應答細胞與有效量的本發(fā)明維生素D3化合物接觸，從而直接或間接地調節(jié)鈣磷平衡。體內或體外檢測鈣波動的技術是本領域已知的。
示范性的Ca++平衡相關測定包括針對腸的測定，其中腸的45Ca2+吸收是1)體內(Hibberd K.A.和Norman A.W.(1969)Biochem.Pharmacol.182347-2355；Hurwitz S.等人(1967)J.Nutr.91319-323；Bickle D.D.等人(1984)Endocrinology 114260-267)，或2)以外翻十二指腸囊的體外(Schachter D.等人(1961)Am.J.Physiol 2001263-1271)，或3)在小雞鈣結合蛋白-D28k或大鼠鈣結合蛋白-D9k的基因誘導作用上(Thomasset M.等人(1981)FEBS Lett.12713-16；Brehier A.和Thomasset M.(1990)Endocrinology 127580-587)測定。骨定向測定包括1)通過測定Ca2+從體內(飼養(yǎng)零鈣飲食的動物)骨中的釋放(HibberdK.A.和Norman A.W.(1969)Biochem.Pharmacol.182347-2355；Hurwitz S.等人(1967)J.Nutr.91319-323)，或者從體外骨移出物中的釋放(Bouillon R.等人(1992)J.Biol.Chem.2673044-3051)，2)血清成骨素水平的測定[成骨素是一種成骨細胞特異性蛋白，其在合成后大量地摻合到骨基質中，但部分地釋放到循環(huán)(或組織培養(yǎng)基)中，并且因此代表了骨形成或循環(huán)的良性需求](Bouillon R.等人(1992)Clin.Chem.382055-2060)，或3)骨灰分含量(Norman A.W.和Wong R.G.(1972)J.Nutr.1021709-1718)。僅完成了一項腎定向測定。在該測定中，測定了尿Ca2+排泄(Hartenbower DX.等人(1977)Walter de Gruyter，Berlinpp 587-589)；該分析是依靠血清Ca2+水平升高，并可以反映骨Ca2+運動活性大于腎臟作用。最后，有一項″軟組織鈣化″測定，其可用于檢測施用本發(fā)明化合物的結果。在該測定中，45Ca2+腹膜內給藥施用于大鼠，接著7天經(jīng)每日施用相對較高劑量的本發(fā)明化合物；在嚴重高鈣血癥發(fā)生的情況下，可以通過測定45Ca2+水平而評價軟組織鈣化。在所有的這些測定中，本發(fā)明維生素D3化合物以單次劑量或長期(依賴于測定方案)，在測定終點定量之前以合適的時間間隔向維生素D-充足或缺乏的動物施用。
在某些實施方案中，本發(fā)明的維生素D3化合物可用于調節(jié)骨代謝。所術語″骨代謝″意欲包括對骨結構的形成和退化的直接或間接作用，例如骨形成、骨吸收等，其可以最終地影響血清中鈣磷的濃度。該術語還意欲包括維生素D3化合物對骨細胞的作用，例如破骨細胞和成骨細胞，它們可依次導致骨形成和退化。例如，本領域已知，成骨細胞通過基因性和非基因性途徑，維生素D3化合物對骨形成細胞產生作用(Walters M.R.等人(1982)J.Biol.Chem.2577481-7484；JurutkaP.W.等人(1993)Biochemistry 328184-8192；Mellon W.S.和DeLucaH.F.(1980)J.Biol.Chem.2554081-4086)。同樣，本領域已知，維生素D3化合物支持骨再吸收破骨細胞的不同活動，例如刺激單核細胞和單核吞噬細胞分化成破骨細胞(Abe E.等人(1988)J.Bone Miner Res.3635-645；Takahashi N.等人(1988)Endocrinology 1231504-1510；Udagawa N.等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 877260-7264)。相應地，本發(fā)明的調節(jié)骨細胞生成的維生素D3化合物可影響骨形成和退化。
本發(fā)明提供了一種調節(jié)骨細胞代謝的方法，其通過將病理性或非病理性骨細胞與有效量的本發(fā)明維生素D3化合物接觸，從而調節(jié)骨形成和退化。本方法可在培養(yǎng)的細胞中完成，例如，體外或離體，或者可在存在于動物個體中的細胞中完成，例如，體內細胞?？墒褂玫牡湫偷呐囵B(yǎng)系統(tǒng)包括成骨細胞系，例如，ROS17/2.8細胞系、單核細胞、骨髓培養(yǎng)系統(tǒng)(Suda T.等人(1990)Med.Res.Rev.7333-366；Suda T.等人(1992)J.Cell Biochem.4953-58)等。所選化合物可進一步在體內試驗，例如，在骨硬化癥的動物模型和在人疾病中(Shapira F.(1993)Clin.Orthop.29434-44)。
在優(yōu)選的實施方案中，提供了治療骨質疏松癥的方法，包括向個體施用本發(fā)明維生素D3化合物的藥物制劑，從而改善未治療個體有關的狀況。
本發(fā)明的維生素D3化合物可在卵巢切除動物中試驗，例如犬類、嚙齒類，以評價正常動物和雌激素缺乏動物的骨量和骨形成率的變化。臨床試驗可以通過主治臨床醫(yī)生在人身上進行，以確定本發(fā)明維生素D3化合物的預防和治療骨質疏松癥的治療有效量。
在其它實施方案中，本發(fā)明維生素D3化合物治療應用包括治療其它以代謝性鈣磷缺乏為特征的疾病。該疾病的實例如下骨質疏松癥、骨營養(yǎng)不良、骨軟化癥、佝僂病、囊性纖維性骨炎、腎性骨營養(yǎng)不良、骨硬化、抗驚厥藥治療、骨量減少、不完全性骨纖維生成、繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥、甲狀旁腺功能減退癥、甲狀旁腺功能亢進癥、肝硬化、阻塞性黃疸、藥物造成的代謝、骨髓癌、慢性腎臟病、血磷酸鹽過少性VDRR、維生素D-依賴性佝僂病、結節(jié)病、糖皮質激素拮抗、吸收不良綜合征、脂肪瀉、熱帶口炎性腹瀉、原發(fā)性高鈣血癥和生乳熱(milk fever)。
E、激素分泌 再另一方面，本發(fā)明提供了一種調節(jié)維生素D3-應答細胞例如內分泌細胞的激素分泌的方法。激素分泌包括本發(fā)明維生素D3化合物的基因性和非基因性活性，其在維生素D3應答細胞中控制給定激素分泌的轉錄和加工，例如甲狀旁腺激素(PTH)、降鈣素、胰島素、催乳素(PRL)和TRH(Bouillon，R.等人(1995)Endocrine Reviews 16(2)235-237)。
本方法可在培養(yǎng)的細胞中完成，例如，體外或離體，或者可在存在于動物個體中的細胞中完成，例如，體內。本發(fā)明的維生素D3化合物可以先在體外使用原代培養(yǎng)的甲狀旁腺細胞試驗?？梢允褂玫钠渌到y(tǒng)包括大鼠垂體瘤細胞中催乳素分泌試驗，例如，GH4C1細胞系(Wark J.D.和Tashjian Jr.A.H.(1982)Endocrinology 1111755-1757；Wark J.D.和Tashjian Jr.A.H.(1983)J.Biol.Chem.2582118-2121；Wark J.D.和Gurtler V.(1986)Biochem.J.233513-518)，以及GH4C1細胞中TRH分泌試驗。另外，本發(fā)明維生素D3化合物的作用可以使用體內動物模型定性，該動物模型如在以下公開的Nko M.等人(1982)Miner Electrolyte Metah.567-75；Oberg F.等人(1993)J.Immunol.1503487-3495；Bar-Shavit Z.等人(1986)Endocrinology 118679-686；Testa U.等人(1993)J.Immunol.1502418-2430；Nakamaki T.等人(1992)Anticancer Res.121331-1337；Weinberg J.B.和Larrick J.W.(1987)Blood 70994-1002；Chambaut-Guerin A.M.和Thomopoulos P.(1991)Eur.Cytokine New.2355；Yoshida M.等人(1992)Anticancer Res.121947-1952；Momparler R.L.等人(1993)Leukemia 717-20；Eisman J.A.(1994)Kanis JA(eds)Bone and Mineral Research 245-76；Veyron P.等人(1993)Transplant Immunol.172-76；Gross M.等人(1986)J BoneMiner Res.1457-467；Costa E.M.等人(1985)Endocrinology 1172203-2210；Koga M.等人(1988)Cancer Res.482734-2739；FranceschiR.T.等人(1994)J.Cell Physiol.123401-409；Cross H.S.等人(1993)Naunyn Schmiedebergs Arch.Pharmacol.347105-110；Zhao X.和Feldman D.(1993)Endocrinology 1321808-1814；Skowronski RJ.等人(1993)Endocrinology 1321952-1960；Henry HX.和Norman A.W.(1975)Biochem.Biophys.Res.Commun.62781-788；Wecksler W.R.等人(19S0)Arch.Biochem.Biophys.20195-103；Brumbangh P.F.等人(1915)Am.J.Physiol.238384-388；Oldham S.B.等人(1979)Endocrinology 104248-254；Chertow B.S.等人(1975)J.Clin Invest.56668-678；Canterbury J.M.等人(1978)J.Clin.Invest.611375-1383；Quesad J.M.等人(1992)J.Clin.Endocrinol Metab.75494-501。
在某些實施方案中，本發(fā)明的維生素D3化合物作為治療方案的一部分可用于抑制甲狀旁腺激素(PTH)加工，例如，轉錄的、翻譯的加工，和/或甲狀旁腺細胞的分泌。使用這些化合物的治療方法可以容易地用于所有疾病，包括PTH活動的直接或間接作用，例如，原發(fā)性和繼發(fā)性應答。
相應地，本發(fā)明維生素D3化合物的治療應用包括治療疾病，例如慢性腎衰竭的繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥(Slatopolsky E.等人(1990)Kidney Int.38S41-S47；Brown AJ.等人(1989)J.CHn.Invest.84728-732)。治療有效量和給藥方案的確定可以通過熟練技術人員使用本領域公開的數(shù)據(jù)而完成。
F、防止神經(jīng)元缺失 再另一方面，本發(fā)明提供了一種防止神經(jīng)元缺失的方法，其通過將維生素D3應答細胞例如神經(jīng)元細胞與本發(fā)明的維生素D3化合物接觸，以預防或延緩神經(jīng)元缺失。所述的術語″防止″意欲包括預防、延緩和/或終止神經(jīng)元的退化、損傷或死亡。
正常功能受損的神經(jīng)元的任何疾病均可導致神經(jīng)元缺失。損害神經(jīng)元功能的、容易導致神經(jīng)元缺失的任何疾病均可導致神經(jīng)元退化。神經(jīng)元功能可因例如神經(jīng)元的生化學、生理學或解剖學改變而受損。神經(jīng)元退化可包括膜、樹枝狀或突觸變化，該變化對正常神經(jīng)元功能有害。神經(jīng)元退化、損傷、和/或死亡的原因可能不清楚?；蛘?，可能是年齡和/或疾病相關變化的原因，該變化發(fā)生于個體的神經(jīng)系統(tǒng)中。
當神經(jīng)元缺失在此描述為″年齡相關″時，其意欲包括起因于已知或未知的與老化相關的個體的身體變化的神經(jīng)元缺失。當神經(jīng)元缺失在此描述為″疾病相關″時，其意欲包括起因于已知或未知的與疾病相關的個體的身體變化的神經(jīng)元缺失。然而，應當理解，這些術語并非相互排斥，事實上，許多導致神經(jīng)元缺失的疾病是與年齡和疾病相關的。
示例性的與神經(jīng)元缺失和神經(jīng)元形態(tài)學變化相關的年齡相關疾病包括，例如，阿耳茨海默氏病、皮克氏病、帕金森氏病、血管疾病、亨延頓氏病和年齡相關記憶缺陷。在阿耳茨海默氏病患者中，在海馬，額部的、壁的和前顳的皮層，扁桃體和嗅系統(tǒng)中，神經(jīng)元缺失最明顯。海馬的最明顯的侵襲區(qū)域包括CAl區(qū)、下腳和內嗅皮質。記憶喪失被認為是最早并最具代表性的認知改變，因為公知的是，海馬在記憶中發(fā)揮著決定性的作用。皮克氏病的特征在于在額部和前顳葉的新皮質中嚴重的神經(jīng)元退化，其有時伴隨紋狀體內神經(jīng)元的死亡。帕金森氏病可通過黑質和藍斑中的神經(jīng)元缺失識別。亨延頓氏病的特征為紋狀體內和皮質的膽堿能神經(jīng)元和GABA-能神經(jīng)元的退化。帕金森氏和亨延頓氏病通常與運動障礙相關，但常常也表現(xiàn)為認知損傷(記憶喪失)。
年齡相關的記憶缺陷(AAMI)是另一種年齡相關障礙，其特征為健康的、上了年紀的個體在生命的后數(shù)十年記憶喪失。Crook，T.等人(19S6)Devel.Neuropsych.2(4)261-276。目前，AAMI的神經(jīng)基礎還沒有準確地確定。然而，已報道伴隨老化的神經(jīng)元死亡出現(xiàn)在許多物種的涉及記憶的腦區(qū)域，包括皮層、海馬、扁桃體、基底神經(jīng)節(jié)、膽堿能基底前腦、藍斑、脊核和小腦。Crook，T.等人(1986)Devel.Neuropsych.2(4)261-276。
本發(fā)明的維生素D3化合物可通過基因性或非基因性機理防止神經(jīng)元缺失。已知核心維生素D3受體存在于外周，但還發(fā)現(xiàn)于腦中，特別是海馬和新皮質中。非基因性機理也可通過調節(jié)內神經(jīng)元和/或外周鈣磷水平而預防或延緩神經(jīng)元缺失。此外，本發(fā)明的維生素D3化合物可以通過間接作用而防止神經(jīng)元缺失，例如，通過調節(jié)血清PTH水平。例如，已經(jīng)證明在阿耳茨海默氏病中，血清PTH水平與認知降低呈正相關。
本方法可在培養(yǎng)的細胞中完成，例如，體外或離體，或者可在存在于動物個體中的細胞中完成，例如，體內。本發(fā)明的維生素D3化合物可以先在體外使用來自胚胎性嚙齒動物小狗(例如見美國專利5,179,109-胚胎大鼠組織培養(yǎng)物)、或其它哺乳動物(例如見美國專利5,089,517-胚胎小鼠組織培養(yǎng)物)或非哺乳動物模型的神經(jīng)元試驗。在局部缺血、中風、傷、神經(jīng)壓傷、阿耳茨海默氏病、皮克氏病和帕金森氏病等的動物或組織培養(yǎng)模型中，這些培養(yǎng)物系統(tǒng)已用于表征的外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元保護作用。
研究預防新皮質神經(jīng)元破壞的體外系統(tǒng)實例包括使用胚胎小鼠神經(jīng)元的體外培養(yǎng)物，并將神經(jīng)膠質細胞預先暴露于不同的谷氨酸激動劑，例如鉀鹽鎂礬(kainite)、NMDA和α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異 唑丙酸酯(isoxazolepronate)(AMPA)。美國專利5,089,517。另見美國專利5,170,109(用神經(jīng)保護化合物處理之前用谷氨酸鹽處理大鼠皮質/海馬神經(jīng)元培養(yǎng)物)；美國專利5,163,196和5,196,421(在大鼠中神經(jīng)保護性興奮性氨基酸受體拮抗劑抑制甘氨酸、鉀鹽鎂礬、AMPA受體結合)。
或者，本發(fā)明維生素D3化合物的作用可以使用動物模型在體內表征。在這些模型系統(tǒng)中的神經(jīng)元退化常常通過實驗性創(chuàng)傷或介入而誘導(例如應用毒素、神經(jīng)壓傷、中斷氧供應)。
G、平滑肌細胞 再另一方面，本發(fā)明提供了一種調節(jié)血管平滑肌細胞活性的方法，其通過將維生素D3-應答的平滑肌細胞與本發(fā)明的維生素D3化合物接觸以刺激或，優(yōu)選的，抑制該細胞的活動。所述的術語″平滑肌細胞的活性″意欲包括平滑肌細胞的任何活性，例如增殖、遷移、粘連和/或代謝。
在某些實施方案中，本發(fā)明的維生素D3化合物可用于治療與維生素D3-應答的平滑肌細胞的異常活性相關的疾病和疾病。例如，本發(fā)明可用于治療過度增殖性血管疾病，例如高血壓誘導的血管重構、血管再狹窄和動脈粥樣硬化。在其它實施方案中，本發(fā)明的化合物或用于治療以維生素D3-應答的平滑肌細胞的異常代謝為特征的障礙，例如，動脈性高血壓。
本方法可在培養(yǎng)的細胞中完成，例如，體外或離體，或者可在存在于動物個體中的細胞中完成，例如，體內。本發(fā)明的維生素D3化合物可以先在體外如Catellot等人(1982)，J.Biol.Chem.257(19)11256所述試驗。
4、腎素表達的抑制 本發(fā)明的化合物通過通過抑制凝乳酶表達而控制血壓，并可用作抗高血壓劑。腎素-血管緊張素調節(jié)劑級聯(lián)在血壓、電解質和容量自體平衡的調節(jié)中發(fā)揮重要作用(Y.C.Li，摘要，DeLuca Symposium onVitamin D3，Tauc，New Mexico，June 15-June 19，2002，p.18)。為此，本發(fā)明提供了治療個體維生素D3相關狀態(tài)的方法，其中該維生素D3相關狀態(tài)是以表達腎素的細胞的異?；钚詾樘卣鞯恼系K。該方法包括向個體施用有效量的式I化合物，從而由該細胞的腎素表達被抑制，從而為該個體治療了高血壓。
5、膀胱功能障礙 包括膀胱壁進行性去神經(jīng)和肥大的形態(tài)學的膀胱變化，這在具有不同的膀胱障礙患者中是組織學檢查經(jīng)常可見的，該膀胱障礙導致活動過度性膀胱與例如臨床良性的前列腺增生(BPH)和脊髓損傷相關的膀胱障礙。
在這些疾病中觀測到，膀胱張力和/或緊張的增加顯示與細胞和分子改變例如細胞支架蛋白和收縮性蛋白、線粒體功能和平滑肌細胞的各種酶活性相關。膀胱壁肥大還包括改變它的細胞外基質和非平滑肌部位。
在膀胱中的這些變化與存貯(刺激)癥狀相關，特別是尿頻、尿急、欲望性尿失禁和夜尿癥。這些癥狀影響到患者的社交、心理、家庭、職業(yè)、身體和性生活，對患者的生活質量造成深刻的負面影響。
目前，尚未發(fā)現(xiàn)這些癥狀的理想治療方法?？捎玫拿糠N治療選項(例如抗毒蕈堿劑或α-阻滯劑)與和其作用機理有關的缺點相關，其僅僅是基于癥狀的治療，而不是基于疾病的病因治療。事實上，一些可用藥物的臨床效果受限于其弱的效能，以及由于一些顯著的副作用而不為一般患者接受。
因此，需要有一種新的提供改善臨床效果的治療方法，該方法針對潛在的致病因素、異常生長以及因此而發(fā)生的膀胱平滑肌細胞的功能障礙。
如此處所述的，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，維生素D類似物可以治療或預防與膀胱肥大相關的膀胱功能障礙，例如膀胱過度活動和臨床BPH?；顒舆^度性膀胱，還稱為逼尿肌過度活動或逼尿肌功能失調，包括無意識性膀胱痙攣。活動過度的逼尿肌可引起活動過度性膀胱。盡管活動過度性膀胱的潛在原因可能是神經(jīng)性疾病(例如，多發(fā)性硬化癥、帕金森氏病、中風、脊髓損傷)，由腹部創(chuàng)傷、骨盆創(chuàng)傷或手術造成的神經(jīng)損害，中風，多發(fā)性硬化癥，感染，膀胱癌，藥物副作用或前列腺增大(BPH)，在多數(shù)情況下該原因是自發(fā)性的，即未知原因。
另外，該維生素D相關化合物已用于治療與BPH相關的刺激性排泄癥狀。BPH不但與導致膀胱出口阻塞(BOO)的腺增大及其繼發(fā)癥狀相關，還與包括膀胱壁肥大和進行性去神經(jīng)的膀胱形態(tài)變化相關。這些變化導致功能需求增加和膀胱平滑肌細胞內協(xié)調中斷。
6、眼色素層炎 眼色素層炎，一種包括包含虹膜、睫狀體和脈絡膜的眼的炎癥的疾病，事實上包括一大群不同的疾病，其不但影響眼色素層，還影響視網(wǎng)膜、視神經(jīng)和玻璃體。根據(jù)國際眼色素層炎研究小組(InternationalUveitis Study Group)，有多種眼色素層炎分類前、中、后和全眼色素層炎(全部的)。炎癥可能是由創(chuàng)傷或毒素或傳染劑誘導的，但在多數(shù)情況下，該機理在性質上似乎是自身免疫。癥狀可能是急性的、亞急性的、慢性的(持續(xù)時間大于3個月)和復發(fā)的。大多數(shù)情況下，內源性眼色素層炎的病因是未知的。眼色素層炎是視力嚴重損傷的主要原因。盡管由眼色素層炎致盲的患者數(shù)量不清楚，估計在美國眼色素層炎占全部全盲病例的10-15％。
可描述為后眼色素層炎的多種疾病病灶性、多病灶性或彌漫性脈絡膜炎，脈絡膜視網(wǎng)膜炎，視網(wǎng)膜脈絡膜炎，眼色素層視網(wǎng)膜炎或神經(jīng)性眼色素層炎。該疾病通常是無痛的，但其特征是存在懸浮物、視覺損傷(突然的或逐漸的)例如目昏等和視力喪失。后眼色素層炎可能有多種病因，而且其本身癥候復雜，有時誤認為臨床疾病。在試驗模型和臨床上，越來越多的證據(jù)表明內源性后眼色素層視網(wǎng)膜炎常常具有過大的免疫應答的特征，該過大的免疫應答會引起組織破壞。當未發(fā)現(xiàn)明顯的感染或瘤病原時，治療可以直接針對抑制炎癥級聯(lián)產生，并且有望減少組織損傷。在一種實施方案中，本發(fā)明提供了治療眼色素層炎的方法。
7、間質性膀胱炎 間質性膀胱炎，在此是指″IC″，是一種慢性炎癥性膀胱疾病，還稱為慢性骨盆疼痛綜合征(CPPS)或疼痛性膀胱綜合征(PBS)，其特征為骨盆疼痛、尿急和尿頻。該疾病主要影響雌性動物，盡管雄性動物也有診斷為IC的。與其它膀胱功能障礙疾病不同，IC的特征為由于癥狀學的膀胱壁慢性炎癥；換言之，引起異常膀胱收縮性和慢性骨盆疼痛的原因是慢性炎癥，因此，治療應以這種病原部位為目標。事實上，傳統(tǒng)的以平滑肌弛緩劑治療膀胱功能障礙，如活動過度性膀胱，這在IC患者中是無效的。在一種實施方案中，本發(fā)明提供了治療間質性膀胱炎的方法。
8、子宮肌瘤 子宮肌瘤(還稱為子宮的平滑肌瘤/平滑肌瘤、纖維瘤、肌瘤/肌瘤、纖維肌瘤、肌纖維瘤、纖維平滑肌瘤)是來自子宮的子宮肌膜的良性的平滑肌細胞腫瘤。它們包括粘膜下的、漿膜下的和壁內的肌瘤。在一種實施方案中，本發(fā)明提供了治療子宮肌瘤的方法。
9、藥物組合物 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包括有效量的式I或其它在此描述的維生素D3化合物和藥學可接受的載體。在進一步的實施方案中，該有效量治療如前述的維生素D3相關狀態(tài)是有效的。在一種實施方案中，該維生素D3化合物使用藥學可接受的配方施用于該個體，例如，藥學可接受的配方施用于該個體后，藥學可接受的配方給個體提供了持續(xù)遞送達至少12小時、24小時、36小時、48小時、1周、2周、3周或4周的維生素D3化合物。
在某些實施方案中，這些藥物組合物適合于局部或經(jīng)口施用于個體。在如以下詳細描述的其它實施方案中，本發(fā)明的該藥物組合物可以特別地配制用于以固體或液體形式施用，包括如下適用的(1)經(jīng)口施用，例如，灌服劑(水性或非水性溶液或混懸液)、片劑、大丸劑(boluses)、散劑、顆粒劑、糊劑；(2)胃腸外施用，例如，通過皮下的、肌內的或靜脈內的注射劑，例如，滅菌溶液混懸液；(3)局部應用，例如，乳膏劑、軟膏劑用于皮膚的噴霧劑；(4)陰道內或直腸內，例如，陰道栓劑、乳膏劑或泡沫劑；或者(5)氣霧劑，例如，水性氣霧劑、脂質體制劑或含有該化合物的固體微粒。
所述的短語″藥學可接受的″是指本發(fā)明維生素D3化合物、含有該化合物的組合物和/或劑型，它們在可靠的醫(yī)學判斷范圍內，適用于與人類和動物的組織接觸而沒有過高的毒性、刺激、過敏性應答或其它問題或并發(fā)癥，具有適當合理的利益/風險比。
所述的短語″藥學可接受的載體″包括藥學可接受的材料、組分或載體，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包膠材料，參與將該主題化學藥品從一個器官或身體的部分運載或運輸另一器官或身體的部分。在與配方其它成分相容性和對患者無害的意義上說，各載體應當是″可接受的″。一些可用于藥學可接受的載體的材料的實例包括(1)糖類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉類，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)西黃蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟類；(9)油類，例如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)乙二醇類，例如丙二醇；(11)多元醇類，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它非毒性可配伍的用于藥物配方的物質。
潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調味劑和芳香劑，防腐劑和抗氧劑也可以出現(xiàn)于該組合物中。
藥學可接受的抗氧劑的實例包括(1)水溶性抗氧劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、偏重亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、丁羥基茴香醚、α-生育酚等；和(3)和金屬螯合劑，例如枸櫞酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
含有維生素D3化合物(類)的組合物包括適合于經(jīng)口、經(jīng)鼻、局部(包括口頰和舌下)、直腸、陰道、氣霧劑和/或胃腸外施用的那些。該組合物可方便地以單位劑型呈現(xiàn)，并且可以通過任何藥學領域已知的方法制備?？梢耘c載體材料組合以生產單一劑型的活性成分的量會根據(jù)被治療的宿主、特定的施用方法而改變。可以與載體材料組合以生產單一劑型的活性成分的量通常是產生療效的化合物的量。通常，以100％計，該量為約1％～約99％的活性成分，優(yōu)選約5％～約70％，最優(yōu)選約10％～約30％。
制備這些組合物的方法包括將維生素D3化合物(類)與該載體并且任選一種或多種助劑結合的步驟。通常，該配方通過均勻地且緊密地將維生素D3化合物與液體載體、或細微分開的固體載體、或二者結合，然后如果需要，使該產品成形而制備。
適合于經(jīng)口施用的本發(fā)明組合物可以是膠囊劑膠囊劑、扁膠囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用香味基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠)、散劑、顆粒劑，或為在水或非水性液體中的溶液劑或混懸劑，或為水包油或油包水液體乳劑，或為酏劑或糖漿劑，或為軟錠劑(使用惰性基質，例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或為口腔洗劑等的形式，各自含有預定量的維生素D3化合物(類)作為活性成分?；衔镞€可以以大丸劑、藥糖劑(electuary)或糊劑施用。
在本發(fā)明供經(jīng)口施用的固體劑型(膠囊劑、片劑、丸劑、糖錠劑、散劑、顆粒劑等)中，該活性成分與一種或多種藥學可接受的載體混合，該載體例如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣，和/或如下任意的1)充填劑或增充劑，例如淀粉類、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，例如，羧甲基纖維素、藻酸鹽類、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽類和碳酸鈉；(5)溶解阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收促進劑，例如季胺類化合物；(7)潤濕劑，例如，乙酰醇(acetyl alcohol)和單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，例如高嶺土和膨潤土；(9)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇類、十二烷基硫酸鈉及其混合物；和(10)著色劑。對于膠囊劑、片劑和丸劑，該藥物組合物還可以包括緩沖劑。使用賦形劑使用乳糖或乳糖(milksugars)以及高分子量聚乙二醇類等，相似類型的固體組分還可以作為充填劑用于軟和硬填充的明膠膠囊劑。
片劑可以任選地與一種或多種助劑通過壓制或模制而制備。壓制片劑可以使用粘合劑(例如，明膠或羥丙基甲基纖維素)、滑潤劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，淀粉羥乙酸鈉或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性或分散劑而制備。模制片劑可以通過在適當?shù)臋C器上將粉末化的用惰性液體稀釋劑潤濕的活性成分的混合物制模而得。
本發(fā)明藥物組合物的片劑和其它固體劑型，例如糖錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可以任選地壓痕，或者以衣層或殼而制備，例如藥物配制領域公知的腸溶衣或其它衣層。它們還可以配制成提供延緩或控制釋放的活性成分，其中使用例如，以不同比例提供期望的釋放模式的羥丙基甲基纖維素，其它聚合物基質、脂質體和/或微球。它們通過例如經(jīng)細菌截流濾器過濾，或通過將滅菌劑摻入無菌固體組合物中而除菌，該無菌固體組合物可以在使用前溶于無菌水或一些其它無菌可注射的介質中。這些組合物還任選地含有遮光劑并且可以是僅僅、或優(yōu)選在胃腸道的某些部位，任選地以延緩的方式釋放活性成分(類)的組合物?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質和蠟類。如果合適，該活性成分還可以是與一種或多種上述賦形劑的微膠囊形式。
維生素D3化合物(類)經(jīng)口施用的液體劑型包括藥學可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除該活性成分外，液體劑型可以含有通常用于本領域的惰性稀釋劑，例如，水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁烯乙二醇、油類(特別地，棉籽、花生、玉米、胚芽、橄欖、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氫呋喃甲醇、聚乙二醇類和脫水山梨醇脂肪酸酯類及其混合物。
除了惰性稀釋劑外，經(jīng)口服的組合物可以包括輔助劑例如潤濕劑、乳化劑和混懸劑、甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。
除了活性維生素D3化合物(類)外，混懸劑可以含有混懸劑，例如，乙氧基化異硬脂醇類、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯類、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠及其混合物。
本發(fā)明供直腸或陰道施用的藥物組合物可以是栓劑，其可以通過將一種或多種維生素D3化合物(類)與一種或多種適合的非刺激性的包括例如可可脂、聚乙二醇類、栓劑蠟或水楊酸酯的賦形劑或載體混合而制備，并且該栓劑在室溫下為固體，但在體溫下為液體，并且因此在直腸或陰道貌岸然腔中會熔化并釋放活性劑。
本發(fā)明適合陰道施用的組合物還包括陰道栓劑、棉塞劑、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或含有如本領域已知的適合的載體的噴霧配方。
維生素D3化合物(類)的局部或經(jīng)皮施用的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑。該活性維生素D3化合物(類)可以在無菌條件下與藥學可接受的載體和任何防腐劑、緩沖劑或可能需要的拋射劑混合。
除了本發(fā)明的維生素D3化合物(類)外，軟膏劑、糊劑、乳膏劑和凝膠劑可以含有賦形劑，例如動物和植物脂肪類、油類、蠟類、石蠟類、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇類、硅酮類、膨潤土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或其混合物。
除了維生素D3化合物(類)外，散劑和噴霧劑可以含有賦形劑例如乳糖、滑石粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣類和聚酰胺粉，或這些物質的混合物。噴霧劑還可以含有常用的拋射劑，例如氯氟碳氫化合物和揮發(fā)性未取代的碳氫化合物，例如丁烷和丙烷。
維生素D3化合物(類)可以另選地通過氣霧劑施用。這是通過制備含有該化合物的水性氣霧劑、脂質制品或固體顆粒而實現(xiàn)?？梢允褂梅撬?例如碳氟化合物拋射劑)混懸劑。聲波霧化器是優(yōu)選的，因為它們使該化合物曝露于剪切力減至最小，該剪切力可引起化合物降解。
通常，水性氣霧劑是通過將該化合物的水性溶液或混懸液與常規(guī)的藥學可接受的載體和穩(wěn)定劑配制而制備。該載體和穩(wěn)定劑因特定化合物的需要量而改變，但是典型地包括非離子型表面活性劑(吐溫類、普流羅尼克類或聚乙二醇類)、無毒蛋白類如血清白蛋白、脫水山梨酯類、油酸、卵磷脂、氨基酸例如甘氨酸、緩沖劑、鹽類、糖類或糖醇類。氣霧劑通常由等滲溶液制備。
透皮貼劑具有向身體提供控制釋放維生素D3化合物(類)的額外優(yōu)點。該劑型可以通過將該化合物溶解或分散至適當?shù)慕橘|中而制備。還可使用吸收促進劑以增加該活性成分穿過皮膚的流量。該流量的速率可以通過提供速率控制膜或者將活性成分分散至聚合物基質或凝膠中而得到控制。
眼科配方、眼膏劑、散劑、溶液劑等也在本發(fā)明的范圍內。
本發(fā)明適合胃腸外施用的藥物組合物包含一種或多種維生素D3化合物(類)與一種或多種藥學可接受的無菌等滲水性或非水性溶液劑、分散劑、混懸劑或乳劑，或者臨用前可以復溶于無菌可注射溶液劑或分散劑中的無菌粉末，該藥物組合物可以含有抗氧劑、緩沖劑、抑菌劑、使該配方與意欲接受者的血液等滲的溶質或者混懸或增稠劑。
可以用于本發(fā)明藥物組合物的適合的水性或非水性載體的實例包括水、乙醇、多元醇類(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇類等)及其適合的混合物、植物油類如橄欖油和可注射的有機酯類例如油酸乙酯?？梢员３诌m合的流動性，例如，通過使用包衣材料例如卵磷脂、在分散劑時通過維持需要的粒子徑和通過使用表面活性劑。
這些組合物還可以含有輔助劑例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。通過包含各種抗細菌劑和抗真菌劑可以確保防止微生物的作用。該抗細菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等。還可以需要等滲劑例如糖類、氯化鈉等包含于組合物中。另外，通過包含延緩吸收例如單硬脂酸鋁和明膠的成分，可以使可注射藥物劑型延長吸收。
在某些情況下，為了延長藥物的作用，需要減緩從皮下或肌內注射的藥物的吸收。這可以通過使用具有弱水溶性的結晶或無定形材料的液體混懸劑而實現(xiàn)。藥物的吸收速率依賴于其溶解速率，該溶解又依賴于晶體粒度和晶型。或者，胃腸外施用的藥物劑型的延緩吸收是通過將該藥物溶解或混懸于油性載體中而實現(xiàn)的。
可注射的貯庫形式是通過在生物可降解聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中將維生素D3化合物(類)形成微膠囊基質而制備的。依據(jù)藥物與聚合物的比，以及所用特定聚合物的性質，可以控制藥物的釋放速率。其它生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯類)和聚(酐類)。貯庫型可注射配方還可通過將藥物包陷在與身體組織相容的脂質體或微乳劑中而制備。
當維生素D3化合物(類)作為藥物施用于人或動物時，它們可以以其本身給予，或者以含有例如0.1～99.5％(更優(yōu)選0.5～90％)的活性成分與藥學可接受的載體組合的藥物組合物給予。
不論所選擇的施用途徑，本發(fā)明的可以以適當水合的形式使用的維生素D3化合物(類)和/或藥物組合物，它們是通過本領域技術人員已知的常規(guī)方法而配制成藥學可接受的劑型。
在本發(fā)明藥物組合物中的活性成分，其實際的劑量水平和施用的時程可以改變以便獲得一種活性成分的量，該量對于特定的患者、組合物和施用方法而言可有效地獲得期望的治療應答而對患者無毒性。示例性的劑量范圍內為每日0.1～10mg。
本發(fā)明維生素D3化合物的優(yōu)選劑量是患者可耐受的最大的并且不發(fā)生嚴重高鈣血癥的量。優(yōu)選地，本發(fā)明的維生素D3化合物以約0.001μg～約100μg/kg體重，約0.001～約10μg//kg體重或約0.001μg～約100μg/kg體重的濃度施用。上述值的中間范圍也是本發(fā)明的一部分。
本發(fā)明的實例 本發(fā)明通過以下實施例進一步說明，這些實施例不應解釋為進一步的限定。
本發(fā)明化合物的合成 試驗 涉及維生素D3類似物的全部操作均在氮氣氛下、在琥珀色玻璃器皿中進行。四氫呋喃是在臨用前從二苯酮羰自由基鈉(sodium-benzophenone ketyl)中蒸餾而來，并且溶質的溶液以硫酸鈉干燥。熔點在Thomas-Hoover毛細管儀上測定并且未經(jīng)校正。旋光度是在25℃下測定。除非另有說明，1H NMR光譜是在CDCl3中、在400MHz處記錄的。TLC是在硅膠板(Merck PF-254)上進行，在短波長UV光下顯影或通過以10％磷鉬酸甲醇噴板接著加熱顯影。快速色譜法是在40-65μm篩目硅膠上進行。制備型HPLC是在5×50cm柱及15-30μm篩目硅膠上、以100ml/min流速而完成。化合物1-14的結果概述于表1和2中。
實施例1 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
在-78℃下，向(3aR，4S，7aR)-1-{l-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-1-基])-環(huán)丙基}-乙炔基(1.0g，2.90mmol)在四氫呋喃(15mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(2.72mL，4.35mmol，1.6M在己烷中)。在-78℃下攪拌1h后加入丙酮(2.5mL，34.6mmol)，連續(xù)攪拌2.5h。加入NH4Cl水溶液(15mL)，并在室溫下將該混合物攪拌15min，然后用AcOEt(2×50mL)萃取。將合并的萃取液用鹽水(50mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(2.4g)通過FC(50g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到(3aR，4S，7aR)-5-{l-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-1-基]-環(huán)丙基}-2-甲基-戊-3-炔-2-醇(1.05g，2.61mmol)，將其用氟化四丁基銨(6mL，6mmol，1.0M在THF中)處理，并在65-75℃下攪拌48h。將該混合物用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×25mL)、鹽水(25mL)洗滌。將合并的水洗滌物用AcOEt(25mL)萃取，再將合并的有機萃取物通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(1.1g)通過FC(50g，20％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(0.75g，2.59mmol，90％)。
[α]30D＝+2.7c 0.75，CHCl3.1H NMR(CDCl3)5.50(1H，m)，4.18(1H，m)，2.40(2H，s)，2.35-1.16(11H，m)，1.48(6H，s)，1.20(3H，s)，0.76-0.50(4H，m)；13CNMR(CDCl3)156.39，125.26，86.39，80.19，69.21，65.16，55.14，46.94，35.79，33.60，31.67，29.91，27.22，19.32，19.19，17.73，10.94，10.37； MS HREI 計算值C22H28O2 M+288.2089，測定值M+288.2091. 實施例2 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-l-[l-(4-羥基-4-甲基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
在室溫下將(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(-4-羥基-4-甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(0.72g，2.50mmol)、乙酸乙酯(10mL)、己烷(24mL)、無水乙醇(0.9mL)、喹啉(47μL)和林德拉(Lindlar)催化劑(156mg，5％Pd披CaCO3)的混合物氫化2h。將該反應混合物通過硅藻土墊板(celite pad)過濾，并將該墊板用AcOEt洗滌。合并過濾液和洗滌液，再用1M HCl、NaHCO3和鹽水洗滌。通過Na2SO4干燥后蒸發(fā)溶劑，殘余物(0.79g)通過FC(45g，20％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(640mg，2.2mmol，88％)。
實施例3 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
使用Paar儀，在室溫和50p.s.i.壓力下，將(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(100mg，0.34mmol)、1，4-雙(二苯基-膦基)丁烷1，5環(huán)辛二烯銠四氟硼酸鹽(25mg，0.034mmol)、二氯甲烷(5mL)和1滴汞的混合物氫化3h。將該反應混合物通過硅藻土墊板過濾，然后將其用乙酸乙酯洗滌。將混合的過濾液和洗滌液蒸發(fā)至干(110mg)，再通過FC(10g，20％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(75mg，0.26mmol，75％)。
[α]30D＝-8.5c 0.65，CHCl3.1HNMR(CDCl3)5.37(1H，m，)，4.14(1H，m)，2.37-1.16(17H，m)，1.19(6H，s)，1.18(3H，s)，0.66-0.24(4H，m)； MS HREI 計算值 C19H32O2 M+H 292.2402。測定值M+H 292.2404. 實施例4 (3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮的合成
在室溫下向攪拌的(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(440mg，1.50mmol)和硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的混懸液中加入重鉻酸吡啶 (1.13g，3.0mmol)。將產生的混合物攪拌5h，通過硅膠(10g)過濾，然后將硅膠墊板用20％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并的過濾液和洗滌液蒸發(fā)，得到粗制的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(426mg，1.47mmol，98％)。在室溫下向(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(424mg，1.47mmol)在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的溶液中加入三甲代甲硅烷基-咪唑(0.44mL，3.0mmol)。將產生的混合物攪拌1.0h，通過硅膠(10g)過濾，再將硅膠墊板用10％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并液過濾，并將洗滌液蒸發(fā)，得到標題化合物(460mg，1.27mmol，86％)。
[α]29D＝-9.9c 0.55，CECl3.1H NMR(CDCl3)5.33(1H，dd，J＝3.2，1.5Hz)，2.81(1H，dd，J＝10.7，6.2Hz)，2.44(1H，ddd，J＝5.6，10.7，1.5Hz)，2.30-1.15(13H，m)重疊峰2.03(ddd，J＝15.8，6.4，3.2Hz)，1.18(6H，s)，0.92(3H，s)，0.66-0.28(4H，m)，0.08(9H，s)；13C NMR(CDCl3)211.08(0)，155.32(0)，124.77(1)，73.98(0)，64.32(1)，53.91(0)，44.70(2)，40.45(2)，38.12(2)，34.70(2)，29.86(3)，29.80(3)，26.80(2)，24.07(2)，22.28(2)，21.24(0)，18.35(3)，12.60(2)，10.64(2)，2.63(3)； MS HRES 計算值 C22H38O2Si M+362.2641。測定值M+362.2648. 實施例5 (3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮的合成
在室溫下向(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(381mg，1.32mmol)和硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的混懸液中加入重鉻酸吡啶(1.0g，2.65mmol)。產生的混合物攪拌1.5h，通過硅膠(10g)過濾，然后將硅膠墊板用20％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并的過濾液和洗滌液蒸發(fā)，得到粗制的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(360mg，1.26mmol，95％)。在室溫下(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-羥基-4-甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(360mg，1.26mmol)在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的溶液中加入三甲代甲硅烷基-咪唑(0.25mL，1.7mmol)。產生的混合物攪拌0.5h，通過硅膠(10g)過濾，再將硅膠墊板用5％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并液過濾，并將洗滌液蒸發(fā)，得到標題化合物(382mg，1.07mmol，81％)。
實施例6 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(1)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1，5-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-2-亞甲基-環(huán)己烷(513mg，0.88mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.55mL，0.88mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(179mg，0.50mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(716mg)通過FC(15g，5％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(324mg，045mmol)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(322mg，0.45mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，1M溶液在THF中)。將混合物攪拌18h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(280mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(1)(172mg，0.41mmol，82％)。
[α]31D＝+32.4c.0.50，MeOH.UVλmax(EtOH)261nm(ε11930)；1H NMR(CDCl3)6.36(1H，d，J＝11.3Hz)，6.09(1H，d，J＝11.3Hz)，5.45(1H，m)，5.33(1H，m)，5.01(1H，s)，4.45(1H，m)，4.22(1H，m)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.50-1.10(16H，m)，1.45(6H，s)，0.81(3H，s)，0.72-0.50(4H，m)；MS HRES計算值C28H38O3 M+ 422.2821。測定值M+422.2854. 實施例7 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-19-去甲-膽骨化醇(2)的合成
在-78℃下向(1R，3R)-1，3-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-5-[2-(二苯基膦基)亞乙基]-環(huán)己烷(674mg，1.18mmol)在四氫呋喃(8mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.74mL，1.18mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(235mg，0.66mmol)在四氫呋喃(3mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(850mg)通過FC(15g，5％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-19-去甲-膽骨化醇(330mg，0.46mmol)。在室溫下，向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-19-去甲-膽骨化醇(328mg，0.46mmol)中加入氟化四丁基銨(5mL，5mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌62h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(410mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(2)(183mg，0.45mmol，68％)。
[α]29D＝+72.1c 0.58，MeOH. UVλmax(EtOH)242nm(ε29286)，251nm(ε34518)，260mm(ε23875)；1HNMR(CDCl3)6.30(1H，d，J＝11.3Hz，5.94(1H，d，J＝11.3 Hz)，5.48(1H，m)，4.14(1H，m)，4.07(1H，m)，2.78(2H，m)，2.52-1.10(18H，m)，1.49(6H，s)，0.81(3H，s)，0.72-0.50(4H，m)；MS HRES 計算值 C27H38O3 M+410.2821。測定值M+410.2823. 實施例8 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
在-78℃下向(3aR，4S，7aR)-1-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-1-基])-環(huán)丙基}-乙炔基(1.95g，5.66mmol)在四氫呋喃(35mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(4.3mL，6.88mmol，1.6M在己烷中)。在-78℃下攪拌1h后，加入六氟丙酮(從冷卻棒中加入6滴)，并連續(xù)攪拌1h。加入NH4Cl水溶液(10mL)，并使該混合物溫熱至室溫。將反應混合物用鹽水(100mL)稀釋，并用己烷(2×125mL)萃取。將合并的萃取物通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(8.2g)通過FC(150g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到(3aR，4S，7aR)-5-{1-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-7a-甲基-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-1-基]-環(huán)丙基}-1，1，1-三氟-2-三氟甲基-戊-3-炔-2-醇(2.73g，5.35mmol)，將其用氟化四丁基銨(20mL，20mmol，1.0M在THF中)處理，并在65-75℃下攪拌30h。將該混合物用AcOEt(150mL)稀釋，再用水(5×150mL)、鹽水(150mL)洗滌。將合并的水洗滌物用AcOEt(150mL)萃取，再將合并的有機萃取物通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(3.2g)通過FC(150g，20％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(2.05g，5.17mmol，97％)。
[α]28D＝+6.0c0.47，CHCl3.1H NMR(CDCl3)5.50(1H，br.s)，4.16(1H，br.s)，3.91(1H，s)，2.48(1H，AB四重峰的A部分，J＝17.5Hz)，2.43(1H，AB四重峰的B部分，J＝17.5Hz)，2.27(1H，m)，2.00-1.40(9H，m)，1.18(3H，s)，0.8-0.5(4H，m)；13CNMR(CDCl3)155.26(0)，126.68(1)，121.32(0，q，J＝284Hz)，90.24(0)，71.44(0，sep.J＝34Hz)，70.54(0)，69.57(1)，55.17(1)，47.17(0)，36.05(2)，33.63(2)，30.10(2)，27.94(2)，19.50(3)，19.27(0)，17.90(2)，11.56(2)，11.21(2)；MS HREI 計算值 C19H22O2F6 M+396.1524。測定值M+396.1513. 實施例9 (3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羥基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮的合成
在室溫下向(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(504mg，1.27mmol)和硅藻土(1.5g)在二氯甲烷(12mL)中的攪拌的混懸液中加入重鉻酸吡啶(0.98g，2.6mmol)。將產生的混合物攪拌2.5h，通過硅膠(5g)過濾，然后將硅膠墊板用20％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并液過濾，并將洗滌液蒸發(fā)，得到標題化合物(424mg，1.08mmol，85％)。
[α]28D＝+3.1c 0.55，CHCl3.1H NMR(CDCl3)5.46(1H，br.s)，3.537(1H，s)，2.81(1H，dd，J＝10.7，6.5Hz)，2.49-1.76(10H，m)，0.90(3H，s)，0.77-0.53(4H，m)；MS HREI 計算值 C19H20O2F6M+H 395.1440。測定值M+H 395.1443. 實施例10 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(3)的合成
在-78℃下向(1R，3R)-1，3-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-5-[2-(二苯基膦基)亞乙基]-環(huán)己烷(900mg，1.58mmol)在四氫呋喃(8mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(1.0mL，1.6mmol)。產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-羥基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(200mg，0.51mmol)在四氫呋喃(3mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(850mg)通過FC(20g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(327mg，0.44mmol，86％)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(327mg，0.44mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌24h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(250mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(3)(183mg，0.45mmol，68％)。
[α]30D＝+73.3c 0.51，EtOH.UVλmax(EtOH)243nm(ε29384)，251nm(ε34973)，260nm(ε23924)；1H NMR(CDCl3)6.29(1H，d，J＝11.1Hz)，5.93(1H，d，J＝11.1Hz)，5.50(1H，m)，4.12(1H，m)，4.05(1H，m)，2.76(2H，m)，2.55-1.52(18H，m)，0.80 (3H，s)，0.80-0.49(4H，m)；13CNMR(CDCl3)155.24(0)，141.78(0)，131.28(0)，126.23(1)，123.65(1)，121.09(0，q，J＝285Hz)，115.67(1)，89.63(0)，70.42(0)，67.48(1)，672.9(1)，59.19(1)，49.87(0)，44.49(2)，41.98(2)，37.14(2)，35.76(2)，29.22(2)，28.47(2)，27.57(2)，23.46(2)，19.32(0)，17.97(3)，11.89(2)，10.18(2)； MS HRES 計算值 C27H32O3F6 M+H 519.2329。測定值M+H 519.2325. 實施例11 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(4)的合成
在下向(1S，5R)-1，5-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-2-亞甲基-環(huán)己烷(921mg，1.58mmol)在四氫呋喃(8mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(1.0mL，1.6mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羥基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(197mg，0.50mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(876mg)通過FC(20g，105％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(356mg，0.47mmol)。
在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(356mg，0.47mmol)中加入氟化四丁基銨(5mL，5mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(270mg)通過FC(20g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(4)(216mg，0.41mmol，87％)。
[α]30D＝+40.0c 0.53，EtOH.UVλmax(EtOH)262nm(ε12919)；1H NMR(CDCl3)638(1H，d，J＝11.5Hz)，6.10(1H，d，J＝11.1Hz)，5.49(1H，m)，5.35(1H，s)，5.02(1H，s)，4.45(1H，m)，4.25(1H，m)，3.57(1H，s)，2.83-1.45(18H，m)，0.82(3H，s)，0.80-0.51(4H，m)；MSHRES 計算值 C28H32O3F6 M+H531.2329。測定值M+H531.2337. 實施例12 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[2-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
在5℃下向氫化鋁鋰(4.5mL，4.5mmol，1.0M在THF中)中首先加入固體甲醇鈉(245mg，4.6mmol)，然后滴加(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(360mg，0.91mmol)在四氫呋喃(5mL)中的溶液。添加完畢后，在回流下將該混合物攪拌2.5h。然后在冰浴中將其冷卻，并用水(2.0mL)和氫氧化鈉(2.0mL，2.0M水溶液)猝滅；用醚(50mL)稀釋，攪拌30min，然后加入MgSO4(5g)，再連續(xù)攪拌30min。將過濾液蒸發(fā)后的殘余物(0.42g)通過FC(20g，20％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(315mg，0.79mmol，87％)。
[α]28D＝+2.0c 0.41，CHCl3.1HNMR(CDCl3)6.24(1H，dt，J＝15.7，6_7Hz)，5.60(1H，d，J＝15.7Hz)，5.38(1H，br.s)，4.13(1H，br.s)，3.27(1H，s)，2.32-1.34(12H，m)，1.15(3H，s)，0.80-0.45(4H，m)；13C NMR(CDCl3)155.89(0)，138.10(1)，126.21(1)，122.50(0，q，J＝287Hz)，119.15(1)，76.09(0，sep.J＝31Hz)，69.57(1)，55.33(1)，47.30(0)，40.31(2)，36.05(2)，33.71(2)，30.10(2)，20.36(0)，19.46(3)，17.94(2)，11.96(2)，11.46(2)；MS HREI 計算值C19H24O2F6 M+398.1680。測定值M+398.1675. 實施例13 (3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2E-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮的合成
在室溫下向(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(600mg，1.51mmol)和硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中攪拌的混懸液的中加入重鉻酸吡啶(1.13g，3.0mmol)。產生的混合物攪拌3.5h，通過硅膠(10g)過濾，然后將硅膠墊板用25％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并的過濾濾和洗滌液蒸發(fā)，得到粗制的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(550mg，1.39mmol，92％)。在室溫下向(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-三氟甲基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(550mg，1.39mmol)在二氯甲烷(15mL)中的攪拌的溶液中加入三甲代甲硅烷基-咪唑(1.76mL，12.0mmol)。將產生的混合物攪拌1.0h，通過硅膠(10g)過濾，并將硅膠墊板用10％AcOEt在己烷中的溶液洗滌。將合并的過濾濾和洗滌液蒸發(fā)，得到標題化合物(623mg，1.33mmol，88％)。
[α]28D＝-1.6c 0.51，CHCl3.1H NMR(CDCl3)6.14(1H，dt，J＝15.5，6.7Hz)，5.55(1H，d，J＝15.5Hz)，5.35(1H，m)，2.80(1H，dd，J＝10.7，6.4Hz)，2.47-1.74(10H，m)，0.90(3H，s)，0.76-0.40(4H，m)，0.2(9H，s)；13CNMR(CDCl3)210.99(0)，154.28(0)，137.41(1)，126.26(1)，122.59(O，q，J＝289Hz)，120.89(1)，64.31(1)，53.96(0)，40.60(2)，40.13(2)，35.00(2)，27.03(2)，24.21(2)，20.57(0)，18.53(3)，12.41(2)，10.79(2)，1.65(3)； MS HRES 計算值C22H30O2F6Si M+H 469.1992。測定值M+H 469.1995. 實施例14 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(5)的合成
在-78℃下向(1R，3R)-1，3-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-5-[2-(二苯基膦基)亞乙基]-環(huán)己烷(514mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(750mg)通過FC(15g，5％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇的混合物(250mg)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇的混合物(250mg)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌24h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(270mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(5)(157mg，0.30mmol，70％)。


EtOH.UVλmax(EtOH)243nm(ε30821251nm(ε3 6064)，260nm(ε24678)；1H NMR(CDCl3)6.29(1H，d，J＝11.3Hz)，6.24(1H，dt，J＝15.9，6.4Hz)，5.92(1H，d，J＝11.1Hz)，5.61(1H，d，J＝15.7Hz)，5.38(1H，m)，4.13(1H，m)，4.05(1H，m)，2.88(1H，s)，2.82-1.34(19H m)，0.770(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；MSHRES 計算值 C27H34O3F6M+H 521.2485。測定值M+H 521.2489. 實施例15 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇(6)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1，5-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-2-亞甲基-環(huán)己烷(525mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌2.5h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(760mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(274mg)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(274mg)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(280mg)通過FC(15g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(6)(167mg，0.31mmol，73％)。
[α]3D＝+18.3c 0.41，EtOH.UVλmax(EtOH)207nm(ε17778)，264nm(ε15767)；1H NMR(CDCl3)6.36(1H，d，J＝11.1Hz)，6.24(1H，dt，J＝15.7，6.7Hz)，6.07(1H，d，J＝11.3Hz)，5.60(1H，d，J＝15.5Hz)，5.35(1H，m)，5.33(1H，s)，5.00(1H，s)，4.44(1H，m)，4.23(1H，m)，3.14(1H，s)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.40-1.40(15H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；MS HRES計算值C28H34O3F6 M+H533.2485。測定值M+H 533.2483. 實施例16 (3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇的合成
在室溫下將(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(300mg，0.76mmol)、乙酸乙酯(5mL)、己烷(12mL)、無水乙醇(0.5mL)、喹啉(30μL)和林德拉催化劑(75mg，5％Pd披CaCO3)的混合物氫化2h。將該反應混合物通過硅藻土墊板過濾，并將該墊板用AcOEt洗滌。蒸發(fā)溶劑，得到標題化合物(257mg，0.65mmol，87％)。
[α]28D＝+1.8c0.61，CHCl3 1HNMR(CDCl3)6.08(1H，dt，J＝2.3，6.7Hz)，5.47(1H，m，)，5.39(1H，d，J＝12.1Hz)，4.15(1H，br.s)，328(1H，s)，2.52-1.34(12H，m)，1.16(3H，s)，0.78-0.36(4H，m)；13CNMR(CDCl3)156.66(0)，141.77(1)，126.51(1)，122.79(0，q，J＝285Hz)，115.77(1)，69.59(1)，55.41(1)，47.28(0)，36.44(2)，35.90(2)，33.75(2)，30.22(2)，20.89(0)，19.41(3)，17.94(2)，12.05(2)，11.11(2)；MS HRES 計算值C19H24O2F6 M+H 399.1753。測定值M+H 399.1757. 實施例17 (3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮的合成
在室溫下向(3aR，4S，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-醇(617mg，1.55mmol)和硅藻土(2.0g)在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的混懸液中加入重鉻酸吡啶(1.17g，3.1mmol)。將產生的混合物攪拌2.5h，通過硅膠(5g)過濾，然后將硅膠墊板用20％AcOEt己烷洗滌。將合并的過液濾和洗滌液蒸發(fā)，得到粗制的(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(600mg，1.51mmol，98％)。在室溫下向(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-羥基-4-三氟甲基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(600mg，1.51mmol)在二氯甲烷(15mL)中的攪拌的溶液中加入三甲代甲硅烷基-咪唑(1.76mL，12.0mmol)。將產生的混合物攪拌1.0h，通過硅膠(10g)過濾，并將硅膠墊板用10％AcOEt的己烷洗滌。將合并的過液濾和洗滌液蒸發(fā)，得到標題化合物(640mg，1.37mmol，88％)。
[α]28D＝-0.2c 0.55，CHCl3.1H NMR(CDCl3)5.97(1H，dt，J＝12.2，6.2Hz)，5.40(1H，m)，5.38(1H，d，J＝12.2Hz)，2.82(1H，dd，J＝10.7，6.6Hz)，2.60-1.74(10H，m)，0.89(3H，s)，0.75-0.36(4H，m)，0.21(9H，s)；13C NMR(CDCl3)210.56(0)，154.30(0)，139.28(1)，125.81(1)，122.52(0，q，J＝289Hz)，118.17(1)，64.11(1)，53.69(0)，40.43(2)，35.51(2)，34.85(2)，26.94(2)，24.07(2)，20.89(0)，18.39(3)，12.26(2)，10.61(2)，1.43(3)； MS HRES 計算值 C22H30O2F6Si M+H 469.1992。測定值M+H 469.1992. 實施例18 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇(7)的合成
在-78℃下向(1R，3R)-1，3-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-5-[2-(二苯基膦基)亞乙基]-環(huán)己烷(514mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(194mg，0.41mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.0h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(750mg)通過FC(15g，10％AcOEt己烷)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇的混合物(230mg)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇的混合物(230mg)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌40h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(260mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(7)(1327mg，0.25mmol，62％)。
[α]28D＝+53.6c0.33，EtOH.UVλmax(EtOH)243nm(ε26982)，251nm(ε32081)，260nm(ε21689)；1H NMR(CDCl3)6.29(1H，d，J＝10.7Hz)，6.08(1H，dt，J＝12.5，6.7Hz)，5.93(1H，d，J＝11.1Hz)，5.46(1H，m，)，5.40(1H，d，J＝12.7Hz))，4.12(1H，m)，4.05(1H，m)，3.14(1H，s)，2.80-1.40(19H，m)，0.37(3H，s)，0.80-0.36(4H，m)；MS HRES 計算值C27H34O3F6 M+H 521.2485。測定值M+H 521.2487. 實施例19 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇(8)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-l，5-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-2-亞甲基-環(huán)己烷(525mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌2.5h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(680mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(310mg)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(310mg)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(370mg)通過FC(10g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(8)(195mg，0.37mmol，85％)。
[α]30D＝+9.4c 0.49，EtOH.UVλmax(EtOH)262nm(ε11846)；1HNMR(CDCl3)6.36(1H，d，J＝11.1Hz，6.08(2H，m)，5.44(1H，m)，5.40(1H，d，J＝12.3Hz)，5.32(1H，s)，5.00(1H，s)，4.43(1H，m)，423(1H，m)，3.08(1H，s)，2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.55-1.40(15H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.34(4H，m)；MS HRES計算值C28H34O3F6 M+H 533.2485。測定值M+H 533.2502. 實施例20 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇(9)的合成
在-78℃下向(1R，3R)-1，3-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-5-[2-(二苯基膦基)亞乙基]-環(huán)己烷(697mg，1.22mmol)在四氫呋喃(9mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.77mL，1.23mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(220mg，0.61mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(900mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇(421mg，0.59mmol)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇(421mg，0.59mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌40h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(450mg)通過FC(15g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(9)(225mg，0.54mmol，89％)。
[α]29D＝+69.5c0.37，EtOH.UVλmax(EtOH)243nm(ε27946251nm(ε33039)，261nm(ε22701)；1HNMR(CDCl3)6.30(1H，d，J＝11.3Hz)，5.93(1H，d，J＝11.3Hz)，，5.36(1H，m)，4.12(1H，m)，4.04(1H，m)，2.75(2H，m)，2.52-1.04(22H，m)，1.18(6H，s)，0.79(3H，s)，0.65-0.26(4H，m)；13C NMR(CDCl3)157.16(0)，142.33(0)，131.25(0)，124.73(1)，123.76(1)，115.50(1)，71.10(0)，67.39(1)，67.19(1)，59.47(1)，50.12(0)，44.60(2)，43.84(2)，42.15(2)，38.12(2)，37.18(2)，35.57(2)，29.26(3)，29.11(2)，29.08(3)，28.48(2)，23.46(2)，22.26(2)，21.27(0)，17.94(3)，12.70(2)，10.27(2)；MS HRES計算值C27H42O3 M+H 415.3207。測定值M+H 415.3207. 實施例21 1α，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(10)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1，5-雙-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-2-亞甲基-環(huán)己烷(675mg，1.16mmol)在四氫呋喃(8mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.73mL，1.17mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(210mg，0.58mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(35mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(850mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(382mg，0.53mmol)。在室溫下向1α，3β-二(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇(382mg，0.53mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，并通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(380mg)通過FC(15g，50％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(10)(204mg，0.48mmol，83％)。
[α]29D＝+16.1c 0.36，EtOH.UV λmax(EtOH)208nm(ε17024)，264nm(ε16028)；1HNMR(CDCl3)6.37(1H，d，J＝113Hz)，6.09(1H，d，J＝11.1Hz)，5.33(2H，m)，5.01(1H，s)，4.44(1H，m)，4.23(1H，m)， 2.80(1H，m)，2.60(1H，m)，2.38-1.08(2OH，m)，1.19(6H，s)，0.79(3H，s)，0.66-0.224(4H，m)；13CNMR(CDCl3)157.07(0)，147-62(0)，142.49(0)，133.00(0)，124.90(1)，124.73(1)，117.19(1)，111.64(2)，71.10(1)，70.70(0)，66.88(1)，59.53(1)，50.28(0)，45.19(2)，43.85(2)，42.86(2)，38.13(2)，35.59(2)，29.27(2)，29.14(3)，28.65(2)，23.57(2)，22.62(2)，21.29(0)，17.84(3)，12.74(2)，1O.30(2)；MS HRES計算值C28H42O3 M+Na449.3026。測定值M+Na 449.3023. 實施例22 1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(11)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-5-氟-2-亞甲基-環(huán)己烷(320mg，0.68mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.43mL，0.68mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(4-甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(122mg，0.34mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(30mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物通過FC(15g，5％AcOEt在己烷中)純化，得到1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(162mg，0.27mmol)。
在室溫下向1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-膽骨化醇(162mg，0.27mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌18h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(160mg)通過FC(10g，30％AcOEt在己烷和AcOEt中)純化，得到標題化合物(106mg，0.25mmol，74％)。
[α]31D＝+60.6c 0.51，MeOH；UVλmax(MeOH)242nm(ε12265)，269nm(ε12618)；1H NMR(CDCl3)6.40(1H，d，J＝11.1Hz)，6.10(1H， d，J＝11.1Hz)，5.45(1H，m)，5.40(1H，s)，5.15(1H，dm，J＝50Hz)，5.12(1H，s)，4.23(1H，m)，2.85-1.50(17H，m)，1.47(6H，s)，0.81(3H，s)，0.72-0.50(4H，m). MS HRES 計算值 C28H37FO2 M+424.2778 測定值 M+424.2745. 實施例23 1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(12)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-5-氟-2-亞甲基-環(huán)己烷(565mg，1.2mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.75mL，1.2mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-羥基-戊-2-炔基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(156mg，0.40mmol)在四氫呋喃(2.5mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌3.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(610mg)通過FC(20g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(206mg)。在室溫下向1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-炔-26，27-六氟-膽骨化醇(206mg，0.32mmol)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(50mL)稀釋，再用水(4×520mL)、鹽水(50mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(410mg)通過FC(20g，30％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(163mg，0.31mmol， [α]30D＝+39.8c 0.48，EtOH.UVλmax(EtOH)244nm(ε9521)；1H NMR(CDCl3)6.39(1H，d，J＝11.3Hz)，6.10(1H，d，J＝11.1Hz)，5.48(1H，m)，5.40(1H，s)，5.15(1H，dm，J＝52Hz)，5.11(1H，s)，4.23(1H，m)，3.56(1H，s)，2.82-1.52(16H，m)，030(3H，s)，0.80-0.50(4H，m). MS HRES 計算值 C28H31O2F7 M+H 533.2285 測定值M+H 533.2300. 實施例24 1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇(13)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-5-氟-2-亞甲基-環(huán)己烷(424mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟-4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧-戊-2E-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(200mg，0.43mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌2.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(660mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(197mg)。
在室溫下向1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-E-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(197mg)中加入氟化四丁基銨(4mL，4mmol，在THF中的1M溶液)。將該混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(190mg)通過FC(10g，30％，50％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(143mg，0.27mmol，62％)。
[α]30D＝+47.4c 0.38，EtOH.UVλmax(EtOH)243nm(ε9699)，265nm(ε9315)；1HNMR.(CDCl3)6.39(1H，d，J＝11.3Hz)，6.25 1H，dt，J＝15.8，6.6Hz)，6.09(1H，d，J＝11.3Hz)，5.61(1H，d，J＝15.6Hz)，5.40(1H，s)，5.36(1H，m)，5.15(1H，dm，J＝52Hz)，5.11(1H，s)，4.23(1H，m)，3.18(1H，s)，2.80(1H，m)，2.63(1H，m)，2.40-1.46(14H，m)，0.78(3H，s)，0.76-0.36(4H，m). MS HRES 計算值 C28H331O2F7 M+H 535.2442測定值 M+H 535.2450 實施例25 1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇(14)的合成
在-78℃下向(1S，5R)-1-((叔丁基二甲基)硅烷基氧基)-3-[2-(二苯基膦基)-乙-(Z)-亞基]-5-氟-2-亞甲基-環(huán)己烷(424mg，0.90mmol)在四氫呋喃(6mL)中的攪拌的溶液中加入n-BuLi(0.57mL，0.91mmol)。將產生的混合物攪拌15min，并滴加(3aR，7aR)-7a-甲基-1-[1-(5，5，5-三氟4-三氟甲基-4-三甲基硅烷基氧基-戊-2Z-烯基)-環(huán)丙基]-3a，4，5，6，7，7a-六氫-3H-茚-4-酮(100mg，0.25mmol)在四氫呋喃(2mL)中的溶液。在-72℃下將該反應混合物攪拌4.5h，用己烷(25mL)稀釋，鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(590mg)通過FC(15g，10％AcOEt在己烷中)純化，得到1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(85mg)。在室溫下向1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-三甲基硅烷基氧基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇和1α-氟-3β-叔丁基-二甲基-硅烷基氧-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23，24-Z-烯-26，27-六氟-膽骨化醇的混合物(85mg)中加入氟化四丁基銨(2mL，2mmol，在THF中的1M溶液)。將混合物攪拌15h，用AcOEt(25mL)稀釋，再用水(5×20mL)、鹽水(20mL)洗滌，再通過Na2SO4干燥。將蒸發(fā)溶劑后的殘余物(110mg)通過FC(10g，30％，50％AcOEt在己烷中)純化，得到標題化合物(62mg，0.12mmol，46％)。
[α]30D＝+26.5c 0.37，EtOH UVλmax(EtOH)243nm(ε10706)，266nm(ε10098)； 1H NMR(CDCl3)6.39(1H，d，J＝11.3Hz)，6.09(1H，d，J＝11.8Hz)，6.08 1H，dt，J＝12.1，6.9Hz)，5.44(1H，m)，5.40(1H，d，J＝12.1Hz)，5.39(1H，s)，5.14(1H，dm，J＝50Hz)，5.10(1H，s)，4.23(1H，m)，3.08(1H，s)，2.79(1H，m)，2.62(1H，m)，2.60-1.50(14H，m)，0.77(3H，s)，0.80-0.34(4H，m). MS HRES 計算值 C28H33O2F7 M+H 535.2442測定值 M+H 535.2453. 生物學實施例 實施例26 最大耐受劑量(MTD)的測定 本發(fā)明維生素D3化合物的最大耐受劑量是以8周齡雌性C57BL/6小鼠(3小鼠/組)，以不同濃度的維生素D3類似物，每日經(jīng)口給藥(0.1ml/小鼠)達4日。將類似物配制在米格列醇(miglyol)中，使每日以0.1ml/小鼠p.o.給予時達到0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100和300μg/kg的終濃度。在研究最后一日的第5日通過尾部放血抽取用于血清鈣測定的血。使用比色測定法(Sigma Diagnostics，操作編號597)測定血清鈣水平。取耐受而不誘導高鈣血癥(血清鈣＞10.7mg/dl)的類似物的最高劑量作為最大耐受劑量(MTD)。表3顯示了化合物(1)-(14)的相對MTD。
實施例27 化合物(1)-(14)的免疫測定 未成熟樹突狀細胞(DC)如Romani，N.等人(Romanij N.等人(1996)J.Immunol.Meth.196137)所述制備。在混合白細胞應答(MLR)中激活同種異體T細胞的IFN-γ產量是如Penna，G.，等人，J Immunol，1642405-2411(2000)所述測定。
簡而言之，外周血單核細胞(PBMC)是通過聚蔗糖(Ficoll)梯度從血沉棕黃層分離而得，并將相同數(shù)目(3×105)的來自2種不同供體的同種異體PBMC在96孔平底板中共同培養(yǎng)。將維生素D3化合物加至各培養(yǎng)物中。5日后，MLR測定中的IFN-γ產量通過ELISA測定，結果以需要誘導50％抑制IFN-γ產量(IC50)的測試化合物的量(nM)表示。結果概述于表3中。
表3 實施例28 使用膀胱癌細胞系的增殖測定 膀胱癌細胞系(T24、RT112、HT1376和RT4為人膀胱癌細胞系；NHEK為正常人角質化細胞)從European Collection of Cell Cultures(Salisbury，UK)獲得。在平底96孔板中在100μl的DMEM介質內將細胞以3×103/孔鋪板，該DMEM培養(yǎng)基含有5％胎克隆I(Fetal CloneI)、50μg/l慶大霉素、1mM丙酮酸鈉和1％非必需氨基酸。在37℃下5％CO2中培養(yǎng)24h后，使細胞附著在板上，加入在100μl上述完全培養(yǎng)基中的濃度100μM～0.3μM的VDR配體(化合物(1)-(14))。進一步培養(yǎng)72h后，使用熒光基礎增殖測定盒測定細胞增殖(CyQuant細胞增殖測定盒，分子探針，Eugene，OR，USA)。由滴定數(shù)據(jù)的回歸曲線計算IC50。結果見表4。
表4 實施例29 骨化三醇和維生素D3類似物對膀胱狀細胞的生長和功能的活性 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，骨化三醇和維生素D3類似物對膀胱狀細胞的生長和功能有影響，這已在體外模型中通過培養(yǎng)人間質膀胱狀細胞得到證實。本發(fā)明人證實了文獻已報道的維生素D受體(VDR)存在于這些細胞中(見以下圖1)。
在這些模型中，骨化三醇(維生素D3的活性型)和其它維生素D3類似物(化合物(4)、(6)、(8)和(10))顯示有效地抑制膀胱狀細胞的基礎(圖2)生長。在以前尚未報道的該活性是劑量依賴型的，骨化三醇(1，25-二羥基維生素D3)(對基底細胞)的IC50為9.8±7×10-15。
已經(jīng)完成了一些其它維生素D化合物的類似研究，結果(以-LogIC50表示)見下表。表中數(shù)據(jù)是指化合物對基底人膀胱細胞生長的抑制作用，該細胞未用睪酮刺激或(在一種情況下)受刺激。還列出了各化合物的大鼠最大耐受劑量(MTD)(表5)。
表5 實施例30 在鼠類/腎小球旁細胞系As4.1中腎素mRNA的抑制作用 在完全培養(yǎng)基中用本發(fā)明化合物以108、109、和1010M將As4.1細胞(80％亞融合)處理24h。將總RNA用RNeasy Mini試劑盒(Qiagen)提取；用DNase I(Qiagen)處理，根據(jù)制造商的指示以隨機試驗將逆轉錄試劑(Applied Biosystems)用于逆轉錄作用。使用商業(yè)獲得的β-肌動蛋白VIC結合探針(目錄號4352341E，Applied Biosystems)和用戶設計的mRENIN FAM-結合探針(圖樣分析，Applied Biosystems；正向AGGCCTTCCTTGACCAATCTTAC；反向GCTGAACCCGTGTCAAAGATG；探針FAM-ACCAACTACCTGAATACCGAGT-MGB)，以多通路完成實時PCR分析。反應在25μL體積中完成，該25μL體積中含有12.5μl 2×Master Mix(AppliedBiosystems)、10ng/反應/孔cDNA和2.5μM各種基因特異性引物。將ABI PRISM 7700分析儀(Applied Biosystems)在50℃下使用2分鐘，在95℃下使用10分鐘，接著在95℃下15秒和60℃下1分鐘經(jīng)40循環(huán)。將循環(huán)閾(Ct)值輸出到Excel工作表中進行分析。將試驗cDNA結果對鼠β-肌動蛋白持家(housekeeping)基因正交。使用2-ΔΔCt方法來表示扣除對未扣除群間基因表達的疊差(表6)。
表6 實施例31 硅(Silico)模型 根據(jù)二維結構，計算多種與藥用性能(druggability)相關的物理化學和結構性質來評價化合物。使用ACD/labs軟件(v.7.0，AdvancedChemistry Development Inc.，Toronto，Canada)。計算的物理化學性質包括辛醇/水分配系數(shù)的對數(shù)尺(ACDlogP)、pH7.4時辛醇/水分配系數(shù)的對數(shù)尺(logD7.4)和pH7.4時摩爾溶解度對數(shù)轉換(logS7.4)計算的結構性質包括分子量(MW)、摩爾體積(表示為cm3)、摩爾折射系數(shù)(表示為cm3)、氫鍵供體和受體(即H供體和H受體)的數(shù)目、自由旋轉鍵(FRB)的數(shù)目、違反Lipinski規(guī)則的數(shù)目和極化表面積(PSA表示為2)。結果見表7。
為評價所選化合物腸吸收的可能性，還使用了修改的原始方程計算小鼠、大鼠和人的腸的最大可吸收劑量(MAD)(Johnson 1996，Hilgers2003)MAD(mg)＝S·Pe·(A/ILV)·SIV·SITT(方程1)，其中S是在pH7.4時測定的溶解度(mg/ml)，Pe是在人工膜(PAMPA)上或在Caco-2細胞尖端至底外側方向上測定的滲透性(cm/sec)，A是腸表面積(cm2)，ILV是腸內腔容積(cm3)，SIV是小腸容積，SITT是通過小腸時間(sec)。結果見表8。
表7、計算的化合物的物理化學和結構性質(ACD/labs 7.0軟件) 表8、使用PAMPA或Caco-2滲透性數(shù)據(jù)計算化合物在小鼠、大鼠和人中的理論MAD(還報告了pH7.4的溶解度和滲透性數(shù)據(jù))。
實施例32 體外模型 以下體外試驗用于表征化合物 pH7的溶解度。使用96-孔板模塊測定。將化合物貯備溶液在pH值7的水緩沖溶液中稀釋成10μM的濃度。溶液經(jīng)0.22μm過濾，過濾液中的化合物濃度以1和10μM標準作對照，使用LC-MS/MS測定。測量結果以mM表示。
代謝穩(wěn)定性(hCYP34A4)。底物的相對穩(wěn)定性是通過與表達CYP3A4微粒體制品(Gentest，6pmol)的人cDNA孵育，與含有活性的細胞色素P450的對照微粒體孵育對比，測量底物剩余量而測定其穩(wěn)定性。該測定是在96孔板模塊中完成。每一化合物以2μM濃度在37℃下孵60min。使用LC-MS/MS測定孵育后剩余的化合物。結果表示為％剩余。
被動擴散的滲透性(JPAMPA)。試驗在96孔接受板(acceptor)和供應板(donor)上、使用15％大豆卵磷脂、以正十二烷人工膜而完成。接受板(96孔疏水性濾板(MAIP N45，Millipore))是通過4μL人工膜材料加至濾器上端而制備，并將該板用200μL的HEPES緩沖的HBSS(pH7.4)過濾。供應板(鋸齒狀96孔板來自于p-ION，MA)用含有10μM試驗化合物的200μL的HEPES緩沖的HBSS(pH7.4)過濾。將接受板置于供應板上，形成″三明治″，并在37℃下孵育4小時。孵育期過后，接受板、供應板和初始供應板溶液(參比)經(jīng)LC-MS/MS分析。將數(shù)據(jù)報告為以cm×10-6/秒表示的雙向Peff(bilateral Peff)和膜中％殘留量。
Caco-2細胞上的表觀滲透性。人結腸腺癌(Caco-2)細胞從American Type Culture Collection(Rockville，MD)獲得。滲透性研究是使用24孔模塊在Caco-2單層上，以2個轉運方向，即頂端(apical)至底外側(basolateral)(A→B)和基底外側至頂端(B→A)而完成。將含有10μM試驗化合物的新鮮供體溶液加至頂端或底外側，同是將無藥物的培養(yǎng)基加至相對側。在37℃下將24橫孔板置于板振蕩器上。2h后，收集來自接收和供體室的緩沖溶液，并將等分經(jīng)LC-MS/MS分析。報告的數(shù)據(jù)為滲透性cm·10-6/秒和流出率。結果見表9。
表9、使用體外模型獲得的生物藥劑學性質 NA未得到 ＜1低于測定限 實施例33 軟明膠膠囊配方I 項目 成分 mg/膠囊 1化合物(1) 10.001-0.02 2二丁基羥基甲苯(BHT)0.016 3叔丁基對羥基茴香醚(BHA)0.016 4米格列醇812，適量 160.0 制備過程 1、將BHT和BHA混懸于米格列醇812中，并在攪拌下混熱至約50℃，直至溶解。
2、在50℃下將1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇溶于步驟1的溶液中。
3、在室溫下將步驟2的溶液冷卻。
4、將步驟3的溶液填充至軟明膠膠囊中。
注所有制備步驟均在在氮氣氛下完成并避光。
實施例34 軟明膠膠囊配方II 項目 成分 mg/膠囊 1化合物(1) 10.001-0.02 2二-α-生育酚(Di-α-Tocopherol) 0.016 3米格列醇812，適量 160.0 制備過程 1、將二-α-生育酚混懸于米格列醇812中，并在攪拌下混熱至約50℃，直至溶解。
2、在50℃下將1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇溶于步驟1的溶液中。
3、在室溫下將步驟2的溶液冷卻。
4、將步驟3的溶液填充至軟明膠膠囊中。
合并引用 據(jù)此，本申請的全部引用內容(包括文獻、授權專利、公開專利申請和共同待決專利申請)以其整體通過引用清楚地并入本文。
等同物 本領域技術人員清楚，或者只使用常規(guī)試驗即能夠確定本發(fā)明在此描述特定的實施方案的許多等同物。該等同物包含于以下權利要求中。
權利要求
1.式I的維生素D3化合物
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；
R1是羥基或鹵素；
R2和R3與C20一起形成C3-C6環(huán)烷基；
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基；
R6是氫、C1-C4烷基、羥基烷基或鹵代烷基，條件是當B是三鍵時R6不存在；和
藥學可接受的酯類、鹽類及其前體藥物。
2.權利要求1所述的化合物，其中R1是羥基。
3.權利要求1所述的化合物，其中R1是鹵素。
4.權利要求3所述的化合物，其中R1是F。
5.權利要求1-4任意一項所述的化合物，其中B是單鍵。
6.權利要求1-4任意一項所述的化合物，其中B是雙鍵。
7.權利要求1-4任意一項所述的化合物，其中B是三鍵。
8.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中X1是CH2并且X2是H2。
9.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中X1和X2各自是H2。
10.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
11.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R4和R5各自獨立地是烷基或三鹵代烷基。
12.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R4和R5各自獨立地是甲基或三氟甲基。
13.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R4和R5是甲基。
14.權利要求1-12任意一項所述的化合物，其中R4和R5是三氟甲基。
15.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R6是氫。
16.上述權利要求任意一項所述的化合物，其中R2和R3與C20一起形成環(huán)丙基。
17.權利要求1所述的化合物，其具有式I-a
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
18.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
19.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
20.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇
21.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-膽骨化醇
22.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇
23.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
24.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-19-去甲-膽骨化醇
25.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
26.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
27.權利要求17所述的化合物，其中所述的化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
28.權利要求1所述的化合物，其具有式I-b
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
29.權利要求28所述的化合物，其中所述的化合物是1α-氟-25-羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
30.權利要求28所述的化合物，其中所述的化合物是1α-氟-25-羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-23-炔-26，27-六氟-膽骨化醇
31.權利要求28所述的化合物，其中所述的化合物是1α-氟-25-羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
32.權利要求28所述的化合物，其中所述的化合物是1α-氟-25-羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
33.治療個體的維生素D3相關疾病的方法，包括向所述的需要的個體施用有效量的權利要求1-32任意一項的維生素D3化合物，這樣所述的個體治療了所述的維生素D3相關疾病。
34.根據(jù)權利要求33所述的方法，進一步包括獲得所述維生素D化合物的所述步驟。
35.權利要求33所述的方法，進一步包括鑒別需要治療維生素D3相關疾病的個體。
36.權利要求33所述的方法，其中所述的維生素D3相關疾病是ILT3-相關障礙。
37.權利要求36所述的方法，其中所述的ILT3-相關障礙是免疫障礙。
38.權利要求37所述的方法，其中所述的免疫障礙是自身免疫性障礙。
39.權利要求38所述的方法，其中所述的自身免疫性障礙選自1型胰島素依賴型糖尿病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、皮炎、腦膜炎、血栓性血小板減少性紫癜、斯耶格倫氏綜合征、腦炎、眼色素層炎、眼色素層視網(wǎng)膜炎、白細胞粘附缺陷、類風濕性關節(jié)炎、風濕熱、萊特爾氏綜合征、牛皮癬關節(jié)炎、進行性全身性硬化癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、天皰瘡、類天皰瘡、壞死性脈管炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化癥、紅斑狼瘡、多發(fā)性肌炎、結節(jié)病、肉芽腫病、血管炎、惡性貧血、CNS炎性障礙、抗原-抗體復合介導的疾病、自身免疫性溶血性貧血癥、橋本氏甲狀腺炎、格雷夫斯病、習慣性自然流產、雷諾氏綜合征、腎小球腎炎、皮肌炎、慢性活動性肝炎、腹部疾病、AIDS的自身免疫性并發(fā)癥、萎縮性胃炎、強直性脊柱炎和阿狄森氏病。
40.權利要求37所述的方法，其中所述的免疫障礙是移植排斥。
41.權利要求38所述的方法，其中所述的自身免疫性障礙是I型胰島素依賴型糖尿病。
42.權利要求33所述的方法，其中所述的維生素D3相關疾病是一種以維生素D3-應答細胞的異?；钚詾樘卣鞯恼系K。
43.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙包括過度增殖皮膚細胞的異?；钚浴?br> 44.權利要求43所述的方法，其中所述的障礙選自牛皮癬、基底細胞癌和角化病。
45.權利要求44所述的方法，其中所述的障礙是牛皮癬。
46.權利要求45所述的方法，其中所述的維生素D3化合物具有所述的式I-a
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
47.權利要求46所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
48.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙包括內分泌細胞的異?；钚浴?br> 49.權利要求48所述的方法，其中所述的內分泌細胞是甲狀旁腺細胞，并且所述的異?；钚允羌谞钆韵偌に氐奶幚砗?或分泌。
50.權利要求49所述的方法，其中所述的障礙是繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥。
51.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙包括骨細胞的異常活性。
52.權利要求51所述的方法，其中所述的障礙選自骨質疏松癥、骨營養(yǎng)不良、老年性骨質疏松癥、骨軟化癥、佝僂病、囊性纖維性骨炎和腎性骨營養(yǎng)不良。
53.權利要求52所述的方法，其中所述的障礙是骨質疏松癥。
54.權利要求53所述的方法，其中所述的維生素D3化合物具有所述的式I-a
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
55.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是肝硬化或慢性腎臟病。
56.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是高血壓。
57.權利要求56所述的方法，其中所述的化合物抑制腎素的表達，從而治療所述的個體的高血壓。
58.權利要求57所述的方法，其中所述的維生素D3化合物具有所述的式I-a
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
59.權利要求57所述的方法，其中所述的維生素D3化合物具有所述的式I-b
其中
B是單鍵、雙鍵或三鍵；
X1和X2各自獨立地是H2或CH2，假定X1和X2不都是CH2；和
R4和R5各自獨立地是烷基或鹵代烷基。
60.權利要求58所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
61.權利要求58所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-23-炔-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
62.權利要求58所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
63.權利要求58所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-19-去甲-膽骨化醇
64.權利要求58所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1，25-二羥基-16-烯-20-環(huán)丙基-膽骨化醇
65.權利要求59所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1α-氟-25-羥基-16，23E-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
66.權利要求59所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是1α-氟-25-羥基-16，23Z-雙烯-20-環(huán)丙基-26，27-六氟-膽骨化醇
67.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是良性的前列腺肥大。
68.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是腫瘤疾病。
69.權利要求68所述的方法，其中所述的腫瘤疾病選自白血病，淋巴瘤，黑素瘤，骨肉瘤，結腸癌，直腸癌，前列腺癌，膀胱癌和肺臟、乳腺、胃腸道和生殖泌尿道的惡性腫瘤。
70.權利要求69所述的方法，其中所述的腫瘤疾病是膀胱癌。
71.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是神經(jīng)元缺失。
72.權利要求71所述的方法，其中所述的障礙是選自阿耳茨海默氏病、皮克氏病、帕金森氏病、血管疾病、亨延頓氏病和年齡相關記憶缺陷。
73.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是眼色素層炎。
74.權利要求45所述的方法，其中所述的障礙是間質性膀胱炎。
75.權利要求42所述的方法，其中所述的障礙是以維生素D3-應答的平滑肌細胞的異?；钚詾樘卣?。
76.權利要求75所述的方法，其中所述的障礙是子宮肌瘤。
77.權利要求75所述的方法，其中所述的障礙是過度增殖性血管疾病，其選自高血壓誘導的血管重構、血管再狹窄和動脈粥樣硬化。
78.權利要求75所述的方法，其中所述的障礙是動脈性高血壓。
79.改善鈣磷代謝脫調節(jié)的方法，包括向個體施用治療有效量的權利要求1-32任意一項的化合物，以便改善鈣磷代謝脫調節(jié)。
80.權利要求79所述的方法，其中所述的鈣磷代謝脫調節(jié)導致骨質疏松癥。
81.調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在細胞中表達的方法，包括將所述細胞與有效量的權利要求1-32任意一項的化合物接觸以調節(jié)免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子在所述細胞中的表達。
82.權利要求81所述的方法，其中所述的細胞是在個體內。
83.在個體中治療ILT3-相關障礙的方法，包括向所述的個體施用有效量的權利要求1-32任意一項的化合物以調節(jié)所述的ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中治療所述的ILT3-相關障礙。
84.權利要求83所述的方法，其中所述的ILT3-相關障礙是免疫障礙。
85.權利要求84所述的方法，其中所述的免疫障礙是自身免疫性障礙。
86.權利要求85所述的方法，其中所述的自身免疫性障礙是胰島素依賴型糖尿病。
87.在個體中誘導免疫耐受的方法，包括向所述的個體施用有效量的權利要求1-32任意一項的化合物以調節(jié)所述的ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中誘導免疫耐受性。
88.權利要求87所述的方法，其中所述的免疫耐受性是在抗原呈遞細胞中被誘導的。
89.權利要求88所述的方法，其中所述的抗原呈遞細胞選自樹突狀細胞、單核細胞和巨噬細胞。
90.在個體中抑制移植排斥的方法，包括向所述的個體施用有效量的權利要求1-32任意一項的化合物以調節(jié)所述的ILT3表面分子的表達，從而在所述的個體中抑制移植排斥。
91.權利要求90所述的方法，其中所述的移植是實體器官移植。
92.權利要求90所述的方法，其中所述的移植是胰島移植。
93.權利要求90所述的方法，其中所述的移植是骨髓移植。
94.通過抗原呈遞細胞調節(jié)免疫抑制活性的方法，包括將抗原呈遞細胞與有效量的權利要求1-32任意一項的化合物接觸以調節(jié)ILT3表面分子表達，從而通過所述的抗原呈遞細胞調節(jié)所述的免疫抑制活性。
95.權利要求81或94所述的方法，其中所述的細胞是抗原呈遞細胞。
96.權利要求95所述的方法，其中所述的抗原呈遞細胞選自樹突狀細胞、單核細胞和巨噬細胞。
97.在需要的個體中預防或治療膀胱功能障礙的方法，其通過施用有效量的權利要求1-32任意一項的化合物，從而在所述的個體中預防或治療膀胱功能障礙。
98.權利要求97所述的方法，其中所述的膀胱功能障礙的特征為存在膀胱肥大。
99.權利要求97所述的方法，其中所述的膀胱功能障礙是活動過度性膀胱。
100.權利要求97-99任意一項所述的方法，其中所述的個體雄性動物。
101.權利要求97-99任意一項所述的方法，其中所述的雄性動物同時罹患BPH。
102.權利要求97-99任意一項所述的方法，其中所述的個體雌性動物。
103.權利要求33所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是與藥學可接受的載體組合施用。
104.權利要求70、81、83、7或90任意一項所述的方法，其中所述的維生素D3化合物是使用藥學可接受的配方向所述的個體施用。
105.權利要求104所述的方法，其中在該藥學可接受的配方向所述的個體施用后，所述的藥學可接受的配方向個體提供了所述維生素D3化合物持續(xù)釋放達至少4周。
106.權利要求81、83、87或90任意一項所述的方法，其中所述免疫球蛋白樣轉錄物3(ILT3)表面分子的該表達是增量調節(jié)。
107.權利要求97所述的方法，其中所述的化合物是與藥學可接受的稀釋劑或載體一起配制于藥物組合物中。
108.權利要求98所述的方法，其中所述的化合物是維生素D受體激動劑。
109.權利要求33-108任意一項所述的方法，其中所述的個體是哺乳動物。
110.權利要求109所述的方法，其中所述的個體是人。
111.權利要求33、79、81、83、87或90任意一項所述的方法，其中所述的化合物是經(jīng)口施用。
112.權利要求33、79、81、83、87或90任意一項所述的方法，其中所述的化合物是靜脈內施用。
113.權利要求33、79、81、83、87或90任意一項所述的方法，其中所述的化合物是局部施用。
114.權利要求33、79、81、83、87或90任意一項所述的方法，其中化合物是胃腸外施用。
115.權利要求33、79、81、83、87或90任意一項所述的方法，其中所述的化合物是以0.001μg-100μg/kg體重的濃度施用。
116.藥物組合物，包括有效量的權利要求1-32任意一項的化合物和藥學可接受的稀釋劑或載體。
117.權利要求116所述的藥物組合物，其中所述的有效量治療維生素D3相關疾病是有效的。
118.權利要求117所述的藥物組合物，其中所述的維生素D3相關疾病是ILT3-相關障礙。
119.權利要求117所述的藥物組合物，其中所述的維生素D3相關疾病是一種以維生素D3-應答細胞的異?；钚詾樘卣鞯恼系K。
120.權利要求117所述的藥物組合物，其中所述的維生素D3相關疾病是膀胱功能障礙。
121.權利要求117所述的藥物組合物，其中所述的障礙是高血壓。
122.用于治療維生素D3相關狀態(tài)的包裝化配方，包括含有權利要求1-32任意一項的化合物的藥物組合物和指令說明，以用于治療維生素D3相關疾病。
123.權利要求122所述的包裝化配方，其中所述的維生素D3相關疾病是ILT3-相關障礙。
124.權利要求122所述的包裝化配方，其中所述的維生素D3相關疾病是一種以維生素D3-應答細胞的異?；钚詾樘卣鞯恼系K。
125.權利要求122所述的包裝化配方，其中所述的維生素D3相關疾病是膀胱功能障礙。
全文摘要
本發(fā)明提供了碳-20被環(huán)烷基，例如環(huán)丙基，取代的膽骨化醇的維生素D3類似物，其中碳-16是雙鍵，并且碳-23是單鍵、雙鍵或三鍵。各種烷基或鹵代烷基取代基結合在碳-25上。本發(fā)明提供了藥學可接受的酯類、鹽類及其前體藥物。還公開了使用該化合物以治療維生素D3相關疾病的方法，以及含有該化合物的藥物組合物。
文檔編號C07D309/00GK101106985SQ200580040165
公開日2008年1月16日 申請日期2005年9月23日 優(yōu)先權日2004年9月24日
發(fā)明者M·R·烏斯科科維克, L·阿多里尼, G·彭納, E·科利, S·馬查克 申請人:拜奧艾克塞爾股份公司