專利名稱：豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從哺乳動(dòng)物血液中提取免疫球蛋白IgG的加工方法。
背景技術(shù)：
目前免疫球蛋白的分離方法有硫酸銨分級(jí)沉淀法，乙醇分離法、辛酸沉淀法，這些方法都用于免疫球蛋白的粗提，進(jìn)一步純化的方法主要包括離子交換法，凝聚過濾法、親合色譜法和超濾法。有時(shí)，采用幾種方法結(jié)合使用。
現(xiàn)有的從動(dòng)物血液中提取免疫球蛋白IgG的加工方法都停留在實(shí)驗(yàn)室的研究和運(yùn)用上。中國輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)和北京市食品工業(yè)研究所聯(lián)合出版的《食品工業(yè)科技》雜志2003年第6期“工藝技術(shù)”專欄發(fā)表的由卜春文、賈建波撰寫的文章《豬血中IgG的分離、純化放大試驗(yàn)工藝研究》，其工藝過程采用了離心、鹽析、分離沉淀、滲析、超濾、冷凍干燥六個(gè)重要工序。該工藝是可行的，并且充分考慮了廢液的綜合利用，但不能運(yùn)用于工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。
發(fā)明目的 本發(fā)明的目的是針對(duì)上述現(xiàn)狀，旨在提供一種適用于工業(yè)化從豬血中提取免疫球蛋白的加工方法。
發(fā)明技術(shù)方案 本發(fā)明的目的是通過如下措施達(dá)到的收集健康的豬血，進(jìn)行抗凝處理、低溫保鮮、低溫運(yùn)輸、制冷貯藏，然后通過高速離心分離，得到血漿液體，血漿液體通過多級(jí)鹽析，得到含IgG的固形物，固形物加超純水溶解，通過超濾、離子交換、降膜蒸發(fā)濃縮和低溫噴霧干燥，得到免疫球蛋白IgG的成品。
收集健康的豬血是指加工的動(dòng)物血液全部來自定點(diǎn)大型屠宰場，所有的豬只必須經(jīng)過國家動(dòng)物檢疫部門檢驗(yàn)無疫病。
抗凝處理本發(fā)明采用的抗凝劑為食品級(jí)檸檬酸鈉和葡萄糖的混合物(比例7∶3)，添加量4g/kg豬血。
低溫保鮮、低溫運(yùn)輸和制冷貯藏的溫度保持在4±1℃，制冷貯藏時(shí)攪拌機(jī)的轉(zhuǎn)速為28-30轉(zhuǎn)/分鐘。
高速離心分離的轉(zhuǎn)速6000-9000轉(zhuǎn)/分鐘。
多級(jí)鹽析是通過50％硫酸銨飽和溶液、不同濃度的乙醇和PH值，得到含IgG的固形物，含免疫球蛋白IgG固形物的鹽析條件為硫酸銨飽和溶液的濃度為50％，乙醇的濃度為1％，PH為6.7-6.9，溫度40℃，鹽析時(shí)間1小時(shí)。
采用超濾和離子交換，除掉NH4+和小分子雜質(zhì)。超濾是用12組并聯(lián)HFS系列生物膜裝置組成。
降膜蒸發(fā)濃縮的溫度為T≤55℃。
低溫噴霧干燥的溫度為T≤160℃。
發(fā)明的積極效果 本發(fā)明為了防止血液凝固和血細(xì)胞破裂進(jìn)行了抗凝處理。
本發(fā)明采用了低溫保鮮、低溫運(yùn)輸和制冷貯藏，血液的溫度保持在4±1℃，保證了血液不變質(zhì)，不溶血，便于長途運(yùn)輸。
本發(fā)明采用多級(jí)鹽析，沒有采用常規(guī)的鹽析和滲析的工序，這樣操作簡單，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用先超濾后進(jìn)行離子交換，提高了濃縮液中免疫球蛋白IgG的濃度。
本發(fā)明采用降膜蒸發(fā)濃縮和低溫噴霧干燥，不同于常見的冷凍干燥，節(jié)約了成本。


圖1豬血中提取免疫球蛋白IgG的加工工藝流程圖。
發(fā)明的實(shí)施實(shí)例 參照?qǐng)D1 為了確定最佳抗凝劑，發(fā)明人作了如下實(shí)驗(yàn)

從上述結(jié)果可見，每公斤豬血添加4克食品級(jí)檸檬酸鈉和葡萄糖的混合物是最佳劑量。
揮發(fā)性鹽基氮是反映血液新鮮度的重要標(biāo)志，揮發(fā)性鹽基氮越低，表明血液越新鮮，參照?qǐng)D1，發(fā)明人在不同的溫度條件下，對(duì)血液的揮發(fā)性鹽基氮進(jìn)行了測定，結(jié)果如下

從上述結(jié)果可見，不同的溫度條件血液的揮發(fā)性鹽基氮差異很大，通過低溫保鮮、保溫運(yùn)輸和制冷貯藏處理的血液與新鮮的血液的揮發(fā)性鹽基氮十分接近，表明血液新鮮，沒有變質(zhì)。
參照?qǐng)D1，本發(fā)明采用了多級(jí)鹽析，通過不同的條件得到不同的濃縮液，測定結(jié)果如下

從上述結(jié)果可見，通過調(diào)整PH和乙醇濃度，得到含不同免疫球蛋白的濃縮液，γ-球蛋白即免疫球蛋白IgG。
參照?qǐng)D1，按照本發(fā)明的工藝流程在安徽恩彼蛋白質(zhì)有限公司進(jìn)行工業(yè)化試生產(chǎn)，并采用高效液相色譜法測定免疫球蛋白IgG的含量，結(jié)果如下

從測試結(jié)果可見，采用本發(fā)明的加工方法，得到的免疫球蛋白IgG含量為IgG＞35％，且適合工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。
權(quán)利要求
1.豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法與現(xiàn)有的加工方法都采用了高速離心分離、鹽析和超濾，豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法的特征在于血液收集后，采用抗凝處理、低溫保鮮、低溫運(yùn)輸、制冷貯藏、多級(jí)鹽析、離子交換、降膜蒸發(fā)濃縮和低溫噴霧干燥，得到IgG成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于抗凝處理采用的抗凝劑為食品級(jí)檸檬酸鈉和葡萄糖的混合物(比例7∶3)，添加量4g/kg豬血。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于低溫保鮮、低溫運(yùn)輸、制冷貯藏的溫度保持在4±1℃，制冷貯藏時(shí)攪拌機(jī)的轉(zhuǎn)速為28-30轉(zhuǎn)/分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于多級(jí)鹽析是通過50％硫酸銨飽和溶液、不同濃度的乙醇和PH值，得到含IgG的固形物，含免疫球蛋白IgG固形物的鹽析條件為硫酸銨飽和溶液的濃度為50％，乙醇的濃度為1％，PH為6.7-6.9，溫度40℃，鹽析時(shí)間1小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于采用先超濾后進(jìn)行離子交換。超濾是用12組并聯(lián)HFS系列生物膜裝置組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于降膜蒸發(fā)濃縮的溫度在55℃以下(T≤55℃)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，其特征在于低溫噴霧干燥的溫度在160℃以下(T≤160℃)。
全文摘要
豬血中提取免疫球蛋白IgG的方法，涉及一種從哺乳動(dòng)物血液中提取免疫球蛋白IgG的加工方法。方法中采用了抗凝處理，防止血液凝固和血細(xì)胞破裂。采用低溫保鮮、低溫運(yùn)輸和制冷貯藏，保證了血液不變質(zhì)，不溶血，便于運(yùn)輸。采用多級(jí)鹽析、超濾、離子交換、降膜蒸發(fā)濃縮和低溫噴霧干燥，既操作簡單又節(jié)約了成本，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07K1/14GK1824679SQ20051001830
公開日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2005年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日
發(fā)明者周增太 申請(qǐng)人:周增太