專利名稱：一種改進的合成6,9－雙[(2－氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉－5,10－二酮及其二馬來 ...的制作方法
背景發(fā)明的領域Mitoxantrone(Mitox)，一種1，4-雙(氨基烷基氨基)蒽-9，10-二酮抗腫瘤藥劑，目前在臨床治療白血病、淋巴瘤以及聯(lián)合治療晚期乳腺癌和卵巢癌方面占有重要的位置。雖然Mitox與doxorubicim(DX)及其它蒽環(huán)類藥劑相比較具有改地的耐受特性，但這種藥物仍未避免明顯的毒性副反應，特別是那些與骨髓抑制和使心臟中毒相關的毒副反應。具體地說，充血性的心力衰竭對以前曾用蒽環(huán)類藥物治療過的病人是一種嚴重的臨床影響(近期對Mitoxantrone的治療和毒理的綜述可參見Faulds，D；Balfour，J．A．；Chrisp，P．；Langtry，H．D．等在Drugs 1991，41，400-449)發(fā)表的題為“Mitoxantrone，它的藥效學和藥物動力學性質以及在癌癥化療中的治療潛力的綜述”的論文。
Mitox對細胞破壞的機理從它們的性質上說可能是多種模式的許多研究工作提出插入DNA內是主要的細胞活動。帶有DNA拓撲異構酶Ⅱ活性的核酸緊貼和干擾導致蛋白質締合的DNA股的拆開也被提出作為導致Mitox誘導細胞死亡的關鍵事件。細胞被抗腫瘤的蒽-9，10-二酮類藥物毀壞，包括Mitox在內，也被歸因于氧化代射。后者導致形成能使DNA烷基化和／或DNA分裂的游離基，產生非蛋白質締合的DNA股的破碎。然而，一般相信醌部分的還原氧化循環(huán)可能對Mitox的心臟中毒副反應比它的抗腫瘤活性的機理更有關系。Mitox和DX的心臟毒性也和鄰近的羥基和醌基的金屬螯合能力結合在一起。形成藥物-金屬絡合物可通過金屬催化型反應而增進氧化還原循環(huán)(參看Shipp，N．G．；Dorr，R．T．；Alberts，D．S．；Dawson，B．V．；Hendrix，M．等人在Cancer Res．1993，53，550-556頁發(fā)表的題為“實驗的Mitoxantrone心臟毒性及它在培養(yǎng)的新生老鼠心臟細胞中可被ICRF-187部分抑制的特征”的論文)。
Mitox明顯的臨床活性使得開發(fā)第二代蒽二酮類似物成為有吸引力的研究領域。到目前為止，已經進行了許多研究來探索側鏈性質的變化以及重新布置羥基取代基和／或外側的側鏈。
在蒽醌生色團中引入雜原子是相對說來尚未被探索的課題，但這一變化可能明顯地影響分子與生物標靶的相互作用。具體地說，蒽醌的雜環(huán)類似物；a)應基本保留與母體藥物同樣的立體的和平面的特征以便于宿主分子識別，諸如DNA嵌入；b)可引入另外的氫鍵或堿性部位，這兩者可能增加藥物對DNA親合力和／或影響與拓撲異構酶Ⅱ的相互作用。此外，雜環(huán)類似物可被賦予改變了的氧化還原性質。
已經制備并篩選過一些氮雜類似物(Krapcho，A．P．，＂6，9-雙(取代的氨基)苯并[g]異喹啉-5，10-二酮．PCT Intl．WO 92／15300，Sept．17，1992，在此引入作為參考)；A．P．Krapcho等人＂6，9-雙[(2-氨基烷基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮，一類新的修篩生色團的抗腫瘤蒽-9，10-二酮類合成和抗腫瘤評估；J．Med．Chem．(1994)，印刷中。(在此引入作為參考)。
在這些化合物中6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽在抗腫瘤實驗模型中表現(xiàn)出最大的活性。
6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽經分別用大鼠和小鼠進行單次和多次治療后還未發(fā)現(xiàn)對心臟組織有任何明顯的毒性效應。在用近似于LD10和LD50的劑量對大鼠進行一次治療以后，化合物6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽比Mitox誘導出較少的紅細胞減少和血小板減少癥狀。這一有益特性經過對小鼠作重覆治療并在等活性劑量水平上基于鼠性白血病模型與Mitoxantrone進行對比而得到證實。
不幸，這一化合物的化學開發(fā)由于該化合物低的純度(純度低至96％)而面臨著未曾預料到的問題。這種化合物的分析進展指出在制備過程的最后一步中形成了未知的雜質，而且不能通過現(xiàn)今可使用的提純方法從這種化合物中除去。因為未知雜質的量大于2％，并且這些未知雜質中有一種單獨含量就達1．3％，從而使這種化合物的開發(fā)受到嚴重危害，因為按規(guī)章的授權要求對未知的雜質進行廣泛的研究，如果這后一雜質以這樣明顯的含量存在的話。
本發(fā)明的概要申請人已經發(fā)現(xiàn)新的改進的合成6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮及其二馬來酸鹽的方法。用本發(fā)明的這種新的改進的合成方法，可以獲得純度大于99％的這種化合物。
附圖的簡單描述

圖1HPLC分析，報告本發(fā)明化合物的一種混合物，有6個峰，以及經鑒定的雜質。
圖2用J．Med．Chem或WO 92／15300的方法中合成雙馬來酸鹽的先有技術制得的本發(fā)明化合物的實際樣品的HPLC分析。具有長保留時間的峰，即第7，8和9號峰是未知雜質。
圖3按照本發(fā)明的方法A制備的本發(fā)明化合物的HPLC分析結果。
圖4按照本發(fā)明的方法B制備的本發(fā)明化合物的HPLC分析結果。
本發(fā)明化合物的合成本發(fā)明的化合物，6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮或它的二馬來酸鹽可用兩種改進的方法來制得，這些方法能生產出純度很高的化合物。
6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮作為游離堿是不穩(wěn)定的，因為它在溶液中很快地環(huán)化而形成化合物1a和1b，由于這兩種化合物而在HPLC中形成兩個不同的峰(參見圖1)。 進一步，游離堿很易溶解于水中；這樣，它就很難用有機溶劑來提取并且很難操作和提純。
還有，6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的其它鹽，諸如二鹽酸鹽，由于固有的酸性太強而在放置時分解。事實上，化合物6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮在酸性pH條件下(低于2．5)即分解而形成化合物2a和2b，即分子中的一個側鏈丟失了。化合物2a和2b在HPLC中不能被區(qū)分并形成一個單峰(參見圖1)。所有上面報告的分解產物都以雜質形式存在于6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮中(參見圖2，第3，4和5號峰)。相反，二馬來酸鹽卻被賦予優(yōu)良的固有穩(wěn)定性。
報導合成6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮及其二馬來酸鹽的先有技術方法可參見1) WO 92／15300和2)A．P．Krapcho等人“6，9-雙[(2-氨基烷基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮類。一類新的生色團改性的抗腫瘤蒽-9，10-二酮類合成和抗腫瘤評定”，J．Med．Chem．(1994)，印刷中。
所報告的合成方法中是用6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮作為關鍵性的中間體。這種化合物與乙二胺反應產生所需的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮。
另一種報告的方法涉及把6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮與單一叔丁氧羰基-乙二胺(BOC-乙二胺)進行反應，然后用干燥的HCl除去BOC保護基而得到6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二鹽酸鹽。把HCl鹽轉化為穩(wěn)定的二馬來酸鹽是行不通的，因為HCl不會和酸性較弱的馬來酸進行交換。還有，HCl鹽一旦溶于水即發(fā)生分解。
此外，先有技術的合成方法1)不能制備出純度高于96．1％的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮或它的二馬來酸鹽，2)不能避免在方法的最后一步形成的仍未被鑒定的雜質的存在。圖2報告的是按先有技術的操作程序制備的典型的一批6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽的HPLC分析結果。有三種未知的雜質存在(參看第7，8和9號峰)它們的含量多于2％，其中有一種雜質(即8號峰)的含量約為1．3％。這種化合物的純度不能通過從以下的方法來增高并且不能避免未知雜質的存在-在不同溶劑或溶劑的混合物中重覆懸浮或結晶，因為未知雜質的量保持恒定，-通過柱層析，-或在不同溶劑中、在不同溫度下來完成合成步驟中的最后一步。
還有，按照先有技術的方法，在最后一步的后處理過程中作為二馬來酸鹽的化合物的沉淀是在有粗的二氫氟酸鹽懸浮物存在的條件下得到的。從未達到過完全的溶解。在放大的實驗中，這一懸浮物可能導致非均勻產物的形成，其中摻雜有別的鹽類和／或含有不希望有的物質(例如不溶性物質，雜質等)。最終產物的完全溶解，至少在最后一步中有一次，是為得到想用于哺乳類治療中的化合物的先決條件。
這些先有技術合成方法中典型的缺陷構成了生產和開發(fā)本發(fā)明化合物的嚴重障礙。按規(guī)章的授權通常不能允許其活性主要成分的純度低至96％的藥物用來對人類進行治療。尤其是如果未知的雜質存在的量達到2％以上時。高度優(yōu)選地避免使任何雜質存在的量高于0．5％。
我們現(xiàn)在令人驚奇地提供一種新的方法，它允許人們以優(yōu)于97％、優(yōu)選地是大于99％的純度得到6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮及其二馬來酸鹽，其中每一種含有的雜質存在量均低于0．5％，并且每一種未知雜質的量均低于0．2％，即在這種分析方法的檢測限度上。
形成6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮及其二馬來酸鹽可通過用下列兩種方法中的任何一種來完成方法A包括以下新的特征-6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮與乙二胺的反應是通過反的加料，即把固體的6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮慢慢地加到大量過量的二胺在THF中的溶液中來完成的。
-從反應混合物中得到的粗的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的二氫氟酸鹽被完全地溶解在pH=5的水和醋酸中；然后把溶液過濾，并通過加入馬來酸在水中的溶液從上述濾液中使二馬來酸鹽結晶。
反的加料以及加料的速率本身是為獲得高純度的產物和很高的收率(92％)的關鍵。溶劑的選擇也是很重要的用THF代替吡啶改進了收率。粗的氫氟酸鹽的溶解對于最終產物的高純度和高均一性是重要的。還有，完成溶解時的pH值對于避免形成其它不希望有雜質是關鍵性的。整個完全的操作程序被描述于下面的實施例1中。
方法B包括以下新的特征-中間體6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮是和單BOC-乙二胺進行反應，得到的中間體6，9-雙[(2-[N-(叔丁氧羰基)氨基乙基]氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮用三氟醋酸處理而導致粗的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮三氟醋酸鹽，然后把它完全溶解于水中，用NaOH把pH值調節(jié)到4．2并過濾；
-把上述粗三氟醋酸鹽的溶液用馬來酸的水溶液處理，導致純的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]并喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽的結晶。
完整的實驗操作程序描述于下面的實例4中。
我們已經令人驚奇地發(fā)現(xiàn)所需的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽可通過置換相應的粗三氟醋酸鹽而制得，后者是用三氟醋酸除去BOC-保護基時得到的。
關鍵的中間體6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的制備可通過一種多步的改進實驗程序來完成。這種改進已被用來增加收率并允許方法的放大，這對于6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的藥物開發(fā)是重要的。
1，4-二氟苯與吡啶-3，4-二羧酸酐在三氯化鋁存在時導致4-(2′，5′-二氟苯甲?；?煙酸和和3-(2′，5′-二氟苯甲?；?異煙酸的混合物的反應如所述進行，并以下述方法改性在回收過量的1，4-二氟苯以后用硝苯稀釋反應混合物，再慢慢傾入水中。先有技術的實驗程序要求在回收過量1，4-二氟苯以后把水加到整個半固體的反應混合物中，這一操作在大規(guī)模重覆時是極為冒險和不適宜的，因為三氯化鋁和水是高度放熱的反應。新的后處理方法允許人們把殘留三氯化鋁絡合物和過量氯化物的溶液慢慢地加到大量過量的水中。
然后把得到的4-(2′，5′-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2′，5′-二氟苯甲?；?異煙酸的混合物在20％發(fā)煙硫酸中進行環(huán)化反應，改進之處是進一步分批加入20％的發(fā)煙硫酸，以使收率增加到高達81％。
制備實例13，4-吡啶二羧酸酐的制備在氮氣保護下把由97％純凈的3，4-吡啶二羧酸(152克，0．88摩爾)在醋酸酐(450毫升)中形成的懸浮液加熱至回流并得到完全溶解的溶液。一旦到達回流溫度，即通過在大氣壓力下的蒸餾來除去溶劑(收集大約400毫升)，約需1小時?？捎^察到蒸氣溫度從大約132℃升高到140℃，當內部溫度達到150-155℃時停止蒸餾。反應混合物被冷卻到70℃并在攪拌下滴加叔丁基甲基醚(t-BuoMe 400毫升)。讓溫度自動到達20-25℃，在大約40℃時有深灰色的固體沉淀。把懸浮液進一步冷卻到0-5℃并攪拌2小時。在氮氣層保護下過濾收集深灰色的沉淀，用tert-BuoMe(100毫升)洗滌并在真空下干燥(20托；30℃；2小時)即產生3，4-吡啶二羧酸酐(100克；收率76％)可直接用于下一步。
3，4-吡啶二羧酸酐對濕氣高度敏感，因此必須在氮氣下操作并在P2O5干燥器中儲存。
熔點72-74℃制備實例24-(2′，5′-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2′，5′-二氟苯甲酰基)異煙酸往沸騰的1，4-二氟苯(650毫升，90℃)中同時但分別地分五次(每隔15分鐘)加入3，4-吡啶二羧酸酐(95．7克，0．67摩爾)和AlCl3(367．3克，2．67摩爾)。最后一次加完后大約1小時，在常壓下通過蒸餾除去主要的1，4-二氟苯直至得到稠厚的物質為止。把溫度降到80℃并加入硝苯(150毫升)以溶解殘留的物質。趁熱把得到的溶液小心地在冰冷和攪拌著的水(1000克冰和530克無離子水)中淬滅(即慢慢地把溶液滴入冰水中)。然后在0-5℃往這傾注的混合物中加入濃鹽酸(37％，160毫升)繼續(xù)攪拌約3小時。過濾收集脂狀米色沉淀(約150克濕)同時把水層與硝苯層分離并用AcOEt提取(6×500毫升)。硝苯層用石油醚(400毫升)稀釋并過濾收集得到的小量沉淀(大約2克)。匯合的提取液在真空下濃縮，殘留的粗固體(大約45克)連同前面收集的沉淀被懸浮在AcOEt／石油醚(1／1)(600毫升)的混合物中。在室溫放置大約2小時以后把懸浮液過濾并把固體在真空下干燥即給出4-(2′，5′-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2′，5′-二氟苯甲?；?異煙酸的混合物(147．3克，84％收率)，為一淡米黃色固體。
熔點214-216℃制備實例36，9-二氟苯并[g]異喹啉-5．10-二酮把4-(2′，5′-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2′，5′-二氟苯甲?；?異煙酸的混合物(120克，0．456摩爾)在20％發(fā)煙硫酸(180毫升)中形成的溶液加熱到140℃。大約30分鐘以后，分四部分往這熱的反應混合物中加入更多的20％發(fā)煙硫酸(120毫升)，每隔20分鐘加一份，每份30毫升。在最后一份加完后20分鐘，把反應混合物冷卻到大約80℃然后傾入含冰的無離子水中(3000克冰和3000毫升水)。用40％NaOH(850毫升)把已經淬滅的反應混合物的pH值調節(jié)到1，這時可觀察到有黃棕色的沉淀形成。在0-5℃冷卻大約1小時后過濾收集粗產物并在真空下干燥即給出粗的6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(98．5克)。把反應的粗產物溶解在沸騰的THF中(1000毫升)并用活性炭(9克)把熱溶液脫色，過濾并濃縮到只剩下大約300毫升體積。在0-5℃冷卻大約2小時以后過濾收集黃色的固體，即得到分析純的6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(90．6克，收率81％)。
熔點197-199℃實例16，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽在2．5小時內往溫熱的(55℃)乙二胺(154．4毫升，2．29摩爾)在THF(1400毫升)中的溶液中分批加入6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(70．1克，0．29摩爾)(大約每10分鐘加一份，每份4．6克)。在同一溫度下把混合物攪拌3小時，這時有藍色沉淀逐漸生成。在25℃攪拌一夜后，在氮氣層保護下把懸浮液過濾，用THF(200毫升)洗滌并在真空下干燥(15托，60℃，3小時)即產生粗的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的二氫氟酸鹽(117克)。
把粗產物直接溶解在水(2340毫升)和AcOH(40毫升)的混合物中，得到深藍色的溶液，其pH值為大約5，并把它在玻璃纖維濾器上過濾。為防止反應產物發(fā)生任何降解這一pH值是很重要的。經過濾的溶液在室溫逐漸用經過濾的3 M馬來酸水溶液(585毫升)處理，使溶液pH值達到3．5。在40℃保持大約30分鐘以后，把懸浮液在室溫攪拌過夜。濾出藍色沉淀并用另外的(3×80毫升)和乙醇(3×100毫升)逐次洗滌，然后在真空下干燥(15托，60℃，4小時)即給出粗的6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽(168克)。
把粗的二馬來酸鹽懸浮在水中(3180毫升)并在50℃加熱30分鐘。在25℃攪拌一夜之后把懸浮液再次過濾，藍色沉淀用另外的水(3×100毫升)洗滌并把這濕的產物重新懸浮在水中(2400毫升)，在室溫下維持攪拌大約40小時。
濾出二馬來酸鹽，用另外的水(3×100毫升)和EtOH(3×100毫升)逐次洗滌，然后在真空下干燥(15托，60℃，4小時，然后在40℃干燥一夜)即產生6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽(146．7克，收率92％)。
HPLC分析(Waters，紫外／可見檢測器486，泵510)柱Lichrospher C18(5微米)t．a．洗脫劑H2O／CH3CN／二噁烷75／20／5庚烷磺酸鈉(20毫摩爾)，pH用H3PO4調至3．0流速1毫升／分檢測器紫外(245納米)保留時間12分鐘HPLC純度(面積％)=99．586％；參見圖3，峰n°4。
1H-NMR分析(用Brucker 200兆赫譜儀，化學位移(δ)是以Me4Si為內標往低場方向以ppm報告的)。
(δ；D2O)3．30(m，4H)；3．70(m，4H)；6．05(s，4H)；7．05(s，2H)；7．70(d，1H)；8．70(d，1H)；8．95(s，1H)。
實施例2在大約3小時內，在氮氣保護下把二碳酸二叔丁基酯(290．8克，1．32摩爾)在干燥THF(1200毫升)中的溶液慢慢地加到一個冷卻的(0℃)攪拌著的1，2-乙二胺(268毫升，4摩爾)在THF(3600毫升)中的溶液中。在10℃保持3小時并在室溫保持約16小時以后，在真空下除去溶劑。殘余的黃色油狀物(約230克)被溶解在異丙醚中(460毫升)并用食鹽水(50毫升)洗滌。用硫酸鈉(50克)干燥后把有機溶液濃縮至小體積并在減壓下蒸餾(8托，119-121℃)即得N-叔丁氧羰基-1，2-乙二胺(161克，基于二碳酸二叔丁酯計算收率為76％)。
NMR(CDCl3，δ)1．3-(s，2H，可與D2O交換)，1．4(s，9H)，2．7(bt，2H)，3．1(dd，2H)，5．4(bs，1H)實例3在氮氣保護下把6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(15克，0．061摩爾)和N-叔丁氧羰基-1，2-乙二胺(49克，0．305摩爾)在無水N-甲基吡咯烷酮(300毫升)中形成的溶液加熱到60℃。大約4．5小時以后，把反應混合物稍為冷卻(至50℃)并傾入攪拌著的去離子水(1500毫升)中。在室溫繼續(xù)攪拌2小時，過濾收集深藍色的固體沉淀并用水洗滌。把粗的濾出的沉淀重新懸浮于水中(1500毫升)，過濾并在真空下干燥。這反應粗產物被溶解于熱的二氯甲烷和甲醇(1／1，500毫升)的混合物中。溫熱的溶液在一玻璃纖維濾器上過濾并在10-15℃冷卻2小時。再在室溫保持6小時后過濾收集深藍色的結晶產物并干燥，給出27克6，9-雙[(2-N-叔丁氧羰基氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(收率84％)。
NMR(CDCl3，δ)1．4(s，18H)，3．4-3．7(m，8H)，5．4(m，2H)，7．3(s，2H)，8(d，J=6 Hz，1H)，8．85(d，J=6 Hz，1H)，9．5(s，1H)，11(m，2H)實例4把三氟醋酸(32毫升，0．42摩爾)加到6，9-雙[(2-N-叔丁氧羰基氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮(22克，0．042摩爾)在二氯甲烷(330毫升)中所形成的懸浮液中。在室溫攪拌大約16小時以后，用EtOH(100毫升)把反應混合物稀釋并在真空下濃縮。殘余的油狀物重新用乙醇(300毫升)稀釋并再次濃縮至小的體積。往此油狀殘留物中加入去離子水(220毫升)并用20％KOH(45毫升)調節(jié)溶液的pH值到4．2單位。得到的深藍色溶液在一玻璃纖維濾器上過濾后與3M的馬來酸水溶液(45毫升，0．135摩爾)混合。用20％KOH(24毫升)把溶液的pH值重新調節(jié)到3．4單位并把混合物在室溫攪拌大約40小時。過濾收集粗的馬來酸鹽并重新懸浮在去離子水中(200毫升)，加熱到50℃1小時并在室溫攪拌另外16小時。過濾出深藍色的固體，用水(2×50毫升)和乙醇(2×50毫升)依次洗滌并在真空下干燥，即產生18．6克6，9-雙[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮二馬來酸鹽(收率80％)。
HPLC分析(Waters，紫外／可見檢測器486，泵510)柱Lichrospher C18(5微米)t．a．洗脫劑H2O／CH3CN／二噁烷75／20／5庚烷磺酸鈉(20毫摩爾)，用H3PO4調pH至3．0流速1毫升／分檢測器紫外(245納米)保留時間12分HPLC純度(面積％)=99．28 5％；參看圖4，峰n°3
1H-NMR分析(Brucker 200MHz譜儀，化學位移是以Me4Si為內標往低場方向以PPm報告的)。
(δ；D2O)3．30(m，4H)；3．70(m，4H)；6．05(s，4H)；7．05(s，2H)；7．70(d，1H)；8．70(d，1H)；8．95(s，1H)。
治療本發(fā)明的化合物可作為治療組合物中的活性成份，當服用量在大約1毫克并大約0．4克／公斤體重時可誘導哺乳動物中的癌消退和／或緩解。一種經優(yōu)選的劑量方案為每分斤體重每日服用大約1毫克至大約50毫克。單位劑量可這樣來使用，即要在24小時內使體重約為70分斤的受治療者服用大約70毫克至大約3．5克的活性化合物。劑量可以進行調節(jié)以使之和其它治療方案，諸如放射治療相配伍。
藥物組合物可以是片劑、膠囊、凝膠膠囊、栓劑、經真空冷凍干燥的粉劑和為靜脈注射用藥的溶液等劑型。
權利要求
1.一種經改進的合成6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的方法，所說的方法包括下列步驟a)把4-(2’，5’-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2’，5’-二氟苯甲?；?異煙酸的混合物在20％發(fā)煙硫酸中形成的溶液加熱到140℃；b)大約30分鐘以后，往熱的反應混合物中分四部分，每20分鐘一次加入更多的20％發(fā)煙硫酸；c)加完最后一次之后20分鐘，把反應混合物冷卻到大約80℃并傾入含冰的無離子水中；d)用40％NaOH把已淬滅的反應混合物的pH值調節(jié)到1，這時形成黃棕色的沉淀；e)在0-5℃保持約1小時后濾出粗的沉淀并在真空下干燥即得到粗的6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮；f)把反應粗產物溶解于沸騰的THF中，并同活性炭把熱溶液脫色，過濾并濃縮；g)在0-5℃冷卻大約2小時后過濾收集黃色固體以提供分析純的6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮。
2.一種6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮的生產方法，它包括a)用3，4-吡啶二羧酸酐與1，4-二氟苯進行Friedel-Grafts?；磻援a生4-(2’，5’-二氟苯甲?；?煙酸和3-(2’，5’-二氟苯甲?；?異煙酸，并除去過量的1，4-二氟苯；b)把固體沉淀溶解在硝基苯中并將此溶液傾入冰水中；c)用發(fā)煙硫酸在升高的溫度使上述混合物發(fā)生環(huán)化反應而制得6，9-二氟苯并[g]異喹啉-5，10-二酮。
全文摘要
在尋求新的蒽二酮雜環(huán)類似物時,6,9－雙[(2－氨乙基)氨基]苯并(g)異喹啉－5,10－二酮二馬來酸鹽(BBR 2778)被選作最有前途的化合物。新的合成方法產生的這種化合物的純度大于99%。
文檔編號C07D221/08GK1282738SQ00104930
公開日2001年2月7日 申請日期2000年3月29日 優(yōu)先權日1994年3月28日
發(fā)明者S·施平奈利, R·迪多曼尼科 申請人:諾瓦斯制藥公司