一種水稻秸稈土壤修復(fù)有機菌肥的制作方法
【專利摘要】一種水稻秸稈土壤修復(fù)有機菌肥，將水稻秸稈發(fā)酵料、水稻秸稈固氮菌肥、水稻秸稈解磷解鉀菌肥、水稻秸稈環(huán)境修復(fù)菌肥等量或不等量混合，并按總重量的10?30%添加輔料，調(diào)節(jié)含水量至30%以下，即為本水稻秸稈土壤修復(fù)有機菌肥。本發(fā)明優(yōu)點：1、明顯提高土壤修復(fù)效率和速度；2、可在較長時間內(nèi)保證功能微生物發(fā)揮作用及促進其它生物發(fā)揮作用；3、以環(huán)境修復(fù)菌與系列固氮解磷解鉀功能菌共同組成功能菌，相互協(xié)同和促進；4、一肥多用，可作為污染不嚴重土壤的基肥和追肥；5、成本低廉，安全環(huán)保。
【專利說明】
一種水稻秸稈土壤修復(fù)有機菌肥
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)肥料領(lǐng)域。
技術(shù)背景
[0002]近年來，隨著工業(yè)的發(fā)展，工業(yè)廢水廢渣污染農(nóng)田及土壤時有發(fā)生，以及人們長期習(xí)慣于大量施用農(nóng)藥等多種原因，土壤性能嚴重下降，有毒有害物質(zhì)大量殘留，土壤微生物嚴重缺乏，土壤生態(tài)系統(tǒng)遭受嚴重破壞，作物品質(zhì)嚴重下降、生長困難或富集有毒有害物質(zhì)，危害人們健康。降解、轉(zhuǎn)化和消除土壤中有毒有害物質(zhì)，對恢復(fù)土壤功能、保證農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和品質(zhì)、保護環(huán)境，有重要意義。
[0003]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的，就是針對農(nóng)田及土壤有毒有害物質(zhì)殘留、土壤相關(guān)微生物缺乏、生態(tài)系統(tǒng)遭受嚴重破壞之現(xiàn)狀，而提供一種水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥，制備方法為:
一)制備水稻稻桿發(fā)酵料
(I)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備A液體培養(yǎng)基:將去皮土豆80-120g、水稻秸桿粉18-22g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-12g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得A液體培養(yǎng)基；
b、制備B液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入尿素2-4g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入1000C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得B液體培養(yǎng)基；
c、制得C液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉18-22g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-128、尿素4-68、蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得C液體培養(yǎng)基；
d、制備D液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖4-68、尿素8-128、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100 0C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得D液體培養(yǎng)基；
B)制備各菌種菌株的菌種液
a、將草菇菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45°C搖床培養(yǎng)5_7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
b、將木霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)5_7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
c、將球毛殼菌菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min,25-40 °C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C培養(yǎng)6-8日，至菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
d、將嗜熱側(cè)孢霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C培養(yǎng)7-9日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
e、將產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種活化，活化后無菌接入C液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入D液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上；
C)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液
將上述培養(yǎng)的草菇菌種液、木霉菌種液、球毛殼菌菌種液、嗜熱側(cè)孢霉菌種液、產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種液等量混合，即為水稻秸桿發(fā)酵菌種液；
(2)制備水稻稻桿發(fā)酵料
A)發(fā)酵原料重量份配比:
水稻秸桿10000公斤養(yǎng)豬場豬糞尿及其沖洗水或其沼氣發(fā)酵后的沼渣沼液9000-12000公斤98%濃硫酸300-350公斤石灰200-250公斤紅糖100-150公斤尿素200-300公斤 KC150-100公斤 KH2PO4 50-100公斤 MgCl2 50-100公斤 FeSO4 50-100公斤MnCl2 50-80公斤 ZnSO4 50-80公斤；
B)發(fā)酵料制備方法:
a、水稻秸桿酸堿處理
將水稻秸桿粉粹為l-2cm小段，并等分為堆體甲和堆體乙;豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液也等分為兩份，并分別加入堆體甲和堆體乙；堆體甲在加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液時，隨之加入全部配方量的濃硫酸溶液并拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，酸處理12-24小時，期間翻堆3_4次;堆體乙先拌入全部配方量的石灰，后加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液，拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，堿處理12-24小時，期間翻堆3_4次；
b、水稻秸桿低溫發(fā)酵
將上述經(jīng)過酸、堿處理后的堆體甲、堆體乙進行混合、拌勻，按配方量加入全部KCl、KH2P04、MgCl2、FeS04、MnCl2 ,ZnSO4、NaSe03、水稻秸桿發(fā)酵菌種液，并加入1/2配方量的尿素，拌勻，建堆發(fā)酵，約從第二天開始，每天翻堆1-2次，維持堆溫約25-400C，至第7-10日、堆體內(nèi)可見菌絲明顯生長；
C、水稻秸桿高溫發(fā)酵
水稻秸桿低溫發(fā)酵過程中、至堆體內(nèi)可見菌絲大量生長時，繼續(xù)加入全部配方用量的紅糖及余下配方用量的尿素，拌勻，適當(dāng)覆膜，進行高溫發(fā)酵，至7-10日、堆體溫度經(jīng)高溫自然降至常溫、堆料黑褐色并可見大量菌絲，結(jié)束發(fā)酵，打碎，即為水稻秸桿發(fā)酵料； 二)制備水稻秸桿固氮菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備E液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌
0.5-1小時，制得E液體培養(yǎng)基；
b、制備F液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得F液體培養(yǎng)基；
B)制備固氮菌菌種液
a、將短小芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變；繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為短小芽孢桿菌菌種液；
b、將短芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上，S卩為短芽孢桿菌菌種液；
C、將賴氨酸芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為賴氨酸芽孢桿菌菌種液；
d、將上述培養(yǎng)的短小芽孢桿菌菌種液、短芽孢桿菌菌種液、賴氨酸芽孢桿菌菌種液等量混合，即為固氮菌菌種液；
C)制備水稻秸桿固氮菌肥
以1000公斤剛完成發(fā)酵的水稻秸桿發(fā)酵料，加入固氮菌種液50-100公斤，并以固氮菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿固氮菌肥；
三)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基:
a、制備G液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基；
b、制備H液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基； C、制備I液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、黃豆粉18-22g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1lOOml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得I液體培養(yǎng)基；
d、制備J液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得J液體培養(yǎng)基；
B)制備解磷解鉀菌種液
a、將膠凍樣芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為膠凍樣芽孢桿菌菌種液；
b、將蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液；
c、制備肉桂褐鏈霉菌菌種液
將肉桂褐鏈霉菌菌種進行活化，活化后無菌接入I液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)7-9日，至菌絲大量生長、菌液粘稠；繼續(xù)無菌接入J液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-20(^/1^11、25-40°(:搖床培養(yǎng)9-11日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上，S卩為肉桂褐鏈霉菌菌種液；
d、制備解磷解鉀菌種液
將上述膠凍樣芽孢桿菌菌種液、蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液、肉桂褐鏈霉菌菌種液進行等量混合，即為解磷解鉀菌菌種液；
C)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥
以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入解磷解鉀菌菌種液50-100公斤，并以解磷解鉀菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)10-12日，至堆體降為常溫，即為水稻秸桿解磷解鉀菌菌肥；
四)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備O培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、紅糖8-128，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌
0.5-1小時，制得O液體培養(yǎng)基；
b、制備P培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得P液體培養(yǎng)基； C、制備Q液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、去皮土豆90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后加入紅糖4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入1000C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得Q液體培養(yǎng)基；
d、制備R液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得R液體培養(yǎng)基；
B)制備環(huán)境修復(fù)菌種液
a、將嗜糖克拉布特里氏菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 108/ml以上，即為嗜糖克拉布特里氏菌菌種液；
b、將嗜糖假單胞桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為嗜糖假單胞桿菌菌種液；
c、將季倫類芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為季倫類芽孢桿菌菌種液；
d、將假單胞菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°(:搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 XlO8Ail以上，即為假單胞菌菌種液；
e、將長枝木霉菌種活化，無菌接入Q液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min,25-40 °C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入R液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
f、制備環(huán)境修復(fù)菌種液
將上述嗜糖克拉布特里氏菌、嗜糖假單胞桿菌、季倫類芽孢桿菌、假單胞菌、長枝木霉的菌種液等量混合，即為環(huán)境修復(fù)菌菌種液；
C)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥
以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入環(huán)境修復(fù)菌種液50-100公斤，并以環(huán)境修復(fù)菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45 °C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥；
五)制備菌肥輔料
將磷礦粉300公斤、鉀長石粉80-120公斤混勻，即為最終菌肥產(chǎn)品的輔料，用于調(diào)節(jié)最終產(chǎn)品含水量； 六)制備水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥產(chǎn)品
將水稻秸桿發(fā)酵料、水稻秸桿固氮菌肥、水稻秸桿解磷解鉀菌肥、水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥等量或不等量混合，并按總重量的10-30%添加輔料，調(diào)節(jié)含水量至30%以下，即為本水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥。
[0005]
本發(fā)明優(yōu)點:
1、以微生物易于吸收利用的有機質(zhì)與環(huán)境修復(fù)菌等配伍組成功能菌肥，功能菌含量充足，施入土壤，可迅速利用土壤物質(zhì)及施入的有機質(zhì)等，迅速生長和代謝，明顯提高土壤修復(fù)效率和速度；
2、有機質(zhì)含量充足，施入土壤可顯著改善土壤結(jié)構(gòu)和性能，作用時間長久，且微生物和其它生物均易于利用和吸收，可在較長時間內(nèi)保證功能微生物持久發(fā)揮作用和促進其它生物發(fā)揮作用；
3、以環(huán)境修復(fù)菌與系列固氮解磷解鉀功能菌共同組成功能菌，相互協(xié)同和促進生長，不斷提高土壤養(yǎng)分自我積累水平，可加快改善土壤性能和結(jié)構(gòu)；
4、可一肥多用，對污染不嚴重的土壤，可作為一般肥料使用，且大中微量元素等養(yǎng)分充足、比例恰當(dāng)且為有機態(tài)，既可作為生態(tài)修復(fù)菌劑，也用于基肥和追肥；
5、遵循生態(tài)原理，以系列微生物改善和修復(fù)土壤生態(tài)鏈，成本低廉，安全環(huán)保，提高土壤及農(nóng)廣品品質(zhì)。
[0006]
【具體實施方式】
本產(chǎn)品最佳制備方法為:
一)制備水稻稻桿發(fā)酵料
(I)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備A液體培養(yǎng)基:將去皮土豆80-120g、水稻秸桿粉18-22g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-12g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得A液體培養(yǎng)基；
b、制備B液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入尿素2-4g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入1000C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得B液體培養(yǎng)基；
c、制得C液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉18-22g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-128、尿素4-68、蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得C液體培養(yǎng)基；
d、制備D液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖4-68、尿素8-128、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100 0C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得D液體培養(yǎng)基；
B)制備各菌種菌株的菌種液
a、將草菇菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45 °C搖床培養(yǎng)5_7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
b、將木霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)5_7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
c、將球毛殼菌菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min,25-40 °C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C培養(yǎng)6-8日，至菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
d、將嗜熱側(cè)孢霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C培養(yǎng)7-9日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
e、將產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種活化，活化后無菌接入C液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入D液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上；
C)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液
將上述培養(yǎng)的草菇菌種液、木霉菌種液、球毛殼菌菌種液、嗜熱側(cè)孢霉菌種液、產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種液等量混合，即為水稻秸桿發(fā)酵菌種液；
(2)制備水稻稻桿發(fā)酵料
A)發(fā)酵原料重量份配比:
水稻秸桿10000公斤養(yǎng)豬場豬糞尿及其沖洗水或其沼氣發(fā)酵后的沼渣沼液9000-12000公斤98%濃硫酸300-350公斤石灰200-250公斤紅糖100-150公斤尿素200-300公斤 KC150-100公斤 KH2PO4 50-100公斤 MgCl2 50-100公斤 FeSO4 50-100公斤MnCl2 50-80公斤 ZnSO4 50-80公斤；
B)發(fā)酵料制備方法:
a、水稻秸桿酸堿處理
將水稻秸桿粉粹為l-2cm小段，并等分為堆體甲和堆體乙;豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液也等分為兩份，并分別加入堆體甲和堆體乙；堆體甲在加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液時，隨之加入全部配方量的濃硫酸溶液并拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，酸處理12-24小時，期間翻堆3_4次;堆體乙先拌入全部配方量的石灰，后加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液，拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，堿處理12-24小時，期間翻堆3_4次；
b、水稻秸桿低溫發(fā)酵
將上述經(jīng)過酸、堿處理后的堆體甲、堆體乙進行混合、拌勻，按配方量加入全部KCl、KH2P04、MgCl2、FeS04、MnCl2、ZnS04、NaSe03、水稻秸桿發(fā)酵菌種液，并加入1/2配方量的尿素，拌勻，建堆發(fā)酵，約從第二天開始，每天翻堆1-2次，維持堆溫約25-40 °C，至第7-10日、堆體內(nèi)可見菌絲明顯生長；
C、水稻秸桿高溫發(fā)酵
水稻秸桿低溫發(fā)酵過程中、至堆體內(nèi)可見菌絲大量生長時，繼續(xù)加入全部配方用量的紅糖及余下配方用量的尿素，拌勻，適當(dāng)覆膜，進行高溫發(fā)酵，至7-10日、堆體溫度經(jīng)高溫自然降至常溫、堆料黑褐色并可見大量菌絲，結(jié)束發(fā)酵，打碎，即為水稻秸桿發(fā)酵料；
二)制備水稻秸桿固氮菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備E液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌
0.5-1小時，制得E液體培養(yǎng)基；
b、制備F液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得F液體培養(yǎng)基；
B)制備固氮菌菌種液
a、將短小芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變；繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為短小芽孢桿菌菌種液；
b、將短芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上，S卩為短芽孢桿菌菌種液；
C、將賴氨酸芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為賴氨酸芽孢桿菌菌種液；
d、將上述培養(yǎng)的短小芽孢桿菌菌種液、短芽孢桿菌菌種液、賴氨酸芽孢桿菌菌種液等量混合，即為固氮菌菌種液；
C)制備水稻秸桿固氮菌肥
以1000公斤剛完成發(fā)酵的水稻秸桿發(fā)酵料，加入固氮菌種液50-100公斤，并以固氮菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿固氮菌肥；
三)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基:
a、制備G液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°c蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基；
b、制備H液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基；
C、制備I液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、黃豆粉18-22g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1lOOml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得I液體培養(yǎng)基；d、制備J液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得J液體培養(yǎng)基；
B)制備解磷解鉀菌種液
b、將膠凍樣芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為膠凍樣芽孢桿菌菌種液；
b、將蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液；
c、制備肉桂褐鏈霉菌菌種液
將肉桂褐鏈霉菌菌種進行活化，活化后無菌接入I液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)7-9日，至菌絲大量生長、菌液粘稠；繼續(xù)無菌接入J液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-20(^/1^11、25-40°(:搖床培養(yǎng)9-11日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上，S卩為肉桂褐鏈霉菌菌種液；
d、制備解磷解鉀菌種液
將上述膠凍樣芽孢桿菌菌種液、蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液、肉桂褐鏈霉菌菌種液進行等量混合，即為解磷解鉀菌菌種液；
C)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥
以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入解磷解鉀菌菌種液50-100公斤，并以解磷解鉀菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)10-12日，至堆體降為常溫，即為水稻秸桿解磷解鉀菌菌肥；
四)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥
A)制備菌種培養(yǎng)基
a、制備O培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、紅糖8-128，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌0.5-1小時，制得O液體培養(yǎng)基；
b、制備P培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得P液體培養(yǎng)基；
C、制備Q液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、去皮土豆90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后加入紅糖4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入1000C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得Q液體培養(yǎng)基；
d、制備R液體培養(yǎng)基
將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得R液體培養(yǎng)基；
B)制備環(huán)境修復(fù)菌種液
a、將嗜糖克拉布特里氏菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 108/ml以上，即為嗜糖克拉布特里氏菌菌種液；
b、將嗜糖假單胞桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為嗜糖假單胞桿菌菌種液；
c、將季倫類芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為季倫類芽孢桿菌菌種液；
d、將假單胞菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°(:搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 XlO8Ail以上，即為假單胞菌菌種液；
e、將長枝木霉菌種活化，無菌接入Q液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min,25-40 °C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入R液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上；
f、制備環(huán)境修復(fù)菌種液
將上述嗜糖克拉布特里氏菌、嗜糖假單胞桿菌、季倫類芽孢桿菌、假單胞菌、長枝木霉的菌種液等量混合，即為環(huán)境修復(fù)菌菌種液；
C)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥
以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入環(huán)境修復(fù)菌種液50-100公斤，并以環(huán)境修復(fù)菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45 °C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥；
五)制備菌肥輔料
將磷礦粉300公斤、鉀長石粉80-120公斤混勻，即為最終菌肥產(chǎn)品的輔料，用于調(diào)節(jié)最終產(chǎn)品含水量；
六)制備水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥產(chǎn)品
將水稻秸桿發(fā)酵料、水稻秸桿固氮菌肥、水稻秸桿解磷解鉀菌肥、水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥等量或不等量混合，并按總重量的10-30%添加輔料，調(diào)節(jié)含水量至30%以下，即為本水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥。
[0007]
菌種來源:中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心及中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心
中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心:草燕(菌株保藏號50900)、木霉(菌株保藏號32591)、球毛殼菌(菌株保藏號32593)、嗜熱側(cè)孢霉(菌株保藏號30346)、產(chǎn)黃纖維單胞菌(菌株保藏號11055)、短小芽孢桿菌(菌株保藏號19379)、短芽孢桿菌(菌株保藏號19423)、賴氨酸芽孢桿菌(菌株保藏號19456)、膠凍樣芽孢桿菌(菌株保藏號10090)、肉桂褐鏈霉菌(菌株保藏號40130)、嗜糖克拉布特里氏菌(菌株保藏號03059)、嗜糖假單胞桿菌(菌株保藏號01133)、季倫類芽孢桿菌(菌株保藏號03268)、假單胞菌(菌株保藏號05510)、長枝木霉(菌株保藏號31887);
中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心:蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌(菌株保藏號22670)；
使用方法
本產(chǎn)品主要用于被工業(yè)廢水廢渣、農(nóng)藥等難降解有機物污染的土壤及農(nóng)田進行土壤修復(fù)、種植時使用。對不適合作物種植土壤，可畝施800-1500公斤，翻耕入土，同時種植植物或養(yǎng)殖其它生物，以逐步降解有害物質(zhì)，修復(fù)土壤。對仍可種植作物土壤，可于作物耕種前以基肥施用，畝施用量500-800公斤;作物主要生長階段進行追肥，可于行間每畝施用200-300公斤。施用本產(chǎn)品后，覆土或翻耕覆土，以避免強陽光直接照射，及避免寒冷冬季使用。
【主權(quán)項】
1.一種水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥，其特征在于制備方法為: 一)制備水稻稻桿發(fā)酵料 (I)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液 A)制備菌種培養(yǎng)基 a、制備A液體培養(yǎng)基:將去皮土豆80-120g、水稻秸桿粉18-22g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-12g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得A液體培養(yǎng)基； b、制備B液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入尿素2-4g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100.0C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得B液體培養(yǎng)基； c、制得C液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉18-22g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖8-128、尿素4-68、蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得C液體培養(yǎng)基； d、制備D液體培養(yǎng)基:將水稻秸桿粉180-220g加水900-110ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入紅糖4-68、尿素8-128、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100 0C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得D液體培養(yǎng)基； B)制備各菌種菌株的菌種液 a、將草菇菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-45 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上； b、將木霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)5_7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上； c、將球毛殼菌菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C培養(yǎng)6-8日，至菌絲生物量達500 mg/100ml以上； d、將嗜熱側(cè)孢霉菌種活化，無菌接入A液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長；繼續(xù)無菌接入B液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、35-55°C培養(yǎng)7-9日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上； e、將產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種活化，活化后無菌接入C液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入D液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上； C)制備水稻秸桿發(fā)酵菌種液 將上述培養(yǎng)的草菇菌種液、木霉菌種液、球毛殼菌菌種液、嗜熱側(cè)孢霉菌種液、產(chǎn)黃纖維單胞菌菌種液等量混合，即為水稻秸桿發(fā)酵菌種液； (2 )制備水稻稻桿發(fā)酵料 A)發(fā)酵原料重量份配比: 水稻秸桿10000公斤 養(yǎng)豬場豬糞尿及其沖洗水或其沼氣發(fā)酵后的沼渣沼液9000-12000公斤 98%濃硫酸300-350公斤 石灰200-250公斤 紅糖100-150公斤 尿素200-300公斤 KC150-100 公斤 KH2PO4 50-100公斤 MgCl2 50-100公斤 FeSO4 50-100公斤 MnCl2 50-80公斤 ZnSO4 50-80公斤； B)發(fā)酵料制備方法: a、水稻秸桿酸堿處理 將水稻秸桿粉粹為l-2cm小段，并等分為堆體甲和堆體乙；豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液也等分為兩份，并分別加入堆體甲和堆體乙；堆體甲在加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液時，隨之加入全部配方量的濃硫酸溶液并拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，酸處理12-24小時，期間翻堆3_4次;堆體乙先拌入全部配方量的石灰，后加入豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液，拌勻，并以豬糞尿及其沖洗水或其沼渣沼液調(diào)節(jié)含水量至65-75%，堿處理12-24小時，期間翻堆3_4次； b、水稻秸桿低溫發(fā)酵 將上述經(jīng)過酸、堿處理后的堆體甲、堆體乙進行混合、拌勻，按配方量加入全部KCl、KH2P04、MgCl2、FeS04、MnCl2 ,ZnSO4、NaSe03、水稻秸桿發(fā)酵菌種液，并加入1/2配方量的尿素，拌勻，建堆發(fā)酵，約從第二天開始，每天翻堆1-2次，維持堆溫約25-400C，至第7-10日、堆體內(nèi)可見菌絲明顯生長； C、水稻秸桿高溫發(fā)酵 水稻秸桿低溫發(fā)酵過程中、至堆體內(nèi)可見菌絲大量生長時，繼續(xù)加入全部配方用量的紅糖及余下配方用量的尿素，拌勻，適當(dāng)覆膜，進行高溫發(fā)酵，至7-10日、堆體溫度經(jīng)高溫自然降至常溫、堆料黑褐色并可見大量菌絲，結(jié)束發(fā)酵，打碎，即為水稻秸桿發(fā)酵料； 二)制備水稻秸桿固氮菌肥 A)制備菌種培養(yǎng)基 a、制備E液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌.0.5-1小時，制得E液體培養(yǎng)基； b、制備F液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°c、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得F液體培養(yǎng)基； B)制備固氮菌菌種液 a、將短小芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變；繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為短小芽孢桿菌菌種液； b、將短芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 18/ml以上，S卩為短芽孢桿菌菌種液； C、將賴氨酸芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入E液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入F液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為賴氨酸芽孢桿菌菌種液； d、將上述培養(yǎng)的短小芽孢桿菌菌種液、短芽孢桿菌菌種液、賴氨酸芽孢桿菌菌種液等量混合，即為固氮菌菌種液； C)制備水稻秸桿固氮菌肥 以1000公斤剛完成發(fā)酵的水稻秸桿發(fā)酵料，加入固氮菌種液50-100公斤，并以固氮菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿固氮菌肥； 三)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥 A)制備菌種培養(yǎng)基: a、制備G液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基； b、制備H液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得G液體培養(yǎng)基； C、制備I液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、黃豆粉18-22g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-ll00ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-l小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得I液體培養(yǎng)基；d、制備J液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g、磷礦粉20-30g、鉀長石粉5-10g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得J液體培養(yǎng)基； B)制備解磷解鉀菌種液 將膠凍樣芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變；繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為膠凍樣芽孢桿菌菌種液； b、將蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入G液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入H液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液； c、制備肉桂褐鏈霉菌菌種液 將肉桂褐鏈霉菌菌種進行活化，活化后無菌接入I液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)7-9日，至菌絲大量生長、菌液粘稠；繼續(xù)無菌接入J液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-20(^/1^11、25-40°(:搖床培養(yǎng)9-11日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上，S卩為肉桂褐鏈霉菌菌種液； d、制備解磷解鉀菌種液 將上述膠凍樣芽孢桿菌菌種液、蠟樣膠質(zhì)芽孢桿菌菌種液、肉桂褐鏈霉菌菌種液進行等量混合，即為解磷解鉀菌菌種液； C)制備水稻秸桿解磷解鉀菌肥 以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入解磷解鉀菌菌種液50-100公斤，并以解磷解鉀菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45°C，培養(yǎng)10-12日，至堆體降為常溫，即為水稻秸桿解磷解鉀菌菌肥； 四)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥 A)制備菌種培養(yǎng)基 a、制備O培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g加水900-1 10ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°(:、0.5-1小時，冷卻后再加入蛋白胨4-68、紅糖8-128，混勻，轉(zhuǎn)入100°(:蒸汽滅菌.0.5-1小時，制得O液體培養(yǎng)基； b、制備P培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得P液體培養(yǎng)基； C、制備Q液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料90-110g、去皮土豆90-110g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后加入紅糖4-6g、補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5-1小時，制得Q液體培養(yǎng)基； d、制備R液體培養(yǎng)基 將水稻秸桿發(fā)酵料180-220g加水900-1100ml置于密閉容器內(nèi)，加熱排除冷空氣后維持110-130°C、0.5-1小時，冷卻后補足水量，混勻，轉(zhuǎn)入100°C蒸汽滅菌0.5_1小時，制得R液體培養(yǎng)基； B)制備環(huán)境修復(fù)菌種液 a、將嗜糖克拉布特里氏菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X 108/ml以上，即為嗜糖克拉布特里氏菌菌種液； b、將嗜糖假單胞桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為嗜糖假單胞桿菌菌種液； C、將季倫類芽孢桿菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °(:搖床培養(yǎng)1_2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 V搖床培養(yǎng)1_2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 X108/ml以上，即為季倫類芽孢桿菌菌種液； d、將假單胞菌菌種進行活化，活化后無菌接入O液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°(:搖床培養(yǎng)1-2日，至菌液渾濁、顏色改變;繼續(xù)無菌接入P液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)1-2日，至發(fā)酵液渾濁、顏色改變，并經(jīng)細胞平板涂抹計數(shù)達5 XlO8Ail以上，即為假單胞菌菌種液； e、將長枝木霉菌種活化，無菌接入Q液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40°C搖床培養(yǎng)5-7日，至菌液粘稠、顏色改變并可見菌絲大量生長;繼續(xù)無菌接入R液體培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速160-200r/min、25-40 °C培養(yǎng)6-8日，至發(fā)酵菌液粘稠、顏色改變、可見菌絲大量生長且菌絲生物量達500 mg/100ml以上； f、制備環(huán)境修復(fù)菌種液 將上述嗜糖克拉布特里氏菌、嗜糖假單胞桿菌、季倫類芽孢桿菌、假單胞菌、長枝木霉的菌種液等量混合，即為環(huán)境修復(fù)菌菌種液； C)制備水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥 以1000公斤剛發(fā)酵完成的水稻秸桿發(fā)酵料，加入環(huán)境修復(fù)菌種液50-100公斤，并以環(huán)境修復(fù)菌種液調(diào)節(jié)發(fā)酵料的含水量至約60-65%，結(jié)合翻堆，控制發(fā)酵溫度約25-45 °C，培養(yǎng)7-8日，至堆體降為室溫，即為水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥； 五)制備菌肥輔料 將磷礦粉300公斤、鉀長石粉80-120公斤混勻，即為最終菌肥產(chǎn)品的輔料，用于調(diào)節(jié)最終產(chǎn)品含水量； 六)制備水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥產(chǎn)品 將水稻秸桿發(fā)酵料、水稻秸桿固氮菌肥、水稻秸桿解磷解鉀菌肥、水稻秸桿環(huán)境修復(fù)菌肥等量或不等量混合，并按總重量的10-30%添加輔料，調(diào)節(jié)含水量至30%以下，即為本水稻秸桿土壤修復(fù)有機菌肥。
【文檔編號】C05F11/08GK106008057SQ201610313971
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】方華舟
【申請人】荊楚理工學(xué)院