專利名稱：焦磷酸測序法檢測oatp1b1基因多態(tài)性的試劑盒及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的是涉及焦磷酸測序法檢測0ATP1B1基因多態(tài)性的試劑盒及方法。
背景技術(shù)：
肝臟是生物轉(zhuǎn)化解毒的主要器官，在肝臟中存在多種類型的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體，對于藥物的吸收、分布和排泄起重要作用，如多藥耐藥相關(guān)蛋白，乳腺癌耐藥蛋白，有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽家族等。0ATP1B1是有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽家族中最為重要的成員，0ATP1B1的編碼基因SLC01B1不僅具有高度多態(tài)性，且已發(fā)現(xiàn)多個(gè)具有功能意義的突變型。目前已研究證實(shí)，0ATP1B1除靶向轉(zhuǎn)運(yùn)非結(jié)合型膽紅素、膽汁酸、甲狀腺激素等多種內(nèi)源性物質(zhì)外，還介導(dǎo)多種具有重要臨床意義藥物的肝臟跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，如抗惡性腫瘤藥(伊立替康、甲氨喋呤)、調(diào)血脂藥(普伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、羅蘇伐他汀、西伐他汀)、抗高血壓藥(纈沙坦、奧美沙坦、波生坦)、抗高血糖藥(瑞格列奈、那格列奈)。OATPIBI與它們的吸收、分布及排泄等過程密切相關(guān)，進(jìn)而關(guān)乎藥物的療效和毒副作用。OATPIBI的編碼基因SLC01B1不僅具有高度多態(tài)性，且已發(fā)現(xiàn)多個(gè)具有功能意義的突變型。對于主要由0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)的他汀類藥物而言，當(dāng)SLC01B1突變導(dǎo)致功能降低時(shí)，就會(huì)使其進(jìn)入肝細(xì)胞的量減少，降脂療效下降，血藥濃度升高，毒副作用增加。研究表明在OATPIBI功能缺陷的*5/*5(rs4149056)基因突變者體內(nèi)，普伐他汀的血藥濃度增加57 130%，匹伐他汀的血藥濃度增加162 191%，阿托伐他汀的血藥濃度增加144%，羅伐他汀的血藥濃度增加62 117 %。全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide Association Study,GffAS)表明0ATP1B1功能缺陷的*5/*5基因突變者是導(dǎo)致辛伐他汀出現(xiàn)肌病不良反應(yīng)的主要因素。根據(jù)0ATP1B1 (rs4149056)基因多態(tài)性，臨床推薦他汀類藥物使用劑量如下表。0ATP1B1 (rs4149056)基因多態(tài)性臨床推薦他汀類劑量
權(quán)利要求
1.一種焦磷酸測序法檢測0ATP1B1基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，包括如下引物 (1)擴(kuò)增引物 上游引物5/ -ACA CTC TCT TAT CTA CAT AGG TTG-3'； 下游引物5' -GGT ACT ATG GGA GTC TCC CCT ATT-3'； 其中，下游引物的5'進(jìn)行生物素標(biāo)記； (2)測序引物5'-CAC GAA GCA TAT TAC CCA T-3'。
2.一種應(yīng)用權(quán)利要求I所述的試劑盒檢測0ATP1B1基因多態(tài)性的方法，包括如下步驟 (1)DNA提?。? (2)聚合酶鏈反應(yīng) 配制 50 μ IPCR擴(kuò)增體系，包含10XPCR buffer 5. O μ I, dNTP 3. O μ 1，OATP1B1-上游引物 O. 5μ l,0ATPlBl(rs4149056)下游引物 O. 5μ I, rTaqO. 5 μ 1，水 39. 5μ 1，模板 I. Ομ I ；循環(huán)程序?yàn)?5°C 5min預(yù)變性；依次在95°C 30S,55°C 30S,72°C 30S，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72°C保持5min，最終保持在4°C，得擴(kuò)增產(chǎn)物； (3)焦磷酸測序單鏈樣本純化； (4)焦磷酸測序及結(jié)果分析。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種焦磷酸測序法檢測OATP1B1基因多態(tài)性試劑盒及方法。所述試劑盒OATP1B1基因多態(tài)性進(jìn)行檢查，具體是指rs4149056(T＞C)單核苷酸多態(tài)性。試劑盒包含如SEQ ID NO.2-4所示的引物。本發(fā)明的試劑盒，可以實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、快捷、高通量OATP1B1基因多態(tài)性的檢測，從而達(dá)到對其底物實(shí)現(xiàn)安全合理有效的個(gè)體化給藥。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102643908SQ201210094448
公開日2012年8月22日 申請日期2012年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月1日
發(fā)明者周宏灝 申請人:周宏灝