專利名稱：用于處理源自人/動物的移植用組織的清洗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于去除源自人/動物的移植用組織中的細胞組分的清洗組合物。更具體地，本發(fā)明涉及一種用于處理源自人/動物的移植用組織的清洗組合物，其包括作為第一溶蛋白組分(protein solubilizing component)的聚氧乙二醇C14-C^1烷基醚、作為第一溶脂組分(lipid solubilizing component)的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作為第二溶蛋白組分的Cltl-C16烷基糖苷和作為第二溶脂組分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
背景技術(shù)：
由于外傷、感染、腫瘤、退化性疾病、先天性疾病等引起的身體組織一部分受到損壞時，作為一種治療方法，可進行自體移植。自體移植與同種異體移植相比具有各種優(yōu)點， 但也有如下的一些問題需要更長的手術(shù)時間(30分鐘至1小時)，并且在獲取自體移植組織和縫合時需要麻醉；在提供組織的區(qū)域可能發(fā)生疼痛、流血和并發(fā)癥如感染；可用移植組織的限制；以及組織形狀的不規(guī)則度。目前，隨著醫(yī)學技術(shù)的發(fā)展，在許多領(lǐng)域，如骨科、 神經(jīng)外科、整形外科、普通外科、胸外科等對組織移植材料的需求正在不斷增加。因此，同種異體移植和異種移植正逐漸代替自體組織移植。在同種異體組織移植和異種組織移植中，會出現(xiàn)兩個固有的問題。一個是傳染性疾病或癌癥可通過移植材料從供體傳播給受體的可能性。另一個是在受體中可由外源蛋白或脂肪細胞引起免疫排斥反應(yīng)的可能性。關(guān)于傳染性疾病的傳播，已有致病細菌、真菌、病毒和癌癥細胞通過組織移植從供體傳播給受體的報道。更具體地，關(guān)于受體在同種異體移植后發(fā)生細菌感染，在美國已報道1953年發(fā)生過1例，1981年發(fā)生過1例，1988年發(fā)生過3例，2002年死亡1例，1988至 2002年在運動醫(yī)學中發(fā)生過14例，2006年發(fā)生過2例。此外，據(jù)美國⑶C(疾病預(yù)防和控制中心)報道，在同種異體移植后，1954年有1例發(fā)生乙肝；1992年有1例、1995年有2例、 2005年有4例發(fā)生丙肝；1988年有1例、1992年有3例發(fā)生獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)； 1996年白色念珠菌感染；1974、1981、1987和1991年同種異體移植角膜或硬膜后發(fā)生瘋牛病(BSE)。如果是同種異體移植，通過嚴格挑選供體；醫(yī)學史、社會學史、性史檢查；體檢、 醫(yī)學記錄和供體血清的檢查等顯著降低了供體的傳染。然而，傳染性疾病仍然可以傳播，因為在常規(guī)的供體血清試驗中，如果試驗是在病毒感染和抗體產(chǎn)生之間的時期即“窗口期”進行，或者病毒是一種新型病毒如嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥(SARA)冠狀病毒或禽流感病毒， 就無法檢測到病毒。因此，在使用新鮮同種異體移植組織或異種移植組織治療人類身體的情況下，移植用組織的消毒步驟是必不可少的，這樣可預(yù)防傳染或癌癥的傳播。除傳染性疾病的傳播外，同種異體移植或異種移植后的免疫排斥反應(yīng)也是有問題的。在組織移植后，在移植的材料中存在的各種細胞組和其它留在骨骼中的材料如膠原、基質(zhì)、蛋白多糖、連接蛋白、無機礦物質(zhì)等也參與了免疫排斥反應(yīng)。它們存在于細胞如骨骼細胞、軟骨細胞、纖維細胞、血管細胞、脂肪細胞、神經(jīng)細胞、干細胞等的膜糖蛋白表面。這些在骨骼中參與免疫排斥反應(yīng)的細胞中，白細胞、髓細胞、脂肪細胞是不需要改變骨骼的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)就可被去除。這些細胞組與免疫排斥反應(yīng)有密切關(guān)系。因此，為了增加同種異體移植或異種移植后在受體體內(nèi)的移植率，并且使免疫排斥反應(yīng)最小化，這些細胞組必須盡可能多地從骨骼中去除。移植用的組織最初可通過洗滌進行消毒。所述組織可通過物理處理洗滌，例如簡單清洗、離心、巴氏消毒或聲波等，或通過使用各種溶劑化學處理洗滌，如乙醇、甲醇、氯仿、 碘乙酸、過乙酸-乙醇、次氯酸鈉、乙二胺、甘油、過氧化氫等。然而，每個方法的功效還未被充分研究和報道。常規(guī)的化學處理方法僅使用一種化學藥物。目前，已有研究表明使用各種化學藥物的組合提高了功效。當僅使用一種化學藥物時，僅洗去一種脂類或蛋白質(zhì)，或者僅失活感染組織中存在的部分細菌或病毒。因此，通過人們需要恰當?shù)亟M合洗滌液組分而增加洗滌功效的方法， 以通過破壞各種細胞如骨髓細胞、紅細胞和白細胞的細胞膜來失活細菌和病毒。因此，對用于化學處理而使移植的組織引起的細菌、朊病毒感染和已知的直接參與免疫排斥反應(yīng)的骨髓細胞、白細胞、脂肪細胞等最小化的清洗溶液的需求不斷增加。如果使用這種清洗溶液，在同種異體移植或異種移植中，通過使用該溶液處理的組織可降低移植物的感染并改善移植率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種處理移植用組織的新型清洗組合物，其與常規(guī)化學處理移植用組織的方法中所使用的清洗組合物相比，在去除細菌或病毒以及去除作為抗原的骨髓細胞、白細胞和脂肪細胞方面更加有效，因此，降低了移植物的免疫排斥反應(yīng)，并且使生物力學特性或生物學特性的改變最小化。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于處理移植用組織的清洗組合物，其包括作為第一溶蛋白組分的聚氧乙二醇C14-C2tl烷基醚、作為第一溶脂組分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作為第二溶蛋白組分的Cltl-C16烷基糖苷和作為第二溶脂組分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。


圖1所示為實施例和比較例中的粗脂類提取結(jié)果。圖2所示為實施例和比較例中的粗蛋白提取結(jié)果。
具體實施例方式以下對本發(fā)明進行詳細描述。在本發(fā)明的清洗組合物中，如果具有碳原子數(shù)低于14或高于20的烷基部分的聚氧乙二醇烷基醚被用作第一溶蛋白組分，那么清洗效果，尤其是去除目標組織中的粗脂類的效果可能會降低。在本發(fā)明的清洗組合物中，第一溶蛋白組分優(yōu)選為聚氧乙二醇C15-C18 烷基醚，更優(yōu)選為聚氧乙二醇十六烷基(即Q6烷基)醚，如Brij 58(商標)。在本發(fā)明的清洗組合物中，第一溶脂組分SC6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇，優(yōu)選為 C7-C8烷基苯酚聚氧乙基醇，更優(yōu)選為C8烷基苯酚聚氧乙基醇，如Triton X-100 (商標)。在本發(fā)明的清洗組合物中，第二溶蛋白組分為Cltl-C16烷基糖苷，優(yōu)選為Cn-C14g基糖苷，更優(yōu)選為C12烷基糖苷，如正十二烷基-β -D-麥芽糖苷。在本發(fā)明的清洗組合物中，第二溶脂組分SC9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，優(yōu)選為C9-Cltl烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，更優(yōu)選為C9烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，如Triton N-101 (商標)。根據(jù)本發(fā)明，用于處理移植用組織的清洗組合物包括作為第一溶蛋白組分的聚氧乙二醇C14-C2tl烷基醚、作為第一溶脂組分WC6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作為第二溶蛋白組分的Cltl-C16烷基糖苷和作為第二溶脂組分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。在上述的組合物中，第一溶蛋白組分第一溶脂組分第二溶蛋白組分第二溶脂組分的重量比優(yōu)選為1 0.05 1.5 0.2 2 0. 05 1. 5，更優(yōu)選為1 0. 2 1. 0 0. 5 1.5 0. 2 1. 0，更優(yōu)選為1 0.4 0.8 0. 8 1. 2 0. 4 0. 8。如果第一溶蛋白組分第一溶脂組分第二溶蛋白組分第二溶脂組分的含量比超出了上述的范圍，清洗效果就會降低。本發(fā)明的清洗組合物最優(yōu)選包含重量比為1.75 1 1.75 1的C16烷基醚、C8烷基苯酚聚氧乙基醇、C12烷基糖苷和C9烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。作為一種處理移植用組織的清洗組合物進行使用，本發(fā)明的清洗組合物可進行稀釋，如用水稀釋，優(yōu)選用去離子水或蒸餾水。在稀釋比例上沒有限定。例如，本發(fā)明的清洗組合物可稀釋10倍至1000倍，但不限于此。本發(fā)明的清洗組合物或含有該清洗組合物的清洗溶液可進一步包括一種或多種殺菌或抗病毒組分，如乙醇、磷酸三正丁酯(TNBP)、脂肪酸酯如硬脂酸聚烴氧00)酯(商標)等，以增加細菌或病毒的失活功效。乙醇對一些革蘭氏陽性菌(結(jié)核分枝桿菌、衣原體等)和一些革蘭氏陰性菌(耶氏小腸結(jié)腸炎桿菌)具有殺菌效果。已知TNBP和脂肪酸酯具有抗病毒功效。這些額外的殺菌或抗病毒組分含量沒有特別限定。如果必要的話，它們可在實現(xiàn)本發(fā)明目的的范圍內(nèi)適當?shù)剡M行添加。根據(jù)本發(fā)明，可獲得與常規(guī)化學處理移植用組織的清洗組合物相比，在去除細菌或病毒以及去除作為抗原的骨髓細胞、白細胞和脂肪細胞方面更加有效的處理移植用組織的新型清洗組合物，從而降低移植物的免疫排斥反應(yīng)，并且使生物力學特性或生物學特性的改變最小化。接下來，以下述實施例詳細闡釋本發(fā)明。然而，須理解本發(fā)明的保護范圍不限于這些實施例。實施例用蒸餾水將0.35g聚氧乙二醇十六烷基醚(商標Brij 58),0. 2g 4_聚氧乙烯辛烷基苯酚醚(商標Triton X-100)、0. 35g正十二烷基-β -D-麥芽糖苷和0. 2g壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(商標Triton N-101)混合(重量比為1. 75 1 1. 75 1)制備IOOmL 清洗組合物(10 X濃度)。將IOg TNBP (lwt % )和5g硬脂酸聚烴氧(40)酯(0. 5wt% )加入到ImL制備的清洗組合物中，再用乙醇溶液稀釋獲得IOOOml乙醇終濃度為10%的處理移植用組織的清洗液。比較例1 3作為處理移植用組織的清洗液，制備蒸餾水(比較例1)、生理鹽水(比較例2)和溶液A(比較例3)。溶液A根據(jù)US 5，977，034的實施例中公開的方法進行制備將聚乙烯(23)十二醚(商標Brij 35)、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(商標=Tergitol NP-40)和壬基苯基聚乙二醇醚(商標N0n0Xyn0l-9)以重量比3. 3 1 1進行混合。實驗例1使用豬肱骨(160g)作為實驗材料。在相同的條件下(溶液溫度40°C，終體積 4L，50psi)，每個清洗液一式十份進行實驗。實驗方案如下(1)使用刮骨刀和手術(shù)刀去除豬肱骨的軟組織和軟骨。(2)切割肱骨使得包括肱骨鄰近部分的這部分重量是相同的。(3)將導(dǎo)液口(tapping port)插入到肱骨的骨髓腔中，并將插入口周圍用封口膜封住。(4)在20L的玻璃瓶中制備清洗液。(5)在導(dǎo)熱性很好的容器內(nèi)將清洗液加熱至40°C。(6)準備反應(yīng)器。(7)將加熱到40°C的清洗液注入到反應(yīng)器和清洗瓶中。(8)將與肱骨骨髓腔相連的導(dǎo)液口通過軟管連接到泵的輸入口。(9)肱骨骨髓腔與軟管相連，泵的輸出軟管連接到反應(yīng)器上。(10)在50psi的壓強下運行泵。(11)運行泵15分鐘，然后停止。(12)將肱骨從反應(yīng)器中取出(13)斷開導(dǎo)液口與軟管的連接。(14)泵的輸入和輸出軟管插入到反應(yīng)器中，再運行泵。(15)2 3分鐘后，輸入軟管從反應(yīng)器中移除。(16)軟管中剩下的所有溶液都輸入到反應(yīng)器中。(17)將反應(yīng)器中的溶液轉(zhuǎn)移到另一個容器中。(18)用清洗液清洗反應(yīng)器表面的提取物，將生成的溶液加入到從反應(yīng)器中回收的溶液中。(19)將溶液在40°C的恒溫水浴鍋中加熱以維持反應(yīng)提取物的脂類的均勻濃度。(20)加熱20 30分鐘后，將溶解的反應(yīng)提取物等分到樣品瓶中。(21)振蕩樣品瓶進行混合后，從樣品瓶中取出分析樣品。(22)將樣品瓶和分析樣品儲存于冰箱中。通過酸水解法分析冰箱中儲存的樣品的粗脂類。粗脂類提取物的分析結(jié)果如表1 所示，并以圖表形式示于圖1(提取結(jié)果為10個樣品的平均值)。表 權(quán)利要求
1.一種用于處理移植用組織的清洗組合物，其包括作為第一溶蛋白組分的聚氧乙二醇C14-C2tl烷基醚、作為第一溶脂組分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作為第二溶蛋白組分的 C10-C16烷基糖苷和作為第二溶脂組分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其中所述的第一溶蛋白組分為聚氧乙二醇C16烷基醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其中所述的第一溶脂組分為C8烷基苯酚聚氧乙基醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其中所述的第二溶蛋白組分為C12烷基糖苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其中所述的第二溶脂組分為C9烷基苯氧基聚乙 氧基乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其中C14-C2tl烷基醚C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇Cltl-Q6烷基糖苷C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇的重量比為1 0.05 1. 5 0. 2 2 0. 05 1. 5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的清洗組合物，其還包括殺菌或抗病毒組分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的清洗組合物，其中所述的殺菌或抗病毒組分為乙醇或脂肪酸
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于去除源自人/動物的移植用組織中的細胞組分的清洗組合物。更具體地，本發(fā)明涉及一種用于處理源自人/動物的移植用組織的清洗組合物，其包括作為第一溶蛋白組分的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作為第一溶脂組分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作為第二溶蛋白組分的C10-C16烷基糖苷和作為第二溶脂組分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
文檔編號C11D1/72GK102317424SQ201080007402
公開日2012年1月11日 申請日期2010年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月11日
發(fā)明者姜孝定, 宋錫范, 鄭求源, 鄭載得, 金炳奭 申請人:Cg生物技術(shù)有限公司