一種具有黏液層滲透和P?gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于抗腫瘤藥物口服遞送的納米膠束的制備技術(shù)，即一種具有黏液層滲透和P?gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法，以殼聚糖、槲皮素和6磷酸葡萄糖酸為原料，通過縮合脂化法制備雙親性殼聚糖?槲皮素琥珀酸脂?6磷酸葡萄糖酸共聚物，通過自組裝技術(shù)合成目標產(chǎn)物，該納米膠束具有良好的黏液層滲透能力，同時兼顧P?gp抑制作用，能夠有效提高抗腫瘤藥物的口服遞送效率?？捎糜卺t(yī)用生物材料和藥物載體，具有良好的研究和開發(fā)應(yīng)用前景。
【專利說明】
一種具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于藥劑學領(lǐng)域的一種具有黏液層滲透和p-gp抑制雙重作用納米膠束的制備技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著納米技術(shù)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域研究與應(yīng)用的不斷深入，納米載體材料在解決疏水藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運困難、胃腸道環(huán)境對藥物分子活性破壞，提高生物利用度等方面呈現(xiàn)出獨特的功效性，表現(xiàn)出其他制劑無法達到的效果。目前普遍認為，小腸粘膜屏障是制約納米制劑小腸吸收效率的主要因素。帶有正電荷的納米制劑，通過靜電作用與小腸上皮細胞發(fā)生粘附，促進細胞對納米制劑的吞噬和轉(zhuǎn)運，但卻容易被滯留于粘膜黏液層中，而無法到達吸收部位;具有親水表面的電中性或弱負電性納米制劑，可以快速滲透粘膜黏液層到達小腸上皮細胞頂側(cè)，但其電中性親水表面卻不利于小腸上皮細胞的吞噬轉(zhuǎn)運。因此，如何調(diào)控納米載體的表面性質(zhì)，使其在具有黏液層滲透性的同時，增強納米載體在小腸上皮細胞處的粘附性與透過性，是提高納米制劑小腸吸收效率的關(guān)鍵。小腸粘膜上皮細胞膜上存在大量的多藥耐藥性蛋白，如P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)，同時，小腸和肝臟細胞微粒體中的細胞色素P450對大部分抗腫瘤藥物具有較強的代謝作用，由此而產(chǎn)生的首過效應(yīng)是限制抗腫瘤藥物口服生物利用度的另一重要因素。如何提高納米制劑黏液層滲透性的同時，賦予納米制劑P-gp抑制能力，是本發(fā)明所解決的關(guān)鍵問題。本發(fā)明分別以堿性磷酸酶底物和P-gp抑制劑一一槲皮素對殼聚糖分子進行雙親化修飾，通過自組裝技術(shù)制備具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用的納米膠束。納米膠束表面親水性的堿性磷酸酶底物，一方面，可以保證納米膠束具有弱負電性或電中性表面而有利于黏液層的穿透，另一方面，在小腸上皮細胞膜堿性磷酸酶的催化作用下，納米膠束的親水基團發(fā)生去磷酸化作用脫去磷酸基團，恢復殼聚糖基納米膠束的聚陽離子屬性，提高納米載體對小腸上皮細胞的粘附性和透過性；槲皮素的疏水化改性，一方面作為形成穩(wěn)定納米膠束的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，另一方面賦予納米載體避免首過效應(yīng)的功效，具有十分重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法，以彌補已有技術(shù)的不足。
[0004]本發(fā)明以殼聚糖、槲皮素和6磷酸葡萄糖酸三鈉鹽為原料，通過縮合脂化法制備雙親性殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸共聚物，通過自組裝技術(shù)合成目標產(chǎn)物，即一種具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用納米膠束，具體步驟如下:
(I)將槲皮素溶于二甲基亞砜中，加入丁二酸酐，40 0C下攪拌反應(yīng)，加入EDC/NHS，調(diào)節(jié)pH至5.0，室溫下攪拌反應(yīng)，逐滴加入殼聚糖水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6小時，置于二甲基亞砜中透析2天，再于去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-琥珀酸脂； (2)將6磷酸葡萄糖酸三鈉鹽溶解在水中，加入EDC，調(diào)節(jié)pH至5.0，40°C下攪拌反應(yīng)，逐滴加入殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂，室溫下攪拌反應(yīng)12小時，置于去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸；
(3)納米膠束的制備:將殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸溶于稀酸溶液中，冰浴超聲后凍干即得目標產(chǎn)物，即殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束。
[0005]本發(fā)明具有操作簡便、制備技術(shù)工藝簡單以及制造成本低廉等優(yōu)點，可以通過改變投料比及反應(yīng)時間來調(diào)整雙親性共聚物的取代度，進而改變納米膠束的粒徑，所形成的殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束為規(guī)則球形，平均粒徑在30 - 50 nm。本發(fā)明的重要意義在于形成的殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束具有良好的黏液層滲透性，同時兼顧P-gp抑制作用，能夠有效提高抗腫瘤藥物的口服遞送效率，具有良好的開發(fā)應(yīng)用潛力，以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明做出進一步說明。
【附圖說明】
[0006]圖1為殼聚糖、殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯、殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸的核磁共振圖譜。
[0007]圖2為殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸透射電鏡照片。
[0008]實施例1
稱取槲皮素60 mg溶于5 mL二甲基亞砜中，加入20.2 mg丁二酸酐后在40 "€下攪拌反應(yīng)4小時。稱取38.4 mg EDC和46 mg NHS加入到反應(yīng)液中，用HCl調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至5.0，室溫下攪拌反應(yīng)30分鐘。稱取0.2 g殼聚糖溶于5 mL水中，將殼聚糖水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)6小時，置于二甲基亞砜溶液中透析2天，再在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-琥珀酸脂;稱取6 mg 6-磷酸葡萄糖酸三鈉溶解在1.5 mL水中，加入3.4 mg EDC,用HCl調(diào)節(jié)pH至5.0，40 °C下攪拌反應(yīng)30分鐘，稱取30 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂溶于3mL水中，將殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)12小時，在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸;稱取2 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸溶于2 mL稀酸溶液中，冰浴超聲即得殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束。
[0009]實施例2
稱取槲皮素150 mg溶于5mL二甲基亞砜中，加入40.4mg丁二酸酐后在40 °C下攪拌反應(yīng)4小時。稱取76.8 mg EDC和9.2 mg NHS加入到反應(yīng)液中，用HCl調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至5.0，室溫下攪拌反應(yīng)30分鐘。稱取0.2 g殼聚糖溶于5 mL水中，將殼聚糖水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)6小時，置于二甲基亞砜溶液中透析2天，再在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-琥珀酸脂;稱取20 mg 6-磷酸葡萄糖酸三鈉溶解在2 mL水中，加入22.4 mg EDC，用HCl調(diào)節(jié)pH至5.0，40°C下攪拌反應(yīng)30分鐘，稱取28 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂溶于4 mL水中，將殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)12小時，在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸;稱取3 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸溶于10 mL稀酸溶液中，冰浴超聲即得殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束。
[0010]實施例3 稱取槲皮素7.6 mg溶于7.6 mL二甲基亞砜中，加入3 mg丁二酸酐后在40 °〇下攪拌反應(yīng)4小時。稱取11.6 mg EDC和7 mg NHS加入到反應(yīng)液中，用HCl調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至5.0，室溫下攪拌反應(yīng)30分鐘。稱取0.1 g殼聚糖溶于5 mL水中，將殼聚糖水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)6小時，置于二甲基亞砜溶液中透析2天，再在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-琥珀酸脂;稱取2 mg 6-磷酸葡萄糖酸三鈉溶解在2 mL水中，加入11.2 mg EDC，用HCl調(diào)節(jié)pH至5.0，40°C下攪拌反應(yīng)30分鐘，稱取9.6 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂溶于4 mL水中，將殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂水溶液逐滴加入反應(yīng)液中，室溫下攪拌反應(yīng)12小時，在去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸;稱取2 mg殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸溶于4 mL稀酸溶液中，冰浴超聲即得殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束。
【主權(quán)項】
1.一種具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法，其特征在于分別利用槲皮素和6磷酸葡萄糖酸對殼聚糖分子進行雙親性修飾，通過自組裝技術(shù)制備得到殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸納米膠束，具體步驟如下: (1)殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂制備:將槲皮素溶于二甲基亞砜中，溶液濃度濃度為I?30 mg/mL，加入丁二酸酐，其中槲皮素與丁二酸酐的摩爾比為0.8 - 1.2: 1,40 °C下攪拌反應(yīng)4小時，加入EDC/NHS，pH調(diào)至5.0，其中EDC與丁二酸酐摩爾比為I?2:1，EDC與NHS摩爾比為0.5?5:1，室溫下攪拌反應(yīng)30分鐘，逐滴加入殼聚糖水溶液，其中殼聚糖水溶液濃度為20?40 mg/mL，殼聚糖分子量為1500?5000Da，殼聚糖與槲皮素摩爾比為1.55?31:1，調(diào)節(jié)pH至5.0，室溫下攪拌反應(yīng)6小時，置于二甲基亞砜中透析2天，再于去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-琥珀酸脂； (2)殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸制備:將6磷酸葡萄糖酸三鈉鹽溶解在水中，溶液濃度為I?10 mg/mL，加入EDC，其中EDC與6磷酸葡萄糖酸三鈉鹽的摩爾比為I?10: 1，調(diào)節(jié)pH至5.0，40°C下攪拌反應(yīng)30分鐘，逐滴加入殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂水溶液，其中殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂水溶液濃度為2?7mg/mL，殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂與6磷酸葡萄糖酸的摩爾比為2?10: 1，室溫下攪拌反應(yīng)12小時，置于去離子水中充分透析，凍干制得殼聚糖-槲皮素琥珀酸脂-6磷酸葡萄糖酸； (3)納米膠束的制備:將殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸溶于稀酸溶液中，溶液濃度為0.3?I mg/mL，冰浴超聲后凍干即得殼聚糖-槲皮素琥珀酸酯-6磷酸葡萄糖酸納米膠束。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有黏液層滲透和P-gp抑制雙重作用納米膠束的制備方法，其特征是在納米膠束的制備中，稀酸溶液為I %醋酸或I %的鹽酸。
【文檔編號】A61P35/00GK106038485SQ201610494581
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】馮超, 穆愈之, 陳西廣, 孔明, 程曉杰, 劉雅
【申請人】中國海洋大學