脫細胞組織基質復合材料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了脫細胞組織基質復合材料及其制備方法，所述復合材料是由脫細胞組織基質經粉碎、加水或加消化液消化后，與聚電解質混勻、冷凍干燥而成；其中，脫細胞組織基質是由動物組織經脫細胞處理得到的。本發(fā)明產品為多孔海綿狀，以此作為支架，原位植入誘導宿主血管化及細胞增殖再生從而促進組織愈合，可用于組織修復，如創(chuàng)面修復、皮下填充、及構建組織工程化肌肉等。本發(fā)明的產品既保留了活性生長因子，又可構建復雜形狀、尺寸大小可調的支架，還可以實現(xiàn)微孔尺寸、孔隙率、降解時間可調。
【專利說明】
脫細胞組織基質復合材料及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領域，具體設及一種脫細胞組織基質復合材料及其制備 方法。
【背景技術】
[0002] 目前，脫細胞組織基質材料作為組織修復材料或組織工程支架是目前最具應用潛 力的材料，已經在許多臨床前的動物研究及人類臨床應用中，顯示出對重塑不同組織具有 非常有建設性的促進作用。運些脫細胞組織基質材料衍生自各種動物組織，包括屯、臟瓣膜， 血管，皮膚，神經，骨骼肌，肌腫，初帶，小腸粘膜下層（smal 1 intestinal submucosa，SIS)， 膀脫和肝臟等，動物來源為豬、牛或羊。脫細胞組織基質材料是將新鮮的組織通過各種方法 包括物理、化學或者酶消化的方法脫除組織的細胞成分后(運些成分是引起免疫反應的主 要來源），所保留下的組織細胞外基質。研究發(fā)現(xiàn)，脫細胞組織基質主要由氨基聚糖、蛋白聚 糖、膠原和彈性蛋白W及纖連蛋白和層粘連蛋白組成，對細胞組織起支持、保護、提供營養(yǎng)， W及細胞分化、細胞運動遷移、細胞識別、細胞黏著和通信聯(lián)絡等作用。各種動物組織雖然 在制備過程中經過了一系列的脫細胞等工程化處理，但是仍可W保留一定含量的生長因 子，如血管內皮生長因子(VEGF)、血小板源性生長因子(PDGF)、轉化生長因子(TGF-β)和成 纖維細胞生長因子(bFG巧等，使其在組織的修復和重建過程中發(fā)揮重要的生物活性作用。
[0003] 然而脫細胞基質材料作為修復材料或者支架使用時，由于存在材料天然固有的結 構導致在降解時間和Ξ維結構上都難W調控，力學強度差，為了調節(jié)降解時間常用的方法 就是交聯(lián)，但交聯(lián)后活性成分損失嚴重。運些問題導致材料難W適用于多個臨床適用癥，臨 床使用受限等。例如脫細胞基質材料中研究最深入、最全面的脫細胞小腸黏膜下層，其在體 內能引導、支持宿主細胞生長，逐漸完全降解，再生的組織結構是重塑而不是形成擁痕，但 是其作一種天然的生物支架，其仍然存在W下問題:小腸粘膜下層為單層薄膜，缺少足夠的 體積及力學支撐，很難達到良好的修復治療效果，而且各種不同的軟組織具有各種不同的 復雜形狀，并非單一的簡單的結構能滿足。COOK公司為解決厚度的問題，采用多層真空層壓 的技術，4層豬小腸粘膜下層復合后厚度約為0.6毫米，8層復合后厚度約為1.2毫米，仍然無 法構建更厚的產品，而且也僅僅是簡單的多層膜狀結構，難W滿足不同的軟組織修復的復 雜形狀要求，所W將W上天然材料按需制成具有復雜形狀和不同厚度的支架材料意義重 大。再者作為修復材料及組織工程支架組織需要為遷移及增殖的細胞提供Ξ維的生長環(huán) 境，而薄層的豬小腸粘膜下層只能提供二維的生長空間，導致細胞長入較慢從而其限制了 其應用，同時致密的組織結構導致材料的孔隙率低，在進一步負載生長因子時負載率低，也 難W起到控制釋放的作用。最后是現(xiàn)有的小腸粘膜下層材料降解時間無法控制，保持原有 結構的脫細胞小腸粘膜下層降解周期通常為4-6個月，脫細胞小腸粘膜下層粉末的降解周 期為1-2周，但不同的組織再生所需的降解時間是不一樣的，太快或者太慢降解都不利于組 織的修復再生。調控降解周期的常用方法是直接交聯(lián)，但交聯(lián)后會失去活性，從而喪失了運 種材料的最大優(yōu)勢。
[0004] 不論是小腸粘膜下層，還是其它的動物組織，制備的脫細胞組織基質材料都存在 力學強度差，活性成分損失，降解時間和Ξ維結構上都難W同時調控的局限性，如何使天然 的脫細胞組織基質材料在保持活性作用的前提下，構建具有降解時間可調、宏觀尺寸可調、 微觀形貌可調新型脫細胞組織基質材料復合材料是當前亟待解決的問題。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供脫細胞組織基質復合材料及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明所采取的技術方案是： 脫細胞組織基質復合材料，所述復合材料是由脫細胞組織基質經粉碎、加水或加消化 液消化后，與聚電解質混勻、冷凍干燥而成；其中，脫細胞組織基質是由動物組織經脫細胞 處理得到的。
[0007] 優(yōu)選的，聚電解質為陰離子型聚電解質或陽離子型聚電解質，且具有可溶解性或 可溶脹性，W及細胞相容性。
[000引優(yōu)選的，所述陰離子型聚電解質為氧化纖維素、簇甲基甲殼素、簇甲基殼聚糖、簇 甲基纖維素鋼、透明質酸、硫酸軟骨素、海藻酸鋼、聚谷氨酸中的至少一種;所述陽離子型聚 電解質為膠原、明膠中的至少一種。
[0009] 優(yōu)選的，所述氧化纖維素的簇基含量15~30%，所述簇甲基甲殼素、簇甲基殼聚 糖、簇甲基纖維素鋼的簇基取代度均獨立選自0.5~1.2。
[0010] 優(yōu)選的，所述消化液是胃蛋白酶的酸溶液。優(yōu)選的，胃蛋白酶的濃度為0.5~ 1.5g/mL。優(yōu)選的，酸溶液的抑為2~6。
[0011] 優(yōu)選的，消化后調節(jié)pH使胃蛋白酶的活性被不可逆地滅活，再與聚電解質混勻。
[0012] 優(yōu)選的，消化可在攬拌狀態(tài)下進行。
[0013] 優(yōu)選的，所述聚電解質占脫細胞組織基質、聚電解質總質量的1~50%wt。實驗中 發(fā)現(xiàn)聚電解質所占比例越高，脫細胞組織基質復合材料中的保留活性生長因子(如VEGF、 PDGF、TGF-i3、bFG巧也會越少，最終所得復合材料的治療效果也會差一些(促進組織愈合能 力差）。為更大程度地保留活性生長因子，所述聚電解質占脫細胞組織基質、聚電解質總質 量的比例優(yōu)選1~20%wt。
[0014] 優(yōu)選的，所述脫細胞組織基質和聚電解質的總質量與水或消化液的體積比為0.1 ~3.0g/mL。
[0015] 優(yōu)選的，所述動物組織為動物的真皮組織、脂肪組織、血管組織、胃粘膜下層、小腸 粘膜下層、膀脫粘膜下層中的至少一種。優(yōu)選的，動物組織來源于豬、?；蜓?。
[0016] 優(yōu)選的，冷凍干燥后，所得產品可進一步在交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)定型反應，清洗，得 到復合材料。
[0017] 優(yōu)選的，交聯(lián)劑為碳化二亞胺基類、二價金屬離子、核黃素、原花青素、京尼平巧、 單寧酸中的至少一種。
[0018] 優(yōu)選的，交聯(lián)定型劑溶液的濃度是0.01~0.20g/mL。反應時間取決于最終產品所 需要的交聯(lián)度，可控。優(yōu)選的，交聯(lián)時間是lOmin~12h。
[0019] 本發(fā)明將脫細胞組織基質粉碎處理或粉碎后再進一步消化處理，是便于宿主組織 加 W原位消化和利用，同時打破原有結構有利于接下來的成型步驟。脫細胞組織基質除了 具有原位營養(yǎng)供應、細胞支架支持的作用，其中大量誘導因子成分和位點也具有促進組織 血管化的潛力，但是，在進行整體使用時，其形成了緊密的膠原網(wǎng)絡，鏈段緊密交纏，部分區(qū) 域甚至呈現(xiàn)了疏水特性，外基質蛋白中大量有誘導功能的活性位點被隱藏在網(wǎng)絡內，無法 與移植宿主組織細胞充分接觸，難W被分解利用，反而有可能成為異物影響組織生長。在粉 碎、消化后，能直接增加其表面積和表面性能，能夠使原來被交纏而埋藏于膠質網(wǎng)絡內部的 活性位點充分暴露，脫細胞組織基質中被固定、結合的生長因子成分加 W釋放，脫細胞組織 基質成分能與移植宿主組織細胞充分接觸，從而使得其能誘導宿主組織功能細胞聚集和原 位利用，促進血管的生長和形成，誘導組織再生和修復，可用于組織修復，包括軟組織缺損 修復、創(chuàng)面修復、皮下填充、肌肉重建等。本發(fā)明將脫細胞組織基質或W粉碎后加水，或粉碎 后再進一步消化處理，可根據(jù)需求選擇，粉碎后再進一步消化處理，也是為了將最終產品的 孔隙調整的更小，消化處理后的產品變得更細，表面積更大，脫細胞組織基質成分與移植宿 主組織細胞接觸更充分。
[0020] 本發(fā)明采用所述聚電解質，也稱高分子電解質，是一類線型或支化的合成和天然 水溶性高分子，其結構單元上含有能電離的基團。其原因在于利用其側鏈帶電特性，對體 液、組織液、循環(huán)系統(tǒng)中的細胞有著吸附和聚集作用，而材料主要為無毒多糖或氨基酸組 成，都可被細胞降解利用，因此，能夠有效促進細胞向材料界面聚集和生長。其中，所優(yōu)選的 氧化纖維素、簇甲基甲殼素、簇甲基殼聚糖、簇甲基纖維素鋼、透明質酸、硫酸軟骨素、海藻 酸鋼、聚谷氨酸主要為陰離子型聚電解質，膠原、明膠表現(xiàn)為陽離子型聚電解質，兩種聚電 解質都具有吸附和聚集細胞的特性。
[0021] 本發(fā)明采用聚電解質復合技術，引入了天然的生物型聚電解質，具有良好的細胞 相容性，可W抑制膠原的過度增生沉積而導致的癒痕，并促進創(chuàng)傷愈合。
[0022] 本發(fā)明采用可溶性生物性的聚電解質和處理后的脫細胞組織基質共混，還因為脫 細胞組織基質粉碎加水或粉碎消化后，實質上形態(tài)為不規(guī)則的凝膠、顆?；蚶w維狀混懸液 或者溶液，成膜后膜的力學性質差，無法直接使用。而聚電解質的分子量較大，溶液粘度較 大，成膜性能好，在和脫細胞組織基質處理物混合后，能加強混合物的成膜能力，使得產品 具有較好的力學強度，較好地維持其整體性，在作為器械植入體內后，不會因為組織液、血 液或是植入部位的中洗破壞而崩解。
[0023] 本發(fā)明的一些實施例中產品不需要進行交聯(lián)定型處理，另一些實施例中產品進行 交聯(lián)定型處理，是為了控制該發(fā)明物在體內的降解時間。由于不同部位的身體組織具有不 同的生長和血管化速度，如果該產品在作為醫(yī)療器械使用而植入體內時，其降解速度遠大 于組織的再生、血管化速度，則在組織被誘導血管化完全之前材料就已經降解消耗，材料濃 度遠低于有效濃度。而如果材料降解速度遠小于組織再生、血管化速度時，則會反過來，阻 礙組織和血管的生長。因此，對材料選擇和控制性交聯(lián)定型，才能較好地適應不同組織的再 生、血管化。
[0024] 本發(fā)明的復合材料，引入了聚電解質，能有效地解決活性因子損失去及復雜尺寸 不能成型的技術問題，更大程度地保留活性生長因子。
[0025] 本發(fā)明的有益效果是： 本發(fā)明產品為多孔海綿狀，W此作為支架，原位植入誘導宿主血管化及細胞增殖再生 從而促進組織愈合，可用于組織修復，如創(chuàng)面修復、皮下填充、及構建組織工程化肌肉等。
[0026] 本發(fā)明的復合材料既能更大程度地保留活性生長因子，又可構建復雜形狀、尺寸 大小可調的支架;本發(fā)明的復合材料具有微觀的多孔結構和超微觀的納米纖維結構，制備 過程中，通過控制材料含水量、脫細胞組織基質和聚電解質的比例來調控支架的孔隙結構， 可W實現(xiàn)微孔尺寸在20微米到800微米之間可調，孔隙率高，孔隙率可控在20%-90%，高的 孔隙率和合適的孔徑可促進組織細胞的粘附及遷移及增殖。本發(fā)明的復合材料，通過與聚 電解質復合，利用不同及交聯(lián)劑濃度和不同的交聯(lián)時間調控降解時間，能實現(xiàn)根據(jù)具體的 組織再生規(guī)律進行1周到半年內調節(jié)。
[0027] 本發(fā)明的復合材料力學強度優(yōu)和安全性好。本發(fā)明脫細胞基質與聚電解質材料復 合后，具有較好的力學特性，能改善脫細胞組織基質處理物的力學特性，使其不會輕易崩解 擴散而失效。兩種組分都為生物基、可體內降解高分子，低毒性、低抗原性、高生物相容性和 可降解性都使其能安全地應用到人體內。
[0028] 本發(fā)明產品對不同部位的組織再生和血管化有良好的針對性和適應性。對復合材 料進行的選擇、控制性交聯(lián)定型，能夠使得材料的降解或被人體的分解速度能與被誘導組 織血管生長的速度保持一致，運樣才能較好地適應不同組織的再生、血管化。
[0029] 本發(fā)明產品應用廣泛，材料可單獨使用進一步加工，可作為功能性添加物質制備 其他材料，最終構建的產品可單獨構建醫(yī)療器械，可和其他功能性植入支架共同構建醫(yī)療 器械W賦予醫(yī)療器械組織血管化誘導性能，也可和其他生物性植入物共同在臨床植入時使 用，涂覆于組織和醫(yī)療器械界面，有效誘導血管生成W及微環(huán)境和大循環(huán)的連通。
【附圖說明】
[0030] 下面結合附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0031 ]圖1是實施例2脫細胞組織基質復合材料的微觀結構； 圖2是實施例2制備的不同尺寸的脫細胞組織基質復合材料。
【具體實施方式】
[0032] 下面結合具體的實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0033] 本發(fā)明脫細胞組織基質材料是將新鮮的組織通過各種方法包括物理、化學或者酶 消化的方法脫除組織的細胞成分后，所保留下的組織細胞外基質?，F(xiàn)有技術中各種脫細胞 處理方法均可行，本實施例僅W常見的一種方法進行脫細胞處理舉例，但并不局限于此。
[0034] W下實施例中，脫細胞組織基質的制備方法是：取屠宰4 h內的新鮮健康動物組 織，沖洗干凈，用含5%體積無水乙醇的0.2%體積過氧乙酸溶液浸泡并持續(xù)攬拌化，（如是 粘膜下層還需去除漿膜層、肌層及粘膜層），用滅菌注射用水持續(xù)沖洗干凈，在室溫下進行 如下處理:①將上述分離的動物組織浸泡在含有l(wèi)OOmmol/L乙二胺四乙酸化DTA)和lOmmol/ L化OH溶液中（pHll.O~12.0)16h;②用滅菌注射用水將材料沖洗干凈，在含有Imol/L 肥巧日1 mol/L化Cl溶液中（pH 0~1)浸泡6~8 h;③用滅菌注射用水沖洗后，在1 mol/L 化Cl的PBS中浸泡16 h;④用滅菌注射用水基質后，在PBS溶液中（pH 7.0~7.4)浸泡2 h; ⑤再用滅菌注射用水沖洗基質2 h(抑5.18~7.10)，后用含0.5 g/L疊氮化鋼的PBS溶液清 洗2 h。
[0035] 實施例1 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與4g透明質酸混合均勻，倒入模具中，凍干得 2mm厚的多孔片狀脫細胞組織基質復合材料。稱取0.2gNHS、1.92巧DC溶于20ml 0.1mol/L巧 樣酸/巧樣酸鋼緩沖液(PH=5.4)中，完全溶解后加入180ml乙醇，混合均勻得到交聯(lián)劑溶 液，該多孔片狀支架放入上述配制的交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)化，后用滅菌注射用水沖洗除去殘 留的交聯(lián)劑，凍干得到脫細胞組織基質復合材料。
[0036] 所得產品供體表使用，用于軟組織修復，具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的， 降解時間為1~2周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-800微米，孔隙率80%。
[0037] 實施例2 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入到含lOOmg胃蛋白酶(2000~2300U/mg)的100ml的O.Olmol/L肥1溶液 中，在室溫（25°C)下保持恒定攬拌4她，酶消化得到的粘稠溶液的抑為約3.0~4.0,用化0H 溶液將抑提高到7.4，胃蛋白酶的活性被不可逆地滅活，所得脫細胞組織基質酶消化液與4g 海藻酸鋼混合均勻，倒入模具中，凍干得2mm厚的多孔片狀復合材料。該支架再與0.05g/ml 的氯化巧溶液交聯(lián)lOmin后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的氯化巧，凍干得到脫細胞組織 基質復合材料。
[0038] 所得產品供體表使用，用于軟組織修復，具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能，降 解時間為2~4周。所得產品的微觀納米結構見圖1，由圖1可知，產品呈海綿多孔狀，其微孔 尺寸20-800微米，孔隙率80%。
[0039] 實施例3 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與4g海藻酸鋼混合均勻，倒入模具中，凍干得 2mm厚的多孔片狀脫細胞組織基質復合材料。
[0040] 所得產品供體表使用，用于軟組織修復，具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的， 降解時間為1~2周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-800微米，孔隙率80%。
[0041 ] 實施例4 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入到含lOOmg胃蛋白酶(2000~2300U/mg)的100ml的O.Olmol/L肥1溶液 中，在室溫(25°C)下保持恒定攬拌4她，酶消化得到的粘稠溶液的抑為約3.0-4.0。用NaO田容 液將抑提高到7.4,胃蛋白酶的活性被不可逆地滅活。脫細胞組織基質酶消化液與4g透明質 酸混合均勻，倒入模具中，凍干得2mm厚的多孔片狀支架。稱取0.2gNHS、1.92姐DC溶于20ml 0.1mol/L巧樣酸/巧樣酸鋼緩沖液(PH=5.4)中，完全溶解后加入180ml乙醇，混合均勻得到 交聯(lián)劑溶液，該多孔片狀支架放入上述配制的交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)化，后用滅菌注射用水沖 洗除去殘留的交聯(lián)劑，凍干得到脫細胞組織基質復合材料。
[0042] 所得產品具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解時間為4~8 周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-800微米，孔隙率80 %。
[0043] 實施例5 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與4g透明質酸混合均勻，倒入模具中，凍干得 2mm厚的多孔片狀支架，稱取ο. 2gNHS、1.92腳)C溶于20ml ο. Imol/L巧樣酸/巧樣酸鋼緩沖 液(PH=5.4)中，完全溶解后加入180ml乙醇，混合均勻得到交聯(lián)劑溶液，該多孔片狀支架放 入上述配制的交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)0.化，后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的交聯(lián)劑，凍干得 到脫細胞組織基質復合材料。其具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解 時間為3~5周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-800微米，孔隙率80%。
[0044] 實施例6 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入到含lOOmg胃蛋白酶(2000~2300U/mg)的100ml的O.Olmol/L肥1溶液 中。在室溫(25°C)下保持恒定攬拌4她。酶消化得到的粘稠溶液的抑為約3.0-4.0。用NaO田容 液將抑提高到7.4，胃蛋白酶的活性被不可逆地滅活。脫細胞組織基質酶消化液與2g海藻酸 鋼混合均勻，倒入模具中，凍干得2mm厚的多孔片狀支架。該支架與0.05g/ml的氯化巧溶液 交聯(lián)lOmin后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的氯化巧，凍干得到脫細胞組織基質復合材料。
[0045] 所得產品具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解時間為2~4 周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸100-800微米，孔隙率90%。
[0046] 實施例7 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與4g膠原混合均勻，倒入模具中，凍干得8mm厚 的多孔片狀支架，稱取0.2gNHS、1.92巧DC溶于20ml的0.1mol/L巧樣酸/巧樣酸鋼緩沖液(PH =5.4)中，完全溶解后加入180ml乙醇，混合均勻得到交聯(lián)劑溶液，該多孔片狀支架放入上述 配制的交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)化，后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的交聯(lián)劑，凍干得到脫細胞 組織基質復合材料。其具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解時間為4 ~8周。所得產品的微孔尺寸20-800微米，孔隙率80%。
[0047] 實施例8 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重lOOg，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與4g膠原混合均勻，倒入模具中，凍干得8mm厚 的多孔片狀支架，稱取0.2gNHS、1.92巧DC溶于20ml的0.1mol/L巧樣酸/巧樣酸鋼緩沖液(PH =5.4)中，完全溶解后加入180ml乙醇，混合均勻得到交聯(lián)劑溶液，該多孔片狀支架放入上述 配制的交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)化，后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的交聯(lián)劑，凍干得到脫細胞 組織基質復合材料。其具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解時間為1 ~4周。所得產品的微孔尺寸20-800微米，孔隙率80 %。
[004引實施例9 脫細胞組織基質復合材料:取豬小腸粘膜下層組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質 濕重80g，粉碎，加入100ml滅菌注射用水后與20g透明質酸混合均勻，倒入模具中，凍干得 8mm厚的多孔片狀支架。取4g乙二醇二縮水甘油酸加入到100ml碳酸鋼/碳酸氨鋼(0.21 M/ 0.02 M，PH=10.5)緩沖液中得到0.4g/ml的交聯(lián)劑溶液，該多孔片狀支架放入上述配制的交 聯(lián)劑溶液中交聯(lián)12h，后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的交聯(lián)劑，凍干得到脫細胞組織基質 復合材料。其具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能的，供體表使用，降解時間為12~24周。 所得產品的微孔尺寸20-800微米，孔隙率80 %。
[0049] 實施例10 脫細胞組織基質復合材料：取豬真皮組織經脫細胞處理后的脫細胞組織基質濕重 lOOg，粉碎，加入50ml滅菌注射用水后與40g簇甲基甲殼素混合均勻，倒入模具中，凍干得 3mm厚的多孔片狀脫細胞組織基質復合材料。所得產品具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功 能的，降解時間為2~3周。所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-100微米，孔隙率30%。
[0050] 實施例11 脫細胞組織基質復合材料：取牛胃粘膜下層經脫細胞處理后的脫細胞組織基質濕重 50g，粉碎，加入到含500mg胃蛋白酶（2000~2300U/mg)的1000ml的0.Olmol/L HC1溶液中， 在室溫(25°C)下保持恒定攬拌2地，酶消化得到的粘稠溶液的pH為約3.0-4.0,用化0H溶液 將P田是高到7.4,胃蛋白酶的活性被不可逆地滅活，所得脫細胞組織基質酶消化液與25g透 明質酸、25g硫酸軟骨素混合均勻，倒入模具中，凍干得4mm厚的多孔片狀復合材料。該支架 再與0.2g/mL京尼平巧溶液交聯(lián)化后用滅菌注射用水沖洗除去殘留的京尼平，凍干得到脫 細胞組織基質復合材料。
[0051 ]所得產品供體表使用，具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能，降解時間為4~5周。 所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸100-800微米，孔隙率85%。
[0化2] 實施例12 脫細胞組織基質復合材料:取牛脂肪組織經脫脂脫細胞處理后的脫細胞組織基質濕重 99g，粉碎，加入50ml滅菌注射用水后，與Ig聚合氨酸混合均勻，倒入模具中，凍干得2mm厚的 多孔片狀復合材料。該支架再與O.Olg/mL核黃素，紫外光交聯(lián)30min后用滅菌注射用水沖洗 除去殘留的核黃素，凍干得到脫細胞組織基質復合材料。
[0053] 所得產品供體表使用，具有促進創(chuàng)面愈合和促血管再生功能，降解時間為4~5周。 所得產品呈海綿多孔狀，其微孔尺寸20-200微米，孔隙率60 %。
[0054] 本發(fā)明冷凍干燥時可根據(jù)模具所設定的形狀，制備大尺寸及形狀復雜的，實施例2 制備了兩種尺寸大小的產品，見圖2。其它實施例均能按模具大小及所設定的形狀，制備出 復雜尺寸大小的產品。
[0055] 實施例中降解性能實驗方法是成品在含膠原酶的生理鹽水中37Γ下振蕩，凍干后 測樣品殘留重量。
[0056] 本發(fā)明中盡管原動物組織通過一系列脫細胞、消化凍干等處理，但通過蛋白質組 學檢測，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明海綿狀脫細胞組織復合材料仍有效保留生長因子，如血管內皮生長因 子（VEGF)、血小板源性生長因子（PDGF)、轉化生長因子（TGF-β)和成纖維細胞生長因子 (bFG巧等。按實施例1的方法重復多組實驗，同時采用了兩組對比，一組為:在進行實驗前的 原材料:脫細胞組織基質，另一組:按實施例1的方法，但不加聚電解質：海藻酸鋼，即：脫細 胞組織基質直接交聯(lián)組，與實施例1制備出的產品，即脫細胞組織基質復合材料組對比，分 別檢測生長因子含量，檢測結果見表1，可見，本發(fā)明的復合材料能更大程度地保留活性生 長因子，與直接交聯(lián)組比較，大大提高了活性生長因子含量。
【主權項】
1. 脫細胞組織基質復合材料，其特征在于:所述復合材料是由脫細胞組織基質經粉碎、 加水或加消化液消化后，與聚電解質混勻、冷凍干燥而成;其中，脫細胞組織基質是由動物 組織經脫細胞處理得到的。2. 根據(jù)權利要求1所述的復合材料，其特征在于:聚電解質為陰離子型聚電解質或陽離 子型聚電解質，且具有可溶解性或可溶脹性，以及細胞相容性。3. 根據(jù)權利要求2所述的復合材料，其特征在于：所述陰離子型聚電解質為氧化纖維 素、羧甲基甲殼素、羧甲基殼聚糖、羧甲基纖維素鈉、透明質酸、硫酸軟骨素、海藻酸鈉、聚谷 氨酸中的至少一種;所述陽離子型聚電解質為膠原、明膠中的至少一種。4. 根據(jù)權利要求1所述的復合材料，其特征在于:所述消化液是胃蛋白酶的酸溶液。5. 根據(jù)權利要求4所述的復合材料，其特征在于:消化后調節(jié)pH使胃蛋白酶的活性被不 可逆地滅活，再與聚電解質混勻。6. 根據(jù)權利要求1所述的復合材料，其特征在于:所述聚電解質占脫細胞組織基質、聚 電解質總質量的1~50%wt; 所述脫細胞組織基質和聚電解質的總質量與水或消化液的體積比為0.1~3.Og/mL。7. 根據(jù)權利要求1所述的復合材料，其特征在于:所述動物組織為動物的真皮組織、月旨 肪組織、血管組織、胃粘膜下層、小腸粘膜下層、膀胱粘膜下層中的至少一種。8. 根據(jù)權利要求1所述的復合材料，其特征在于:冷凍干燥后，所得產品可進一步在交 聯(lián)劑溶液中交聯(lián)定型反應，清洗，得到復合材料。9. 根據(jù)權利要求8所述的復合材料，其特征在于：交聯(lián)定型劑為碳化二亞胺基類、二價 金屬離子、核黃素、原花青素、京尼平苷、單寧酸中的至少一種。10. 根據(jù)權利要求8所述的復合材料，其特征在于:交聯(lián)劑溶液的濃度是0.01~0.20 g/ mL〇
【文檔編號】A61L27/50GK105999410SQ201610291712
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月5日
【發(fā)明人】楊偉紅, 易靜楠, 鄧小敏, 陳大鵬, 劉江輝
【申請人】廣州昕生醫(yī)學材料有限公司