一種馬尾藻多糖的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種馬尾藻多糖的應(yīng)用。馬尾藻多糖作為制備抗補(bǔ)體藥物或抗補(bǔ)體保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明馬尾藻多糖對(duì)經(jīng)典途徑和旁路途徑抗補(bǔ)體活性具有顯著的抑制作用，并公開了將馬尾藻多糖應(yīng)用于制備抗補(bǔ)體藥物和保健品，能夠抑制補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活，從而對(duì)由于補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活而引發(fā)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡，缺血性再灌注，急性心肌梗死，老年癡呆，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種疾病具有一定的預(yù)防和治療作用。
【專利說(shuō)明】
一種馬尾藻多糖的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種馬尾藻多糖的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]補(bǔ)體系統(tǒng)作為人類重要的免疫防御系統(tǒng)之一，可以消除有害物質(zhì)侵入人體。補(bǔ)體系統(tǒng)非正常的激活會(huì)引起人體免疫系統(tǒng)的過(guò)度反應(yīng)，造成人體自身正常組織的損傷。其中與補(bǔ)體過(guò)度激活相關(guān)的疾病有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，老年癡呆，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，急性心肌梗死，急性呼吸窘迫綜合癥等等。臨床上廣泛使用的糖皮質(zhì)激素，環(huán)磷酰胺等免疫抑制劑對(duì)補(bǔ)體過(guò)度激活有一定治療作用，但是該類藥物對(duì)其他免疫系統(tǒng)也有抑制作用，長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)降低機(jī)體的免疫能力，產(chǎn)生多種并發(fā)癥。
[0003]我國(guó)海藻資源十分豐富，海藻多糖作為海藻生物活性物質(zhì)之一，具有多種生物活性，如免疫調(diào)節(jié)作用，抗病毒，抗氧化等作用。此外海藻多糖無(wú)毒，可以大量長(zhǎng)期使用。因此開發(fā)海洋糖類藥物越來(lái)越受到重視。
[0004]馬尾藻，隸屬于褐藻門，圓子綱，墨角藻目，馬尾藻科，在我國(guó)沿海均有分布，生長(zhǎng)于中，低潮間帶巖石上。我國(guó)是馬尾藻主要產(chǎn)地之一，有六十多種。對(duì)于馬尾藻多糖在抗補(bǔ)體活性方面的研究還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種馬尾藻多糖的應(yīng)用。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
[0007]一種馬尾藻多糖的應(yīng)用，馬尾藻多糖作為制備抗補(bǔ)體藥物或抗補(bǔ)體保健品中的應(yīng)用。
[0008]所述馬尾藻多糖以馬尾藻為原料經(jīng)熱水提取法提取獲得。
[0009]所述馬尾藻多糖以馬尾藻為原料經(jīng)脫色后通過(guò)熱水提取法提取獲得。
[0010]所述馬尾藻多糖以馬尾藻為原料，將原料加入至過(guò)量的85%酒精中進(jìn)行脫色，脫色后的馬尾藻藻體在100-120 °C、0.05-0.25MPa的高壓下進(jìn)行熱水提取，而后過(guò)濾、濃縮，所得濃縮物去除褐藻膠(采用氯化鎂和20%酒精除褐藻膠或采用其它現(xiàn)有方式進(jìn)行除膠)，而后離心、濃縮、透析，透析后濃縮，經(jīng)醇沉、干燥，即得馬尾藻多糖。
[0011]其中，85%酒精為原料體積的20-40倍。
[0012]所述馬尾藻多糖分子量范圍為50?200kDa，主要組成單糖為巖藻糖和半乳糖，兩者的摩爾比例為I?20:1，硫酸根含量為15%?50%。
[0013]所述馬尾藻多糖來(lái)源于褐藻門，圓子綱，墨角藻目，馬尾藻科。如鼠尾藻，全緣馬尾藻，海黍子和莫氏馬尾藻。
[0014]本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)為:
[0015]本發(fā)明馬尾藻多糖對(duì)經(jīng)典途徑和旁路途徑抗補(bǔ)體活性具有顯著的抑制作用，并公開了將馬尾藻多糖應(yīng)用于制備抗補(bǔ)體藥物和保健品，能夠抑制補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活，從而對(duì)由于補(bǔ)體系統(tǒng)過(guò)度激活而引發(fā)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡，缺血性再灌注，急性心肌梗死，老年癡呆，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種疾病具有一定的預(yù)防和治療作用。
【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的全緣馬尾藻多糖的紅外圖。
[0017]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1的鼠尾藻多糖的紅外圖。
[0018]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的海黍子多糖的紅外圖。
[0019]圖4為本發(fā)明實(shí)施例1的莫氏馬尾藻多糖的紅外圖。
[0020]圖5為本發(fā)明實(shí)施例1，2，3，4提供的馬尾藻多糖(SIW，STW，SKW和SMW)經(jīng)典途徑的抗補(bǔ)體活性。
[0021]圖6為本發(fā)明實(shí)施例1，2，3，4提供的馬尾藻多糖(SIW，STW，SKW和SMW)旁路途徑的抗補(bǔ)體活性。
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本發(fā)明所限定的范圍。
[0023]實(shí)施例1，全緣馬尾藻多糖的制備
[0024]取全緣馬尾藻粉末100g，加入3L 85%酒精浸提24h，過(guò)濾除去浸泡液，而后將藻體于60°C烘箱烘干。脫色后的全緣馬尾藻粉末用3000mL自來(lái)水在高壓鍋中于110°C，0.1MPa提取4h，篩絹過(guò)濾分離藻渣，硅藻土過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮至400mL，加入4g氯化鎂和10mL無(wú)水乙醇去除褐藻膠，離心(4000rpm, 15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200mL，將濃縮液裝入100Da的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸餾水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至50mL，加入200mL 95%酒精醇沉，紅外燈烘干，即得水提取的全緣馬尾藻多糖(SIW)，產(chǎn)率為1.9%。
[0025]全緣馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為29.56%，糖醛酸為3.98%，硫酸根為26.41%；分子量顯示為131.2kDa;單糖摩爾比為甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖藻糖(0.06:0.08:0.09:0.36:0.10:1)。紅外譜圖(圖1)在約 1220-1260cm—1 和 820-830cm—1出現(xiàn)硫酸基特征吸收峰，說(shuō)明全緣馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0026]實(shí)施例2，鼠尾藻多糖的制備
[0027]取鼠尾藻粉末100g，加入3L85%酒精浸提24h，過(guò)濾除去浸泡液，藻體60度烘箱烘干。脫色后的鼠尾藻粉末用3000mL自來(lái)水在高壓鍋中于110 °C，0.1MPa提取4h，篩絹過(guò)濾分離藻渣，硅藻土過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮至400mL，加入4g氯化鎂和10mL無(wú)水乙醇去除褐藻膠，離心(4000rpm，15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200mL，將濃縮液裝入100Da的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸餾水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至50mL，加入200mL 95%酒精醇沉，紅外燈烘干，即得水提取的鼠尾藻多糖(STff)，產(chǎn)率為2.5%。
[0028]鼠尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為31.69%,糖醛酸為2.09%,硫酸根為29.39%；分子量顯示為191.2kDa;單糖摩爾比為甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖藻糖(0.02:0.03:0.03:0.05:0.07:1)。紅外譜圖(圖2)在約 1220-12600^1 和820-8300^1出現(xiàn)硫酸基特征吸收峰，說(shuō)明鼠尾藻多糖為硫酸多糖。
[0029]實(shí)施例3，海黍子多糖的制備
[0030]取海黍子粉末10g，加入3L85%酒精浸提24h，過(guò)濾除去浸泡液，藻體60度烘箱烘干。脫色后的海黍子粉末用3000mL自來(lái)水在高壓鍋中于110 °C，0.1MPa提取4h，篩絹過(guò)濾分離藻渣，硅藻土過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮至400mL，加入4g氯化鎂和10mL無(wú)水乙醇去除褐藻膠，離心(4000rpm，15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200mL，將濃縮液裝入100Da的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸餾水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至50mL，加入200mL 95 %酒精醇沉，紅外燈烘干，即得水提取的海黍子多糖(SKW)，產(chǎn)率為1.0 %。
[0031 ]海黍子多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為20.56%,糖醛酸為8.93%,硫酸根為15.34 % ;分子量顯示為91.3kDa;單糖摩爾比為甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖藻糖(0.11:0.23:0.16:0.36:0.46:1)。紅外譜圖(圖3)在約 1220-12600^1 和820-8300^1出現(xiàn)硫酸基特征吸收峰，說(shuō)明海黍子多糖為硫酸多糖。
[0032]實(shí)施例4，莫氏馬尾藻多糖的制備
[0033]取莫氏馬尾藻粉末100g，加入3L85%酒精浸提24h，過(guò)濾除去浸泡液，藻體60度烘箱烘干。脫色后的莫氏馬尾藻粉末用3000mL自來(lái)水在高壓鍋中于110°C，0.1MPa提取4h，篩絹過(guò)濾分離藻渣，硅藻土過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮至400mL，加入4g氯化鎂和I OOmL無(wú)水乙醇去除褐藻膠，離心(4000rpm, 15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200mL，將濃縮液裝入100Da的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸餾水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至50mL，加入200mL95 %酒精醇沉，紅外燈烘干，即得水提取的莫氏馬尾藻多糖(SMW)，產(chǎn)率為1.6%。
[0034]莫氏馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為19.66%，糖醛酸為5.78%，硫酸根為19.89% ;分子量顯示為166.2kDa;單糖摩爾比為甘露糖，鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖藻糖(0.13:0.16:0.39:0.67:0.16:1)。紅外譜圖(圖4)在約 1220-1260(31^1 和820-830cm—1出現(xiàn)硫酸基特征吸收峰，說(shuō)明莫氏馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0035]實(shí)施例5
[0036]測(cè)定上述實(shí)施例獲得多糖樣品(SIW，STW，SKW和SMW)經(jīng)典途徑的抗補(bǔ)體活性作用。
[0037]本例通過(guò)經(jīng)典途徑抗補(bǔ)體活性來(lái)反映馬尾藻多糖對(duì)補(bǔ)體作用大小。
[0038]實(shí)驗(yàn)方法:
[0039]I，2% 羊紅細(xì)胞(SRBC):取綿羊血2ml，用GVB2+(VBS中含有0.I % 明膠，0.5mM Mg2+，
0.15mM Ca2+)洗滌，3000rpm離心5min，重復(fù)三次后，配制成2% SRBC；
[0040]2，溶血素的制備:用GVB2+配制成1:2000溶血素溶液；
[0041 ] 3，樣品溶液:稱取多糖樣品1mg，用GVB2+溶解后，稀釋成終濃度為I，10，50，100，250和500yg/ml的溶液。
[0042]4，補(bǔ)體的制備:豚鼠股動(dòng)脈血，4°C放置2h后，3000rpm離心5min，取血清，分裝后-78 °C冷凍保存。
[0043]實(shí)驗(yàn)分組情況為:(I)全溶血組:10yL 2%SRBC加入500yL水；(2)樣品對(duì)照組:100yL不同濃度樣品溶液加入500yL GVB2+ ； (3)補(bǔ)體組:10yL補(bǔ)體，10yL溶血素，加入100yL2 %SRBC在300yL GVB2+ (4)樣品測(cè)定組:I OOyL不同濃度樣品溶液，I OOyL補(bǔ)體，加入10yL溶血素和100yL2%SRBC在200yL GVB2'37°C溫浴30min后，混合物用5000rpm 1min離心，細(xì)胞裂解率使用酶標(biāo)儀在405nm檢測(cè)。使用肝素作為參照。抑制率的計(jì)算公式，細(xì)胞裂解率=(Aw$-(AiWrA??) )/Α.Χ 100.
[0044]上述四種多糖的經(jīng)典途徑抗補(bǔ)體活性結(jié)果如圖5所示，馬尾藻多糖樣品SIW，STW，SKW和SMW的CH5q值分別為5.94，4.50，23.3和10.0yg/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于對(duì)照品肝素CH5q值(137.3yg/mL)。且馬尾藻多糖的經(jīng)典途徑抗補(bǔ)體活性隨著樣品的濃度增大而增大，說(shuō)明馬尾藻多糖在抗補(bǔ)體活性中的具有廣闊的前景。
[0045]實(shí)施例6
[0046]測(cè)定上述實(shí)施例獲得多糖樣品(SIW，STW，SKW和SMW)旁路途徑的抗補(bǔ)體活性作用。
[0047]本例通過(guò)旁路途徑抗補(bǔ)體活性來(lái)反映馬尾藻多糖對(duì)補(bǔ)體作用大小。
[0048]實(shí)驗(yàn)方法:
[0049]1,0.5 %兔紅細(xì)胞(RE):取新西蘭兔血2ml，用GVB_Mg_EDTA(VBS中含有0.1 %明膠，2.5mM Mg2+,8mM EDTA)洗滌，3000rpm離心5min，重復(fù)三次后，配制成0.5%RE;
[0050]2，樣品溶液:稱取多糖樣品30mg，用GVB2+溶解后，稀釋成終濃度為3,30,150,300和750yg/ml的溶液。
[0051 ] 3，補(bǔ)體的制備:成年人男性靜脈血，4°C放置2h后，3000rpm離心5min，取血清，分裝后-78 °C冷凍保存。
[0052]實(shí)驗(yàn)分組情況為:(I)全溶血組:200yL 0.5%RE加入400yL水；(2)樣品對(duì)照組:150yL不同濃度樣品溶液加入450yL GVB-Mg-EDTA ；(3)補(bǔ)體組:150yL補(bǔ)體，加入200yL0.5 % RE在250yL GVB-Mg-EDTA(4)樣品測(cè)定組:150yL不同濃度樣品溶液，150yL補(bǔ)體，加入200μL0.5%RE在10yL GVB-Mg-EDTAJTcC溫浴30min后，混合物用5000rpm 1min離心，細(xì)胞裂解率使用酶標(biāo)儀在405nm檢測(cè)。使用肝素作為參照。抑制率的計(jì)算公式，細(xì)胞裂解率=(Aw$-(AiWrA??) )/Α.Χ 100.
[0053]上述四種多糖的旁路途徑抗補(bǔ)體活性結(jié)果如圖6所示，馬尾藻多糖樣品SIW，STW，SKW和SMW的CH5Q值分別為17.2,15.4,30.0和21.lyg/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于對(duì)照品肝素CH5q值(339.3yg/mL)。且馬尾藻多糖的旁路途徑抗補(bǔ)體活性隨著樣品的濃度增大而增大，說(shuō)明馬尾藻多糖在抗補(bǔ)體活性中的具有廣闊的前景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:馬尾藻多糖作為制備抗補(bǔ)體藥物或抗補(bǔ)體保健品中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:所述馬尾藻多糖以馬尾操為原料經(jīng)熱水提取法提取獲得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:所述馬尾藻多糖以馬尾藻為原料經(jīng)脫色后通過(guò)熱水提取法提取獲得。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:所述馬尾藻多糖以馬尾藻為原料，將原料加入至過(guò)量的85%酒精中進(jìn)行脫色，脫色后的馬尾藻藻體在100-120°C、0.05-0.25MPa的高壓下進(jìn)行熱水提取，而后過(guò)濾、濃縮，所得濃縮物去除褐藻膠，而后離心、濃縮、透析，透析后濃縮，經(jīng)醇沉、干燥，即得馬尾藻多糖。5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4所述的馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:所述馬尾藻多糖分子量范圍為50?200kDa，主要組成單糖為巖藻糖和半乳糖，兩者的摩爾比例為I?20:1，硫酸根含量為15%?50%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬尾藻多糖的應(yīng)用，其特征在于:所述馬尾藻多糖來(lái)源于褐藻門，圓子綱，墨角藻目，馬尾藻科。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK105943550SQ201610334072
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月19日
【發(fā)明人】金維華, 張全斌, 張文靜
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院海洋研究所