一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法，屬于動物血液采集技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括以下步驟：1)固定動物，打開圍心腔，充分暴露心臟后剪斷動脈干；2)在動脈干剪斷處滴加抗凝劑，并用毛細(xì)管吸取從動脈干中流出的血液，至停止流出為止。本發(fā)明提供的血液采集方法能夠?qū)崿F(xiàn)小型有尾兩棲動物的血液采集，克服了現(xiàn)有技術(shù)中心臟采血法采不到血或采血量不足的缺陷，能獲得較多的血液量(如采集到70～80μL山溪鯢血液)，操作簡便、快速。
【專利說明】
一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法，屬于動物血液采集技術(shù)領(lǐng)域?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]血液是動物體內(nèi)一種極其重要的組織，具有多種多樣的功能，如運(yùn)輸(氧氣、營養(yǎng)和代謝產(chǎn)物)、體液調(diào)節(jié)、體溫調(diào)節(jié)、防御等。血液學(xué)指標(biāo)受多種因素的影響，如動物種類、生活環(huán)境、季節(jié)、健康狀況、營養(yǎng)狀況等的不同均會導(dǎo)致血液學(xué)指標(biāo)的差異，因此血液指標(biāo)被認(rèn)為是一個(gè)能夠反映動物對環(huán)境的適應(yīng)狀況、動物自身健康狀況及營養(yǎng)狀況的重要生理、 病理和毒理學(xué)指標(biāo)。
[0003]現(xiàn)用的兩棲動物血液采集方法多為心臟采血法，即將注射器針頭扎入動物心臟后抽取血液。這種方法要求動物個(gè)體較大，心臟也較大，常用于兩棲動物無尾目的蛙類。這些蛙類心臟重量多在〇.4g左右，針頭扎入心臟后通過緩慢抽取可以采集到所需的血液。對于個(gè)體略小一點(diǎn)的蛙類動物也可采用將心臟剪破后收集血液的方法。
[0004]小型有尾兩棲動物是指隸屬兩棲綱、有尾目的蠑螈類動物，它們個(gè)體較小，體長一般不超過30cm。這類動物的心臟多數(shù)僅有0.lg左右，直徑0.3mm左右，現(xiàn)用的心臟采血法在這類動物中基本不適用，其存在的不足之處主要在于:個(gè)體小，心臟小，很難采集到血液，如對山溪鯢進(jìn)行血液采集時(shí)，利用lmL注射器從心臟刺入后根本抽不出血液，而將心臟剪破后雖能采集到血液，但是血液量較少，通常只能采集到10?15此血液，尚不能滿足血液學(xué)指標(biāo)測定時(shí)對血液量的要求。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法，該方法能獲得較多的血液量，有效克服現(xiàn)有心臟采血法采血量不足的缺陷，且操作簡便。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0007]—種采集小型有尾兩棲動物血液的方法，包括以下步驟:
[0008]1)固定動物，打開圍心腔，充分暴露心臟后剪斷動脈干；
[0009]2)在動脈干剪斷處滴加抗凝劑，并用毛細(xì)管吸取從動脈干中流出的血液，至停止流出為止。
[0010]步驟1)中在固定動物之前，需先將動物麻醉。麻醉劑可采用MS-222 (間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽)溶液。
[0011]步驟1)中固定動物的操作為:將動物置于解剖臺上，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用大頭針固定在解剖臺上。對于體型較小的有尾兩棲動物，可利用泡沫板充當(dāng)解剖臺。
[0012]步驟1)中打開圍心腔的操作為:動物固定后，用手術(shù)剪剪開腹腔，再沿腹中線向上剪，直至打開圍心腔;將圍心腔兩側(cè)的體壁拉開固定在解剖臺上，充分暴露出心臟。
[0013]步驟1)中剪斷動脈干的操作為:用手術(shù)剪將左右動脈干在動脈干與心臟的連接處剪斷。
[0014]步驟2)中滴加抗凝劑的原因在于血液易凝固，在動脈干剪斷處滴加抗凝劑可防止血液凝固?？鼓齽┑姆N類較多，可選用肝素、水蛭素、檸檬酸鈉、氟化鉀等，具體可根據(jù)測定血液學(xué)指標(biāo)的內(nèi)容選擇相應(yīng)的抗凝劑。
[0015]步驟2)中毛細(xì)管可選用毛細(xì)玻璃管。加入抗凝劑后，立即用毛細(xì)玻璃管(如20此規(guī)格)吸取從動脈干中流出的血液，一根毛細(xì)玻璃管吸好后再換另外一根繼續(xù)吸取，直到最后血液停止流出為止。
[0016]本發(fā)明的有益效果:[〇〇17]本發(fā)明提供的血液采集方法能夠?qū)崿F(xiàn)小型有尾兩棲動物的血液采集，克服了現(xiàn)有技術(shù)中心臟采血法采不到血或采血量不足的缺陷，能獲得較多的血液量(如采集到70?80y L山溪鯢血液)，操作簡便、快速?！揪唧w實(shí)施方式】
[0018]下述實(shí)施例僅對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
[0019]實(shí)施例1
[0020]本實(shí)施例中采集山溪鯢血液的方法，包括以下步驟:
[0021]1)麻醉動物:將體重16g的山溪鯢放于MS-222 (間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽)溶液 (濃度0.1%)中進(jìn)行麻醉；[〇〇22]2)固定動物;將麻醉后的山溪鯢取出，放于泡沫板上(泡沫板大小40cmX 40cm)，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用長度2cm左右的大頭針插透四肢肌肉，然后插入泡沫板中， 將麻醉后的動物固定；[〇〇23]3)打開圍心腔:動物固定后，用手術(shù)鑷子提起腹面的皮膚，并用手術(shù)剪剪開腹腔，然后沿腹中線向上剪(頭在上尾在下)，直到打開圍心腔；[〇〇24]將圍心腔兩側(cè)的體壁拉開，用長度2cm左右的大頭針插透體壁并插入泡沫板中固定體壁，充分暴露出心臟；
[0025]4)剪斷動脈干:心臟充分暴露后，用手術(shù)剪將左右動脈干在動脈干與心臟連接處將其剪斷；
[0026]5)加抗凝劑:吸取一小滴含肝素鈉的抗凝劑(濃度1%)，滴加到動脈干剪斷處，以防止血液凝固；[〇〇27]6)用20yL的毛細(xì)玻璃管吸取從動脈干中流出的血液，一根毛細(xì)玻璃管吸好后再換另外一根繼續(xù)吸取，直到最后血液停止流出為止，共采集到85yL血液。[〇〇28] 實(shí)施例2
[0029]本實(shí)施例中采集紅瘰疣螈血液的方法，包括以下步驟:
[0030]1)麻醉動物:將體重1 lg的紅瘰疣螈放于MS-222溶液(濃度0.1 % )中進(jìn)行麻醉；
[0031]2)固定動物;將麻醉后的紅瘰疣螈取出，放于泡沫板上(泡沫板大小40cmX 40cm)， 背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用長度2cm左右的大頭針插透四肢肌肉，然后插入泡沫板中，將麻醉后的動物固定；[〇〇32]3)打開圍心腔:動物固定后，用手術(shù)鑷子提起腹面的皮膚，并用手術(shù)剪剪開腹腔，然后沿腹中線向上剪(頭在上尾在下)，直到打開圍心腔；
[0033]將圍心腔兩側(cè)的體壁拉開，用長度2cm左右的大頭針插透體壁并插入泡沫板中固定體壁，充分暴露出心臟；
[0034]4)剪斷動脈干:心臟充分暴露后，用手術(shù)剪將左右動脈干在動脈干與心臟連接處將其剪斷；
[0035]5)加抗凝劑:吸取一小滴含肝素鈉的抗凝劑(濃度1%)，滴加到動脈干剪斷處，以防止血液凝固；[〇〇36]6)用20yL的毛細(xì)玻璃管吸取從動脈干中流出的血液，一根毛細(xì)玻璃管吸好后再換另外一根繼續(xù)吸取，直到最后血液停止流出為止，共采集到70yL血液。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種采集小型有尾兩棲動物血液的方法，其特征在于:包括以下步驟:1)固定動物，打開圍心腔，充分暴露心臟后剪斷動脈干；2)在動脈干剪斷處滴加抗凝劑，并用毛細(xì)管吸取從動脈干中流出的血液，至停止流出 為止。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟1)中在固定動物之前，先將動物麻醉， 麻醉劑采用MS-222溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟1)中固定動物的操作為:將動物置于 解剖臺上，背部朝下，腹面朝上，四肢拉直后用大頭針固定在解剖臺上。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟1)中打開圍心腔的操作為:動物固定 后，用手術(shù)剪剪開腹腔，再沿腹中線向上剪，直至打開圍心腔;將圍心腔兩側(cè)的體壁拉開固 定在解剖臺上，充分暴露出心臟。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟1)中剪斷動脈干的操作為:用手術(shù)剪 將左右動脈干在動脈干與心臟的連接處剪斷。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述抗凝劑選自肝素、水蛭素、檸檬酸鈉、氟化鉀。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟2)中毛細(xì)管為毛細(xì)玻璃管。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于:加入抗凝劑后，立即用毛細(xì)玻璃管吸取從 動脈干中流出的血液，一根毛細(xì)玻璃管吸好后再換另外一根繼續(xù)吸取，直到最后血液停止 流出為止。
【文檔編號】A61D3/00GK105943062SQ201610390970
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月2日
【發(fā)明人】熊建利, 劉秀英, 張亞男, 孫原野, 閔遙
【申請人】河南科技大學(xué)