抗pedf單克隆抗體在糖尿病男性勃起功能障礙疾病中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物技術(shù)藥物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，公開了抗PEDF單克隆抗體在糖尿病男性勃起功能障礙疾病的應(yīng)用；通過研究發(fā)現(xiàn)抗PEDF單克隆抗體能夠改善糖尿病男性海綿體內(nèi)皮功能和減少內(nèi)皮凋亡，增加海綿體密度，增加海綿體內(nèi)NO的釋放，改善糖尿病勃起功能，提供了抗PEDF單克隆抗體在制備治療男性勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用，該抗PEDF單克隆抗體可用于治療由糖尿病或/和代謝綜合征引起的性功能障礙等疾病。
【專利說明】
抗PEDF單克隆抗體在糖尿病男性勃起功能障礙疾病中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及生物技術(shù)藥物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及抗PEDF單克隆抗體治療糖尿病男性勃起功能障礙疾病的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]糖尿病男性勃起功能障礙(diabetic erectile dysfunct1n，DED)是糖尿病的常見并發(fā)癥，也是男性勃起功能障礙的常見病因。有研究表明在糖尿病男性病人中有多50%的病人存在勃起功能障礙，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量。海綿竇內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO是陰莖正常勃起最重要的神經(jīng)介質(zhì)，其由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生后，通過彌散方式進入血管平滑肌細(xì)胞(SMC)，激活鳥苷酸環(huán)化酶，cGMP含量增加，激活SMC細(xì)胞膜上K+、Ca2+通道使SMC舒張，陰莖動脈血流增加，大量血流注人海綿竇，牽拉白膜壓迫靜脈回流以達到勃起狀態(tài)。糖尿病男性勃起功能障礙是由于陰莖海綿體內(nèi)皮損傷引起的NO釋放減少、NO利用率降低引起的。導(dǎo)致內(nèi)皮損傷的因素眾多，糖尿病、高血壓、高膽固醇血癥等多種疾病均可以引起內(nèi)皮損傷，內(nèi)皮損傷后可出現(xiàn)內(nèi)皮功能障礙、血管收縮性改變、以及血管重構(gòu)。因此，保護海綿體內(nèi)皮功能是治療糖尿病男性勃起功能障礙的重要靶點。
[0003]研究表明糖尿病病人的內(nèi)皮損傷是引起勃起功能障礙(ErectiIeDysfunct1nED)的重要病理基礎(chǔ)之一。高血糖是糖尿病性心血管病發(fā)展的一個獨立危險因子，預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的關(guān)鍵是要控制血糖，嚴(yán)格控制血糖至接近正常水平，可以防止和延緩糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生和進展，提示高血糖可能導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷。高濃度葡萄糖以劑量依賴性和時間依賴性方式誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死，目前有關(guān)高糖調(diào)控的細(xì)胞因子研究主要局限在細(xì)胞生長因子，研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)生長因子(nerve growth factor，NGF)和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)具有保護高糖導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用。血管抑素angi o s tat in、內(nèi)皮抑素endostat in、色素上皮衍生因子(pigmentepithelium-derived factor，PEDF)等抑制因子具有促進內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用。
[0004]色素上皮細(xì)胞衍生因子(pigmentepithelium-derived factor，PEDF)是內(nèi)源性的強效血管增生抑制因子，PEDF抑制血管新生的基本細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)是誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。最近研究報道PEDF在I型、II型糖尿病和代謝綜合癥病人血中顯著上調(diào)；糖尿病升高的PEDF可能誘導(dǎo)微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，抑制糖尿病血管新生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供抗PEDF單克隆抗體在制備治療糖尿病男性勃起功能障礙疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的:
抗PEDF單克隆抗體在制備治療糖尿病男性勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
[0007]糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，高血糖則是由于胰島素分泌缺陷及其生物作用受損或者兩者兼有引起，糖尿病時長期存在的高血糖導(dǎo)致各種組織的功能障礙，雖然能夠治療糖尿病的藥物能夠在一定程度上減輕糖尿病的并發(fā)癥，但對于已存在的并發(fā)癥，卻不能治療，本發(fā)明則在通過研究發(fā)現(xiàn)抗PEDF單克隆抗體能夠改善糖尿病海綿體內(nèi)皮功能和減少內(nèi)皮凋亡，增加海綿體密度，增加海綿體內(nèi)NO的釋放，改善糖尿病勃起功能，因此，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了抗PEDF單克隆抗體的一個新的應(yīng)用，即用于治療男性勃起功能障礙。
[0008]優(yōu)選地，所述抗PEDF單克隆抗體的制備方法是用PEDF蛋白免疫BALB/C小鼠，再用免疫鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)篩選克隆獲得分泌抗PEDF單克隆抗體的雜交瘤株，得到所需單克隆抗體。
[0009]優(yōu)選地，所述糖尿病男性勃起功能障礙男性勃起功能障礙是由PEDF升高的糖尿病和/或代謝綜合征引起的。
[0010]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)抗PEDF單克隆抗體能夠改善糖尿病海綿體內(nèi)皮功能和減少內(nèi)皮凋亡，增加海綿體密度，增加海綿體內(nèi)NO的釋放，改善糖尿病男性勃起功能，提供了抗PEDF單克隆抗體在制備治療男性勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用，該抗PEDF單克隆抗體可用于治療由糖尿病或/和代謝綜合征引起的性功能障礙等疾病。
【附圖說明】
[0011 ] 圖1為注射PEDF蛋白后外周血PEDF水平檢測(ELISA)。
[0012]圖2為注射PEDF蛋白及對照蛋白BSA后的勃起功能情況。
[0013]圖3為注射PEDF蛋白及對照蛋白BSA后的勃起功能統(tǒng)計。
[0014]圖4為糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組勃起功能情況。
[0015]圖5為糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組勃起功能情況統(tǒng)計；圖中control為正常對照組，DM+IgG為糖尿病ED注射IgG組，DM+PEDF-antibody為糖尿病ED注射PEDF抗體組。
[0016]圖6為注射PEDF蛋白及對照蛋白BSA后海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮凋亡情況和海綿體內(nèi)皮密度。
[0017]圖7為PEDF蛋白及對照蛋白BSA后海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮凋亡情況和海綿體內(nèi)皮密度統(tǒng)計。
[0018]圖8為注射PEDF蛋白及對照蛋白BSA后海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮eNOS磷酸化水平。
[0019]圖9為注射PEDF蛋白及對照蛋白BSA后海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮eNOS磷酸化水平統(tǒng)計。
[0020]圖10糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組海綿體組織內(nèi)皮凋亡情況和海綿體內(nèi)皮密度。
[0021 ]圖11糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組海綿體組織內(nèi)皮凋亡情況和海綿體內(nèi)皮密度統(tǒng)計。
[0022]圖12糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組海綿體組織內(nèi)皮eNOS磷酸化水平。
[0023]圖13糖尿病ED組及糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組海綿體組織內(nèi)皮eNOS磷酸化水平統(tǒng)計。
【具體實施方式】
[0024]以下結(jié)合實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。以下實施例中的方法、設(shè)備、材料，如果未特別說明，均為本領(lǐng)域常規(guī)的方法、設(shè)備和材料。
[0025]本發(fā)明實施例中所用的抗PEDF單克隆抗體的制備方法參考申請?zhí)枮?01210245123.2 的專利。
[0026]實施例1 PEDF單克隆抗體的應(yīng)用一、糖尿病動物模型的建立
取60只8周SD大鼠(中山大學(xué)動物中心提供)，分為正常組和糖尿病組，每組30只，糖尿病組腹腔注射鏈脲霉素(Strept0Z0t0cin，STZ)(劑量為50mg/kg)，后經(jīng)空腹血糖、胰島素耐量(insulin tolerance test，ITT)、葡萄糖耐量(glucose tolerance test，GTT)實驗檢測確定糖尿病模型建模成功。
[0027]二、糖尿病勃起功能障礙動物模型的建立
對I型糖尿病大鼠進行篩選，以正常大鼠作為對照:STZ注射8周后篩選，動物稱重后分別放入試驗鐵籠中，將房間燈光調(diào)暗，保持室內(nèi)安靜。適應(yīng)環(huán)境10分鐘后，將APO按lOOyg/kg比例皮下注射于大鼠頸部皮膚松軟處。觀察30分鐘，記錄勃起次數(shù)。大鼠陰莖勃起的標(biāo)準(zhǔn)為:龜頭露出充血，包皮后退，陰莖膨大增長為勃起。未見勃起者為糖尿病勃起功能障礙大
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[0028]三、抗PEDF單克隆抗體的治療效果
將正常的SD大鼠隨機分成為3組:對照組，BSA組和PEDF組。BSA組和PEDF組大鼠分別每天注射一次BSA和抗PEDF單克隆抗體(2.5 mg/kg)，三天后大鼠眼眶取血檢測血中PEDF水平，結(jié)果顯示和注射BSA相比，PEDF組的大鼠血中PEDF含量明顯升高30%以上(見圖1)。腹腔注射30天后，采用BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)測定大鼠海綿體內(nèi)壓(Intracavernouspressure，ICP)、頸動脈壓(arterial blood pressure，ABP)以及ICP/平均動脈壓(meanarterial blood pressure，MAP)比值的計算，用于評價勃起功能。結(jié)果顯示注射PEDF組的ICP/MAP比值明顯比注射BSA組低，表明PEDF升高可以降低勃起功能(見圖2?3 )。
[0029]同樣將糖尿病勃起功能障礙(ED)大鼠隨機分成2組，糖尿病ED注射IgG組和糖尿病ED注射PEDF抗體組。糖尿病ED老鼠，分別每天注射一次IgG和抗PEDF單克隆抗體(0.34mg/kg)，連續(xù)腹腔注射15天后采用BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)測定大鼠海綿體內(nèi)壓(ICP)、頸動脈壓(arterial blood pressure，ABP)以及ICP/平均動脈壓(mean arterial bloodpressure，MAP)比值的計算，用于評價勃起功能，結(jié)果表明抗PEDF單克隆抗體可以使糖尿病勃起功能障礙(ED )大鼠ICP/MAP比值明顯比I gG組高，為抗PEDF單克隆抗體用于治療PEDF升高的糖尿病及代謝綜合癥等引起的勃起功能障礙藥物提供了依據(jù)(見圖4?5)。
[0030]海綿竇內(nèi)皮細(xì)胞分泌的NO是陰莖正常勃起最重要的神經(jīng)介質(zhì)，其由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生后，通過彌散方式進入血管平滑肌細(xì)胞，陰莖動脈血流增加，大量血流注入海綿竇，牽拉白膜壓迫靜脈回流以達到勃起狀態(tài)。取上面動物實驗大鼠的海綿體組織進行固定，冰凍切片。通過免疫熒光化學(xué)方法檢測海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮密度、內(nèi)皮凋亡情況和eNOS磷酸化水平，結(jié)果顯示和BSA組相比PEDF蛋白注射組海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮凋亡增加、內(nèi)皮密度(見圖6?7)和eNOS磷酸化水平降低(見圖8?9)。和糖尿病勃起功能障礙(ED)大鼠注射IgG組相比，抗PEDF單克隆抗體注射組海綿體組織內(nèi)的內(nèi)皮凋亡減少、內(nèi)皮密度(見圖10?11)和eNOS磷酸化水平提高(見圖12?13 )。為PEDF單克隆抗體用于治療PEDF升高的糖尿病及代謝綜合癥等引起的勃起功能障礙藥物提供了依據(jù)。
【主權(quán)項】
1.抗PEDF單克隆抗體在制備治療糖尿病男性勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗PEDF單克隆抗體的制備方法是用PEDF蛋白免疫BALB/C小鼠，再用免疫鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)篩選克隆獲得分泌抗PEDF單克隆抗體的雜交瘤株，得到所需單克隆抗體。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述糖尿病男性勃起功能障礙是由PEDF升高的糖尿病和/或代謝綜合征引起的。
【文檔編號】A61K39/395GK105935444SQ201610359837
【公開日】2016年9月14日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】高國全, 楊霞, 周倜, 齊煒煒, 車迪
【申請人】中山大學(xué)