一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于腫瘤學領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明設(shè)及一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥 物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)母細胞瘤(Neuroblastoma, NB)與其它大多數(shù)腫瘤的區(qū)別在于其好發(fā)于兒童， 其是起源于神經(jīng)崎的胚胎性腫瘤，由未分化的交感神經(jīng)細胞組成。其發(fā)病率在15歲W下兒 童中約為1/10萬，是臨床上1歲W內(nèi)兒童中最常見的惡性腫瘤。由于近年來對神經(jīng)母細胞瘤 的診斷方法和治療手段的更新改進，神經(jīng)母細胞瘤患者的整體生存率有較大提高，但高危 患兒的生存率與生活質(zhì)量仍無顯著改善。
[0003] 由于高危組惡性程度高、早期發(fā)生骨髓和(或)骨轉(zhuǎn)移，并存在微小殘留病灶(MRD) 等問題，神經(jīng)母細胞瘤的手術(shù)治療效果十分有限。目前臨床上，CiE(順銷+足葉乙武)和CDV (環(huán)憐酷胺+柔紅霉素+長春新堿)交替化療方案是目前高危組神經(jīng)母細胞瘤的一線化療方 案，然而完全緩解(CR)和非常好地部分緩解(VGPR)仍低于40%。
[0004] 并且，傳統(tǒng)化療方案對神經(jīng)母細胞瘤的治療效果及病人的耐受程度已經(jīng)接近最大 限度，探索更為安全和有效的W分子祀向藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療方案也是當務之急。
[0005] 綜上，本領(lǐng)域迫切需要尋求更為安全、有效的神經(jīng)母細胞瘤治療方案，W提升治愈 率，提高臨床患兒的生活質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥物。
[0007] 在本發(fā)明的第一方面，提供NVP-BEZ235和冬凌草甲素的混合物的用途，用于制備 治療神經(jīng)母細胞瘤的藥物組合物。
[000引在一個優(yōu)選例中，所述的NVP-邸Z235和冬凌草甲素的混合物中，NVP-邸Z235與冬 凌草甲素按照重量比為1:0.1~1:100;較佳地為1:0.2~1:80;更佳地為1:0.3~1:60。
[0009] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種NVP-BEZ235和冬凌草甲素的混合物，該混合物中 NVP-邸Z235與冬凌草甲素按照重量比為1:0.1~1:100;較佳地為1:0.2~1:80;更佳地為1: 0.3 ~1 :60d
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的混合物中，NVP-BEZ235與冬凌草甲素按照重量比為1: 0.3875~1:77.5，1:0.4~1:50，1:0.5~1:40，1:0.5~1:30，1:0.5~1:20，1:0.5~1:15，1: 0.5 ~1:10 或 1:1 ~1:10 等。
[0011] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥物組合物，所述的藥 物組合物中包括:NVP-BEZ235和冬凌草甲素的混合物；W及藥學上可接受的載體。
[0012] 在一個優(yōu)選例中，所述的NVP-邸Z235和冬凌草甲素的混合物中，NVP-邸Z235與冬 凌草甲素按照重量比為1:0.1~1:100;較佳地為1:0.2~1:80;更佳地為1:0.3~1:60。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物的劑型是:注射劑，輸液劑，片劑，膠囊劑，丸 劑;較佳地為注射劑。
[0014] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥盒，所述的藥盒中，含 有:NVP-BEZ235; W及冬凌草甲素。
[0015] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥盒，所述的藥盒中，含 有所述的混合物。
[0016] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于治療神經(jīng)母細胞瘤的藥盒，所述的藥盒中，含 有所述的藥物組合物。
[0017] 在一個優(yōu)選例中，所述的藥盒中還含有:使用說明書，說明治療神經(jīng)母細胞瘤的方 法。
[0018] 本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見 的。
【附圖說明】
[0019] 圖1. NVP-BEZ235抑制神經(jīng)母細胞增殖，但不誘導細胞調(diào)亡。
[0020] (A、B)CCK-8檢測不同濃度NVP-肥Z235對甜SY-5Y和SK-N-MC細胞增殖的影響；（C、 D)不同濃度NVP-邸Z235處理甜SY-SY(C)和SK-N-MC(D)細胞后檢測MCM2、cleaved Caspase-3、cleaved PARP蛋白水平情況。WGAPDH作為內(nèi)參。
[0021] 圖2.NVP-BEZ235誘導神經(jīng)母細胞瘤G0/G1期阻滯。
[0022] (A)不同濃度NVP-BEZ235處理甜SY-5Y和SK-N-MC細胞2地后細胞周期的流式細胞 檢測情況；
[0023] (B)不同濃度NVP-BEZ235處理甜SY-5Y和SK-N-MC后細胞周期蛋白的水平。WGAPDH 作為內(nèi)參。
[0024] (C、D)不同濃度NVP-BEZ235處理細SY-SY(C)和SK-N-MC(D)細胞后，細胞周期素 cyclinD巧Pcycli址蛋白的水平。Wgapdh作為內(nèi)參。
[0025] 圖3.NVP-BEZ235與冬凌草甲素(ORI)聯(lián)合應用更顯著抑制神經(jīng)母細胞瘤增殖。
[0026] (A、B)不同濃度NVP-肥Z235處理甜SY-5Y和SK-N-MC細胞后LC3-I/II、P62蛋白表達 的情況;WGAPDH作為內(nèi)參；
[0027] (C、D)CCK-8 檢測 NVP-肥 Z235(500nM)與 0ridonin(2iiM)單獨或聯(lián)合處理細 SY-5Y、 SK-N-MC細胞2地后細胞的增殖情況；
[0028] 化、F)NVP-邸 Z235(500nM)與 0ridonin(2iiM)單獨或聯(lián)合處理甜 SY-5Y、SK-N-MC 細 胞2地后LC3-I/II、P62蛋白表達的情況。
[00巧]圖4.NVP-BEZ235和冬凌草甲素(ORI)具有協(xié)同效應。
[0030] (A、B)不同濃度冬凌草甲素處理細SY-SY(A)和SK-N-MC(B)細胞24h后CCK8檢測細 胞增殖水平；
[0031] (C、D)不同濃度NVP-邸Z235(BEZ)、冬凌草甲素（Ori)及組合物（Co)處理細SY-5Y (C)和SK-N-MC(D)細胞的劑量-效應曲線；
[0032] 化、F)不同濃度NVP-肥Z235和冬凌草甲素組合物合用指數(shù)（Combination Index, Cl)分布圖；
[0033] 圖5. NVP-BEZ235與冬凌草甲素聯(lián)合應用誘導神經(jīng)母細胞瘤細胞調(diào)亡。
[0034] (A、B)A0/邸檢測 NVP-肥 Z235(500nM)與 0ridonin(2iiM)單獨或聯(lián)合處理細 SY-5Y、 SK-N-MC細胞2地后細胞調(diào)亡的情況；
[0035] (C、D)NVP-邸 Z235(500nM)與 0ridonin(2iiM)單獨或聯(lián)合處理甜 SY-5Y、SK-N-MC 細 胞24h后細胞cleaved &spase-3和cleaved PARP蛋白表達情況。
[0036] 圖6.NVP-BEZ235與冬凌草甲素聯(lián)合應用顯著抑制裸鼠移植瘤的生長。
[0037] (A)各組組腫瘤的大?。?br>[0038] (B)各處理組腫瘤的平均質(zhì)量；
[0039] (C)各處理組腫瘤的肥染色、Ki-67表達及細胞調(diào)亡的情況。
【具體實施方式】
[0040] 本發(fā)明人經(jīng)過長期而廣泛的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，將冬凌草甲素與NVP-肥Z235聯(lián)合 應用，對于治療神經(jīng)母細胞瘤具有極其優(yōu)異的效果?；诖送瓿闪吮景l(fā)明。
[0041] 冬凌草甲素
[0042] 冬凌草甲素(Oridonin)CAS N0:28957-04-2又稱為冬凌草素、延命草寧，是一種四 環(huán)二祗類化合物。純化的冬凌草甲素呈淡黃色針狀結(jié)晶，分子式為C2訊28〇6?；瘜W結(jié)構(gòu)式如 下：
[0044] 在本發(fā)明中，所述的"冬凌草甲素"可W是純凈形式存在的式(I)所示的化合物，或 純度大于85% (較佳地大于90%，例如95%，98%，99% )的式(I)所示的化合物，也可W是含 有l(wèi)-90wt%，更佳地5-85wt%的冬凌草甲素的提取物(如來自植物的提取物）。
[0045] 所述的冬凌草甲素可提取自任何含有冬凌草甲素的植物中。較佳地，所述的植物 是香茶菜屬植物冬凌草(Rabdosia rubescens)。提取冬凌草甲素的方法例如可W是:采用 乙醇冷浸后回流提取;純化的方法例如可W是:活性炭超聲脫色，硅膠柱層析。
[0046] 在得知其化學結(jié)構(gòu)的情況下，所述的冬凌草甲素也可通過化學合成的方式獲得。