治療結(jié)腸癌的組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種組合物及其應(yīng)用，特別是涉及一種治療結(jié)腸癌的組合物及其應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 棉酚（gossypol)是一種從棉籽中提取的酚類天然化合物，近年來科學家對棉酚 的抗腫瘤機制進行了深入探索，棉酚能抑制多種癌細胞的生長，如前列腺癌、胰腺癌、結(jié)腸 癌、肺癌等，同時，棉酚還能夠明顯增強在臨床癌癥治療中對癌癥患者進行放療和化療的敏 感度。目前已經(jīng)有一系列的棉酚衍生物被報道，如AT-101、Apogossypol、Tff-37、ABT-737 和WL-276等等，它們具有抑制癌細胞生長的活性。
[0003] 然而，棉酚未用于臨床治療癌癥，因為棉酚酚羥基帶來很強的毒副作用，另外，棉 酚水溶性很差，因此對天然棉酚加以改造才有可能起到高生物利用度殺傷腫瘤的效果。我 們的前期工作對棉酚進行結(jié)構(gòu)改造和修飾，并進行了各種癌細胞株的生物活性篩選，與動 物水平的生物活性分析等技術(shù)手段，獲得了一個棉酚衍生物6-APA-鈉-棉酮（compound 7) (可參見中國專利【申請?zhí)枴?0101021931L9)。
[0004] 經(jīng)過進一步改造的棉酚衍生物一一棉酮-?；撬徕c，其結(jié)構(gòu)式如式⑴所示，分子 量804, 37°C條件下，100g水中至少溶解12mmol棉酮-牛磺酸鈉 （MW = 804)，即9. 648g棉 酮-?；撬徕c，37°C條件下，將棉酮-?；撬徕c溶解于PBS溶液中，180分鐘后，棉酮-?；?酸鈉仍然存于70%以上，穩(wěn)定性良好。
[0005]
[0006] 自噬抑制劑氯喹（Chloroquine，CQ)從1944年開始應(yīng)用于臨床；用來治療瘧疾。 最近的研究表明硼替佐米（一種治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床用藥）與氯喹聯(lián)用對于會比單獨 使用硼替佐米對于抑制荷瘤鼠結(jié)腸癌腫瘤生長更有效果。
[0007] 然而，目前還沒有關(guān)于棉酮-?；撬徕c與氯喹的具體聯(lián)用對于治療結(jié)腸癌的臨床 前研究的報道，因此，棉酮-?；撬徕c與氯喹聯(lián)用在治療結(jié)腸癌中的應(yīng)用是全新的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種治療結(jié)腸癌的組合物及其應(yīng)用。該組合物中 含有棉酮-?；撬徕c與氯喹，而且經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，它們能用于治療結(jié)腸癌。
[0009] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的治療結(jié)腸癌的組合物，其包括：棉酮-?；撬徕c與 氯喹，其中，棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為2:1~1:1 (質(zhì)量比可為16:3~8:3)。
[0010] 優(yōu)選地，棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為1:1 (質(zhì)量比可為3:2)。
[0011] 所述組合物還包括溶劑，該溶劑包括：DMS0 (二甲基亞砜）或乙醇等。優(yōu)選乙醇。
[0012] 另外，本發(fā)明還提供上述組合物的應(yīng)用，即在制備治療結(jié)腸癌的藥物中的應(yīng)用。
[0013] 再者，本發(fā)明還公開了一種藥物組合物，其包含：棉酮-?；撬徕c、氯喹以及藥學 上可接受的載體，其中，棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為2:1~1:1。
[0014] 優(yōu)選地，棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為1:1。
[0015] 本發(fā)明中，藥學上可接受的載體是指藥學領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括：稀釋劑、賦 形劑（如水）、填充劑（如淀粉）、黏合劑（如明膠）、崩解劑（碳酸鈣）、吸收促進劑（如季 銨化合物）、表面活性劑（如十六烷醇）、潤滑劑（如滑石粉）、矯味劑等。
[0016] 本發(fā)明的藥物組合物可以采用的常規(guī)方法制備成不同的制劑，例如使棉酮-?；?酸鈉與氯喹與一種或者多種載體混合，然后將其制成所需的劑型，如注射制劑、片劑、藥丸、 膠囊、半固體、粉末、緩釋劑型、溶液、混懸液、配劑、氣霧劑等。其中，優(yōu)選注射制劑。
[0017] 本發(fā)明藥物組合物中的棉酮-?；撬徕c與氯喹量可以在本領(lǐng)域技術(shù)人員所用的 全部范圍內(nèi)變動。通常，按重量百分比（wt% )記，劑型中含有占總劑型約1~10wt%的棉 酮-?；撬徕c與氯喹。
[0018] 本發(fā)明的藥物組合物以治療上的有效量施用，其施用方式可以是口服、全身施用 (例如，透過皮膚的、鼻吸入的或者用栓劑）或腸胃外施用（例如，肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下）。
[0019] 本發(fā)明的藥物組合物的用量和療程可根據(jù)劑型、患者的年齡、疾病的輕重程度等 進行適當調(diào)整，但棉酮-?；撬徕c的劑量不高于120 μπιο?/kg/day且不低于20 ymol/kg/ day (如60 μ mol/kg/day)，如一般為大約日劑量為注射棉酮-?；撬徕c48. 24mg/kg受體體 重；優(yōu)選約50mg/kg/day，可以一次或多次施用，以1個月為一個療程，可連續(xù)使用6個療程 或更長時間。
[0020] 本發(fā)明中，棉酮-牛磺酸鈉作用于多種腫瘤細胞，其靶點為Bcl-2家族抗凋亡蛋 白，競爭性結(jié)合抗凋亡蛋白后，促發(fā)細胞凋亡，但與此同時，誘發(fā)細胞自，細胞自噬被公認 為細胞抗藥的一個原因，因此，抑制細胞自噬，能夠加強棉酮-?；撬徕c對結(jié)腸癌的殺傷， 而且經(jīng)本發(fā)明的MTS實驗也證實了棉酮-牛磺酸鈉對于人源及鼠源結(jié)腸癌細胞株具有較強 的殺傷能力。
[0021] 另外，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，棉酮-?；撬徕c聯(lián)合自噬抑制劑氯喹（CQ)對腫瘤的殺傷強度 明顯強于單獨用藥。
[0022] 因此，本發(fā)明的組合物為制備治療結(jié)腸癌的藥物研究奠定了基礎(chǔ)，而且具有良好 的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0023] 下面結(jié)合附圖與【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步詳細的說明：
[0024] 圖1是棉酮-?；撬徕c的細胞活力檢測結(jié)果。
[0025] 圖2是棉酮-?；撬徕c單獨給藥及與氯喹（CQ)聯(lián)用對荷瘤鼠腫瘤抑制結(jié)果圖，其 中，圖中的"**"表示差異顯著，"***"表示差異極顯著；
[0026] 圖3是給藥15天后荷瘤鼠代表性形態(tài)圖；其中，1表示乙醇，2表示氯喹（CQ)，3表 示棉酮-牛磺酸鈉，4表示棉酮-牛磺酸鈉+氯喹（CQ);
[0027] 圖4是荷瘤鼠腫瘤抑制生長實驗結(jié)束時不同組腫瘤重量比較圖，其中，"***"表示 差異極顯著。
【具體實施方式】
[0028] 以下實施例中所用的棉酮-牛磺酸鈉是由中國科學院上海有機化學研究所合成， HPLC分析表明，左旋棉酮-?；撬徕c：右旋棉酮-牛磺酸鈉=1:1。
[0029] 實施例1細胞生存能力（MTS法）
[0030] 將 SW480、SW620、L0V0、Cac〇-2, CT26、HCT116 和 HT29 細胞（細胞均購自中國科學 院上海生科院細胞資源中心）以3000個/孔或5000個/孔的密度均勻鋪于96孔板，24小 時后細胞完全貼壁，用溶解了0、5、10、20、40、8(^1棉酮-?；撬徕c的此(：〇 7'5&(6讓(3〇公 司）培養(yǎng)基（棉酮-?；撬徕c母液用DMS0溶解）替換舊培養(yǎng)基，在37°C、5% 0)2培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)72小時，用含有3% (體積百分比）的血清的McCoy's 5a培養(yǎng)基（Gibco公司）替換 藥物培養(yǎng)基，每孔添加20 yL MTS(Promega公司）于37°C孵育lh，室溫搖勻15min，用酶標 儀（Thermo Scientific)檢測 490nm 處吸光值，使用軟件 GraphPad Prism5. 01 計算 EC50〇
[0031] 結(jié)果如圖1所示，棉酮-?；撬徕c對于人源及鼠源結(jié)腸癌細胞株的殺傷能力，SP EC5。值基本在5~20 μ Μ之間。
[0032] 實施例2荷瘤鼠腫瘤生長抑制實驗
[0033] 1、藥物配制
[0034] 稱取棉酮-?；撬徕c粉末0.192968(0.00024111〇1)完全溶解于16111110%乙醇溶液 (乙醇溶液中，乙醇：水的體積比=10:90)中，作為第一溶液。
[0035] 同時，稱取0. 00024mol氯喹（Sigma公司）完全溶解于16ml 10%乙醇溶液中，作 為第二溶液。
[0036] 再稱取棉酮-牛磺酸鈉粉末0. 19296g和0. 00024mol氯喹（CQ)同時溶解于16ml 10 %乙醇溶液中，作為第三溶液。
[0037] 以上三種溶液均分裝成1ml/管保存于_20°C冰箱內(nèi)。
[0038] 2、實驗過程
[0039] 動物：6_8周齡BALB/c雄性裸小鼠購買自上海南方模式動物中心。裸小鼠的飼養(yǎng) 與實驗在上海南方模式生物研究中心進行。
[0040] 注射藥物：上述配制的第一~三溶液。
[0041] 實驗過程：
[0042] 將1 X 106個HCT116細胞（細胞購自中國科學院上海生科院細胞資源中心）注射 到裸小鼠的右側(cè)皮下。當腫瘤大小達到約50_ 3時，將小鼠隨機分成4組，每組6只。棉 酮-牛磺酸鈉給藥組按照60 μπιο?/kg/day的劑量口服給藥；CQ給藥組按照60 ymol/kg/ day的劑量口服給藥；聯(lián)用組（棉酮-?；撬徕c+氯喹）為同時給藥棉酮-?；撬徕c和CQ， 濃度均為60ym〇l/kg/day，用10% (體積百分比）乙醇作為陰性對照組。以上四組均連 續(xù)給藥15天，每天每次給藥量為100 μ 1。每2天測量腫瘤的長與寬，腫瘤的體積按照長X 寬X寬X JT/6計算。
[0043] 結(jié)果如圖2-4所示，在裸小鼠腫瘤長至50mm3的情況下，按照60 μπιο?/kg/day的 劑量口服給藥，單獨使用棉酮-牛磺酸鈉能夠有效的抑制腫瘤的生長；同時將棉酮-?；撬?鈉與氯喹聯(lián)用，與陰性對照組相比，能夠有效的抑制腫瘤的生長，同時其抑制腫瘤的效果也 比單獨使用棉酮-牛磺酸鈉要顯著。
【主權(quán)項】
1. 一種治療結(jié)腸癌的組合物，其特征在于，包括：棉酮-牛磺酸鈉與氯喹，其中，棉 酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為2:1~1:1。2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于：所述棉酮-牛磺酸鈉與氯喹的摩爾比為 1:1〇3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于：所述組合物還包括溶劑； 其中，該溶劑包括：二甲基亞砜或乙醇。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于：所述溶劑為乙醇。5. -種如權(quán)利要求1~4中的任一項所述的組合物的應(yīng)用，其特征在于：所述組合物 在制備治療結(jié)腸癌的藥物中的應(yīng)用。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含：棉酮-?；撬徕c、氯喹以及藥學上可接受的載 體，其中，棉酮-牛磺酸鈉與氯喹的摩爾比為2:1~1:1。7. 如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于：所述棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾 比為1:1。8. 如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物的劑型為注射制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療結(jié)腸癌的組合物及其應(yīng)用，該組合物包括：棉酮-?；撬徕c與氯喹，其中，棉酮-?；撬徕c與氯喹的摩爾比為2:1～1:1。該組合物應(yīng)用于制備治療結(jié)腸癌的藥物中。本發(fā)明的組合物為制備治療結(jié)腸癌的藥物研究奠定了基礎(chǔ)，而且具有良好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61K31/255, A61K31/4706, A61P35/00, A61K9/08
【公開號】CN105616411
【申請?zhí)枴緾N201410654346
【發(fā)明人】郭方, 王雪楓, 姜標, 王建永, 嚴向明
【申請人】中國科學院上海高等研究院
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年11月17日