Micranthanone A在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化合物MicranthanoneA的新用途，尤其設(shè)及MicranthanoneA在制 備抗幽口螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 幽口螺桿菌化elicobacterp^ori，化）是一種革蘭氏陰性螺旋狀細(xì)菌。研究顯 示，幽口螺桿菌是急、慢性胃炎W及胃、十二指腸潰瘍的主要致病原因，并可能與胃癌和胃 粘膜相關(guān)性淋己樣組織（MALT)惡性淋己瘤發(fā)病有關(guān)。最近，世界衛(wèi)生組織將化歸為I類致 癌物，它在胃癌發(fā)展中起主導(dǎo)作用。目前流行的治療化感染的方案是同時(shí)服用質(zhì)子累抑制 劑（PPI)加兩種抗生素（克拉霉素，阿莫西林、四環(huán)素、甲硝挫等選二種）的Ξ聯(lián)療法。影 響Ξ聯(lián)療法的最主要因素被認(rèn)為是化對(duì)抗菌劑的耐藥性；另一嚴(yán)重問(wèn)題是質(zhì)子累抑制劑 會(huì)誘發(fā)消化不良，大量抗菌劑則導(dǎo)致消化道內(nèi)菌群的嚴(yán)重毀滅。因此，尋找高效、安全的抗 化活性一類新藥物成為一個(gè)重要和迫切的任務(wù)。
[0003] 本發(fā)明設(shè)及的化合物MicranthanoneA是一個(gè)2013年發(fā)表（Men址eZhang, etal. ,MicranthanoneA,aNewDiterpenewithanUnprecedentedCarbonSkeleton fromMiododen化onmicranthum,OrganicLetters，2013, 15(12):3094 - 3097.)的新化 合物，該化合物擁有全新的骨架類型，目前的用途僅僅設(shè)及免疫調(diào)節(jié)，（Men址eZhang,et al. ,MicranthanoneA,aNewDiterpenewithanUnprecedentedCarbonSkeletonfrom Miododen化onmicranthum,OrganicLetters, 2013, 15 (12) : 3094 - 3097.)，本發(fā)明設(shè)及的 MicranthanoneA在制備抗幽口螺桿菌藥物中的用途屬于首次公開(kāi)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有MicranthanoneA研究中未發(fā)現(xiàn)其具有抗幽口螺桿菌 活性的報(bào)道的現(xiàn)狀，提供了MicranthanoneA在制備抗幽口螺桿菌藥物中的應(yīng)用。
[0005] 所述化合物MicranthanoneA,結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0006]
[0007] 所述MicranthanoneA在抗幽口螺桿菌藥物中的應(yīng)用，幽口螺桿菌為幽口螺桿菌 標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43504。
[0008] -種抗幽口螺桿菌藥物，由MicranthanoneA為活性成分添加輔料制備而成，制備 方法為取5克化合物MicranthanoneA,加入糊精195克，混勻，常規(guī)壓片制成1000片。
[0009] -種抗幽口螺桿菌藥物，由MicranthanoneA為活性成分添加輔料制備而成，制備 方法為取5克化合物MicranthanoneA，加入淀粉195克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
[0010]MicranthanoneA的體外實(shí)驗(yàn)表明，MicranthanoneA具有很強(qiáng)的抗幽口螺旋桿菌 活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為17mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個(gè) 隨機(jī)的臨床菌株化pOOl、化003、化004、化018和化036)和1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC43504)的 生長(zhǎng)，最小抑菌濃度（MIC)均為0. 46μg/ml。用氨節(jié)西林作陽(yáng)性對(duì)照，其對(duì)6株測(cè)試菌完全 抑制的最小濃度（MIC)為5. 9μg/ml。
[0011] 本研究結(jié)果顯示，MicranthanoneA的抑制幽口螺旋桿菌活性的能力比氨節(jié)西 林強(qiáng)，說(shuō)明對(duì)于與幽口螺旋桿菌密切相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來(lái)講， MicranthanoneA是一個(gè)極具開(kāi)發(fā)潛力的化合物。它可直接用于相應(yīng)疾病的治療W及相關(guān) 藥物的制備。
[0012] 本發(fā)明設(shè)及的MicranthanoneA在制備治療抗幽口螺桿菌藥物中的用途屬于首次 公開(kāi)，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對(duì)于幽口螺桿菌抑制活性強(qiáng)，具備突出的 實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于幽口螺桿菌感染的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 本發(fā)明所設(shè)及化合物MicranthanoneA的制備方法參見(jiàn)文獻(xiàn)（Men址eZhang,et al. ,MicranthanoneA,aNewDiterpenewithanUnprecedentedCarbonSkeletonfrom Miododendronmicranthum,OrganicLetters,2013, 15(12):3094 - 3097.)
[0014]W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加W限定。
[0015] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所設(shè)及化合物MicranthanoneA片劑的制備：
[0016] 取5克化合物MicranthanoneA,加入糊精195克，混勻，常規(guī)壓片制成1000片。
[0017] 實(shí)施例2 :本發(fā)明所設(shè)及化合物MicranthanoneA膠囊劑的制備：
[0018] 取5克化合物MicranthanoneA，加入淀粉195克，混勻，裝膠囊制成1000粒。
[0019] 下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明其藥物活性。
[0020] 實(shí)驗(yàn)例3:MicranthanoneA的藥理實(shí)驗(yàn)
[0021] 1)供試菌株：幽口螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC43504購(gòu)于美國(guó)菌種保存中屯、（American Type化ItureCollection，ATCC)。15株化臨床菌株采自江蘇省人民醫(yī)院消化科、江蘇省 中醫(yī)院檢驗(yàn)科和南京市兒童醫(yī)院胃鏡室接受胃鏡檢查的患者；在連續(xù)胃鏡檢查中對(duì)消化性 潰瘍、十二指腸球炎或痛狀胃炎的患者，先經(jīng)快速尿素酶實(shí)驗(yàn)確定為化陽(yáng)性者，再取胃竇 黏膜1-2塊，切碎后接種于含8%馬血清、Ξ甲氧節(jié)氨喀晚1. 25旨/1、多粘菌素B2500U/L、萬(wàn) 古霉素lOmg/L的Columbia選擇性瓊脂培養(yǎng)基中，于37°C在微氧環(huán)境下巧％ 02, 10%C02 和85%N2)培養(yǎng)72小時(shí)。收集細(xì)菌，經(jīng)涂片革蘭氏染色，氧化酶、觸酶和尿素酶鑒定為陽(yáng)性 后，傳代純培養(yǎng)，所得菌株作為實(shí)驗(yàn)菌株。
[002引。菌株培養(yǎng)：我們采用微需氧袋（購(gòu)自上海醫(yī)科大學(xué)）進(jìn)行HP的菌株培養(yǎng)，它可 通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生化所需要的微需氧環(huán)境。
[002引扣生物活性測(cè)定：采用紙片法測(cè)定化合物對(duì)幽口螺桿菌的抑制作用，用瓊脂稀釋 法來(lái)測(cè)定供試樣品的最低抑菌濃度。
[0024]I.紙片法實(shí)驗(yàn)：(A)準(zhǔn)備培養(yǎng)基將配制好的Columbia培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后， 冷卻至50-60°C，加8%馬血清或綿羊血，混勻傾注于已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿7-lOml，培 養(yǎng)基厚度為1.5mm(無(wú)菌操作）。度）轉(zhuǎn)接實(shí)驗(yàn)菌（涂菌）用微量取樣器取稀釋好的l〇SCFU/ ml(10D660 = 108CFU/ml)，化的菌懸液0. 1ml均勻地涂抹在適宜的培養(yǎng)皿表面。倒置于37°C 烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。（C)貼樣品紙片用微量取樣器取6μ1 待測(cè)樣品（質(zhì)量濃度2mg/ml)注入已經(jīng)滅菌的圓濾紙片上。用無(wú)菌綴子綴取含樣品的紙片 和對(duì)照空白紙片，按無(wú)菌操作分別紙片緊貼于含菌瓊脂表面，每隔一定距離貼一張紙片。每 種菌做3皿，所得結(jié)果求其平均值。（D)培養(yǎng)將各平皿置于微需氧袋中，封口，打開(kāi)氣體發(fā)生 器，再置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。巧）測(cè)抑菌圈直徑取出平板后，分別測(cè)量各紙片周圍抑 菌圈直徑的大小。參照對(duì)照組的結(jié)果，可得出待測(cè)樣品敏感實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。重復(fù)Ξ次。
[00巧]II.瓊脂稀釋法測(cè)定MIC: (A)藥物平板的制備首先將測(cè)試的化合物用二甲基亞諷 (DMS0)溶液配制成0. 5mg/ml的母液，再用無(wú)菌水稀釋，最終配成10. 0,8. 0,6. 0,4. 5,4. 0， 3. 5, 3. 0, 2. 5, 2. 0,1. 5,1. 0,0. 5和0. 25μg/ml的濃度系列，DMS0在介質(zhì)中的濃度小于1 %。 將1ml配制好的測(cè)試化合物溶液與保溫于50°C的9ml哥倫比亞培養(yǎng)基另加1ml保溫于50°C 的馬血清充分混勻，誘制入培養(yǎng)皿中冷卻即成。度）轉(zhuǎn)接實(shí)驗(yàn)菌（涂菌）用微量取樣器吸取 稀釋好的1Xl〇8C即/ml化的菌懸液0. 1ml均勻地涂抹在培養(yǎng)皿表面，倒置于37°C烘干箱 中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥，備用。似確定MIC將待測(cè)培養(yǎng)皿在微需氧袋（含： 85 %N2, 10 %C〇2和5 % 0 2)中，保溫37 °C培養(yǎng)72小時(shí)，觀察化生長(zhǎng)情況，與空白組相對(duì)照， W完全沒(méi)有菌生長(zhǎng)的樣品最低濃度為最低抑菌濃度值。陽(yáng)性對(duì)照為氨節(jié)西林。
[0026] 4)MicranthanoneA的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)表明，MicranthanoneA具有很強(qiáng) 的抗幽口螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直徑為17mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示 它能完全抑制5個(gè)隨機(jī)的臨床菌株化pOOl、化003、化004、化018和化036)和1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)菌 株（ATCC43504)的生長(zhǎng)，最小抑菌濃度（MIC)均為0.46μg/ml。用氨節(jié)西林作陽(yáng)性對(duì)照，其 對(duì)6株測(cè)試菌完全抑制的最小濃度（MIC)為5. 9μg/ml。
[0027] 結(jié)論:MicranthanoneA抑制幽口螺旋桿菌活性的能力比氨節(jié)西林強(qiáng)，說(shuō)明對(duì)于與 幽口螺旋桿菌密切相關(guān)的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來(lái)講，MicranthanoneA是 一個(gè)極具開(kāi)發(fā)潛力的化合物。它可直接用于相應(yīng)疾病的治療W及相關(guān)藥物的制備。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. Micranthanone A在抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，所述化合物Micranthanone A結(jié)構(gòu) 如式（I )所示：2. 如權(quán)利要求1所述Micranthanone A在抗幽門螺桿菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于幽 門螺桿菌為幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 43504。3. -種抗幽門螺桿菌藥物，其特征在于由權(quán)利要求1所述Micranthanone A為活性成 分添加輔料制備而成，制備方法為取5克化合物Micranthanone A,加入糊精195克，混勾， 常規(guī)壓片制成1000片。4. 一種抗幽門螺桿菌藥物，其特征在于由權(quán)利要求1所述Micranthanone A為活性成 分添加輔料制備而成，制備方法為取5克化合物Micranthanone A，加入淀粉195克，混勾， 裝膠囊制成1000粒。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了Micranthanone？A在制備抗幽門螺旋桿菌藥物中的應(yīng)用，可用于急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病的治療及在制備治療急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍藥物中得到應(yīng)用，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對(duì)于幽門螺桿菌抑制活性強(qiáng)，具備突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時(shí)用于幽門螺桿菌感染的防治顯然具有顯著的進(jìn)步。
【IPC分類】A61K31/122, A61P31/04
【公開(kāi)號(hào)】CN105412052
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510961133
【發(fā)明人】田麗華
【申請(qǐng)人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年12月20日