一種乙肝病毒藥物的微膠囊載體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，尤其涉及一種形態(tài)可控的乙肝病毒藥物的微膠囊載體制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]當(dāng)前，針對(duì)治療乙肝病毒感染的藥物主要分為兩類:抗病毒類藥物(類核苷類)和免疫調(diào)節(jié)類藥物(干擾素)。盡管沒(méi)有藥物可以清除感染，但是，這些藥物可以阻止病毒的復(fù)制，進(jìn)而使其對(duì)肝臟的傷害降到最低。但是，這些藥物具有較短的半衰期，因此需要每天進(jìn)藥，從而容易產(chǎn)生抗藥性和其他毒副作用。
[0003]綜上所述，在生理?xiàng)l件下對(duì)其藥物組分進(jìn)行保護(hù)并且增加藥物在細(xì)胞內(nèi)的駐留時(shí)間可以極大地提高治療的效果。為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目的，這些藥物被包埋在可降解聚合微膠囊中，延長(zhǎng)藥物的釋放過(guò)程，提高藥物的效率降低副作用。
[0004]然而，眾所周知，膠囊顆粒的大小、形狀等對(duì)微膠囊的細(xì)胞吞噬、釋放等影響是巨大的，如果能夠控制微膠囊的形態(tài)大小，對(duì)未來(lái)微膠囊在生物學(xué)方面的研究起關(guān)鍵作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種乙肝病毒藥物的微膠囊載體的制備方法，以實(shí)現(xiàn)微膠囊形態(tài)大小可控，且操作簡(jiǎn)單方便、環(huán)境影響小的目的。
[0006]為此采用如下的技術(shù)方案，一種乙肝病毒藥物的微膠囊載體的制備方法，其特征在于采取以下步驟:
A)取聚丙稀酸、支化聚乙稀亞胺、聚乙稀卩比略燒酮用80%的乙醇溶液配制成5mg/mL的混合溶液；
B)將l~3mL重量百分比為2.6%的聚苯乙烯和7~15mL濃度為lmg/mL的聚醋酸乙烯酯混合、鋪勻、干燥得到厚度約為75um的薄膜；然后置于120°C油浴拉伸變形，拉伸比根據(jù)預(yù)定的微膠囊形狀確定，然后室溫冷卻；之后用異丙醇洗滌去油后切成1~4_2的微粒，溶解于體積比為70:30的水與異丙醇的混合溶液中；
C)將經(jīng)過(guò)步驟B)處理的混合溶液分別置于1000、10000、30000r轉(zhuǎn)速下離心15min，分別可以得到3um、500nm、200nm的聚苯乙稀顆粒；重復(fù)用體積比為70:30的水/異丙醇混合溶液溶解所述聚苯乙稀顆粒，并于1000、10000、30000r轉(zhuǎn)速下離心15min，重復(fù)此溶解、離心步驟4次后，將所得的3um、500nm、200nm聚苯乙稀顆粒分散于80%的乙醇溶液中；
D)將異硫氰酸熒光劑溶解于二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液，聚丙烯酸溶解于80%的二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液；然后在制得的l~5mL聚丙烯酸溶液中加入4~20mg的碳二亞胺，lOmin之后加入3~9mg輕基琥?自酰亞胺，過(guò)5min之后加入上述配制的異硫氰酸焚光劑溶液20~40ul，并置于80%乙醇溶液中透析24h，制備得到聚丙烯酸-異硫氰酸熒光劑溶液，所述過(guò)程均需要避光處理；
E)取C)中l(wèi)OOmL重量百分比2.6%的聚苯乙烯溶液，離心，然后重新分散于4~10ml的80%乙醇中；
F)在步驟E)中制得的溶液中加入l~4mL支化聚乙烯亞胺溶液，然后超聲lOmin，離心lOmin，在1000、5000、1000(^轉(zhuǎn)速下可制備311111、50011111、20011111的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心；
G)將F)中得到的聚苯乙烯顆粒再次分散于4~10mL80%的乙醇溶液中，并加入l~4mL通過(guò)步驟D)制得的聚丙稀酸-異硫氰酸焚光劑溶液，超聲lOmin，離心lOmin，在1000、5000、lOOOOr轉(zhuǎn)速下可制備3um、500nm、200nm的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心；
H)將G)中得到的聚苯乙烯顆粒再次分散于4~10mL80%的乙醇溶液中，加入l~4mL通過(guò)步驟A)制得的溶液，超聲lOmin，離心lOmin，在1000、5000、lOOOOr轉(zhuǎn)速下制備3um、500nm、200nm的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心；制備得到聚乙烯亞胺/ (聚丙烯酸-異硫氰酸熒光劑/聚乙烯吡咯烷酮)顆粒，即PEI/ (PAA-F/PVPON)顆粒；
I)將H)中得到的PEI/(PAA-F/PVPON)顆粒溶解于4~8mL的四氫呋喃中，2min之后再離心25min，于1000、5000、8000r轉(zhuǎn)速分別制備3um、500nm、200nm的微膠囊，除去上清液，用200~500ul的四氫呋喃洗滌2次，然后將得到的微膠囊分散于500~800ul水中。
[0007]本發(fā)明有益的效果是:采用聚苯乙烯作為微膠囊模板，具有方便、容易去除、對(duì)環(huán)境要求低的要求，并且能夠有效地控制微膠囊形態(tài)結(jié)構(gòu)和尺寸大小。
【具體實(shí)施方式】
[0008]實(shí)施例1采取以下步驟:
A)取聚丙稀酸、支化聚乙稀亞胺、聚乙稀卩比略燒酮用80%的乙醇溶液配制成5mg/mL的混合溶液；
B)將lmL重量百分比為2.6%的聚苯乙烯和7mL濃度為lmg/mL的聚醋酸乙烯酯混合、鋪勻、干燥得到厚度約為75um的薄膜；然后置于120°C油浴拉伸變形，拉伸比根據(jù)預(yù)定的微膠囊形狀確定，然后室溫冷卻；之后用異丙醇洗滌去油后切成1~4_2的微粒，溶解于體積比為70:30的水與異丙醇的混合溶液中；
C)將經(jīng)過(guò)步驟B)處理的混合溶液置于1000r轉(zhuǎn)速下離心15min，可以得到3um的聚苯乙烯顆粒；重復(fù)用體積比為70:30的水/異丙醇混合溶液溶解所述聚苯乙烯顆粒，并于1000r轉(zhuǎn)速下離心15min，重復(fù)此溶解、離心步驟4次后，將所得的3um聚苯乙稀顆粒分散于80%的乙醇溶液中；
D)將異硫氰酸熒光劑溶解于二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液，聚丙烯酸溶解于80%的二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液；然后在制得的lmL聚丙烯酸溶液中加入4mg的碳二亞胺，lOmin之后加入3mg輕基琥?自酰亞胺，過(guò)5min之后加入上述配制的異硫氰酸焚光劑溶液20ul，并置于80%乙醇溶液中透析24h，制備得到聚丙烯酸-異硫氰酸熒光劑溶液，所述過(guò)程均需要避光處理；
E)取C)中100mL重量百分比2.6%的聚苯乙烯溶液，離心，然后重新分散于4ml的80%乙醇中；
F)在步驟E)中制得的溶液中加入lmL支化聚乙烯亞胺溶液，然后超聲lOmin，離心lOmin，在1000r轉(zhuǎn)速下可制備3um的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心； G)將F)中得到的聚苯乙烯顆粒再次分散于4mL80%的乙醇溶液中，并加入lmL通過(guò)步驟D)制得的聚丙稀酸-異硫氰酸焚光劑溶液，超聲lOmin，離心lOmin，在lOOOr轉(zhuǎn)速下可制備3um的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心；
H)將G)中得到的聚苯乙烯顆粒再次分散于4mL80%的乙醇溶液中，加入lmL通過(guò)步驟
A)制得的溶液，超聲lOmin，離心lOmin，在lOOOr轉(zhuǎn)速下制備3um的顆粒，去除上清液，加入80%的乙醇再次分散和離心；制備得到聚乙烯亞胺/ (聚丙烯酸-異硫氰酸熒光劑/聚乙烯吡咯烷酮)顆粒，即PEI/ (PAA-F/PVPON)顆粒；
I)將H)中得到的PEI/(PAA-F/PVPON)顆粒溶解于4mL的四氫呋喃中，2min之后再離心25min，于lOOOr轉(zhuǎn)速分別制備3um的微膠囊，除去上清液，用200ul的四氫呋喃洗滌2次，然后將得到的微膠囊分散于500ul水中。
[0009]實(shí)施例2采取以下步驟:
A)取聚丙稀酸、支化聚乙稀亞胺、聚乙稀卩比略燒酮用80%的乙醇溶液配制成5mg/mL的混合溶液；
B)將2mL重量百分比為2.6%的聚苯乙烯和llmL濃度為lmg/mL的聚醋酸乙烯酯混合、鋪勻、干燥得到厚度約為75um的薄膜；然后置于120°C油浴拉伸變形，拉伸比根據(jù)預(yù)定的微膠囊形狀確定，然后室溫冷卻；之后用異丙醇洗滌去油后切成1~4_2的微粒，溶解于體積比為70:30的水與異丙醇的混合溶液中；
C)將經(jīng)過(guò)步驟B)處理的混合溶液分別置于lOOOOr轉(zhuǎn)速下離心15min，分別可以得到500nm的聚苯乙烯顆粒；重復(fù)用體積比為70:30的水/異丙醇混合溶液溶解所述聚苯乙烯顆粒，并于10000r轉(zhuǎn)速下離心15min，重復(fù)此溶解、離心步驟4次后，將所得的500nm聚苯乙烯顆粒分散于80%的乙醇溶液中；
D)將異硫氰酸熒光劑溶解于二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液，聚丙烯酸溶解于80%的二甲基亞砜中配制成0.1M的溶液；然后在制得的3mL聚丙烯酸溶液中加入12mg的碳二亞胺，lOmin之后加入6mg輕基琥?自酰亞胺，過(guò)