一種高穩(wěn)定性的茶樹油納米脂質(zhì)體抗菌劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗菌劑及藥物制劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的茶樹油 納米脂質(zhì)體抗菌劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 茶樹油，系唇形科茶樹油屬植物，常綠灌木，因含有大量天然抗氧化成分而備受人 們關(guān)注，其中茶樹油莖和葉提取得到的揮發(fā)油具有很好的抗菌消炎功效；茶樹油無色或淡 黃色，主要化學(xué)成分為桉葉油素、樟腦、龍腦、α -蒎烯、莰烯、乙酸龍腦酯、馬鞭草烯酮等，茶 樹油全草可入藥，有健胃發(fā)汗功效，精油對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、霍亂弧菌等有較好 的抗菌作用，茶樹油作為香辛料可廣泛地應(yīng)用于食品工業(yè)，而且經(jīng)研究表明茶樹油還是一 種高效理想的抗氧化劑。
[0003] 國內(nèi)有很多關(guān)于茶樹油在食品、保健品、醫(yī)藥的專利申請；CN103788494A公開了 一種果蔬保鮮薄膜及其制備方法，添加茶樹油作為活性成分抑制微生物繁殖及起到抗氧 化作用；CN104365822A公開了一種用茶樹油保鮮南方葡萄的方法；CN103316158A發(fā)明提 供了一種包括茶樹油的復(fù)方精油以達(dá)到減肥瘦身效果；CN101506106公開了一種含草藥 成分的飲用水的配方及方法，配方包括茶樹油以穩(wěn)定成分，從而延長保存期；CN101402864 公開了屬于高活性抗氧化產(chǎn)品制備技術(shù)領(lǐng)域的一種從茶樹油中制備抗氧化產(chǎn)品的方法； CN103031210A公開了一種可兼制茶樹油的茶樹油脫水方法，最大化利用茶樹油之良好經(jīng) 濟(jì)效果；CN102899170A公開了一種采用亞臨界流體技術(shù)萃取茶樹油的方法，適合工業(yè)化推 廣。
[0004] 雖然茶樹油在醫(yī)學(xué)，食品和化妝品行業(yè)被廣泛應(yīng)用，具有較好的殺菌、增香等特 點(diǎn)，但是茶樹油易揮發(fā)，暴露在空氣中不穩(wěn)定，所以要尋找有效地方法降低茶樹油在使用過 程中的揮發(fā)程度，延長保存期。
[0005] 納米脂質(zhì)體能將茶樹油包裹在內(nèi)，并且納米脂質(zhì)體不會對茶樹油的主要活性成分 造成破壞；納米脂質(zhì)體使茶樹油中的活性成分與外界環(huán)境隔絕開來，可以降低茶樹油揮發(fā) 性，延長保存期，但由于脂質(zhì)體的緩釋作用，包裹精油的脂質(zhì)體保質(zhì)期受限，所以，選用殼聚 糖和明膠制成穩(wěn)定性高的多層脂質(zhì)體，此外，納米脂質(zhì)體由于它們的亞細(xì)胞尺寸，能加強(qiáng)脂 質(zhì)體的被動吸收機(jī)制，減少物質(zhì)運(yùn)輸阻力，從而增強(qiáng)精油的抗菌等效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是公開一種高穩(wěn)定的茶樹油納米脂質(zhì)體及其制備方法，通過將茶樹 油包裹在多層納米脂質(zhì)體中，以實(shí)現(xiàn)減少茶樹油在使用過程中的揮發(fā)，從而減少茶樹油的 浪費(fèi)，達(dá)到長效抗菌與高效利用的目的。
[0007] -種高穩(wěn)定性的茶樹油納米脂質(zhì)體，茶樹油包裹在磷脂雙分子層中，其特征在于： 磷脂雙分子層為第一層納米脂質(zhì)體，還設(shè)有第二層納米脂質(zhì)體，第二層由殼聚糖組成。
[0008] 進(jìn)一步地，所述的一種高穩(wěn)定性的茶樹油納米脂質(zhì)體，其特征在于：還設(shè)有第三層 納米脂質(zhì)體，第三層由明膠組成。
[0009] 進(jìn)一步地，第二層納米脂質(zhì)體中殼聚糖的濃度為0· 2 mg/mL。
[0010] 進(jìn)一步地，第三層納米脂質(zhì)體中明膠的濃度為0. 4 mg/mL。
[0011] 本發(fā)明由茶樹油，大豆卵磷脂，膽固醇和表面活性劑，殼聚糖和明膠制成茶樹油納 米脂質(zhì)體。
[0012] 大豆卵磷脂、膽固醇是構(gòu)成脂質(zhì)體的組要成分，膽固醇均有調(diào)節(jié)膜流動性的作用， 所以考察其兩者的配比變化，對構(gòu)成的脂質(zhì)體分散性等參數(shù)有無影響；表面活性劑是增加 脂質(zhì)體穩(wěn)定性；茶樹油濃度是根據(jù)包封率來確定的；醋酸鹽溶液的pH是為了最佳溶解殼聚 糖；殼聚糖和明膠可以增加穩(wěn)定性。
[0013] 本發(fā)明的制備方法是將茶樹油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸干形 成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)和表面活性劑組成的混合溶液溶解薄膜并超聲成乳、離心后 取上層液體過濾得到單層茶樹油納米脂質(zhì)體，其特征在于：將單層茶樹油納米脂質(zhì)體與殼 聚糖溶液攪拌均勻，通過離心和微孔濾膜過濾，得到粒徑為納米級的雙層茶樹油納米脂質(zhì) 體。
[0014] 進(jìn)一步地，將雙層茶樹油納米脂質(zhì)體與明膠溶液攪拌均勻，通過離心和微孔濾膜 過濾，得到粒徑為納米級的多層茶樹油納米脂質(zhì)體。
[0015] 進(jìn)一步地，本發(fā)明的大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比例為5:1 ;表面活性劑、茶樹油 與膽固醇的質(zhì)量比為：1:4:4,此條件下可以得到最高的包封率。
[0016] 進(jìn)一步地，表面活性劑為PVP，混合溶液中PVP的濃度為1. 0 mg/mL。
[0017] 單層茶樹油納米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液的體積比為1:10 ;雙層茶樹油納米脂質(zhì)體 與明膠溶液的體積比為1:10。
[0018] 本發(fā)明中所述的有機(jī)溶劑是氯仿。
[0019] 本發(fā)明中所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液， pH 值 3. 5~4· 0。
[0020] 所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸鹽溶液，濃度為0.2 mg/mL，醋酸鹽溶液是根 據(jù)中國藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0,優(yōu)選3. 6,能夠最佳溶解殼 聚糖。
[0021] 所述明膠溶液為明膠的醋酸鹽溶液，濃度為0. 4 mg/mL，醋酸鹽溶液是根據(jù)中國藥 典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0。
[0022] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第一層是磷脂雙分子層，即人工細(xì)胞膜層。
[0023] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第二層由殼聚糖組成，濃度為0. 2 mg/mL。
[0024] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第三層由明膠組成，濃度為0.4 mg/mL。
【附圖說明】
[0025] 圖1為茶樹油納米脂質(zhì)體的包封率。
[0026] 圖2為茶樹油納米脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)roi。
[0027] 圖3為多層茶樹油納米脂質(zhì)體熒光顯微圖。
[0028] 圖4為多層茶樹油納米脂質(zhì)體原子力顯微圖。
[0029] 圖5多層茶樹油納米脂質(zhì)體對大腸桿菌的抗菌性能。
[0030] 圖6多層茶樹油納米脂質(zhì)體對金黃色葡萄球菌的抗菌性能。
[0031] 表1為茶樹油納米脂質(zhì)體的Zeta電位。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 通過下面實(shí)例說明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容，不僅局限于此 實(shí)施例1多層茶樹油納米脂質(zhì)體的包封率 1實(shí)驗(yàn)材料 大豆卵磷脂；BR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0033] 膽固醇；AR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0034] 三氯甲烷；AR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0035] 茶樹油；AR ;法國florihana精油。
[0036] PVP ;GR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0037] 殼聚糖；BR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0038] 明膠；BR ;國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0039] 2實(shí)驗(yàn)方法 1)單層茶樹油納米脂質(zhì)體的制備 ①稱取1 g大豆卵磷脂，0. 2 g膽固醇和200mg的茶樹油，加50 mL氯仿使其溶解。
[0040] ②在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至溶劑蒸干，蒸發(fā)溫度為10~30 °C，圓底燒瓶內(nèi)壁會形 成光滑的薄膜；然后將所得產(chǎn)品放入真空干燥箱中，30 °C，真空狀態(tài)下干燥24小時。
[0041] ③稱取0. 05 g的PVP于50mL醋酸鹽緩沖液中，超聲波條件下擴(kuò)散，然后將PVP 的醋酸鹽緩沖液加入圓底燒瓶中超聲波條件下進(jìn)行水化。
[0042] ④將水化后的混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10 S，間隙5 S的頻率粉碎 30 min來進(jìn)一步使脂質(zhì)體乳狀液粒徑更均勾細(xì)小一些。
[0043] ⑤將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000 rpm，15min，取上層液體。
[0044] ⑥將所得液體用0. 22 μ m濾膜進(jìn)行過濾，得濾液，為單層茶樹油納米脂質(zhì)體。
[0045] 2)雙層茶樹油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述單層茶樹油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200 mg茶樹油的單層納米脂 質(zhì)體。
[0046] ②將單層茶樹油脂質(zhì)體分散在含0. 2 mg/mL殼聚糖的醋酸鹽溶液中混合均勻； 單層茶樹油納米脂質(zhì)體與殼聚糖的醋酸鹽溶液的體積比1 :1〇。
[0047] ③將所得混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10 s，間隙5 s的頻率粉碎30 min〇
[0048] ④將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000 rpm，15min，取上層液體； ⑤將所得液體用〇. 22 μ m濾膜進(jìn)行過濾，得濾液，為雙層茶樹油納米脂質(zhì)體。
[0049] 3)多層茶樹油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述雙層茶樹油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200mg茶樹油的雙層納米脂 質(zhì)體。
[0050] ②將雙層茶樹油納米脂質(zhì)體分散在含0. 4 mg/mL明膠的醋酸鹽溶液中使其混合 均勻；雙層茶樹油納米脂質(zhì)體與明膠的醋酸鹽溶液的體積比為1 :1〇。
[0051] ③將所得混合液于細(xì)胞超微粉碎儀中以工作10 s，間隙5 s的頻率粉碎30 min ； ④ 將所得產(chǎn)品進(jìn)行離心，4000 rpm，15min，取上層液體； ⑤ 將所得液體用〇. 22 μ m濾膜進(jìn)行過濾，得濾液，為多層茶樹油納米脂質(zhì)體。
[0052] 4)包封率的測定 用無水乙醇稀釋茶樹油，逐級稀釋成濃度分別為0. l、〇. 2、0. 4、0. 6、0. 8 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn) 溶液。然后，分別吸取1 yL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行GC-MS分析，對其主要成分1，8-桉葉素的譜峰 面積進(jìn)行自動積分，繪制1，8-桉葉素峰面積-茶樹油濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線。首先取lmL茶樹油納 米脂質(zhì)體樣品，13500 rpm，離心3 h，倒掉上清液。接著加入1 mL乙醇破乳劑，超聲3 h，最 后以10000 rpm的轉(zhuǎn)速離心15 min，取上清液，用于GC-MS分析；制備好的脂質(zhì)體樣品，對 精油主成分的峰面進(jìn)行自動積分，再根據(jù)步驟1中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出脂質(zhì)體中植物 精油的含量，則：
[0053] 3茶樹油納米脂質(zhì)體的包封率 包封率是評價(jià)脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的最重要的指標(biāo)，也是脂質(zhì)體能否發(fā)揮較普通制劑 高效、低毒等特點(diǎn)的關(guān)鍵；由圖1可看出，單層茶樹油納米脂質(zhì)體的包封率為20. 7%，雙層茶 樹油納米脂質(zhì)體的包封率為37. 3%，多