一種海星酶解提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種化妝品添加劑及其制備方法與應(yīng)用，具體涉及一種海星酶解提取 物及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 衰老是器官功能、機(jī)體組織隨著年齡的增長(zhǎng)而發(fā)生的退行性變化，是機(jī)體各種生 化反應(yīng)的綜合表現(xiàn)，是環(huán)境污染、精神緊張、遺傳等體內(nèi)外諸多因素共同作用的結(jié)果。皮膚 是人體的最大器官，暴露于體外，擔(dān)負(fù)著感覺、分泌、排泄、體溫調(diào)節(jié)、保護(hù)和免疫等諸多方 面的作用。在機(jī)體衰老的過程中，皮膚的衰老最為明顯。隨著年齡的增長(zhǎng)，皮膚會(huì)發(fā)生退行 性變化，隨之功能會(huì)逐漸減弱或喪失，將導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)變薄、含水量減少、彈性消退、起皺、 色斑等現(xiàn)象。
[0003] 皮膚衰老的主要原因是真皮結(jié)構(gòu)的改變。衰老真皮層厚度變薄，密度降低。超聲 波或直接測(cè)量結(jié)果都顯示20歲以后皮膚厚度呈線性減少。女性的皮膚比男性的皮膚薄，可 能是女性比男性皮膚較早衰老的原因。20歲以后真皮層中成纖維細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，膠原 蛋白的總含量逐年減少1%，膠原纖維變粗，并出現(xiàn)異常交鏈；同時(shí)，膠原纖維密度增大，膠 原酶分解困難，膠原的穩(wěn)定性增加。一般嬰兒及青年人皮膚I型膠原含量約占70%，而衰老 皮膚中I型膠原不僅基因表達(dá)量降低，而且合成也會(huì)相應(yīng)的減少。隨著膠原蛋白的不斷降 解真皮層會(huì)變得越來越薄，從而引起皺紋、松弛、色斑、下垂等一系列皮膚問題。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)中，針對(duì)皮膚皺紋形成原理和過程，市場(chǎng)上常用的防衰老抗皺活性成分 主要包括：影響組織細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的成分，如細(xì)胞生長(zhǎng)因子、動(dòng)植物提取物、果酸類物質(zhì)、羊 胎素等；促進(jìn)皮膚保濕與修復(fù)皮膚屏障功能的活性成分，如神經(jīng)酰胺、透明質(zhì)酸、吡咯烷酮 羧酸鈉等；抗氧化損傷的成分，如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化酶、維生素E和維生素 C、輔酶Q10等。目前尚未見到海星酶解提取物具有防衰老抗皺等功能的報(bào)道。
[0005] 海星（Asteroidea)是棘皮動(dòng)物中結(jié)構(gòu)生理最有代表性的一類。體扁平，多為五輻 射對(duì)稱，體盤和腕分界不明顯。生活時(shí)口面向下，反口面向上。腕腹側(cè)具步帶溝，溝內(nèi)伸出 管足。內(nèi)骨骼的骨板以結(jié)締組織相連，柔韌可曲。若把海星撕成幾塊拋入海中，每一碎塊會(huì) 很快重新長(zhǎng)出失去的部分，從而長(zhǎng)成幾個(gè)完整的新海星來。例如，沙海星保留一厘米長(zhǎng)的腕 就能生長(zhǎng)出一個(gè)完整的新海星，而有的海星本領(lǐng)更大，只要有一截殘臂就可以長(zhǎng)出一個(gè)完 整的新海星。海星的腕、體盤受損或自切后，都能夠自然再生。海星的任何一個(gè)部位都可以 重新生成一個(gè)新的海星。
[0006] 因此從海星中分離提取具有促進(jìn)表皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)，研宄其對(duì)膠 原蛋白分泌的影響就有可能得到一種具有抗皺作用，延緩皮膚衰老的組分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種海星酶解提取物及其制備方法與在制備祛 皺修復(fù)化妝品中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] -種海星酶解提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0010] (1)取新鮮海星洗凈后，剪碎后棄去水分，并稱重；向剪碎的海星中加入蒸餾水， 勻漿，得到海星勻漿液。
[0011] ⑵將步驟⑴中得到的海星勻漿液恒溫水浴，并加入磷酸緩沖液和復(fù)合酶進(jìn)行 酶解，持續(xù)攪拌，并保持pH在6. 8-7. 2之間。
[0012] (3)酶解結(jié)束后，加入乙醇溶液，室溫靜置后，室溫離心，取上清液，然后將上清液 通過中空纖維膜組件，收集透過液。
[0013] (4)取步驟（3)中的透過液，濃縮干燥即得海星酶解提取物。
[0014]所述步驟（1)中，蒸餾水的質(zhì)量為海星質(zhì)量2-4倍。
[0015] 所述步驟⑴中，采用分散機(jī)進(jìn)行勻漿，轉(zhuǎn)速為10000-22000rpm，時(shí)間為5-10min。
[0016] 所述步驟（2)中，恒溫水浴的溫度為40-60°C，磷酸緩沖液的pH為7.0,摩爾濃度 為0. lmol/L，加入量是海星勻漿液體積的2-4倍。
[0017] 所述步驟（2)中，復(fù)合酶的加入質(zhì)量為海星體重質(zhì)量的0. 5-2%，每克復(fù)合酶的酶 活力為30萬U。所述復(fù)合酶是由堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶組成的混合物，其中， 所述堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的活力單位比為3:3:4。
[0018] 所述步驟（2)中，酶解時(shí)間為10~12h。
[0019] 所述步驟（3)中，乙醇溶液中乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%，加入量為步驟（3)中酶解液 體積的3倍。
[0020] 所述步驟（3)中，室溫靜置的時(shí)間為6-12h。
[0021] 所述步驟（3)中，室溫離心的轉(zhuǎn)速為5000rpm，時(shí)間為lOmin。
[0022] 所述步驟（3)中，中空纖維膜組件的截留分子量為6000道爾頓。
[0023] 所述步驟（4)中，干燥采用冷凍干燥或者噴霧干燥。
[0024] 通過所述海星酶解提取物的制備方法制備得到海星酶解提取物。
[0025] 所述海星酶解提取物在促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和分泌膠原蛋白的應(yīng)用，具體應(yīng)用形 式是，所述海星酶解提取物在制備祛皺修復(fù)化妝品中的應(yīng)用。
[0026] 海星酶解提取物具有使皮膚明顯細(xì)嫩、彈性明顯增加、皺紋明顯變淺等作用，可添 加到護(hù)膚水、精華、乳液或者面霜中，制成祛皺修復(fù)化妝品，實(shí)際應(yīng)用時(shí)，化妝品添加劑（海 星酶解提取物）的質(zhì)量占祛皺修復(fù)化妝品總質(zhì)量的〇. 1~2%。
[0027] 本發(fā)明的有益效果是：
[0028](1)本發(fā)明中海星酶解提取物的制備方法簡(jiǎn)單、易操作，制備過程中安全、環(huán)保。
[0029] (2)通過本發(fā)明制備方法得到的海星酶解提取物具有活性高、生物相容性好、安全 無副作用等優(yōu)點(diǎn)。
[0030] (3)本發(fā)明提出海星酶解提取物在祛皺修復(fù)化妝品中的應(yīng)用，具有促進(jìn)成纖維細(xì) 胞增殖、促進(jìn)分泌膠原蛋白、使皮膚明顯細(xì)嫩、彈性明顯增加、皺紋明顯變淺等作用，使用后 具有明顯的祛皺修復(fù)效果，可添加到護(hù)膚水、精華、乳液或者面霜中，制成祛皺修復(fù)化妝品。
【附圖說明】
[0031] 圖1 :海星酶解提取物對(duì)NIH/3T3細(xì)胞增值率的影響。
[0032] 圖2:海星酶解提取物對(duì)NIH/3T3細(xì)胞膠原蛋白分泌的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0034] 實(shí)施例1:海星酶解提取物的提取
[0035] 取新鮮海星lkg用清水洗凈后，剪碎后盡量棄去水分，并稱重。向剪碎的海星中加 入海星質(zhì)量2倍的蒸餾水，使用分散機(jī)勻漿（22000rpm) lOmin，得到海星勻漿液。
[0036] 將上述勻漿液放置于50°C恒溫水浴中，并加入勻漿液2倍體積的pH為7. 0的 0. lmol/L的磷酸緩沖液以及海星體壁質(zhì)量1 %的復(fù)合酶，每克復(fù)合酶的酶活力為30萬 U (該復(fù)合酶是堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按活力單位比為3:3:4的混合物），酶解 l〇h，持續(xù)攪拌，并保持pH在6. 8-7. 2之間。
[0037] 酶解結(jié)束后，加入酶解液三倍體積的乙醇溶液（乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95 % )，室溫靜 置6h，室溫離心（5000rpm，10min)，取上清。然后在恒流泵的作用下將上清液通過截留分子 量為6000道爾頓的中空纖維膜組件，收集透過液。
[0038] 取上述透過液用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，噴霧干燥即得海星酶解提取物50g。
[0039] 實(shí)施例2 :海星酶解提取物的提取
[0040] 取新鮮海星5kg用清水洗凈后，剪碎后盡量棄去水分，并稱重。向剪碎的海星中加 入海星質(zhì)量3倍的蒸餾水，使用分散機(jī)勻漿（lOOOOrpm) 15min，得到海星勻漿液。
[0041] 將上述勻漿液放置于50°C恒溫水浴中，并加入勻漿液3倍體積的pH為7. 0的 0. lmol/L的磷酸緩沖液以及海星體壁質(zhì)量1 %的復(fù)合酶，每克復(fù)合酶的酶活力為30萬 U (該復(fù)合酶是堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶按活力單位比為3:3:4的混合物），酶解 12h，持續(xù)攪拌，并保持pH在6. 8-7. 2之間。
[0042] 酶解結(jié)束后，加入酶解液三倍體積的乙醇溶液（乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95 % )，室溫靜 置8h，室溫離心（5000rpm，10min)，取上清。然后在恒流泵的作用下將上清液通過截留分子 量為6000道爾頓的中空纖維膜組件，收集透過液。
[0043] 取上述透過液用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，噴霧干燥即得海星酶解提取