專利名稱：抗菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將N-甲酰羥胺衍生物作為抗菌劑的用途，涉及這些化合物的新種類，涉及包含這些化合物的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)的組合物。
背景技術(shù)：
一般來(lái)說(shuō)，細(xì)菌病原體被分成革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性。許多抗菌劑(包括抗生素)都是對(duì)一種或另一種革蘭氏家族的病原體專一性的。同時(shí)對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性的病原體有效的抗菌劑因而被認(rèn)為有廣譜活性。
為人所知的有許多類的抗菌劑，包括青霉素和頭孢霉素，四環(huán)素，磺胺藥，單酰胺菌素，氟喹諾酮和喹諾酮，氨基糖苷類，糖肽，大環(huán)內(nèi)酯物，多粘菌素，林肯胺，甲氧芐胺嘧啶和氯霉素。這些抗菌類的作用的基本機(jī)制是不同的。
細(xì)菌對(duì)許多已知的抗菌物的抗性是一個(gè)增長(zhǎng)的問(wèn)題。因此，對(duì)發(fā)現(xiàn)替代抗菌劑的技術(shù)有著持續(xù)的需要，尤其是對(duì)那些和已知種類具有截然不同的作用機(jī)制的抗菌劑。
在革蘭氏陽(yáng)性病原體中，如葡萄球菌，鏈球菌，分枝細(xì)菌和腸球菌，抗性菌株已演化/產(chǎn)生，使得它們特別難被消除。這些菌種的例子有甲氧苯青霉素抗性的金黃色葡萄球菌(MRSA)，甲氧苯青霉素抗性的凝固酶陰性的葡萄球菌(MRCNS)，青霉素抗性的肺炎鏈球菌和多抗性的糞便腸球菌。
病原性的細(xì)菌常常對(duì)氨基糖苷類，β-內(nèi)酰胺(青霉素和頭孢霉素)，和氯霉素類的抗生素有抗性。這種抗性包括通過(guò)水解或形成非活性衍生物的抗生素酶催化失活?？股卅?內(nèi)酰胺(青霉素和頭孢霉素)家族以具有β-內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)為特征。在臨床分離物中對(duì)這個(gè)抗生素家族的抗性通常是由于抗性細(xì)菌制造的“青霉素酶”(β-內(nèi)酰胺酶)水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，從而消除了它的抗菌活性。
近來(lái)，出現(xiàn)了對(duì)萬(wàn)古霉素抗性菌種的腸球菌。(Woodford N.1998糖肽抗性的腸球菌經(jīng)驗(yàn)十年。醫(yī)學(xué)微生物雜志。47(10):849-62)。萬(wàn)古霉素抗性的腸球菌特別危險(xiǎn)，它們是醫(yī)院感染的常見(jiàn)原因，而且對(duì)大多數(shù)抗生素天然具有抗性。萬(wàn)古霉素通過(guò)連接到細(xì)胞壁肽聚糖前體的末端D-Ala-D-Ala殘基起作用。對(duì)萬(wàn)古霉素的高水平抗性以VanA為人所知，由一定位于一轉(zhuǎn)座子上的基因產(chǎn)生，該基因?qū)⒛┒藲埢兓蒁-Ala-D-lac，從而降低了對(duì)萬(wàn)古霉素的親和力。
由于多藥物抗性細(xì)菌的迅速出現(xiàn)，對(duì)數(shù)量增長(zhǎng)的抗性細(xì)菌有效的，特別是對(duì)萬(wàn)古霉素抗性的腸球菌和β-內(nèi)酰胺抗生素抗性的細(xì)菌，例如甲氧苯青霉素抗性的金黃色葡萄球菌有效的，具有新作用模式的抗菌劑的開(kāi)發(fā)，是至關(guān)重要的。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明基于某些N-甲酰羥胺衍生物具有抗菌活性的發(fā)現(xiàn)，而使得一類新的抗菌劑變得可用。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提到的化合物對(duì)一定范圍的革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性有機(jī)體有抗菌性。另外，有證據(jù)表明，一些化合物對(duì)于常用抗生素例如萬(wàn)古霉素和β-內(nèi)酰胺抗生素抗性的細(xì)菌有抗菌性，比如甲氧苯青霉素抗性的金黃色葡萄球菌。
盡管建立本發(fā)明提到的化合物的作用機(jī)制可能有用，但使它們有效的是它們抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的活性。然而，現(xiàn)在相信，它們的抗菌活性是由于，至少部分由于，抑制細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌多肽脫甲酰基酶(PDF)。
細(xì)菌多肽脫甲酰基酶(PDF)(EC3.5.1.31)，是金屬酶的一個(gè)保守家族，(綜述Meinnel T,Lazennec C,Villoing S,Blanquet S,1997，分子生物學(xué)雜志267,749-761)對(duì)細(xì)菌的生存能力至關(guān)重要，它們的功能在于從真核細(xì)菌的核糖體合成的蛋白質(zhì)的N-末端甲硫氨酸殘基上除去甲?；鶊F(tuán)。Mazel等.(EMBOJ.13(4):914-923,1994)最近克隆并表征了一種大腸桿菌PDF。由于PDF對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)至關(guān)重要，而沒(méi)有PDF的真核對(duì)應(yīng)物，Mazel等(ibid),Rajagopalan等.(J.Am.Chem.Soc.119:12418-12419,1997)和Becker等，(J.BiolChem.273(19):11413-11416,1998)都分別設(shè)想PDF是一卓越的抗菌目標(biāo)。
一些N-甲酰羥胺衍生物以前在下列專利公告中提到過(guò)，雖然這些化合物中的極少的例子被專門制造并描述過(guò)EP-B-0236872(Roche)WO92/09563(Glycomed)WO92/04735(Syntex)
WO95/19965 (Glycomed)WO95/22966 (SanofiWinthrop)WO95/33709 (Roche)WO96/23791 (Syntex)WO96/16027 (Syntex/Agouron)WO97/03783 (BritishBiotech)WO97/18207 (DuPontMerck)WO98/38179 (GlaxoWellcome)WO98/47863 (LabsJaquesLogeais)在那些公告中歸功于N-甲酰羥胺衍生物的藥物利用性是抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的能力，和在一些例子中，釋放腫瘤壞死因子(TNF)，因而對(duì)這些酶引起的疾病和情況，例如癌癥和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行治療。該先前的技術(shù)未公開(kāi)或意味N-甲酰羥胺衍生物有抗菌活性。
此外，US-A-4,738,803(Roques等)也公開(kāi)了N-甲酰羥胺衍生物。然而，這些化合物被作為腦啡肽酶抑制劑來(lái)公開(kāi)，被設(shè)想用作抗抑郁劑和降血壓劑。同樣的，WO97/38705(Bristol-Myers Squibb)公開(kāi)了一些N-甲酰羥胺衍生物，作為腦啡肽酶和血管緊縮素轉(zhuǎn)換酶抑制劑。該先前的技術(shù)也未公開(kāi)或意味N-甲酰羥胺衍生物有抗菌活性。
發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了在制備抗菌組合物時(shí)，式(Ⅰ)化合物或它的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽的用途 其中R1代表氫，或C1-C6烷基，被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)m-基團(tuán)，其中R10代表氫，或C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜環(huán)基團(tuán)，其中的任意一個(gè)可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，氰基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，而ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-，-O-或-S-鍵，而X代表-NH-，-O-或-S-，而m和n分別獨(dú)立的代表0或1；而A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一個(gè)基團(tuán) 其中R3代表氫，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，或者，當(dāng)與它們分別連接的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)，R3和R4形成一個(gè)5到8個(gè)原子的任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選地與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，R5和R6，獨(dú)立代表氫，或任選取代的C1-C8烷基，環(huán)烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，雜環(huán)，或雜環(huán)(C1-C6烷基)，或者，當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，R5和R6形成一個(gè)3到8個(gè)原子的任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選地與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，而R7代表氫，C1-C6烷基，或酰基基團(tuán)。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種對(duì)在人或非人哺乳動(dòng)物體內(nèi)的細(xì)菌感染的治療方法。其包括對(duì)患有此類感染的對(duì)象投以含有上文定義的式(Ⅰ)的化合物的抗菌有效的藥量。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了處理細(xì)菌污染的方法，其通過(guò)在污染位置上投以含有上文定義的式(Ⅰ)的化合物的抗菌有效的藥量。
如上所定義的式(Ⅰ)的化合物可被用作抗菌的清潔和消毒材料成分。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選例，本發(fā)明的不同方面可被用于萬(wàn)古霉素-，喹喏酮-，以及“β-內(nèi)酰胺”-抗性的細(xì)菌以及它們引起的感染。
根據(jù)化合物(Ⅰ)通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)PDF起作用的假設(shè)，使用能充分穿透細(xì)胞壁的化合物可以得到最強(qiáng)的抗菌效果。因此，在體外有高度PDF抑制劑活性，并可穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞壁的的化合物，根據(jù)本發(fā)明適宜被選用。預(yù)計(jì)，在體外是PDF酶的強(qiáng)力抑制劑，但缺少穿過(guò)細(xì)胞能力的那些化合物的抗菌效力，可以通過(guò)以前體藥物的形式使用來(lái)提高效力。比如，結(jié)構(gòu)修飾了的類似物，其在穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞壁后，比如通過(guò)酶的作用，能轉(zhuǎn)化成式(Ⅰ)的母分子。
本發(fā)明也提供了如上式(Ⅰ)的新化合物，或它們的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽，其中R1代表氫，C1-C6烷基，或被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)m-基團(tuán)，其中R10代表氫，或C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜環(huán)基團(tuán)，其中的任意一個(gè)可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-,-O-或-S-鍵，而m代表0或1；A代表如上式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一個(gè)基團(tuán)其中R3代表氫，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，或者，當(dāng)與它們分別連接的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)，R3和R4形成一個(gè)5到8個(gè)原子的任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選地與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，R5和R6，獨(dú)立代表氫，或任選取代的C1-C8烷基，環(huán)烷基，芳基(C1-C6烷基)，非芳族的雜環(huán)，或雜環(huán)(C1-C6烷基)，或者，當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，R5和R6形成一個(gè)3到8個(gè)原子的任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選地與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，而R7代表氫，C1-C6烷基，或?；鶊F(tuán)。
條件是(ⅰ)當(dāng)A是式(ⅠA)或(ⅠB)基團(tuán)，并且R2是C2-C5烷基時(shí)，則R4不是天然α氨基酸的側(cè)鏈，或任一功能性取代基被保護(hù)，任一氨基基團(tuán)被?；我霍然鶊F(tuán)被酯化的天然α氨基酸的側(cè)鏈；(ⅱ)當(dāng)A是式(ⅠA)或(ⅠB)的基團(tuán)時(shí)，則R4不是雙環(huán)芳甲基基團(tuán)；而(ⅲ)當(dāng)A是式(ⅠA)基團(tuán)，并且R2是環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基，或環(huán)戊基甲基，而且R5和R6之一是氫時(shí)，則R4不是叔丁基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(C1-C6)烷基”代表具有1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基部分，包括例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲-丁基，叔丁基，正戊基和正己基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂二價(jià)(C1-C6)亞烷基＂代表具1至6個(gè)碳原子的飽和烴鏈，以及兩個(gè)未滿足的價(jià)鍵。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(C2-C6)鏈烯基”指直鏈或支鏈的烯基團(tuán)，其具有2至6個(gè)碳原子，至少有一個(gè)可選的E或Z立體化學(xué)的雙鍵。本術(shù)語(yǔ)可包括，例如，乙烯基，烯丙基，1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂二價(jià)(C2-C6)亞烯基＂代表具2至6個(gè)碳原子的烴鏈，至少一個(gè)雙鍵，兩個(gè)未滿足的價(jià)鍵。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“(C2-C6)炔基”代表直鏈或支鏈的具有2至6個(gè)碳原子和一個(gè)三價(jià)鍵的碳?xì)浠鶊F(tuán)。該術(shù)語(yǔ)包括，例如乙炔基，1-丙炔基，1-和2-丁炔基，2-甲基-2-丙炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基和5-己炔基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“二價(jià)(C2-C6)亞炔基(alkynylene radical)”代表具有2至6個(gè)碳原子，至少一個(gè)三鍵，和兩個(gè)未滿足的價(jià)鍵。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指飽和的脂環(huán)部分，其具有3-8個(gè)碳原子，包括，例如環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，和環(huán)辛基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”，指不飽和的脂環(huán)，其具有3-8個(gè)碳原子，包括例子環(huán)丙烯基，環(huán)丁烯基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，環(huán)庚烯基和環(huán)辛烯基。在5-8個(gè)碳原子的環(huán)烯基環(huán)的例子中，該環(huán)可包括多于一個(gè)的雙鍵。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂芳基＂指單-，雙-，或三-環(huán)的碳環(huán)芳基團(tuán)，也指包含有兩個(gè)共價(jià)連接的單環(huán)的碳環(huán)芳基團(tuán)。這些基團(tuán)的例子有苯基，聯(lián)苯基和萘基。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂雜芳基＂指5-或6-芳環(huán)，其包含一個(gè)或多個(gè)雜原子，且任選和苯基環(huán)或吡啶基環(huán)稠合；指包含兩個(gè)共價(jià)連接的5-或6-元芳環(huán)，每個(gè)都包含一個(gè)或多個(gè)雜原子的基團(tuán)；指包括與-5-或6-元，含有一個(gè)或多個(gè)雜原子的芳環(huán)共價(jià)相連的單環(huán)碳環(huán)芳基的基團(tuán)。這些基團(tuán)的例子有噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，苯并咪唑基，噻唑基，吡唑基，異噁唑基，異噻唑基，三唑基，噻二唑基，噁二唑基，吡啶基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，三嗪基，4-([1,2,3]-噻二唑基-4-基)苯基和5-異噁唑-3-基噻吩基。
本文使用的非限定的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)的”包括上文定義的“雜芳基”，而特別代表包含一或多個(gè)選自S，N和O的雜原子的5-7元芳族或非芳族的雜環(huán)，而且任選地和一苯環(huán)稠合，包括例如吡咯基，呋喃基，噻吩基，哌啶基，咪唑基，噁唑基，噻唑基，噻二唑基，吡唑基，吡啶基，吡咯烷基，嘧啶基，嗎啉基，哌嗪基，吲哚基，苯并咪唑基，馬來(lái)酰亞氨基，琥珀酰亞氨基，苯二甲酰亞氨基，和1,3-二氧-1,3-二氫-異吲哚-2-基基團(tuán)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂?；⒋鞷20C(O)-基團(tuán)，其中R20是(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C3-C7)環(huán)烷基，苯基，雜環(huán)基，苯基(C1-C6)烷基，雜環(huán)基(C1-C6)烷基，(C3-C7)環(huán)烷基(C1-C6)烷基，苯基(C2-C6)鏈烯基，雜環(huán)基(C2-C6)鏈烯基，(C3-C7)環(huán)烷基(C2-C6)鏈烯基，其中任一R20基團(tuán)可被取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)＂雙環(huán)芳基甲基＂指(ⅰ)被一個(gè)單環(huán)芳基或雜芳基基團(tuán)取代的甲基，其中芳基和雜芳基又可被單環(huán)芳基或雜芳基取代?；?ⅱ)被一個(gè)單環(huán)芳基或雜芳基取代的甲基，其中單環(huán)芳基和雜芳基和第二個(gè)單環(huán)芳基或雜芳基基團(tuán)稠合；還包含非取代的或取代的雙環(huán)芳基甲基。這些雙環(huán)芳基甲基的例子有萘基，吲哚基，喹啉基和異喹啉基。
除非在出現(xiàn)的上下文中有特別注明，在此的任何部分出現(xiàn)的術(shù)語(yǔ)“取代的”代表被最多到4個(gè)取代基取代，每個(gè)獨(dú)立為(C1-C6)烷基，芐基，(C1-C6)烷氧基，苯氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-CORA,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB。其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基。在“取代的”指芐基時(shí)，其苯環(huán)本身可能被除了芐基的任一前述的基團(tuán)取代。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“天然α-氨基酸的側(cè)鏈”和“非天然α-氨基酸的側(cè)鏈”指Rx基團(tuán)，其分別為具有式NH2-CH(Rx)-COOH的天然或非天然的氨基酸。
天然氨基酸的側(cè)鏈的例子有，包括丙氨酸，精氨酸，天門冬酰胺，天門冬氨酸，半胱氨酸，胱氨酸，谷氨酸，組氨酸，5-羥賴氨酸，4-羥脯氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，賴氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，色氨酸，酪氨酸，纈氨酸，α-氨基己二酸，α-氨基-正丁酸，3,4-二羥基苯丙氨酸，高絲氨酸，α-甲絲氨酸，鳥(niǎo)氨酸，哌可酸和甲狀腺氨酸的側(cè)鏈。
在包含有功能性取代基的天然α-氨基酸側(cè)鏈中，例如，有氨基，羧基，羥基，巰基，胍基，咪唑基，或吲哚基團(tuán)取代的精氨酸，賴氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，色氨酸，組氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸和半胱氨酸中，這些功能性取代基可被任選保護(hù)。
同樣的，在含有功能性取代基的非天然氨基酸α-氨基酸側(cè)鏈中，例如氨基，羧基，羥基，巰基，胍基咪唑基或吲哚基團(tuán)，這些功能性取代基可被任選保護(hù)。
術(shù)語(yǔ)“被保護(hù)”當(dāng)在和天然或非天然α-氨基酸側(cè)鏈的功能性基團(tuán)聯(lián)系使用的時(shí)候，指的是這樣的基本上無(wú)功能性的取代基的衍生物。廣泛使用的T.W.Greene和P.G.Wuts的手冊(cè)＂有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)＂，第二版，Wiley，紐約，1991綜述了該主題。例如，羧基基團(tuán)可被酯化(例如作為C1-C6烷基酯)，氨基基團(tuán)可被轉(zhuǎn)化為酰胺(例如作為-NHCOC1-C6烷基酰胺)或氨基甲酸酯(例如，作為-NHC(=O)OC1-C6烷基或NHC(=O)OCH2Ph氨基甲酸酯)，羥基基團(tuán)可轉(zhuǎn)化為醚(例如-OC1-C6烷基或O(C1-C6烷基)苯基醚)或酯(例如-OC(=O)C1-C6烷基酯)，而巰基可被轉(zhuǎn)化為硫醚(例如叔丁基或芐基硫醚)，或硫酯(例如SC(=O)C1-C6烷基硫酯)。
根據(jù)本發(fā)明，由于不對(duì)稱碳原子的存在，在化合物中有幾個(gè)實(shí)際或潛在手性中心。幾個(gè)不對(duì)稱碳原子的存在，產(chǎn)生在手性中心具有R或S立體化學(xué)的許多非對(duì)映異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有這些非對(duì)映異構(gòu)體和它們的混合物?，F(xiàn)在，較佳的帶有R2基團(tuán)的碳原子的立體構(gòu)型是R；而帶有R4基團(tuán)(當(dāng)不對(duì)稱時(shí))的碳原子的構(gòu)型是S；而帶有R1基團(tuán)(當(dāng)不對(duì)稱時(shí))的碳原子的構(gòu)型是R。
在用于本發(fā)明的上文所定義的式(Ⅰ)的化合物中，以及上文定義的式(Ⅱ)的本發(fā)明的新化合物中(但隸屬于其中的限制性條款)R1可能為，例如，氫，甲基，或三氟甲基。氫現(xiàn)為較佳。
R2可能為，例如任選取代的C1-C8烷基，C3-C6鏈烯基，C3-C6炔基或環(huán)烷基；苯基(C1-C6烷基)-，苯基(C3-C6鏈烯基)-或苯基(C3-C6炔基)-任選在苯環(huán)內(nèi)取代；環(huán)烷基(C1-C6烷基)-，環(huán)烷基(C3-C6鏈烯基)-或環(huán)烷基(C3-C6炔基)-，在環(huán)烷基環(huán)內(nèi)任選地取代。
雜環(huán)基(C1-C6烷基)-，雜環(huán)基(C3-C6鏈烯基)-或雜環(huán)基(C3-C6炔基)-任選在雜環(huán)基環(huán)內(nèi)取代；CH3(CH2)pO(CH2)q-或CH3(CH2)pS(CH2)q-，其中p是0,1,2或3，而q是1,2或3。
R2基團(tuán)的特別例子包括甲基，乙基，正和異-丙基，正和異丁基，正戊基，異戊基，3-甲基-丁基-1-基，正己基，正庚基，n-乙酰基，正辛基，甲硫基乙基(methylsulfanylethyl)，乙硫基甲基(ethylsulfanylmethyl)，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基，2-乙氧基甲基，3-羥基丙基，烯丙基，3-苯丙-3-烯-1-基，丙-2-炔-1-基，3-苯基丙-2-炔-1-基，3-(2-氯苯基)丙-2-炔-1-基，丁-2-炔-1-基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)戊基甲基，環(huán)戊基乙基，環(huán)戊基丙基，環(huán)己基甲基，環(huán)己基乙基，環(huán)己基丙基，呋喃-2-基甲基，呋喃-3-甲基，四氫呋喃-2-基甲基，四氫呋喃-2-基甲基，哌啶基甲基，苯基丙基，4-氯苯基丙基，4-甲基苯基丙基，4-甲氧基苯基丙基，芐基，4-氯芐基，4-甲基芐基，和4-甲氧基芐基。
目前，R2的較佳基團(tuán)是正丙基，正丁基，正苯基，芐基和環(huán)戊基甲基。
在R3處，氫是現(xiàn)在較佳的。
R4可能是，例如天然α氨基酸的特征基團(tuán)，例如芐基，或4-甲氧基苯基甲基，其中任一功能團(tuán)可能被保護(hù)，任一氨基基團(tuán)可能被?；我霍然鶊F(tuán)可能被酰胺化；或-[Alk]nR9基團(tuán)，其中Alk是被一個(gè)或多個(gè)-O-，或-S-原子，或-N(R12)-基團(tuán)[其中R12是氫或(C1-C6)烷基基團(tuán)]任選插入的(C1-C6)亞烷基或(C2-C6)亞烷基，n是0或1，而R9是氫或任選取代的苯基，芳基，雜環(huán)基，環(huán)烷基或環(huán)烯基團(tuán)或(僅當(dāng)n是1時(shí))R9還可能是羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，或在苯環(huán)內(nèi)由式為-OCH2COR8的基團(tuán)取代的芐基，其中R8是羥基，氨基，(C1-C6)烷氧基，苯基(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基氨基，二((C1-C6)烷基)氨基，苯基(C1-C6)烷基氨基，或雜環(huán)基(C1-C6)烷基基團(tuán)，在雜環(huán)內(nèi)非取代或用鹵素，硝基，羧基，(C1-C6)烷氧基，氰基，(C1-C6)烷酰基，三氟甲基(C1-C6)烷基，羥基，甲?；?，氨基，(C1-C6)烷基氨基，雙-(C1-C6)烷基氨基，巰基，(C1-C6)烷硫基，羥基(C1-C6)烷基，巰基(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基苯甲基，或-CRaRbRc基團(tuán)，其中每個(gè)Ra,Rb和Rc分別獨(dú)立是氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，或Rc是氫，而Ra和Rb分別獨(dú)立為苯基或雜芳基，例如吡啶基，或Rc是氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或(C3-C8)環(huán)烷基，而Ra和Rb和它們相連的碳原子一起形成3到8元的環(huán)烷基或-5-到6-元的雜環(huán)，或Ra,Rb和Rc和它們相連的碳原子一起形成一個(gè)三環(huán)核(例如，金剛烷基)；或Ra和Rb分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或如下除氫以外，為Rc定義的基團(tuán)，或Ra和Rb和它們相連的碳原子一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)環(huán)，而Rc為氫，-OH,-SH，鹵素，-CN,-CO2H,(C1-C4)全氟烷基，-CH2OH,-CO2(C1-C6)烷基，-O(C1-C6)烷基，-O(C2-C6)鏈烯基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-S(C2-C6)鏈烯基，-SO(C2-C6)鏈烯基，-SO2(C2-C6)鏈烯基，或-Q-W基團(tuán)，其中Q代表一個(gè)化學(xué)鍵或-O-，-S-，-SO-或-SO2-而W代表苯基，苯基烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基烷基，(C4-C8)環(huán)烯基，(C4-C8)環(huán)烯基烷基，雜芳基或雜芳基烷基基團(tuán)，其中W可被獨(dú)立選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基任選取代羥基，鹵素，-CN,-CO2H,-CO2(C1-C6)烷基，-CONH2,-CONH(C1-C6)烷基，-CONH(C1-C6烷基)2,-CHO,-CH2OH,(C1-C4)全氟烷基，-O(C1-C6)烷基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-NO2,-NH2,-NH(C1-C6)烷基，-N((C1-C6)烷基)2,-NHCO(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，(C3-C8)環(huán)烷基，(C4-C8)環(huán)烯基，苯基或芐基。
特別為R4基團(tuán)的例子包括甲基，乙基，芐基，4-氯芐基，4-羥基芐基，苯基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，吡啶-3-基甲基，叔丁氧基甲基，萘基甲基，異丁基，仲丁基，叔丁基，1-芐硫基-1-甲基乙基，1-甲硫基-1-甲基乙基，1-巰基-1-甲基乙基，1-甲氧基-1-甲基乙基，1-羥基-1-甲基乙基，1-氟-1-甲基乙基，羥甲基，2-羥乙基，2-羧基乙基，2-甲基氨基甲?；一?-氨基甲?；一?，和4-氨基丁基。現(xiàn)在，R4的較佳基團(tuán)包括叔丁基，異丁基，芐基和甲基。
當(dāng)R3和R4與它們分別相連的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)可能會(huì)形成5到8個(gè)原子的任選取代的飽和雜環(huán)。例如，R3和R4可能在和它們相連的氮原子和碳原子之間形成橋，所述的橋用二價(jià)基-(CH2)3-6-，或-(CH2)r-O-(CH2)s-，或-(CH2)r-S-(CH2)s-表示，其中r和s分別獨(dú)立是1,2或3，附加條件是r+s=2,3,4，或5。
R5和R6可分別獨(dú)立為，例如，氫，甲基，乙基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1,1,3,3-四甲基丁基，芐基，或2-羥基乙基；或R5和R6和與它們相連的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，可形成一飽和的5-到8-元單環(huán)的通過(guò)N原子連接的N-雜環(huán)，它任選地含有-N(R11)-，其中R11是氫或C1-C6烷基，芐基，?；?，或氨基保護(hù)基團(tuán)，O,S,SO或SO2作為環(huán)上成員，和/或在一個(gè)或多個(gè)碳原子上被羥基，C1-C6烷基，羥基(C1-C6烷基)-，C1-C6烷氧基，氧，縮酮化的氧，氨基，單(C1-C6烷基)氨基，二(C1-C6烷基)氨基，羧基，C1-C6烷氧基羰基，羥甲基，C1-C6烷氧基甲基，氨基甲酰基，單(C1-C6烷基)氨基甲?；?，二(C1-C6烷基)氨基甲?；?，或羥亞胺基任選取代。
這些環(huán)的例子是取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氫-1-噠嗪基，嗎啉-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氫-1,4-噻嗪-4-基1,1-二氧，六氫吖庚因基，或八氫吖辛因基。前述被取代的例子是2-(甲基氨基甲酰基)-1-吡咯烷基，2-(羥基甲基)-1-吡咯烷基，4-羥基哌啶基，2-(甲基氨基甲?；?哌啶基，4-羥基亞氨基哌啶基，4-甲氧基哌啶基，4-甲基哌啶-1基，4-芐基哌啶-1-基，4-乙?；哙?1-基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4,5]癸-8-基，六氫-3-(甲基氨基甲?；?-2-噠嗪基，和六氫-1-(芐氧基羰基)-2-噠嗪基，十氫異喹啉-2-基，和1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基。
當(dāng)A是式(ⅠA)時(shí)，現(xiàn)在較佳的R5是甲基或氫，而R6是甲基。
R7可能是，例如，氫，或R20C(O)-基團(tuán)，其中R20是一(C1-C6)烷基，例如甲基或乙基。
根據(jù)本發(fā)明作為抗菌劑有效的化合物的特別例子包括本文的特定實(shí)施例的化合物。較佳的本發(fā)明的新穎化合物包括2R(或S)-[(甲?；?羥基-氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-乙基)-酰胺和2R(或S)-[(甲?；?羥基-氨基)-甲基]-3-環(huán)戊基-丙酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基丙基)-酰胺以及它們醫(yī)藥學(xué)和獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明提到的化合物可以通過(guò)對(duì)式(Ⅱ)的O-保護(hù)的N-甲酰-N-羥基氨基化合物去保護(hù)得到 其中R1,R2，和A如通式(Ⅰ)中定義的，R25是一羥基保護(hù)基團(tuán)，可通過(guò)氫解或水解除去，留下羥基基團(tuán)。對(duì)于通過(guò)氫解除去，芐基是較佳的R25基團(tuán)，而叔丁基和四氫吡喃基是通過(guò)酸水解除去的較佳基團(tuán)。式(Ⅱ)的化合物，其中A是式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的基團(tuán)，可以通過(guò)使式(Ⅲ)的酸或它的活性衍生物和式(ⅣA),(ⅣB),(ⅣC)或(ⅣD)的胺分別反應(yīng)來(lái)制備 其中R1R2,R3,R4,R5,R6和R7如通式(Ⅰ)定義的，除了在(ⅣB)中的-OH基團(tuán)，以及在R1R2,R3,R4,R5,R6和R7中的任一在偶聯(lián)反應(yīng)有潛在活性的取代基可能自身被保護(hù)以免發(fā)生這種反應(yīng)，而R25如在上面的式(Ⅱ)中定義的，以及任選地從在(ⅣB)的-OH基團(tuán)和R1R2,R3,R4,R5,R6和R7除去的保護(hù)基團(tuán)。
式(Ⅲ)的化合物可通過(guò)N-甲?；?Ⅴ)的化合物來(lái)制備，例如用乙酸酐和甲酸，或1-甲?；讲⑷?。 其中R1,R2和R25如式(Ⅱ)有關(guān)的定義。而X是手性輔助基團(tuán)或是OR26基團(tuán)，其中R26是氫或羥基保護(hù)基團(tuán)。在X是OR26基團(tuán)或手性輔助基團(tuán)的情況下，羥基保護(hù)基團(tuán)和手性輔助基團(tuán)在甲?；襟E后被除去，以提供式(Ⅴ)的化合物。合適的手性輔助基團(tuán)包括取代的噁唑烷酮，它可在堿存在的情況下通過(guò)水解除去。
在另一個(gè)過(guò)程中，通式(Ⅱ)的化合物可通過(guò)N-甲?；?Ⅵ)的化合物制備，例如用乙酸酐和甲酸，或1-甲酰基苯并三唑。 其中R1,R2和R25以及A如式(Ⅱ)有關(guān)的定義。式(Ⅵ)的化合物，其中A是式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)，或(ⅠD)的一個(gè)基團(tuán)，可通過(guò)使通式(Ⅶ)的酸或它的活化的衍生物 其中R1,R2和R25如式(Ⅱ)所定義，和式(ⅣA),(ⅣB),(ⅣC)或(ⅣD)的胺如上定義分別反應(yīng)來(lái)制備。
式(Ⅵ)的另一些化合物可通過(guò)還原式(Ⅷ)的肟來(lái)制備。 還原劑包括一些金屬氫化物(例如乙酸中的氰基氫硼化鈉，三乙基硅烷或硼烷/吡啶)和有適宜催化劑存在下的氫。
在另一過(guò)程中，通式(Ⅱ)的化合物，其中R1和R2如通式(Ⅰ)中定義，R25是如上定義的羥基保護(hù)基團(tuán)，而A是式(ⅠA)的基團(tuán)，其中R3,R4,R5如通式(ⅠA)所定義，而R6是氫。該化合物可通過(guò)如上定義的通式(Ⅲ)的羧酸，式(Ⅸ)的胺，式(Ⅹ)的醛和式(Ⅺ)的異腈的4-組分Ugi反應(yīng)來(lái)制備。R3-NH2(Ⅸ)R4-CHO(Ⅹ)R5-NC (Ⅺ)其中R3,R4和R5如上定義。
通式(Ⅴ)的化合物可通過(guò)通式(Ⅺ)的肟的還原反應(yīng)來(lái)制備。 其中R1,R2，和R25如上定義，而X是如上定義的OR26基團(tuán)或是手性輔助基團(tuán)。還原劑包括一些金屬氫化物(例如溶于乙酸中的氰基氫硼化鈉，三乙基硅烷或硼烷/吡啶)和有適宜催化劑存在下的氫。在還原反應(yīng)之后，當(dāng)基團(tuán)X是手性輔助基團(tuán)時(shí)，它可以任選地被轉(zhuǎn)換為OR26基團(tuán)。
通式(Ⅺ)的化合物可通過(guò)通式(Ⅻ)的β-酮基羰基類化合物 其中R1,R2，和X如上定義，和O-保護(hù)的羥胺反應(yīng)制備。
β-酮基羰基類化合物(Ⅻ)可通過(guò)用通式(XⅣ)的化合物在堿存在下，甲酰化或?；ㄊ?XⅢ)的羰基化合物(其中R2和X如上定義)，來(lái)制備其外消旋形式， 其中R1如上所定義，而Z是例如鹵素或烷氧基的離去基團(tuán)。
另一種制備通式(Ⅴ)的化合物的方法是通過(guò)Michael加成反應(yīng)將羥胺衍生物加到通式(ⅩⅤ)的α，β-不飽和羰基化合物上， 其中R1,R2，和X如上定義。在Michael加成反應(yīng)后，當(dāng)X基團(tuán)是手性輔助基團(tuán)時(shí)，可以任選地轉(zhuǎn)化為OR26基團(tuán)。α,β-不飽和的羰基化合物(ⅩⅤ)可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法制備。
本發(fā)明化合物的鹽包括生理學(xué)上可接受的酸加成鹽，例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，甲基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，磷酸鹽，乙酸鹽，檸檬酸鹽，琥珀酸鹽，乳酸鹽，酒石酸鹽，延胡索酸鹽和馬來(lái)酸鹽。鹽還可通過(guò)用堿形成，例如，鈉，鉀，鎂和鈣鹽。
本發(fā)明的組合物可以通過(guò)任何與活性成分的藥物動(dòng)力學(xué)特征一致的途徑來(lái)制造，并用于投藥。
可口服的組合物可采用片劑，膠囊，粉末，顆粒，錠劑，液體或凝膠制備劑，例如口服，外用，或無(wú)菌胃腸外溶液或懸浮液的形式?？诜钠瑒┖湍z囊可以是單位劑量的存在形式，還可以包含常規(guī)的諸如粘合劑的賦形劑，例如糖漿，阿拉伯樹(shù)膠，明膠，山梨醇，黃芪膠，或聚乙烯基吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸鈣，山梨醇或甘氨酸；片劑潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂，滑石粉，聚乙二醇或二氧化硅；分解劑例如土豆淀粉，或可接受的濕潤(rùn)劑例如月桂醇硫酸鈉。片劑可以根據(jù)在現(xiàn)有的藥物生產(chǎn)中廣為人知的方法來(lái)進(jìn)行包覆?？诜后w制備劑可以采用以下形式，例如水性的或油性的懸浮液，溶液，乳液，糖漿或酏劑，或可以在使用前用水或其它合適的載體重組的干制品形式存在。這樣的液體制品可包含有常規(guī)的添加劑，像懸浮劑，例如，山梨醇，糖漿，甲基纖維素，葡萄糖漿，明膠，氫化的食用脂肪；乳化劑，例如卵磷脂，縮水山梨醇一油酸酯，或阿拉伯樹(shù)膠；非水載體(可能包含食用脂肪)，例如杏仁油，分餾椰子油，油酯，例如甘油，丙二醇或乙醇；防腐劑，例如甲基或丙基對(duì)羥基安息香酸酯或山梨酸，和如需要的常規(guī)調(diào)味劑或色素。
為皮膚上的外用，活性成分可以被制成乳膏，洗液或油膏。藥用的乳膏或油膏配方在該領(lǐng)域中廣為人知，例如在標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)教科書(shū)中如英國(guó)藥典中描述的。
活性成分亦可通過(guò)在無(wú)菌媒介中不經(jīng)胃腸投藥。根據(jù)所用的載體和濃度，藥物可以懸浮或溶解在載體中。有利的是，輔助劑例如局部麻醉劑，防腐劑和緩沖劑可以溶于載體。靜脈輸液是根據(jù)本發(fā)明使用的藥物的另一途徑。
對(duì)不同種類的病人和對(duì)不同疾病狀態(tài)的安全和有效的劑量根據(jù)該領(lǐng)域所要求的，在臨床實(shí)驗(yàn)中決定?？梢岳斫獾氖牵瑢?duì)任一特別的病人，特異的劑量水平是由多種因子決定的，包括該特定化合物的活性，年齡，體重，一般健康狀況，性別，飲食，投藥的時(shí)間，投藥途徑，排泄率，藥物配伍和治療中的疾病的嚴(yán)重程度。
具有PDF抑制作用的化合物能抑制或防止細(xì)菌生長(zhǎng)的發(fā)現(xiàn)，打開(kāi)了一條通過(guò)在體外篩選實(shí)驗(yàn)化合物作為PDF抑制子的活性，然后用細(xì)菌生長(zhǎng)抑制研究來(lái)肯定它們的抗菌活性的方法，來(lái)鑒別新的抗菌劑的新途徑。本發(fā)現(xiàn)也使(ⅰ)用具有PDF抑制活性的化合物作為抗菌劑，以及(ⅱ)通過(guò)敷以或投以抑制細(xì)菌PDF活性的化合物來(lái)治療細(xì)菌感染或污染的方法成為可能。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種鑒別抗菌化合物的方法，包括在體外對(duì)測(cè)試化合物抑制PDF的活性進(jìn)行篩選，選擇那些顯示所述的活性的化合物，并測(cè)試它們抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的活性。抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的活性可通過(guò)用經(jīng)典的平板法或肉湯培養(yǎng)基細(xì)菌生長(zhǎng)抑制研究來(lái)進(jìn)行，例如本文生物學(xué)實(shí)施例中所進(jìn)行的。
合適的體外PDF抑制篩選包括將PDF,PDF底物，較好的是，用可見(jiàn)標(biāo)記物標(biāo)記，和測(cè)試化合物混合，在合適的時(shí)間長(zhǎng)度后檢測(cè)是否測(cè)試化合物的存在抑制了PDF使底物脫甲?；幕钚?。
在一優(yōu)選例中，分解的底物用熒光標(biāo)記物，例如熒光胺進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)從PDF底物的N-末端甲硫氨酸上除去甲?；鶊F(tuán)時(shí)，游離的氨基基團(tuán)與與熒光胺反應(yīng)產(chǎn)生熒光產(chǎn)物。
另一篩選涉及檢測(cè)由表達(dá)內(nèi)生的(或重組表達(dá)的)PDF的細(xì)菌表達(dá)的蛋白質(zhì)，當(dāng)在有測(cè)試化合物存在的情況下生長(zhǎng)的時(shí)候，是否產(chǎn)生適當(dāng)?shù)墓㎞-末端測(cè)序的底物，或比在沒(méi)有測(cè)試化合物的情況下生長(zhǎng)的同一細(xì)菌表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)生較少的底物。這種方法可用本文使用的生物實(shí)施例為基礎(chǔ)。
在該領(lǐng)域熟練的研究人員可以開(kāi)發(fā)，但不具有創(chuàng)造性加入，可選擇的篩選測(cè)試化合物抑制細(xì)菌PDF的活性的方法。
天然的抗生素放線酰胺素(見(jiàn)例子J.C.SPerkinl,1975,819)是結(jié)構(gòu)式(A)的異羥肟酸衍生物 除了放線酰胺素，多種放線酰胺素的結(jié)構(gòu)類似物也可見(jiàn)到有抗菌活性。(見(jiàn)例子Broughton等(Devlin等，化學(xué)學(xué)會(huì)雜志.佩金學(xué)報(bào)1(9):830-841,1975；Broughton等，化學(xué)學(xué)會(huì)雜志佩金學(xué)報(bào)1(9):857-860,1975)然而，至今放線酰胺素的抗菌活性的機(jī)制仍未知。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)放線酰胺素抑制細(xì)菌PDF的活性。
matlystatin族化合物和放線酰胺素有許多結(jié)構(gòu)上的相似。兩者都是有功能性異羥肟酸金屬結(jié)合基團(tuán)的肽鍵分子。(Ogita等，抗生素雜志45(11):1723-1732；Tanzawa等，抗生素雜志45(11):1733-1737；Haruyama等，抗生素雜志47(12):1473-1480；Tamaki等，抗生素雜志47(12):1481-1492)。matlystatins和它們結(jié)構(gòu)接近的類似物在分子中有具二價(jià)哌嗪-1,6-二基基團(tuán)存在的特征。例如 由于它們的與放線酰胺素極為相似的結(jié)構(gòu)，放線酰胺素抑制PDF的觀察意味著matlystatin化合物也能抑制PDF。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了在制備抗菌組合物或藥劑時(shí)，抑制細(xì)菌PDF的化合物的用處，條件是(ⅰ)該化合物不是式(Ⅺ)RCO-CH(W)-NH-CO-CH(Y)-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是環(huán)氨基(cyclic amino)基團(tuán)，W是氫，甲基，異丙基，異丁基或芐基，而Y是氫，C1-C6烷基，苯基，芐基，4-氯芐基，4-硝基芐基，或4-氨基芐基；或(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是異丙基而Y是正戊基；或(c)R是二乙基氨基，W是甲基或異丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)該化合物不是一個(gè)包含二價(jià)哌嗪-1,6-二基的基團(tuán)，例如，式(Ⅻ)的基團(tuán) 本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了治療細(xì)菌感染或污染的方法，通過(guò)對(duì)患有此類感染或污染的病人投以，或?qū)@些感染或污染的區(qū)域敷以，能抑制細(xì)菌PDF酶活性的化合物的抗菌有效的藥量。條件是該化合物不是在下一段的限制性條款中提供的化合物。
這些限制性條款排除了放線酰胺素和它的抗菌活性的類似物，如在Devlin等，化學(xué)學(xué)會(huì)雜志，佩金學(xué)報(bào)1(9):830-841,1975和Broughton等，化學(xué)學(xué)會(huì)雜志，佩金學(xué)報(bào)1(9):857-860,1975，中公開(kāi)的，和matlystatin化合物如在Ogita等，抗生素雜志.45(11):1723-1732；Tanzawa等，抗生素雜志.45(11):1733-1737；Haruyama等，抗生素雜志47(12):1473-1480和Tamaki等，抗生素雜志47(12):1481-1492中公開(kāi)的。
下面的實(shí)施例闡明了本發(fā)明的優(yōu)選例。
L-叔-亮氨酸-N-甲基酰胺和L-叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺以及其它的氨基酸衍生物根據(jù)確定的文獻(xiàn)方法制備。
下列縮寫被全文使用DMF N,N-二甲基甲酰胺EDC N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽HOAt1-羥基-7-氮雜-苯并三唑HOBt1-羥基苯并三唑HPLC高效液相色譜LRMS低分辨質(zhì)譜TLC 薄層色譜1H和13C核磁共振譜用BrukerAC250E分光計(jì)分別在250.1和62.9MHz記錄。用一PerkinElmerSciexAPl165分光計(jì)同時(shí)在正和負(fù)離子模式下獲得質(zhì)譜。紅外光譜用PerkinElmerPE1600FTIR分光計(jì)記錄。
實(shí)施例12R(或S)-[(甲?；?羥基-氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-甲基-氨基甲酰基-丙基)-酰胺 該標(biāo)題化合物根據(jù)在流程1中描述的途徑制備并如下詳述
流程1 試劑和反應(yīng)條件A.哌啶，HCHO,EtOH,80℃,o/n；B.H2NOBzl,80℃ o/n；C.HCOOH,Ac2O；D.五氟苯酚，EDC,CH2Cl2；E.H-叔-LeuNHMe,DMF,35℃；F.H2,10％Pd/C,EtOAc/EtOH.
步驟A:2-丁基-丙烯酸將丁基丙二酸(25g,156mmol)溶于乙醇(250ml)，加入37％甲醛溶液(15.45ml,156mmol)，再加入哌啶(47ml,624mmol)?；旌衔镌?0℃在回流冷凝器中攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余物用1M鹽酸稀釋，然后用二氯甲烷(3×30ml)抽提。合并的有機(jī)抽提物用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)，得到黃色油狀的目的產(chǎn)物(25g，有殘余溶劑)。1H-NMR:δ(CDCl3),10.04(1H,brs),6.22(1H,s),5.57(1H,d,J=1.3Hz),2.30(2H,t,J=6.9Hz),1.38(4H,m),和0.91(3H,t,J=7.2Hz)。
步驟B:2RS-(芐氧基-氨基-甲基)-己酸將2-丁基丙烯酸(3.43g,27.1mmol)和O-芐基羥胺(5g,40.65mmol)的混合物80℃加熱過(guò)夜。將混合物冷至室溫，用乙酸乙酯(40ml)稀釋，然后用1M鹽酸(3×20ml)，飽和碳酸氫鈉溶液(2×20ml)和鹽水(2×20ml)洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾，蒸發(fā)后得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(2.62g,39％)。1H-NMR:δ(CDCl3),8.05(1H,brs),7.35(5H,m),5.00(2H,m),3.28(2H,m),2.981H,m),1.31(6H,m)和0.88(3H,t,J=5.0Hz)。
步驟C:2RS-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-己酸將2RS-(芐氧基氨基-甲基)-己酸(2.62g,10.51 mmol)溶于甲酸(4ml,105mmol)和乙酸酐(1.9ml,21.02mmol)，室溫下攪拌過(guò)夜。溶液用乙酸乙酯(40ml)稀釋，用水(2×20ml)，飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，剩下黃色油狀的目的產(chǎn)物(2.9g,99％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.21(0.5H,s),8.14(0.5H,s),7.37(5H,m),4.98(2H,m),3.86(1H,m),3.27(0.5H,dd,J=6.0,14.0Hz),2.93(0.5H,m),2.77(1H,m),1.50(2H,m),1.30(4H,m)和0.88(3H,m)。
步驟D:2RS-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-己酸五氟苯酯將2RS-[(芐氧基-甲酰基氨基)-甲基]己酸(30.72g,110mmol)和五氟苯酚(26.31g,143mmol)溶于二氯甲烷(150ml)。加入EDC(25.3g,131mmol)時(shí)將溶液攪拌并在冰浴內(nèi)冷卻。將反應(yīng)混合物溫至室溫，攪拌過(guò)夜。溶液用1M鹽酸(2×50ml)，0.5M碳酸鈉(2×50ml)和鹽水(50ml)依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾。濾液減壓蒸發(fā)，剩余物用快速色譜(硅膠，二氯甲烷)純化，得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(15.0g,31％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.17(1H,brs),7.37(5H,m),4.95-4.70(2H,brm),4.10-3.75(2H,brm),3.10(1H,brs),1.88-1.55(2H,m),1.39(4H,m)和0.92(3H,t,J=7.0Hz)。
步驟E:2R(或S)-[(芐氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基-氨基甲?；?丙基)-酰胺將2RS-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-己酸五氟苯酯(5g,11mmol)和叔-亮氨酸N-甲基酰胺(1.62g,11mmol)溶于DMF(60ml)，將混合物在35℃攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余物在二氯甲烷中重溶解。溶液用0.5M碳酸鈉，1.0M鹽酸和鹽水依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾。用快速色譜(硅膠，洗滌梯度是30％到0％的正己烷溶于乙酸乙酯)來(lái)分離兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體的產(chǎn)物。非對(duì)映異構(gòu)體A(高Rf)1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.12,7.87(1H,2brs),7.27(5H,m),6.26(1H,d,J=8.7Hz),5.78(1H,brs),4.91-4.60(2H,brm),4.15(1H,d,J=9.2Hz),3.75(2H,brm),2.79(3H,d,J=4.8Hz),2.56(1H,m),1.60-1.35(2H,brm),1.24(4H,m),0.96(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.7Hz)。非對(duì)映異構(gòu)體B(低Rf):1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.16,7.88(1H,2brs),7.27(5H,m),6.28(1H,d,J=8.9Hz),5.70-5.44(1H,brs),4.98-4.61(2H,brm),4.14(1H,d,J=9.2Hz),3.78-3.62(2H,brm),2.85-2.60(3H,brm),2.47(1H,m),1.72-1.25(6H,brm),0.98(9H,s)和0.88(3H,t,J=6.7Hz)。
步驟F:2R(或S)-[(甲?；u基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-甲基氨基甲?；?丙基)-酰胺將2-[(芐基-甲?；被?-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基氨基甲酰基-丙基)-酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體A)(1.0g,2.5mmol)溶于乙酸乙酯(20ml)和乙醇(1ml)的混合物。溶液被置于氬氣中。加入10％鈀炭，將細(xì)氫氣氣流以氣泡流過(guò)懸浮液。40分鐘后的TLC分析顯示所有的起始材料被消耗，留下一更加極性的，氯化高鐵陽(yáng)性的物質(zhì)。系統(tǒng)用氬氣沖洗，通過(guò)過(guò)濾除去催化劑。濾液蒸發(fā)至干，剩下白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(810mg，包括殘余溶劑)。1H-NMR:δ((CD3)2SO，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.81,9.41(1H,2brs),7.82-7.60(3H,m),4.04(1H,d,J=9.3Hz),3.50-3.02(2H,m),2.87-2.60(1H,m),2.41(3H,d,J=4.5Hz),1.39-0.936H,m),0.75(9H,s)和0.67(3H,t,J=5.7Hz).13C-NMR:δ((CD3)2SO),172.5,170.2,157.5,59.9,42.8,33.3,29.0,28.4,28.2,26.4,24.8,21.7和13.3.1R(KBr片),Vmax3309,2959,2873,1646和1540cm-1。
將2-[(芐氧基-甲酰基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1-甲基氨基甲?；?丙基)-酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體B)(1.0g,2.5mmol)(1.0g,2.5mmol)類似的去保護(hù)，得到標(biāo)題化合物的非對(duì)映異構(gòu)體B(740mg,97％)。1H-NMR:δ((CD3)2SO，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.75,9.30(1H,2brs),7.81-7.42(3H,m),4.04(1H,d,J=9.5Hz),3.53-3.02(2H,m),2.80-2.55(1H,m),2.41(3H,d,J=4.5Hz),1.33-0.82(6H,m),0.72(9H,s)和0.67(3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR:6((CD3)2SO),172.6,170.4,161.7,157.0,59.8,34.0,29.4,28.6,26.7,25.2,22.1和14.1.IR(KBr片),vmax3312,2959,1640,1541,1369和1240cm-1。
實(shí)施例22R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸-(2,2-二甲基-1S-叔丁基-氨基甲?；?丙基)-酰胺 標(biāo)題化合物用類似實(shí)施例1的方法制備，采用L-叔亮氨酸-N-叔丁基酰胺代替在步驟E中的L-叔亮氨酸-N-甲基酰胺。非對(duì)映異構(gòu)體不能用快速色譜(硅膠，乙酸乙酯)分離，而是通過(guò)氫解轉(zhuǎn)換成目的N-甲?；u胺衍生物的混合物。白色固體13C-NMR:δ((CD3)2SO),172.8,172.5,170.1,169.6,161.6,156.9,59.9,59.7,51.9,51.7,50.2,49.6,48.3,43.2,43.1,42.7,34.2,34.0,29.6,29.3,29.2,28.8,28.6,26.7,22.2,22.1,20.3和13.9.IR(KBr),Vmax3311,2964,1639,1548,1456,1394,1364和1226cm-1。
實(shí)施例32R(或S)-[(甲酰基羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-甲基-2-嗎啉-4-基-2-氧-乙基)-酰胺 將2RS-[(芐氧基甲?；被?-甲基]-己酸五氟苯酯(實(shí)施例1，步驟D)(445mg,1mmol)溶于DMF(5ml)的溶液加到一蒸煮管中的L-丙氨酸-N-嗎啉代酰胺(158mg,1mmol)中，然后35℃攪拌過(guò)夜。真空除去DMF，剩余物在二氯甲烷(2ml)中重新溶解，通過(guò)一純化柱(Isolute-NH2)，用二氯甲烷(4ml)洗滌，來(lái)除去五氟苯酚。減壓除去二氯甲烷，剩余物在甲酸(2ml)和乙酸乙酯(2ml)中重新溶解。溶液用10％鈀炭(200mg)處理，室溫下攪拌2小時(shí)。催化劑通過(guò)硅藻土濾過(guò)除去，用甲醇充分洗滌，真空除去溶劑?；衔镉梅聪郒PLC(洗脫梯度，10-90％乙氰/水).非對(duì)映異構(gòu)體A:1H-NMR；δ(CD3OD),8.03(0.5H,s),7.84(0.5H,s),4.75(1H,m),3.65(8H,m),3.39(1H,m),3.24(1H,dd,J=4.0,13.2Hz),2.84(1H,m),1.57(2H,m),1.34(7H,m),和0.92(3H,m)。LRMS:-veion 328[M-H]。非對(duì)映異構(gòu)體B:1H-NMR；δ(CD3OD),3.66(8H,m),3.41(1H,dd,J=9.98,13.1Hz),3.23(1H,m),2.90(0.5H,m),2.71(0.5H,m),1.62(2H,m),1.33(7H,m),和0.92(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例4到12的化合物是通過(guò)和實(shí)施例3類似的方法制備的，用合適的胺組分取代了L-丙氨酸-N-嗎啉代酰胺。在同時(shí)制備兩種非對(duì)映異構(gòu)體的情況下，非對(duì)映異構(gòu)體A更快被洗提，且有更好的在體外抗PDF的能力。在一些例子中，僅有走的更快的非對(duì)映異構(gòu)體被取出成為最終產(chǎn)物。
實(shí)施例42R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?乙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:δ(CD3OD),4.72(1H,m),3.53(1H,dd,J=8.9,13.0Hz),3.23(1H,m),3.14(3H,s),2.95(3H,s),2.83(0.5H,m),2.74(0.5H,m),1.57(2H,m),1.33(7H,m)和0.92(3H,m)。LRMS；+ve ion 288[M+H],-ve ion286[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B:1H-NMR；δ(CD3OD),4.74(1H,m),3.41(1H,dd,J=9.9,13.0Hz),3.25(1H,dd,J=4.0,13.1Hz),3.15(3H,s),2.97(3H,s),2.89(0.5H,m),2.72(0.5H,m),1.53(2H,m),1.33(7H,m)和0.93(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:+ve ion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
實(shí)施例52R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-羥甲基-3-甲基-丁基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:1H-NMR；δ(CD3OD),4.07(1H,m),3.55(1H,m),3.45(2H,m),3.20(1H,m),2.85(0.5H,m),2.80(0.5H,m),1.60(3H,m),1.35(6H,m)和0.93(9H,m)。LRMS:+ve ion 289[M+H],-ve ion 287[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B:1H-NMR；δ(CD3OD),4.07(1H,m),3.59(1H,m),3.45(2H,m),3.24(1H,m),2.70(1H,m),1.62(3H,m),1.35(6H,m)和0.93(9H,m)。LRMS:+ve ion 311[M+Na],289[M+H],-ve ion 287[M-H]。
實(shí)施例62R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-羥甲基-2-苯基-乙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:1H-NMR；δ(CD3OD),7.24(5H,m),4.15(1H,m),3.54(2H,d,J=5.4Hz),3.38(1H,dd,J=7.8,13.1 Hz),3.14(1H,dd,J=4.7,13.2Hz),2.95(1H,dd,J=7.3,13.7Hz),2.68(2H,m),1.58(2H,m),1.32(4H,m),和0.91(3H,t,J=6.7Hz)。LRMS:+ve ion 345[M+Na],323[M+H],-ve ion 321[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B:LRMS:+ve ion 345[M+Na],323[M+H],-ve ion 321[M-H]。
實(shí)施例72R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-吡啶-2-基-氨基甲酰基)-丙基]-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CD3OD),8.34(1H,m),8.06(1H,m),7.90(1H,m),7.33(1H,m),4.45(1H,s),3.55(1H,dd,J=8.3,13.2Hz),3.25(1H,m),3.05(1H,m),1.61(2H,m),1.32(4H,m),1.11(9H,s)和0.85(3H,m)。LRMS:+ve ion 379[M+H],-ve ion 377[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CD3OD),8.33(1H,m),8.20(0.5H,m)7.93(1H,m),7.41(0.5H,m),7.28(1H,m),4.48(1H,s),3.52(1H,dd,J=8.8,13.1Hz),3.23(1H,dd,J=3.9,13.1Hz),3.05(0.5H,m),2.87(0.5H,m),1.62(2H,m),1.36(4H,m),1.11(9H,s)和0.93(3H,m)。LRMS:+ve ion 393[M+Na],379[M+H],-ve ion 377[M-H]。
實(shí)施例82R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2-甲基-丙基)酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 338[M+Na],-ve ion 319[M-H]。
實(shí)施例92R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨甲?；?2-苯基-乙基)酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 386[M+Na],-ve ion 362[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 386[M+Na],-ve ion 362[M-H]。實(shí)施例102R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?3-甲基-丁基)酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例112R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[3-甲基-1/S-吡咯烷-1-羰基)-丁基]酰胺
非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:-ve ion 354[M-H].。
實(shí)施例121-{2R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己?；鶀-吡咯烷-2S-羧酸二甲基酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。
實(shí)施例132R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 方法1標(biāo)題化合物的合成途徑在流程2中略述，在下文詳述。
流程2 A.HCOOEt,NaOEt；B.HCl,NHOBzl,NaOAc,aq.EtOH；C.NaOH,MeOH；D.H-TleMe2,EDC,HOAt,DMF；E.NaCNBH3,AcOH然后分離非對(duì)映異構(gòu)體；F.HCOBt,THF；G.H2,Pd/C,MeOH.
步驟A:2RS-甲酰基-庚酸乙酯將金屬鈉(4.38g,0.191mmol)切成小片，放在一個(gè)爐火烘干的二頸圓底燒瓶中的一層氬氣下。加入無(wú)水乙醚(100ml)，攪拌懸浮液，冷至0℃。燒瓶裝置回流冷凝器，然后逐滴加入乙醇(1.03ml,17.3mmol)。通過(guò)滴液漏斗，在大約20分鐘內(nèi)，逐滴加入甲酸乙酯(15.41g,0.208mmol)和己酸乙酯(25g,0.173mmol)的混合物。得到的桔紅懸浮液(金屬鈉依然可見(jiàn))溫至室溫，攪拌過(guò)夜。得到的稠狀桔紅色懸浮液(無(wú)金屬鈉可見(jiàn))冷至0℃，用冰水(100ml)稀釋?；旌衔镛D(zhuǎn)移至另一分液漏斗，除去水相，用乙醚洗滌，冷至0℃，用1M鹽酸(200ml)酸化。乳液用乙酸乙酯抽提，分離桔紅色層，用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并過(guò)濾。濾液減壓濃縮，得到主要包含標(biāo)題化合物的黃色油(11.09g)，不經(jīng)進(jìn)一步純化在步驟B中使用。
步驟B:2RS-(芐氧基亞氨基)-庚酸乙酯將從步驟A得到的Claisen粗產(chǎn)物(11.0g,63.9mmol)溶于乙醇(100ml)和水(10ml)，在加入醋酸鈉(6.2g,76.6mmol)和O-芐基羥基胺鹽酸鹽(12.23g,76.6mmol).時(shí)冷至0℃。混合物溫至室溫，攪拌過(guò)夜。得到的懸浮液經(jīng)過(guò)濾，濾液減壓濃縮。剩余的黃色膏狀物在乙酸乙酯和水間分配。有機(jī)相用1M鹽酸和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)，成為一黃色油狀物。目的產(chǎn)品用快速色譜(硅膠，洗脫梯度10％到25％正己烷中的乙酸乙酯)獲得。產(chǎn)量9.19g(52％)。1H-NMR:δ(CDCl3，順式和反式異構(gòu)體的混合物)，7.46(0.6H,d,J=8.0Hz),7.38-7.28(5H,m),6.79(0.4H,d,J=7.1Hz),5.11(0.8H,s),5.08(1.2H,s),4.16(1.2H,q,J=7.0Hz),4.13(0.6H,q,J=7.0Hz),3.91(0.4H,q,J=7.2Hz),3.21(0.6H,td,J=8.0和6.1Hz),1.90-1.48(2H,m),1.37-1.20(7H,m),0.87(3H,t,J=7.0Hz)。
步驟C:2RS-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸將2RS-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸乙酯(7.0g,25.24mmol)溶于甲醇(125ml)，將溶液冷至0℃。用2分鐘分部加入1M氫氧化鈉(26ml,26mmol)，得到淡黃色乳液。加入額外的甲醇，直到得到澄清溶液。溶液在0℃攪拌90分鐘，然后在室溫下攪拌5小時(shí)，這時(shí)TLC分析顯示所有的起始材料都被消耗。減壓除去溶劑，剩余物在水和乙酸乙酯間分配。水層冷卻到0℃，用1M鹽酸酸化。形成的乳狀液用乙酸乙酯提取?；旌系挠袡C(jī)抽提物用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，并過(guò)濾。濾液減壓濃縮，得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(5.15g,82％)，不經(jīng)進(jìn)一步在步驟D中純化使用。1H-NMR:δ(CDCl3，順式和反式異構(gòu)體的混合物)，8.00(1H,brs),7.46(0.6H,d,J=7.9Hz),7.36-7.24(5H,m),6.80(0.4H,d,J=7.0Hz),5.13(0.8H,s),5.09(1.2H,s),3.94(0.4H,q,J=7.1Hz),3.27(0.6H,td,J=6.4和8.0Hz),1.94-1.58(2H,m),1.48-1.24(4H,m)和0.94-0.84(3H,m)。
步驟D:2RS-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺將2-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸(5.16g,20.7mmol)，叔亮氨酸N,N-二甲基酰胺(3.60g,22.77mmol)和EDC(4.76g,24.84mmol)在DMF(75ml)中攪拌，冷至0℃。加入HOAt(250mg,cat.)，亮黃色混合物被溫至室溫，攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余的油在乙酸乙酯和1M鹽酸間分配。有機(jī)相用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮至干。用快速色譜(硅膠，洗脫梯度用33％到66％的正己烷中的乙酸乙酯)得到的無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物。產(chǎn)量6.84g(85％)。1H-NMR:δ(CDCl3，順式和反式異構(gòu)體的混合物)，7.45(0.6H,2d),7.40-7.26(5H,m),6.72(0.4H,2d),6.58(1H,m),5.20-4.69(3H,m),3.82(0.4H,m),3.16-3.10(3H,m),3.05(0.6H,m),2.99-2.92(3H,m),1.90-1.54(2H,m),1.39-1.17(4H,m),0.97(2.7H,s),0.96(1.8H,s),0.94(2.7H,s),0.92(1.8H,s)和0.92-0.82(3H,m)。
步驟E:2R(或S)-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺在溶于乙酸(40ml)的2RS-(芐氧基亞氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺(5.0g,12.84mmol)中一次加入氰基硼氫化鈉(2.02g,32.0mmol)。在1小時(shí)的過(guò)程中，反應(yīng)物緩慢溶解，伴有輕微氣泡，形成一無(wú)色溶液，攪拌過(guò)夜。減壓，與甲苯共沸，以除去溶劑。剩余油狀物在乙醚和1M碳酸鈉(注意！-產(chǎn)生一些氣體)之間分配。有機(jī)層用鹽水洗滌(70ml)，用鹽水洗滌過(guò)后，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮至干燥。標(biāo)題化合物的兩種非對(duì)映異構(gòu)體用快速色譜純化并分離(硅膠，洗脫梯度為50％to100％正己烷中的乙酸乙酯)。
非對(duì)映異構(gòu)體A(快洗提)無(wú)色油狀物(2.27g,45％)。1H-NMR:δ(CDCl3),7.43-7.28(5H,m),6.76(1H,brd,J=9.4Hz),5.69(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.4Hz),4.72(2H,s),3.15(3H,s),3.18-3.00(2H,m),2.96(3H,s),2.49(1H,m),1.66-1.49(2H,m),1.46-1.19(4H,m),0.99(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.8Hz。
非對(duì)映異構(gòu)體B(慢洗提)無(wú)色油狀物(1.44g,46％)。1H-NMR:δ(CDCl3),7.40-7.27(5H,m),6.70(1H,brd,J=9.0Hz),5.99(1H,brs),4.85(1H,d,J=9.0Hz),4.71(2H,d,J=1.6Hz),3.16(3H,s),3.06-2.97(2H,m),2.95(3H,s),2.57(1H,m),1.74-1.21(6H,m),1.00(9H,s)和0.88(3H,brt,J=6.7Hz)。
步驟F:2R(或S)-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-庚酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺將2-(芐氧基氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體A)(2.02g,5.13mmol)溶于無(wú)水THF(50ml)，置于一層氬氣之下。加入N-甲?；讲⑷?A.R.Katritzky等，合成1995,503)(0.83g,5.65mmol)，混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。減壓蒸發(fā)溶劑，剩余油狀物在二氯甲烷和1M氫氧化鈉分配。有機(jī)層用更多的氫氧化鈉和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮至干。標(biāo)題化合物用快速色譜以白色晶狀固體的形式得到。(硅膠，用33％正己烷中的乙酸乙酯來(lái)洗脫)。產(chǎn)量為1.60g(74％).。1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.00(1H,brm),7.47-7.29(5H,m),6.25(1H,brd,J=9.3Hz),5.08-4.74(2H,brm),4.87(1H,d,J=9.4Hz),3.89-3.52(2H,brm),3.13(3H,s),2.94(3H,s),2.54(1H,m),1.67-1.11(6H,m),0.95(9H,s)和0.85(3H,brt,J=6.9Hz)。
2-(芐氧基氨基-甲基)-庚酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體B)由步驟E中的慢洗提的非對(duì)映異構(gòu)體類似制備。產(chǎn)量為0.38g(41％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.00(1H,brm),7.47-7.28(5H,brm),6.29(1H,brd,J=9.3Hz),5.01-4.63(2H,brm),4.88(1H,d,J=9.3Hz),3.82-3.51(1.5H,brm),3.20-2.78(6.5H,brm),2.50(1H,brm),1.76-1.17(6H,brm),0.97(9H,s)和0.85(3H,brt,J=6.7Hz)。
步驟G:2R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)酰胺將2-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-庚酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體A)(1.43g,3.41mmol)溶于甲醇(50ml)，置于一層氬氣之下。加入10％鈀炭(100mg，大約)(懸浮在乙酸乙酯(2ml))中的懸浮液，劇烈攪拌混合物，同時(shí)在溶液中鼓入氫氣氣泡。10分鐘后，將混合物置于氫氣中，繼續(xù)攪拌3小時(shí)。此時(shí)TLC分析顯示所有的起始材料被消耗。體系用氬氣凈化，并過(guò)濾除去催化劑。濾液減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物的無(wú)色吸濕性泡沫(1.11g,99％)。1H-NMR:δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.41(0.35H,s),7.83(0.65H,brs),6.80(0.35H,brd,J=8.9Hz),6.62(0.65H,brd,J=9.4Hz),4.91(0.65H,brd,J=9.4Hz),4.88(0.35H,brd,J=8.9Hz),4.04(1H,dd,J=14.7和7.4Hz),3.82(0.65,dd,J=14.0和9.7Hz),3.56(0.35H,dd,J=14.7和3.3Hz),3.48(0.65H,dd,J=14.0和4.0Hz),3.16(1.05H,s),3.15(1.95H,s),2.98(1.05H,s),2.96(1.95H,s),2.90-2.74(0.65H,brm),2.74-2.61(0.35H,brm)1.73-1.17(6H,brm),0.99(3.15H,s).0.95(5.85H,s)和0.87(3H,brt,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3),174.6,171.2,162.2,157.2,60.1,54.5,54.3,52.3,48.4,44.8,44.3,35.6,35.4,29.6,29.0,26.3,20.8,20.2,14.0和13.7。LRMS:+ve ion 352(M+Na),-ve ion 328(M-H)。
2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸-(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)酰胺(非對(duì)映異構(gòu)體B)由步驟E中的非對(duì)映異構(gòu)體B類似制備。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.37(0.5H,s),8.40(0.5H,s),7.75(0.5H,brs),6.62(0.5H,brs),6.41(0.5H,brd,J=7.1Hz),4.87(0.5H,brd,J=6.6Hz),4.66(0.5H,brd,J=7.6Hz),3.84-3.39(2H,m),3.21(1.5H,brs),3.14(1.5H,brs),2.98(3H,brs),2.91-2.54(1H,m),1.79-1.23(6H,m)和1.08-0.83(12H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),174.9,173.3,56.3,54.8,51.6,50.3,45.545.1,38.6,38.4,36.2,36.0,35.3,34.4,29.5,29.4,29.3,29.2,26.6,26.5,22.6,22.5和13.9。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
方法Ⅱ?qū)嵤├?3化合物的另一不對(duì)稱的合成途徑在流程3中略述，在下文詳述。
流程3 試劑和反應(yīng)條件A.哌啶，HCHO,EtOH,80℃,o/n；B.tBuCOCl,Et3N，然后3-鋰-4-芐基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮；C.H2NOBzl，室溫，o/n，然后pTsOH,EtOAc；D.LiOH,aq.THF,0℃；E.H-TleNMe2,HOBt,EDC,DMF；F.HCOBt,THF；G.H2,Pd/C,EtOH.
步驟A:2-丁基丙烯酸在溶于乙醇(200ml)的正丁基丙二酸(17.2g,107mmol)中加入哌啶(12.76ml,129mmol)和37％水溶的甲醛(40.3ml,538mmol)。溶液被熱至80℃，在此時(shí)間中，出現(xiàn)沉淀，而后在1小時(shí)后完全溶解。反應(yīng)混合物在80℃攪拌過(guò)夜，然后冷至室溫。減壓除去溶劑，剩余物溶于乙酸乙酯(200ml)，依次用1M鹽酸，鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾。濾液經(jīng)濃縮得到澄清油狀的標(biāo)題化合物(13.37g,97％)。1H-NMR；δ(CDCl3),6.29(1H,s),5.65(1H,s),2.34-2.28(2H,m),1.54-1.26(4H,m)和0.94(3H,t,J=7.1Hz)。
步驟B:4S-芐基-3-(2-丁基丙烯?；?-5,5-二甲基噁唑烷-2-酮將2-丁基丙烯酸(21.5g,168mmol)溶于干THF(500ml)，在一層氬氣下冷至-78℃。以使溫度保持在-60℃以下的速率加入三乙胺(30ml,218mmol)和三甲基乙酰氯(21ml,168mmol)。-78℃攪拌混合物30分鐘，溫至室溫保持2小時(shí)，最后再冷至-78℃。
在另一燒瓶中，將4S-芐基-5,5-二甲基噁唑烷-2-酮溶于干THF(500ml)，并在一層氬氣下冷至-78℃。緩慢加入正丁基鋰(2.4M正己烷溶液，83ml，200mmol)室溫下攪拌混合物30分鐘。得到的陰離子利用套管轉(zhuǎn)入原始的反應(yīng)容器中。反應(yīng)物溫至室溫，在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)用1M碳酸氫鉀(200ml)終止，減壓除去溶劑。剩余物在乙酸乙酯和水之間分配。有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮，得到一桔紅色油狀物。TLC分析顯示在要求的產(chǎn)物外還有未反應(yīng)的手性輔助劑存在。將該材料的一部分(30g)溶于二氯甲烷，沖過(guò)一硅膠板，得到一黃色油狀的純凈標(biāo)題化合物(25.3g)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.31-7.19(5H,m),5.41(2H,s),4.51(1H,dd,J=9.7,4.2Hz),3.32(1H,dd,J=14.2,4.2Hz),2.82(1H,dd,J=14.2,9.7Hz),2.40-2.34(2H,m),1.48-1.32(4H,m),1.43(3H,s),1.27(3H,s)和0.91(3H,t,J=7.1Hz)。一些手性輔助劑通過(guò)和甲醇一起沖過(guò)硅膠板被回收。
步驟C:4S-芐基-3-[2-(芐氧基氨基-甲基)-己?；鵠-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(對(duì)甲苯磺酸鹽)將4S-芐基-3-(2-丁基丙烯?；?-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(19.8g,62.8mmol)和O-芐基羥胺(15.4g,126mmol)混合，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜?；旌衔锶苡谝宜嵋阴?，用1M鹽酸，1M碳酸鈉和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾。濾液減壓濃縮，形成淡黃色油狀物(25.3g)，由NMR和HPLC分析，包含4S-芐基-3-[2-(芐氧基氨基-甲基)-己?；鵠-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(約82％d.e.)，以及微量的起始材料。產(chǎn)物和另一批(26.9g,76％d.e.)合并，并溶于乙酸乙酯(200ml)。加入對(duì)甲苯磺酸(22.7g,119mmol)，將混合物冷至0℃。通過(guò)投入晶種并刮擦得到標(biāo)題化合物的白色晶狀固體。產(chǎn)量25.2g,(34％，單非對(duì)映異構(gòu)體)。還得到第二批產(chǎn)物(14.7g,20％，單非對(duì)映異構(gòu)體)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.89(2H,d,J=8.2Hz),7.37-7.12(10H,m),7.02(2H,d,J=6.9Hz),5.28-5.19(2H,m),4.55(1H,m),4.23(1H,m),3.93(1H,m),3.58(1H,m),2.58(1H,m),2.35(3H,s),1.67-1.51(2H,m),1.29-1.16(4H,m),1.25(3H,s),1.11(3H,s)和0.80-0.75(3H,m)。步驟D:2R-芐氧基氨基-甲基)-己酸4S-芐基-3-[2R-(芐氧基氨基-甲基)-己酰基]-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮對(duì)甲苯磺酸鹽(25.2g,40.2mmol)在乙酸乙酯和1M碳酸鈉之間分配。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)。剩余油狀物溶于THF(150ml)和水(50ml)，冷至0℃，用氫氧化鋰(1.86g,44.2mmol)處理。溶液在0℃攪拌30分鐘，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)用1M檸檬酸酸化至pH4，然后除去溶劑。剩余物在二氯甲烷和1M碳酸鈉間分配。堿性的水相層用檸檬酸酸化至pH4，用乙酸乙酯抽提三次。合并有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮，得到無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(7.4g,73％)。1H-NMR；δ(CDCl3),8.42(2H,brs),7.34-7.25(5H,m),4.76-4.66(2H,m),3.20-3.01(2H,m),2.73(1H,m),1.70-1.44(2H,m),1.34-1.22(4H,m)和0.92-0.86(3H,m)。
步驟E:2R-(芐氧基氨基-甲基)-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-1-丙基)酰胺將2R-芐氧基氨基-甲基)-己酸(7.98g,31.8mmol)溶于DMF(150ml)，將溶液冷至0℃。加入EDC(6.1g,31.8mmol)和HOBt(430mg,3.2mmol)，攪拌混合物15分鐘。加入叔-亮氨酸-N,N-二甲基酰胺(5.53g,34mmol)，反應(yīng)溫至室溫，攪拌過(guò)夜。溶劑減壓除去，剩余物溶于乙酸乙酯，依次用1M鹽酸，飽和碳酸氫鈉和鹽水洗滌，干燥并過(guò)濾。除去溶劑以得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(8.7g,69％)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化在步驟F中使用。1H-NMR；δ(CDCl3),7.35-7.28(5H,m),6.77(1H,brd,J=9.2Hz),5.69(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.4Hz),4.72(2H,s),3.15(3H,s),3.10-3.00(2H,m),2.95(3H,s),2.49(1H,m),1.64-1.21(6H,m),0.99(9H,s)和0.86(3H,t,J=6.8Hz).
步驟F:2R-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-1-丙基)酰胺將2R-(芐氧基氨基-甲基)-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺(7.8g,19.9mmol)溶于干THF(100ml),并用1-甲?；?苯并三唑(3.08g,21.0mmol)處理。反應(yīng)物室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余物溶于乙酸乙酯，用2M氫氧化鈉溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮至干。該產(chǎn)物從乙醚-己烷中結(jié)晶(4.83g,57％分兩批獲得)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.12(0.6H,brs),7.89(0.4H,brs),7.37(5H,s),6.25(1H,d,J=9.3Hz),4.96(0.6H,brs),4.86(1H,d,J=9.4Hz),4.80(0.4H,brs),3.74(2H,brs),3.13(3H,s),2.94(3H,s),2.53(1H,m),1.38-1.21(6H,m),0.95(9H,s)和0.85(3H,t,J=6.9Hz)。注意小樣品從乙醚-己烷中結(jié)晶以得到適宜X-射線晶體衍射的晶體。證實(shí)立體化學(xué)如在此陳述。
步驟G:2R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-1-丙基)酰胺將2R-[(芐氧基-甲?；?-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-1-丙基)胺(4.72g,11.3mmol)溶于乙醇(80ml)，置于一層氬氣之下。加入10％鈀碳(940mg)，懸浮于乙酸乙酯(2ml)的懸浮液，在有氫氣鼓泡通過(guò)系統(tǒng)的情況下，劇烈攪拌混合物。30分鐘后，將懸浮液置于一氫氣球下，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。燒瓶用氬氣次掃化，然后過(guò)濾除去催化劑。濾液減壓濃縮，得到無(wú)色泡沫狀的標(biāo)題化合物，它在放置時(shí)結(jié)晶(3.65g,98％)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.32(0.4H,brs),8.41(0.4H,s),7.88(0.6H,brs),7.27(0.6H,s),6.75(0.4H,brd,J=8.8Hz),6.58(0.6H,brd,J=9.3Hz),4.89(1H,m),4.04(0.4H,m),3.82(0.6H,m),3.53(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.79(0.6,m),2.65(0.4H,m),1.78-1.58(6H,m),0.99(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.87,3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.8,173.3,172.0,55.4,54.9,52.2,48.8,46.3,38.9,38.8,36.3,36.1,30.3,30.2,29.7,26.9,23.0和14.3。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例14至27的化合物通過(guò)實(shí)施例13，方法1的類似方法制備，用合適的酯代替步驟A中的乙酸己酯。在兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體都被制備時(shí)，非對(duì)映異構(gòu)體A快洗脫，在體外通常有更強(qiáng)的抗PDF的能力。在一些例子中，只有快洗脫的非對(duì)映異構(gòu)體(步驟E)被制備到最終產(chǎn)物。
實(shí)施例142R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-環(huán)戊基-丙酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A。無(wú)色玻璃狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.33(0.4H,brs),8.94(0.6H,brs),8.40(0.4H,s),7.82(0.6H,s),6.82(0.4H,brd,J=8.6Hz),6.62(0.6H,brd,J=9.3Hz),4.90(1H,m),4.06(0.4H,brdd,J=14.7,7.3Hz),3.81(0.6H,brdd,J=14.0,9.7Hz),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.14(1.8H,s),2.97(1.2H,s),2.95(1.8H,s),2.80(1H,m),1.87-1.32(9H,m),1.16-0.95(2H,m),0.99(3.6H,s)和0.95(5.4H,s).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),172.9,171.3,55.0,54.5,52.0,48.6,45.4,44.2,38.5,38.4,37.9,37.6,36.4,36.3,35.8,35.6,35.5,32.7,32.6,26.5,26.4和25.1。LRMS:+ve ion 378[M+Na],-ve ion 354[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B.無(wú)色玻璃狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.30(0.6H,brs),8.41(0.6H,s),7.75(0.4H,s),6.52(0.4H,brd,J=8.7Hz),6.41(0.6H,brd,J=7.3Hz),4.85(0.4H,brd,J=9.5Hz),4.63(0.6H,brd,J=7.5Hz),3.85-3.40(2H,m),3.25-2.95(6H,3brs),2.78(1H,2brm),1.90-1.40(8H,m),1.30(1H,m),1.20-1.00(2H,m)和1.05-0.95(9H,2s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，174.9,173.3,172.8,56.5,54.7,51.5,50.5,44.7,44.6,38.6,38.4,38.0,37.8,36.2,36.0,35.7,35.5,35.3,34.3,33.0,32.9,32.4,32.3,30.9,26.6,26.5,25.1,25.0和24.9。LRMS:+ve ion 378[M+Na],-ve ion 354[M-H]。
實(shí)施例152R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-庚酸-(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A暗桔紅色油狀物。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.32(0.33H,s),7.76(0.67H,brs),6.78(0.33H,brd,J=9.1Hz),6.68(0.67H,brd,J=9.1Hz),4.87-4.79(1H,m),3.96(0.33H,brdd,J=14.6,7.6Hz),3.74(0.67H,brdd,J=13.9,9.7Hz),3.51-3.36(1H,m),3.09(1H,s),3.08(2H,s),2.90(1H,s),2.89(2H,s),2.86-2.55(1H,m),1.53-1.19(8H,brm),0.92(3H,s),0.88(6H,s)和0.79(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),174.3,172.0,170.5,170.4,54.0,53.5,53.4,50.8,49.7,47.4,44.9,43.8,37.5,37.4,34.8,34.7,34.6,30.6,29.2,29.1,25.8,25.5,21.4和12.9。LRMS:+ve ion 344M+H],-ve ion342[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B暗桔紅色油狀物。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.36(0.5H,s),7.74(0.5H,s),6.69(0.5H,brs),6.57(0.5H,brd,J=7.6Hz),4.89(0.5H,brs),4.70(0.5H,d,J=7.8Hz),3.76-3.40(2H,m),3.21(1.5H,s),3.16(1.5H,s),2.98(3H,s),2.81(1H,brs),2.72-2.60(1H,m),1.67(2H,brs),1.42-1.22(6H,m),1.02(4.5H,s),0.99(4.5H,s),0.90(1.5H,s)和0.87(1.5H,s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.2,173.8,173.1,56.5,55.1,52.3,51.1,50.6,45.8,45.5,39.0,38.9,36.6,36.3,35.6,34.9,32.1,32.0,30.1,29.9,27.4,27.4,27.0,26.9,22.9和14.3。LRMS:+ve ion 344[M+H],-ve ion342[M-H]。
實(shí)施例162R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-丙酸-(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A。白色吸濕性泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.40(0.33H,s),7.83(0.67H,brs),6.88(0.33H,brd,J=8.6Hz),6.69(0.67H,brd,J=9.2Hz),4.90(1H,t),4.06(0.33H,brdd,J=14.5,7.4Hz),3.82(0.67H,brdd,J=13.7,9.8Hz),3.57-3.44(1H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),2.98(1H,s),2.96(2H,s),2.87-2.63(1H,m),1.64-1.26(4H,brm),0.98(3H,s),0.94(6H,s)和0.90(3H,t,J=7.3Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.8,173.2,172.0,55.4,54.9,52.2,48.7,46.2,45.0,38.9,38.9,36.3,36.1,36.1,32.7,32.6,27.0,26.9,20.9,20.8和14.4。LRMS:+ve ion 338[M+Na],-ve ion 314[M-H]。實(shí)施例172R(或S)-[甲?；?羥基氨基)-甲基]-4-甲基-戊酸-(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A。白色吸濕性固體。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.41(0.4H,s),7.83(0.6H,s),6.65(0.4H,d,J=8.6Hz),6.55(0.6H,d,J=9.0Hz),4.91-4.83(1H,m),4.03-3.95(0.4H,m),3.84-3.74(0.6H,m),3.62-3.43(1H,m),3.16(1H,s),3.13(2H,s),2.98(1H,s),2.96(2H,s),2.89-2.79(0.6H,m),2.76-2.71(0.4H,m),1.69-1.34(1.8H,m),1.29-1.20(1.2H,m),1.0(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.93-0.88(6H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.8,173.3,172.0,171.7,55.5,55.0,52.4,49.1,44.3,43.2,39.5,39.4,38.9,38.8,36.3,36.1,27.0,26.9,26.3,26.0,23.1,23.0和22.8。LRMS:+ve ion352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例183-環(huán)己基-2R(或S)-[(甲酰羥基氨基)-甲基]-丙酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 白色固體。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.38(0.25H,s),7.82(0.75H,s),6.93(0.25H,d,J=8.9Hz),6.74(0.75H,d,J=8.9Hz),4.90(1H,d,J=9.4Hz),4.02(0.25H,dd,J=9.7,14.1Hz),3.78(0.75H,dd,J=9.7,14.1Hz),3.46(1H,m),3.15(3H,s),2.96(3H,s),2.92(1H,m),1.65(6H,m),1.20(5H,m),0.98(9H,s)和0.87(2H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，176.4,174.2,172.4,56.0,55.6,53.4,49.9,44.0,43.3,39.6,39.4,38.7,38.5,36.9,36.7,36.6,34.8,34.5,27.5,27.4和27.2。LRMS:+ve ion 370[M+H],368[M-H]。
實(shí)施例192R(或S)-環(huán)戊基-3-(甲酰羥基氨基)-丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A.。灰白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.22(0.33H,s),7.79(0.66H,s),4.89(1H,s),3.87(1H,m),3.50(1H,m),3.19(3H,s,),2.93(3H,s),2.82(0.66H,m),2.65(0.33H,m),1.89(2H,m),1.56(5H,m),1.24(2H,m)和0.98(9H,s).13C-NMR；δ(CD3OD,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),176.0,56.7,53.2,51.1,42.7,39.2,36.5,36.4,32.0,27.4,26.4和26.2.IR(反射片)Vmax3318,2953,1663,1628,1529,1367,1229,1142,1087,877cm-1。LRMS:+ve ion 364[M+Na],-ve ion 340[M-H]。實(shí)施例202R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-辛酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.40(0.4H,s),7.83(0.6H,s),6.88(0.4H,d,J=8.9Hz),6.68(0.6H,d,J=9.2Hz),4.90(1H,m),4.05(0.4H,m),3.81(0.6H,m),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.97(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.86(0.6H,m),2.69(0.4H,m),1.59-1.25(10H,m),1.14-0.95(9H,m)和0.89-0.77(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.2,172.9,171.6,171.4,54.9,54.5,54.3,52.0,48.4,46.1,45.7,45.1,44.7,39.7,38.5,38.4,35.8,35.6,35.6,31.7,31.5,30.2,30.1,29.1,29.1,27.0,26.4,22.4和14.0。LRMS:+ve ion 380[M+Na],358[M+H],-ve ion 356[M-H]。
實(shí)施例212R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-壬酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A棕色固體。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.30(0.4H,s),8.41(0.6H,s),7.83(0.4H,s),6.66(0.4H,d,J=8.9Hz),6.52(0.6H,d,J=9.7Hz),4.92-4.84(1H,m),4.06-3.97(0.4H,m),3.87-3.77(0.6H,m),3.63-3.45(1H,m),3.16(1.2H,s),3.14(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.86-2.74(0.6H,m),2.66-2.63(0.4H,m),1.95-1.25(12H,m),1.00-0.95(9H,m),和0.90-0.84(3H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),175.5,172.8,171.4,162.2,156.1,55.1,54.5,51.3,50.8,48.4,46.3,44.9,38.4,38.4,35.8,35.7,33.9,31.7,30.3,30.2,29.4,29.0,27.1,26.5,26.5,24.9,22.6和14.0。LRMS:+ve ion394[M+Na],372[M+H],-ve ion 370[M-H]。實(shí)施例222R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-癸酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。LRMS:+ve ion 408[M+Na],386[M+H],-ve ion384[M-H]。
實(shí)施例23
2R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-5-甲基-己酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.31(0.4H,s),8.40(0.4H,s),8.17(0.6H,s),6.77(0.4H,d,J=7.5Hz),6.60(0.6H,d,J=8.0Hz),4.89(1H,m),4.04(0.4H,m),3.83(0.6H,m),3.52(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.70(1H,m),1.58-1.14(5H,m),1.00-0.95(9H,m)和0.87-0.84(6H,m).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),172.9,171.5,162.2,156.3,55.1,54.6,51.4,48.5,46.4,45.0,38.5,38.4,36.2,35.9,35.6,29.7,28.1,28.0,27.9,26.7,26.6,26.5和22.4。LRMS:+ve ion366[M+Na],344[M+H],-ve ion 342[M-H]。
實(shí)施例242R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]丙酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.41(0.55H,s),7.81(0.45H,s),6.67(0.45H,d,J=8.4Hz),6.51(0.45H,d,J=7.2Hz),4.88(0.45H,d,J=9.4Hz),4.66(0.55H,d,J=7.7Hz),3.76(1H,m),3.55(0.55H,dd,J=14.3,9.8Hz),3.44(0.45H,dd,J=14.2,5.3Hz),3.21(1.65H,s),3.14(1.35H,s),2.99(1.65H,s),2.97(1.35H,s),2.81(1H,m),1.21(1.65H,d,J=6.7Hz),1.19(1.35H,d,J=6.8Hz),1.01(4.95H,s)和0.98(4.05H,s)。LRMS:+ve ion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B:1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.47(0.4H,brs),8.41(0.4H,s),7.86(0.6H,s),6.96(0.4H,brs),6.74(0.6H,d,J=7.3Hz),4.91(1H,m),3.99(0.4H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.83(0.6H,dd,J=13.8,9.0Hz),3.50(1H,m),3.16(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.97(3H,s),2.90(1H,m),1.21(1.2H,d,J=6.8Hz),1.15(1.8H,d,J=6.5Hz),0.99(3.6H,s)和0.95(5.4H,s)。LRMS:+veion 310[M+Na],-ve ion 286[M-H]。
實(shí)施例252R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-甲基丁酸(1S-二甲基-氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.33(0.4H,s),8.38(0.4H,s),7.81(0.6H,s),6.86(0.4H,brs),6.58(0.6H,d,J=8.6Hz),4.90(1H,m),4.06(0.4H,dd,J=14.7,7.3Hz),3.91(0.6H,dd,J=13.8,10.6Hz),3.17(1.2H,s),3.15(1.8H,s),2.98(1.2H,s),2.96(1.8H,s),2.62(0.6H,m),2.48(0.4H,m),1.90(1H,m),1.09-0.86(15H,m)。LRMS:+ve ion 338(M+Na),-ve ion 314(M-H)。
實(shí)施例262R(或S)-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙?；?(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺
非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色玻璃。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.33(0.3H,brs),8.95(0.7H,brs),8.43(0.3H,brs),7.83(0.7H,brs),7.27-7.10(5H,m),6.65(0.3H,brs),6.45(0.7H,brd,J=8.2Hz),4.80-4.70(1H,m),4.22-4.10(0.3H,m),3.89(0.7H,dd,J=13.7,9.6Hz),3.63-3.47(1H,m),3.20-2.69(3H,m),3.04(3H,brs),2.86(3H,brs),和0.87(9H,brs).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),137.9,137.7,128.8,128.5,126.6,54.9,54.5,51.3,48.3,47.3,46.6,38.3,38.2,36.2,36.1,35.8,35.7,35.6,35.5和26.4。LRMS:+ve ion 386(M+Na),-ve ion 362(M-H)。
實(shí)施例272R(或S)-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-(4-甲氧基苯基)-丙酸-(1S-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A:LRMS:+ve ion 416(M+Na),394(M+H),-ve ion 392(M-H)。
實(shí)施例28到31的化合物通過(guò)實(shí)施例13的方法Ⅱ的類似方法制備。用合適的氨基酸酰胺或芐基酯代替步驟E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。
實(shí)施例282S-{2R-[甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酰基氨基}-3-苯基丙酸
白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.11(0.35H,s),7.80(0.65H,s),7.31-7.16(5H,m),4.68(1H,dd,J=8.7,5.5Hz),3.58(1H,m),3.39(1H,m),3.19(1H,m),2.98(1H,m),2.76(1H,m),1.55-1.26(6H,m)和0.90-0.85(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),176.1,175.7,174.7,174.5,138.6,138.5,130.3,129.5,129.4,127.7,55.0,53.3,49.8,45.4,38.4,38.3,31.0,30.8,30.1,23.7和14.2.IR(反射片)Vmax2932,2359,1727,1660,1551,1454,1381,1221,882,701cm-1。LRMS:+ve ion 359[M+Na],-ve ion 335(M-H)。
實(shí)施例292S-{2R-[甲?；?羥基氨基)-甲基]-己?；被鶀-3,3-二甲基丁酸 白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),8.25(0.3H,s),7.82(0.7H,s),4.31(1H,s),3.83-3.29(2H,m),3.10-2.89(1H，m)，1.54-1.33(6H,m),1.03(3H,s),1.01(6H,s)和0.92-0.87(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，174.9,172.9,61.0,52.4,44.2,44.0,33.6,30.1,29.1,26.2,22.6和13.1.IR(反射片)Vmax2959,2359,1644,1537,1371,1218,881和704cm-1。LRMS:+ve ion325(M+Na),-ve ion 301(M-H)。
實(shí)施例302S-[2R-(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸{1-[(2S-羥甲基-吡咯烷-1-氨基甲?；鵠-2,2-二甲基-丙基}-酰胺
無(wú)色油狀物。1H-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.26(0.4H,s),7.84(0.6H,s),4.62(0.4H,d,J=8.2Hz),4.39(0.6H,d,J=8.4Hz),4.12(1H,m),3.91-3.37(6H,brm),2.93(0.6H,m),2.78(0.4H,m),1.93(5H,m),1.45(2H,m),1.39(3H,m),0.97(3H,brs),0.95(3H,brs),和0.89(3H,t,J=6.7Hz).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),174.8,172.9,65.3,65.1,59.6,59.5,55.9,55.7,51.9,47.8,44.7,44.0,31.5,30.5,29.3,28.7,28.1,27.3,23.8,22.0,21.2,18.7,18.3,17.6,14.7和13.3。LRMS:+ve ion 394(M+Na),372(M+H),-ve ion 370(M-H)。
實(shí)施例312S-[2R-(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸{1-[(2-羥基乙基)甲基-氨基甲?；鵠-2,2-二甲基-丙基}-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.25(0.25H,s),8.03(0.125H,s),7.82(0.625H,s),4.88(1H,m),3.83-3.54(4H,brm),3.41(2H,m),3.25(2H,s),2.96(2H,s和m),1.49(2H,m),1.23(4H,m),1.00(6H,s),0.99(3H,s),和0.88(3H,m).13C-NMR；δ(CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，173.6,164.4,61.1,61.0,56.9,56.5,54.2,53.9,52.2,41.8,38.9,36.9,36.3,35.3,31.6,30.8,27.5,24.1和14.7。LRMS:+ve ion 382[M+Na],-ve ion 358[M-H]。
實(shí)施例32至59的化合物是按照實(shí)施例7，方法Ⅱ的類似方法制備的，用合適的胺或氨基酸酰胺/芐基酯來(lái)代替步驟E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。在一些例子的步驟E中使用了HOAt，氫解去保護(hù)(步驟G)在催化轉(zhuǎn)移條件下(環(huán)己烯，乙醇中的鈀炭)進(jìn)行。
實(shí)施例322R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸-(1R-二甲基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 330[M+H],-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例332R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-2S-甲基-丁基)-酰胺 白色泡沫。LRMS:+ve ion 352[M+Na],-ve ion 328[M-H]。
實(shí)施例342R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2-甲氧基-2-甲基-丙基)-酰胺 由外消旋的β-羥甲基纈氨酸制備。非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀物。LRMS:+veion 368[M+Na],346[M+H],-ve ion 344[M-H]。非對(duì)映異構(gòu)體B。LRMS:+ve ion368[M+Na],346[M+H],-ve ion 344[M-H]。
實(shí)施例352R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2-羥基-2-甲基-丙基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 354[M+Na],-ve ion 330[M-H]。
實(shí)施例362R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸[2-(4-氯苯基)-1S-二甲基-氨基甲?；?乙基]-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 330(M+H),-ve ion 328(M-H)。
實(shí)施例372R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[1S-二甲基氨基甲?；?2-(4-羥基苯基)-乙基]-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 402(M+Na),380(M+H)。
實(shí)施例382R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2-萘-2-基-乙基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 414(M+H),-ve ion 412(M-H)。
實(shí)施例392R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(2-環(huán)己基-1S-二甲基-氨基甲?；?乙基)-酰胺 白色泡沫。LRMS:+ve ion 392(M+Na),370(M+H)。
實(shí)施例402R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?苯基-甲基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 350(M+H),-ve ion 348(M-H)。
實(shí)施例412-{2R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己?；鶀-1,2,3,4-四氫-異喹啉-3S-羧酸二甲基酰胺 LRMS:+ve ion 398(M+Na),376(M+H),-ve ion 374(M-H)。實(shí)施例42
2R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(4-氨基-1S-二甲基氨基甲?；?丁基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 345(M+H),-ve ion 343(M-H)。
實(shí)施例432R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2-羥基-乙基)-酰胺 無(wú)色油狀物。LRMS:+ve ion 326(M+Na),-ve ion 302(M-H)。
實(shí)施例44N-羥基-N-[2R-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:+ve ion 272[M+H]。實(shí)施例45N-羥基-N-[2R-(嗎啉-4-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:+ve ion 281(M+Na),259(M+H),-ve ion 257(M-H)。實(shí)施例46N-羥基-N-[2R-(2S-羥甲基-吡咯烷-1-羰基)-己基]-甲酰胺 LRMS:-ve ion 271(M-H)。實(shí)施例472R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-羥甲基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 289(M+H),-ve ion 287(M-H)。實(shí)施例482R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-甲氧基甲基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 303(M+H),-ve ion 301(M-H)。
實(shí)施例492R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[1S-(4-芐基-哌啶-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:-ve ion 458(M-H)。
實(shí)施例502R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[1S-(芐基-苯乙基-氨基甲?；?-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 496(M+H),-ve ion 494(M-H)。實(shí)施例51
2S-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(吡咯烷-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 356(M+H),-ve ion 354(M-H)。
實(shí)施例522R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(嗎啉-4-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 372(M+H),-ve ion 370(M-H)。
實(shí)施例532R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 385(M+H),-ve ion 383(M-H)。
實(shí)施例542R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(4-甲基-哌啶-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 384(M+H),-ve ion 382(M-H)。
實(shí)施例552R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1S-環(huán)己基氨基甲酰基-2,2-二甲基-丙基)-酰胺 LRMS:+ve ion 398(M+H),-ve ion 396(M-H)。
實(shí)施例562R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[1S-(4-乙?；?哌啶-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 412(M+H),-ve ion 410(M-H)。實(shí)施例571-(2S-{2R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酰氨基}-3,3-二甲基-丁酰)-哌啶-4-羧酸甲酯 LRMS:+ve ion 442(M+H),-ve ion 440(M-H)。
實(shí)施例582R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2,2-二甲基-1S-(八氫-喹啉-1-羰基)-丙基]-酰胺 LRMS:+ve ion 424(M+H),-ve ion 422(M-H)。
實(shí)施例592R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[1S-(3,4-二氫-2H-喹啉-1-羰基)-2,2-二甲基-丙基]-酰胺 LRMS:-ve ion 416(M-H)。
實(shí)施例602S-{3-乙基硫甲基-2R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]丙酰胺}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺 標(biāo)題化合物的合成途徑在流程4中略述,在下文詳述。
流程4 試劑和反應(yīng)條件A.3-鋰-4-芐基-噁唑烷-2-酮，THF,-78℃；B。LiN(SiMe3)2,THF,-78℃，然后AcCl；C.HCl.H2NOBzl,NaOAc,aq乙醇；D.NaCNBH3,AcOH,室溫；E.HCOBt,THF；F.LiOH,aq THF,0℃；G.H-Tle-NMe2,HOAt,EDC,DMF；H.H2,Pd/C,MeOH然后分離非對(duì)映異構(gòu)體(HPLC)。
步驟A:2-乙基硫甲基-丙烯酸將丙二酸(5.2g,50mmol),多聚甲醛(3.3g,110mmol),二環(huán)己基胺，9.95ml,50mmol)和乙硫醇(4.06ml,55mmol，溶于二氧噁烷(120ml))的混合物在70℃加熱2小時(shí)。減壓除去溶劑，剩余物重新溶于乙酸乙酯，溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液(4×20ml)提取?；旌系乃畬佑靡宜嵋阴?20ml)洗滌，然后用1M鹽酸酸化。得到的懸浮液抽提入二氯甲烷，溶液用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，以得到白色固體狀的標(biāo)題化合物(3.76g,52％)。1H-NMR；δ(CDCl3),9.89(1H,brs),6.35(1H,s),5.77(1H,s),3.39(2H,s),2.49(2H,dd,J=7.4,14.5Hz)和1.25(3H,t,J=5.2Hz)。
步驟B:4S-芐基-3-(2-乙基硫甲基-丙烯酰基)-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮將2-乙基硫甲基-丙烯酸(3.76g,25.8mmol)溶于干THF(75ml)，并在一層氬氣下冷至-78℃。將三乙胺(4.6ml,33.5mmol)和三甲基乙酰氯(3.17ml,25.8mmol)以使溫度保持在-60℃以下的速率加入。混合物在-78℃攪拌30分鐘，溫至室溫，攪拌2小時(shí)，最后冷回-78℃。
在另一燒瓶中，將4S-芐基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮溶于干THF(75ml)并在一層氬氣下冷至-78℃。緩慢加入正丁基鋰(2.4M乙烷溶液12.9ml,30.9mmol)，在室溫下攪拌混合物30分鐘。生成的陰離子利用套管被入原來(lái)的反應(yīng)容器。反應(yīng)物溫至室溫，在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)用飽和碳酸氫鈉(20ml)終止，溶劑減壓除去。剩余物在乙酸乙酯和水之間分配。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉、1M鹽酸和鹽水依次洗滌，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。剩余物用快速色譜純化(20％硅膠，20％乙酸乙酯(溶于正己烷))，得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(6.5g,76％)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.29(5H,m),5.58(1H,s),5.49(1H,s),4.54(1H,dd,J=3.9,9.7Hz),3.52(2H,dd,J=15.8,3.1Hz),3.38(1H,dd,J=3.9,14.5Hz),2.84(1H,dd,J=4.6,14.3Hz),2.52(2H,dd,J=7.2,14.6Hz),1.42(3H,s),1.29(3H,s)和1.22(3H,t,J=7.5Hz),LRMS:+ve ion356(M+Na),334(M+H)。
步驟C:4S-芐基-3-[2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙?；鵠-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮將4S-芐基-3-(2-乙基硫甲基-丙烯酰基)-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(2.1g,6.3mmol)溶于乙醇(10ml)，加入O-叔-丁基-羥胺鹽酸鹽(0.95g,7.56mmol)，三乙胺(1.1ml,7.87mmol)。混合物在30℃攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，然后將剩余物溶于乙酸乙酯。有機(jī)溶液用1M鹽酸，飽和碳酸氫鈉和鹽水依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾。將濾液減壓濃縮，得到淡黃色的油狀標(biāo)題化合物(2.429,91％；用HPLC得到的單一非對(duì)映異構(gòu)體)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.30(5H,m),5.09(1H,brs),4.54(1H,dd,J=3.5,9.9Hz),4.33(1H,m),3.19(2H,m),3.08(1H,dd,J=5.4,11.8Hz),2.80(3H,m),2.56(2H,dd,J=7.4,14.7Hz),1.41(3H,s),1.36(3H,s),1.23(3H,t,J=7.3Hz)和1.13(9H,s),LRMS:+ve ion423(M+H)。
步驟D:2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酸將4S-芐基-3-[2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙?；鵠-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮(2.42g,5.72mmol)溶于THF(40ml)的溶液冷至0℃，加入氫氧化鋰(288mg,6.86mmol)溶于水(10ml)的溶液?；旌衔餃刂潦覝兀瑪嚢?小時(shí)。減壓除去溶劑，剩余物在水和乙酸乙酯之間分配。除去水層，將乙酸乙酯層用水，飽和碳酸氫鈉依次洗滌。合并的水層用乙酸乙酯(20ml)洗滌，然后用1M鹽酸酸化。得到的乳狀液用二氯甲烷(3×20ml)抽提，然后將合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)，得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(0.68g,50％)。1H-NMR；δ(CDCl3),8.03(2H,brs),3.21(2H,d,J=6.1Hz),2.89(2H,m),2.75(1H,m),2.57(2H,dd,J=7.4,14.8Hz),1.26(3H,t,J=7.4Hz)和1.18(9H,s)。LRMS:+ve ion 236[M+H],-ve ion 234M-H]。
步驟E:2S-[2R-(叔-丁氧基-氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺溶液將2R-叔-丁氧基氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙酸(340mg,1.44mol)溶于DMF(10ml),加入叔-亮氨酸-N,N-二甲基酰胺(272mg,1.73mmol),HOAt(19.6mg,0.14mmol)和EDC(331mg,1.73mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余物溶于二氯甲烷。有機(jī)層用1M鹽酸、1M碳酸鈉和鹽水依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，然后過(guò)濾。濾液減壓濃縮，得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(440mg,82％)。1H-NMR；δ(CDCl3),6.87(1H,d,J=9.0Hz),5.11(1H,brs),4.93(1H,d,J=9.3Hz),3.15(3H,s),3.11(1H,m),2.95(3H,s),2.79(3H,m),2.54(3H,s),1.22(3H,t,J=7.6Hz),1.18(9H,s)和1.01(9H,s)。LRMS:+ve ion 398[M+Na],376[M+1]。
步驟F:2S-{2R-[(叔-丁氧基-甲?；被?-甲基]-3-乙基硫甲基-丙?；被鶀-3,3,N,N-四甲基丁酰胺將2S-[2R-(叔-丁氧基-氨基-甲基)-3-乙基硫甲基-丙?；被鶀-3,3,N,N-四甲基丁酰胺(220mg,0.58mmol)溶于二氯甲烷(5ml)的溶液冷至0℃,用甲酸醋酸酐(0.1ml)處理。反應(yīng)在室溫下攪拌4小時(shí)，然后減壓蒸發(fā)去溶劑。剩余物用快速色譜(硅膠，洗脫用50％溶于正己烷中的乙酸乙酯)純化，以得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(120mg,52％)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.31(1H,brs),6.56(1H,d,J=9.1Hz),4.94(0.33H,d,J=9.4Hz),4.88(0.67H,d,J=9.2Hz),4.08(0.67H,brm),3.83(1.34H,brm),3.13(3H,s),2.95(3H,s),2.80(2H,m),2.61(1H,dd,J=6.8,14.0Hz),2.49(2H,dd,J=7.4,14.7Hz),1.29(9H,s),1.25(3H,t,J=7.2Hz)和0.99(9H,s)。LRMS:+ve ion 426[M+Na],404[M+H]。
步驟G:2S-{3-乙基硫甲基-2R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基丁酰胺將2S-{2R-[(叔丁氧基甲?；被?-甲基]-3-乙基硫甲基-丙?；被鶀-3,3,N,N-四甲基丁酰胺(120mg,0.3mmol)溶于氘代氯仿(1ml)的溶液用TFA(4ml)處理，4℃放置過(guò)夜。減壓除去溶劑，剩余TFA用甲苯共沸除去。剩余物用制備好的HPLC純化，得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(40mg,38％；由HPLC得到的7∶2的非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體),8.40(0.33H,s),7.87(0.67H,s),7.24(0.33H,d,J=9.3Hz),6.98(0.67H,d,J=9.3Hz),4.91(0.67H,d,J=9.3Hz),4.90(0.33H,d,J=9.3Hz),4.07(0.33H,dd,J=7.5,14.5Hz),3.86(0.67H,dd,J=8.8,14.2Hz),3.75(0.67H,m),3.68(0.33H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),3.05(1H,m),2.96(3H,s),2.77(1H,m),2.66(1H,m),2.52(2H,dd,J=7.4,14.8Hz),1.22(3H,t,J=7.3Hz),0.99(3H,s)和0.96(6H,s).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，173.3,171.6,171.2,55.2,54.8,51.1,48.5,45.2,44.4,38.5,38.4,35.9,35.8,35.7,31.7,31.4,26.7,26.6,26.5和14.6。LRMS:+ve ion 370[M+Na],348[M+H],-ve ion 346[M-H]。
實(shí)施例61的化合物相似制備，用哌啶代替步驟A中的乙硫醇。
實(shí)施例612-{2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-哌啶-1-基-丙酰基氨基}-3,3,N,N-四甲基-丁酰胺 白色固體(由HPLC得到的非對(duì)映異構(gòu)體的4∶1的混合物)。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.29(1H,s),7.95(1H,brs),4.87(1H,d,J=9.1Hz),4.02(1H,dd,J=5.0,14.6Hz),3.56(1H,dd,J=8.2,14.6Hz),3.14(3H,s),2.96(3H,s),2.89(1H,m),2.69(1H,m),2.52(5H,m),1.65(4H,m),1.49(2H,m)和0.99(9H,s).13C-NMR；δ(CDCl3),172.2,171.3,60.4,55.0,54.9,48.6,42.4,38.8,36.2,36.1,27.0,25.6和24.3。LRMS:+ve ion 371[M+H],-ve ion 369[M-H]。
實(shí)施例62到65的化合物用實(shí)施例7,方法Ⅱ的類似方法制備,用O-叔-丁基羥胺代替步驟B中的O-芐基羥胺,而用合適的胺或氨基酸酰胺/芐基酯來(lái)代替步驟E中的叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺。最終去保護(hù)用TFA通過(guò)酸解進(jìn)行。(見(jiàn)上文實(shí)施例60)。
實(shí)施例622R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸(1R-二甲基氨基甲?；?2-甲基-2-甲基硫丙基)-酰胺 無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.4(0.5H,s),7.85(0.5H,s),7.11(0.5H,d,J=9.1Hz),6.93(0.5H,d,J=9.1Hz),5.15(1H,d,J=9.4Hz),3.90(0.5H,m),3.73(0.5H,m),3.64(0.5H,d,J=14.3Hz),3.48(0.5H,dd,J=14.0,3.9Hz),3.22(3H,s),2.97(3H,s),2.83(0.5H,m),2.70(0.5H,m),2.07(1.5H,s),2.04(1.5H,s),1.58(1H,m),1.36(4H,m),1.32(3H,s),1.28(3H,s)和0.86(3H,t,J=6.6Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，15.4,173.5,170.8,63.6,53.2,53.1,52.5,49.5,47.5,46.1,44.9,41.6,37.5,36.5,36.4,35.4,30.2,29.8,28.0,14.3,12.0和11.9。LRMS:+ve ion 362[M+H],-ve ion360[M-H]。
實(shí)施例632R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己酸(2-芐基硫-1R-二甲基-氨基甲?；?2-甲基-丙基)-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.37(0.33H,s),7.81(0.66H,s),7.31(5H,m),7.06(0.33H,d,J=8.8Hz),6.89(0.66H,d,J=9.3Hz),5.20(1H,d,J=9.3Hz),3.94(0.33H,dd,J=8.3,14.6Hz),3.78(2.66H,m),3.61(0.33H,dd,J=3.5,14.4Hz),3.42(0.66H,dd,J=5.1,14.9Hz),3.21(3H,s),3.03(3H,s),2.82(0.66H,m),2.69(0.33H,m),1.61(1H,m),1.42(1H,m),1.37(3H,s),1.32(3H,s),1.26(4H,m)和0.86(3H,t,J=6.6Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.3,173.5,171.0,138.1,137.4,129.5,129.3,129.1,129.0,128.9,127.6,127.4,55.9,53.7,52.5,51.2,49.6,49.5,46.1,44.9,39.0,38.6,36.6,36.4,33.9,33.7,30.3,30.1,29.7,26.7,26.1,25.7,25.5,24.2,22.9和14.3。LRMS:+ve ion 460[M+Na],438[M+H],-ve ion 436[M-H]。
實(shí)施例642R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2-芐基硫-2-甲基-1R-(嗎啉-4-羰基)-丙基]-酰胺 白色泡沫。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.44(0.5H,s),8.37(0.5H,s),7.30(5H,m),6.88(0.5H,d,J=8.3Hz),6.78(0.5H,d,J=9.2Hz),5.12(1H,d,J=9.5Hz),3.91(1H,dd,J=8.2,14.6Hz),3.78(10H,m),3.45(1H,dd,J=4.5,14.2Hz),2.80(0.5H,m),2.64(0.5H,m),1.61(1H,m),1.41(1H,m),1.36(3H,s),1.33(3H,s),1.29(4H,m)和0.87(3H,t,J=6.8Hz).13C-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，175.5,173.4,169.4,137.8,129.5,129.3,129.1,129.0,127.8,127.5,67.1,67.0,53.3,53.2,51.99,49.6,49.5,49.2,47.9,46.5,45.0,43.2,43.0,34.0,30.3,30.2,29.7,26.8,26.5,25.9,25.8,22.9和14.3。LRMS:+ve ion502[M+Na],480[M+H],-ve ion 478[M-H]。
實(shí)施例652-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-己酸[2-芐基硫-2-甲基-1R(或S)-(4-甲基-哌啶-1-羰基)-丙基]-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A白色固體。LRMS:+ve ion 514[M+Na],492[M+H],-ve ion490[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色膠。LRMS:+ve ion 514[M+Na],492[M+H],-ve ion490[M-H]。
實(shí)施例66到68是用實(shí)施例7，方法Ⅱ的類似方法制備的，用合適的丙二酸代替步驟A中的丁基丙二酸，用O-叔-丁基羥胺代替步驟C中的O-芐基羥胺。Michael加成反應(yīng)中的立體選擇性是可變的。最終的去保護(hù)用TFA酸解進(jìn)行(見(jiàn)上文實(shí)施例60)。
實(shí)施例662R-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-戊-4-烯酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 單一非對(duì)映異構(gòu)體1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.40(0.25H,s),7.84(0.75H,s),7.05(0.35H,d,J=9.0Hz),6.74(0.65H,d,J=9.3Hz),5.70(1H,m),5.03-5.24(2H,m),4.88(1H,dd,J=9.4,6.7Hz),3.98(0.5H,m),3.81(0.5H,m),3.55(1H,m),3.14(3H,s),2.97(1.3H,s),2.96(1.7H,s),2.75-2.92(1H,m),2.16-2.50(2H,m),0.98(4.5H,s)和0.94(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 336[M+Na],-ve ion 312[M-H]。
實(shí)施例672R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己-5-烯酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺 非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.42(0.45H,s),7.84(0.55H,s),6.78(0.45H,d,J=8.4Hz),6.60(0.55H,d,J=9.3Hz),5.74(1H,m),5.03(2H,m),4.88(1H,m),4.14(0.4H,m),3.81(0.6H,m),3.55(1H,m),3.16(1H,s),3.15(2H,s),2.98(1H,s),2.97(2H,s),2.85(0.7H,m),2.68(0.3H,m),2.07(2H,m),1.73(1.6H,m),1.50(0.4H,m),0.99(4H,s)和0.95(5H,s)。LRMS:+ve ion 350[M+Na],-ve ion 326[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.41(0.5H,s),7.75(0.5H,s),6.58(0.5H,d,J=9.1Hz),6.36(0.5H,d,J=9.1Hz),5.75(1H,m),5.01(2H,m),4.86(0.5H,d,J=9.5Hz),4.64(0.5H,d,J=7.5Hz),3.42-3.82(2H,m),3.22(1.5H,s),3.07(1.5H,s),2.99(3H,s),2.87(0.5H,m),2.66(0.5H,m),2.13(2H,m),1.81(1H,m),1.49(1H,m),1.02(4.5H,s)和1.00(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 350[M+Na],-ve ion 326[M-H]。
實(shí)施例682R-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-己-4-炔酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺
非對(duì)映異構(gòu)體A無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.39(0.4H,s),7.87(0.6H,s),7.20(0.4H,d,J=8.4Hz),6.94(0.6H,d,J=9.3Hz),4.90(1H,m),3.66-4.14(2H,m),3.16(2H,s),3.14(2H,s),2.96(3H,s),2.88(1H,m),2.41(2H,m),1.77(3H,m),1.00(3.5H,s)和0.96(5.5H,s)。LRMS:+ve ion 348[M+Na],-ve ion 324[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B無(wú)色油狀。1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.37(0.5H,s),7.81(0.5H,s),6.87(1H,m),4.91(0.5H,d,J=9.4Hz),4.79(0.5H,d,J=8.2Hz),3.76(1.5H,m),3.63(0.5H,m),3.19(1.5H,s),3.14(1.5H,s),2.98(3H,s),2.85(1H,s),2.41(2H,m),1.77(3H,m),1.03(4.5H,s)和1.01(4.5H,s)。LRMS:+ve ion 348[M+Na],-ve ion 324[M-H]。
實(shí)施例692R-[1R(或S)-(甲?；?羥基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基氨基甲?；?2,2-二甲基.丙基)-酰胺 標(biāo)題化合物按照流程5中略述的途徑制備,在下文詳述。
流程5 試劑和反應(yīng)條件A.(CHO)n,EtSH，二環(huán)己基胺，二噁烷，70℃,2h；B.tBuCOCl,Et3N，然后3-鋰-4-芐基-5,5-二甲基-噁唑烷-2-酮；C.HCl,H2NotBu,Et3N,o/n；D.LiOH,aq THF,0℃；E.H-叔-LeuNMe2,HOAt,EDC,DMF；F.HCOAc,CH2Cl2；G.TFA,CDCl3.
步驟A:4-芐基-3-己?；?噁唑烷-2-酮將4S-芐基-噁唑烷-2-酮(14.5g,81.7mmol)在一層氬氣下溶于干THF(75ml)。溶液在冰浴中冷卻，然后緩慢加入正丁基鋰(1.6M溶于乙烷，56ml，89.2mmol)。鋰鹽從溶液中以固塊的形式結(jié)晶出來(lái)，溫至室溫過(guò)夜。生成的桔紅色懸浮液在冰浴中，加入己酰氯(10.4ml,74.3mmol)(溶于干THF(50ml))的冷溶液?；旌衔餃刂潦覝兀缓髷嚢?小時(shí)。反應(yīng)用1M碳酸鈉溶液(5ml)終止，減壓除去溶劑。剩余物在1M碳酸鈉(100ml)和乙酸乙酯(150ml)間分配。除去有機(jī)層，將水層用更多的乙酸乙酯抽提。合并的有機(jī)層用水、1M碳酸鈉和鹽水依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾。濃縮濾液得到桔紅色油狀物。用快速色譜純化后得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(10.21g,50％)。1H-NMR；δ(CDCl3),7.38-7.24(3H,m),7.24-7.16(2H,m),4.68(1H,m),4.24-4.12(2H,m),3.30(1H,dd,J=13.4,3.2Hz),3.02-2.86(2H,m),2.77(1H,dd,J=13.4,9.6Hz),1.77-1.63(2H,m),1.44-1.30(4H,m)和0.92(3H,brt,J=6.9Hz)。
步驟B:1-(4S-芐基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮將4-芐基-3-己酰-噁唑烷-2-酮(10.2g,37.1mmol)在一層氬氣下溶于THF(150ml),并冷至-78℃。以幾分鐘的時(shí)間通過(guò)套管加入六甲基二硅氮烷鋰(1M溶于THF,41ml,41mmol)，然后將所得綠色的溶液在-78℃攪拌2小時(shí)。緩慢加入乙酰氯(3.3ml，46.3mmol)，攪拌反應(yīng)混合物3.5小時(shí)。將檸檬酸(3.0g,14mmol)溶于水(15ml)的溶液快速加入以終止反應(yīng)。減壓除去溶劑，剩余物在乙酸乙酯和水之間分配，用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，并過(guò)濾。濃縮濾液得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(12.11g，含有剩余溶劑)在步驟C中不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。1H-NMR；δ(CDCl3),7.37-7.21(5H,m),4.68(1H,m),4.53(1H,dd,J=9.6,3.7Hz),4.23-4.13(2H,m),3.43(1H,dd,J=13.5,3.3Hz),2.75(1H,dd,J=13.5,9.9Hz),2.33(3H,s),2.03(1H,m),1.77(1H,m),1.46-1.26(4H,m)和0.98-0.86(3H,m)。
步驟C:1-(4S-芐基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮3-(O-芐基-肟)在1-(4S-芐基-2-氧-噁唑烷-3-基)-2R-丁基-1,3-丁二酮(12.11g,38.15mmol)溶于水(10ml)和乙醇(90ml)的溶液中加入醋酸鈉(3.75g,45.78mmol)和O-芐基羥胺鹽酸鹽(7.31g,45.78mmol)。形成的懸浮液在室溫下攪拌過(guò)夜。產(chǎn)物(7.3g,45％，單肟異構(gòu)體)直接從反應(yīng)中結(jié)晶，過(guò)濾，用含水乙醇(1∶1)洗滌，真空干燥。另-批物質(zhì)(5.31g,33％，肟異構(gòu)體的混合物)從母液中通過(guò)酸堿抽提以黃色油狀物的形式獲得，然后柱層析。1H-NMR；δ(CDCl3，主肟異構(gòu)體)，7.34-7.20(8H,m),7.12-7.07(2H,m),5.14-5.02(2H,m),4.53(1H,m),4.13(1H,dd,J=9.4,4.0Hz),4.04(1H,brt,J=8.4Hz),3.91(1H,dd,J=9.0,2.7Hz),3.16(1H,dd,J=13.4,2.9Hz),2.09(3H,s),1.97(1H,m),1.75(1H,dd,J=13.4,10.8Hz),1.67(1H,m),1.45-1.22(4H,m)和0.91(3H,brt,J=6.9Hz)。
步驟D:4S-芐基-3-[2R-(1R(或S)-芐氧基氨基-乙基)-己?；鵠-噁唑烷-2-酮將由步驟C(5.31g,12.5mmol)的到的肟混合物溶于乙酸(30ml)，并在冰水浴中冷卻，然后一次加入氰基氫硼化鈉(0.8g,12.5mmol)。幾分鐘后，冒泡平息，再加入另一部分硼氫化鈉(0.8g)。反應(yīng)溫至室溫，攪拌過(guò)夜。減壓除去乙酸，剩余物用甲苯共沸。將結(jié)果的油狀物溶于乙酸乙酯，用水，1M碳酸鈉和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，并過(guò)濾。將濾液蒸發(fā)得到一淡黃色油狀物，將其用快速色譜(硅膠，洗脫用溶于正己烷的10％-25％的乙酸乙酯)純化。產(chǎn)量3.43g,64％)。1H-NMR；δ(CDCl3，α-非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)，7.36-7.17(10H,m),5.80(0.45H,brs),5.55(0.55H,brd,J=8.9Hz),4.72-4.59(3H,m),4.20-4.05(2H,m),3.97(0.45H,m),3.82(0.55H,m),3.47-3.22(2H,m),2.45(1H,m),1.90-1.48(2H,m),1.40-1.14(7H,m)和0.95-0.84(3H,m)。
步驟E:N-[2R-(4S-芐基-2-氧-噁唑烷-3-羰基)-1R(或S)-甲基-己基]-N-芐氧基-甲酰胺將4S-芐基-3-[2R-(1R(或S)-芐氧基氨基-乙基)-己?；鵠-噁唑烷-2-酮(3.08g,7.3mmol)溶于干THF，并用N-甲?；讲⑷?1.60g,10.9mmol)處理，反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。減壓除去溶劑，剩余的油狀物用二氯甲烷(40ml)和1M氫氧化鈉(30ml)分離。除去有機(jī)層，用額外的氫氧化鈉，然后鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。用快速色譜(硅膠，20％到50％的溶于正己烷的乙酸乙酯)純化，得到淡黃色固體狀的標(biāo)題化合物(2.50g,76％。1H-NMR；δ(CDCl3,α-非對(duì)映異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物),8.22(1H,brm),7.54-7.13(10H,m),5.22-3.92(7H,brm),3.30(1H,m),2.48(1H,brm),1.85-1.13(9H,brm)和0.93-0.83(3H,m)。
步驟F:2R-[1R(或S)-(芐氧基-甲?；被?-乙基]-己酸將N-[2R-(4S-芐基-2-氧-噁唑烷-3-羰基)-1R(或S)-甲基-己基]-N-芐氧基-甲酰胺(1.50g,3.31mmol)溶于THF(25ml)和水(5ml),并將溶于在冰水浴中冷卻。加入過(guò)氧化氫溶液(27％w/w),13.26mmol),然后立即加入氫氧化鋰(167mg,3.98mmol)。反應(yīng)溫至室溫，然后再攪拌3小時(shí)。冷卻溶液，然后加入亞硝酸鈉(0.92g,13.3mmol)。10分鐘后，減壓除去大部分溶劑，得到一白色糊狀物，將其在乙酸乙酯(25ml)和1M碳酸鈉(30ml)之間分配。有機(jī)層用另外的碳酸鈉洗滌，合并的水層提取物用乙酸乙酯洗滌。將水層冷卻，用1M鹽酸酸化，用乙酸乙酯提取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)以得到綠色油狀的標(biāo)題化合物(839mg,86％)。1H-NMR；δ(CDCl3,α-非對(duì)映異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)，8.40-7.64(2H,brm),7.48-7.27(5H,m),5.23-4.80(2H,m),4.16(1H,brm),2.79(1H,m),1.67-1.47(2H,m),1.47-1.18(7H,m)和0.95-0.82(3H,m)。
步驟G:2R-[1R(或S)-(芐氧基-甲?；被?-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺將2R-[1R(或S)-(芐氧基-甲酰基氨基)-乙基]-己酸(839mg,2.86mmol)，叔-亮氨酸N,N-二甲基酰胺(498mg,3.15mmol)和EDC(658mg,3.43mmol)一起溶于DMF(15ml)，并加入催化量的HOAt(60mg)。溶液在室溫下攪拌數(shù)日。減壓除去溶劑，剩余的油狀物用乙酸乙酯和1M鹽酸(75ml)分配。有機(jī)層用1M鹽酸，1M碳酸鈉和鹽水依次洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，得到黃色泡沫(1.08g,82％)。1H-NMR；δ(CDCl3，α-非對(duì)映異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)，8.13(1H,brm),7.52-7.31(5H,m),6.28(1H,brm),5.36-4.67(3H,brm),4.09(1H,brm),3.14(3H,s),2.95(1.2H,s),2.93(1.8H,s),2.48(1H,brm),1.61-1.04(9H,m),0.99(3.6H,s),0.95(5.4H,s)和0.89-0.75(3H,m)。
步驟H:2R-[1R(或S)-(甲酰基-羥基氨基)-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺將2R-[1R(或S)-(芐氧基-甲?；被?-乙基]-己酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺(200mg,0.46mmol)溶于甲醇(15ml)，置于一層氬氣下。加入乙酸乙酯內(nèi)的含有10％鈀炭(20mg)懸浮液，混合物在氫氣中攪拌3小時(shí)。過(guò)濾除去催化劑，蒸發(fā)濾液得到一無(wú)色油狀物(163mg,quant.)。兩種非對(duì)映異構(gòu)體產(chǎn)物可用制備性的HPLC分離。
非對(duì)映異構(gòu)體A(27mg):1H-NMR；δ(CDCl3，主要為一種旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.67(0.9H,brs),8.33(0.1H,brs),7.92(1H,s),6.74(0.1H,brm),6.54(0.9H,d,J=9.4Hz),4.93(0.9H,d,J=9.4Hz),4.64(0.1H,brm),3.89(1H,qd,J=6.6,2.6Hz),3.16(3H,s),2.96(3H,s),2.62-2.48(1H,m),1.52-1.06(6H,m),1.35(3H,d,J=6.6Hz),1.00(9H,s)和0.82(3H,t,J=6.9Hz).13C-NMR；δ(CDCl3),173.0,171.3,57.2,54.4,50.4,38.4,35.6,29.9,29.1,26.6,22.5,17.2和13.9。LRMS:+ve ion 366[M+Na],-ve ion 342[M-H]。
非對(duì)映異構(gòu)體B(42mg):1H-NMR；δ(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)，9.15(0.6H,s),8.60(0.4H,brs),8.42(0.6H,s),7.84(0.4H,s),6.83(0.6H,d,J=9.2Hz),6.55(0.4H,d,J=9.4Hz),4.91(0.6H,d,J=9.2Hz),4.89(0.4H,d,J=9.4Hz),4.69(0.6H,qd,J=7.0,4.3Hz),3.92(0.4H,dq,J=9.1,6.8Hz),3.15(3H,s),2.97(1.8H,s),2.95(1.2H,s),2.59(0.4H,td,J=9.8,4.3Hz),2.39(0.6H,td,J=7.4,4.3Hz),1.92-1.07(6H,m),1.37(1.2H,d,J=6.8Hz),1.31(1.8H,d,J=7.0Hz),1.01(5.4H,s),0.96(3.6H,s),0.85(1.8H,t,J=7.2Hz)和0.83(1.2H,t,J=7.2Hz).13C-NMR；δ(CDCl3,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物),175.7,173.2,171.3,170.7,56.7,55.0,54.4,53.2,50.8,49.9,38.3,35.7,35.6,35.5,35.4,30.3,29.5,29.3,26.5,26.4,22.5,22.4,16.0,15.4和13.8。LRMS:+ve ion 366[M+Na],-ve ion 342[M-H]。
實(shí)施例70N-環(huán)己基-2-{2-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙?；被鶀-3,3-二甲基-丁酰胺 將1M氨溶于甲醇(1ml,1mmol)和1M三甲基乙醛溶于甲醇(1ml,1mmol)的原料溶液在一試管中混合,放置1小時(shí)。加入1M環(huán)己基胩溶于甲醇(1ml,1mmol)的溶液，然后加入溶于甲醇(2ml,1mmol)的0.5M2RS-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-己酸。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。用Savant Speedvac除去溶劑，并將反應(yīng)混合物從乙酸乙酯-己烷中結(jié)晶出來(lái)，得到白色固體的2-{2-[(芐氧基-甲?；被?-甲基]-3-苯基-丙?；被鶀-N-環(huán)己基-3,3-二甲基-丁酰胺(93mg,18％)，將其用接觸轉(zhuǎn)移氫解(氫氣，10％鈀炭，甲醇-乙酸乙酯)去保護(hù)，得到標(biāo)題化合物(75mg,99％)。
白色固體。LRMS:+ve ion 440[M+Na],418[M+H],-ve ion 416[M-H]。
實(shí)施例71到77的化合物用Ugi4組分縮合反應(yīng)，如上所述，平行制備。所有產(chǎn)物用HPLC測(cè)定，以大于85％的純度獲得。
實(shí)施例71
2-{2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-己酸環(huán)己基酰胺 白色固體(90mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.29-7.08(5H,m),4.20(1H,d,J=5.0Hz),3.89(1H,m),3.19(1H,m),2.95-2.67(2H,m),1.88-1.58(5H,brm),1.44-1.05(9H,brm)和0.89(9H,s)。LRMS:+ve ion 468[M+Na],446[M+H],-ve ion 444[M-H]。
實(shí)施例722-{2-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙?；被鶀-3,3-二甲基-己酸芐基酰胺 白色固體(77mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.35-7.11(10H,m),4.38-4.19(3H,m),3.85(1H,m),3.52(1H,m),2.97-2.63(3H,m),1.37-1.11(4H,m)和0.93-0.78(9H,m)。LRMS:+ve ion 476[M+Na],454[M+H]。
實(shí)施例732-{2-[(甲酰基-羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙?；被鶀-3,3-二甲基-丁酸叔-丁基酰胺 白色固體(47mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.82(1H,s),7.45(1H,m),7.30-7.09(5H,m),4.12(1H,d,J=7.2Hz),3.89(1H,m),3.41(1H,m),3.15(1H,m),2.97-2.68(2H,m),1.28(9H,s)和0.92(9H,s)。LRMS:+ve ion 414[M+Na],392[M+H],-ve ion 390[M-H]。
實(shí)施例742-{2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰基氨基}-3,3-二甲基-己酸(1,1,3,3-四甲基)-丁酰胺 白色固體(65mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.79(1H,s),7.42-7.21(1H,m),7.20-7.10(5H,m),4.23(1H,d,J=9.1Hz),3.86(1H,m),3.51(1H,m),3.23(1H,m),3.00-2.56(2H,m),1.50-1.15(12H,m)和1.02-0.83(18H,m)。LRMS:+ve ion498[M+Na],476[M+H,-ve ion 474[M-H]。
實(shí)施例75N-(環(huán)己基-環(huán)己基氨基甲?；?甲基)-2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固體(98mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.38-7.08(5H,m),4.01(1H,m),3.81(1H,m),3.68-3.35(2H,m),3.15(1H,m),2.98-2.65(2H,m),1.88-1.49(10H,brm)和1.45-0.83(11H,brm)。LRMS:+ve ion 466[M+Na],444[M+H],-ve ion 442[M-H]。
實(shí)施例76N-(環(huán)己基-芐基氨基甲?；?甲基)-2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固體(34mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.35-7.10(10H,m),4.44-4.23(2H,m),4.05(1H,m),3.87-3.35(2H,m),3.09(1H,m),2.85-2.72(2H,m),1.65-1.46(4H,m),1.38-0.93(5H,brm)和0.75-0.51(2H,brm)。LRMS:+ve ion474[M+Na],-ve ion 450[M-H]。
實(shí)施例78N-[環(huán)己基-(1,1,3,3-四甲基-丁基氨基甲酰基)-甲基]-2-[(甲?；?羥基氨基)-甲基]-3-苯基-丙酰胺 白色固體(51mg)。1H-NMR；δ(CD3OD),7.80(1H,s),7.36-7.10(5H,m),4.05(1H,m),3.85(1H,m),3.49(1H,m),3.15(1H,m),2.91(1H,m),2.68(1H,m),1.90(1H,m),1.80-1.48(7H,m),1.40-1.12(10H,m)和1.08-0.83(10H,m)。LRMS:+ve ion 496[M+Na],474[M+H],-ve ion 472[M-H]。
生物實(shí)施例A示范化合物1(實(shí)施例1)和化合物2(實(shí)施例2)的抗菌效果a).
抑制大腸桿菌DH5α菌株(基因型F-φ80d/acZAM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96re/A1)從GibcoBRLLifeTechnologies獲得，陰溝腸桿菌(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)保藏號(hào)13047)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC保藏號(hào)13883)或頭狀葡萄球菌(ATCC保藏號(hào)35661)的抑制劑的最小抑制濃度(minimal inhibitoryconcentrations(MIC))被如以下測(cè)定。測(cè)試化合物(從實(shí)施例1和2分別而來(lái)的化合物1和2，(兩者都是異構(gòu)體A))和三種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)用抗生素，羧芐青霉素(Sigma，目錄號(hào)C3416)，卡那霉素(Sigma，目錄號(hào)K4000)和氯霉素(Sigma，目錄號(hào)C1919)的原溶液，通過(guò)將每種化合物以10mM的濃度溶于二甲基亞砜來(lái)制備。為了測(cè)定最小抑制濃度，在2×YT肉湯(胰蛋白胨16g/酵母提取液10g/l，氯化鈉5g/l從BIO101Inc獲得，1070Joshua Way,Vista,CA92083,USA)中制備兩倍的系列稀釋度，以得到0.05ml每孔的含化合物的培養(yǎng)液。接種體通過(guò)將培養(yǎng)物在37℃在2×YT肉湯中生長(zhǎng)過(guò)夜來(lái)制備。細(xì)胞密度調(diào)整至660nm的吸光度(A660)=0.1；光學(xué)密度標(biāo)準(zhǔn)化的制備液在2×YT肉湯中被稀釋至1∶1000；而每孔用0.05ml的已稀釋的細(xì)菌接種。微量滴定板在潮濕的培養(yǎng)箱中在37℃培養(yǎng)18小時(shí)。記錄抑制可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低的藥物濃度作為MIC(μM)。
表1
b).
抑制蛙分枝桿菌(ATCC保藏號(hào)110)，綠膿桿菌(ATCC保藏號(hào)9027)，肺炎克雷伯氏菌(ATCC保藏號(hào)10031)，幽門螺桿菌(ATCC保藏號(hào)43504)，氨基糖苷類、紅霉素抗性的肺炎鏈球菌和甲氧西林抗性(MR)的金黃色葡萄球菌(ATCC保藏號(hào)33591)的臨床分離物的抑制劑最小抑制濃度(MIC)被如下測(cè)定。測(cè)試化合物1和2(每種的異構(gòu)體A)和三種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室用抗菌劑慶大霉素(G)，氨卡青霉素(A)和紅霉素(E)的原溶液通過(guò)將每種化合物溶于10mg/ml的二甲基亞砜來(lái)制備。在此使用的方法與a)相同，除了蛙分枝桿菌的培養(yǎng)液使用Brain Heart Infasion肉湯(GIBCO)，并在37℃培養(yǎng)48小時(shí)，金黃色葡萄球菌(MR)，肺炎克雷伯氏菌，和綠膿桿菌使用營(yíng)養(yǎng)肉湯(DIFCO)，37℃培養(yǎng)20小時(shí)，幽門螺桿菌用含有7％的綿羊血的Columbia瓊脂培養(yǎng)基(OXOID),35℃培養(yǎng)72小時(shí)，肺炎鏈球菌用含7％小牛血清的胰解大豆?fàn)I養(yǎng)液(DIFCO)在37℃培養(yǎng)48小時(shí)。記錄可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低的藥物濃度作為MIC(μM)。
陽(yáng)性載體對(duì)照(1％DMSO；無(wú)測(cè)試藥劑)使所有的微生物生長(zhǎng)。
陰性空白對(duì)照(無(wú)微生物，+測(cè)試藥劑)，顯示無(wú)微生物生長(zhǎng)。
表2.
nd=未測(cè)得。
在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，抑制一定范圍的革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性的細(xì)菌的化合物1和實(shí)施例4的產(chǎn)物(化合物3)的最小抑制濃度(MIC)用微量稀釋肉湯法，參照已批準(zhǔn)的國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)程序(對(duì)好氧菌的稀釋抗微生物易感性實(shí)驗(yàn)方法-第四版ISBN1-56238-309-4)來(lái)測(cè)定。
對(duì)抗革蘭氏陽(yáng)性菌的活性
抵抗革蘭氏陰性菌的活性
化合物3和實(shí)施例14(化合物4)的抗多抗性屎腸球菌的臨床分離物的活性，采用緊隨在前的結(jié)果所采用的方法評(píng)定。其活性在下表列出，和用同樣方法對(duì)已知的抗菌劑得出的結(jié)果作比較
對(duì)抗多抗性屎腸球菌臨床分離物
生物實(shí)施例Bⅰ)克隆大腸桿菌PDF基因?qū)⒋竽c桿菌PDF基因克隆在pET24a(+)(設(shè)計(jì)的pET24-PDF)中，用來(lái)轉(zhuǎn)化BL21DE3細(xì)胞(來(lái)自Novagenlnc,(Madison,Wisconsin).)37℃在添加有30μg/ml卡那霉素的YT瓊脂培養(yǎng)基(8g/l胰蛋白胨，5g/酵母提取液，NaCl5g/l，瓊脂15g/l)上選擇克隆。
ⅱ)PDF的表達(dá)用20ml帶有pET24-PDF的BL21DE3細(xì)胞的過(guò)夜培養(yǎng)物感染存于2升的帶擋板的燒瓶中的500ml2×YT肉湯(16g/l胰蛋白胨，10g/l酵母提取物，NaCl5g/l)(其中含有30ug/ml卡那霉素)，振蕩37℃培養(yǎng)至OD6000.6，然后通過(guò)將培養(yǎng)液調(diào)整到1.0mM異丙基β-D硫代半乳吡喃糖苷(IPTG)來(lái)誘導(dǎo)菌種。誘導(dǎo)可在37℃再進(jìn)行3小時(shí)，將細(xì)胞離心收集，用250ml磷酸鹽緩沖的生理鹽水(PBS)洗滌細(xì)胞團(tuán)，將細(xì)胞團(tuán)儲(chǔ)藏在-70℃。
ⅲ)制備融合蛋白部分將從1升壓榨液得到的細(xì)胞重新在2×25的冰冷磷酸緩沖鹽中懸浮。將細(xì)胞懸浮液用固定有中探針的MSE Soniprep 150，在20-25微米振幅，以6×20秒脈沖在冰上超聲處理。形成的懸浮液用20,000×g離心15分鐘以重新澄清。上清液用作進(jìn)一步純化酶用。
ⅳ)PDF純化從1L磷酸緩沖鹽〔PBS〕培養(yǎng)物得到的大腸桿菌裂解液被調(diào)整到2M硫酸銨。將15ml苯基瓊脂糖凝膠柱和PBS/2M硫酸銨在4℃平衡。將裂解液加到柱上，用平衡緩沖液洗脫。柱用從2M到0M的降低硫酸銨濃度洗脫，洗脫量在10倍柱體積以上。每5ml部分收集，用SDS-PAGE分析。將含有大部分20kDa PDF的洗脫液合并，用3kDa透析膜濃縮至5ml量。將該部分加到一用PBS平衡的Superde×75(粒度排除色譜)柱上。濃縮的PDF匯集液以1ml/min的速度在4℃洗脫，每5ml收集一次，用SDS-PAGE分析。匯集最純的部分，儲(chǔ)存在-70℃。
(ⅴ)體外PDF化驗(yàn)化驗(yàn)在單96孔板中進(jìn)行，最終體積為100μl含有-20μlPDF(4μg/ml)-20μl100mM Hepes pH7.0+1MKCl+0.05％Brij-10μl測(cè)試化合物在20％DMSO中的系列稀釋液-50μl甲?；?Met-Ala-Ser(8mM)化驗(yàn)在37℃培養(yǎng)30分鐘。去甲?；?Met-Ala-Ser)產(chǎn)物的自由氨基基團(tuán)用熒光胺檢測(cè)，用下列添加物-50μl0.2M硼酸鹽pH9.5-50μl熒光胺(150μg/ml溶于干二噁烷)熒光用激發(fā)波長(zhǎng)390nM和發(fā)射波長(zhǎng)485nM在SLT Fluostar閱讀機(jī)上定量。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照反應(yīng)是無(wú)抑制劑反應(yīng)，其提供零抑制數(shù)；以及無(wú)酶亦無(wú)抑制劑的反應(yīng)，其提供100％的抑制數(shù)。通過(guò)將熒光單位轉(zhuǎn)換成％抑制量并將抑制劑濃度對(duì)％抑制量作圖來(lái)分析數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)符合一S形曲線的方程式y(tǒng)=A+((B-A)/(1+((C/×)D)))，其中A代表0抑制，B代表100％抑制而C代表IC50，D代表斜率。IC50代表能降低酶活力達(dá)50％的所需的抑制劑濃度(nM)。
本發(fā)明的化合物被發(fā)現(xiàn)能在體外抑制細(xì)菌PDF。另外，放線酰胺素也被發(fā)現(xiàn)可在體外抑制細(xì)菌PDF。
生物實(shí)施例C示范化合物2在體內(nèi)抑制PDF。
1阻遏tRNAi-Met轉(zhuǎn)甲酰反應(yīng)產(chǎn)生對(duì)化合物2〔非對(duì)映異構(gòu)體/異構(gòu)體A〕抗性。
三甲氧芐二胺嘧啶特異抑制二氫葉酸還原酶，因此降低了四氫葉酸(THF)衍生物，包括甲?；臍淙~酸(fTHF)，甲硫氨?；?tRNA甲?；D(zhuǎn)移酶(EC2.1.2.9)的底物的聚集。如果在補(bǔ)充了胸苷的豐富培養(yǎng)基中以前體形式額外加入所有的其生物合成和THF衍生物有關(guān)的基本代謝產(chǎn)物，例如泛酸鹽、甲硫氨酸、甘氨酸、嘌呤核苷酸和胸苷，則生長(zhǎng)在加入了胸苷(0.3mM)和三甲基芐二胺嘧啶(100μg/ml)的豐富培養(yǎng)基中的細(xì)菌能合成所有的除f-Met-tRNAi之外的正常細(xì)胞的化學(xué)組分。(Baumstark等，J.Bacteriol.129:457-471,1977)。替代使用未甲?；腗et-tRNAi，導(dǎo)致在N-末端缺少甲?；鶊F(tuán)的多肽的形成，與脫甲?；傅淖饔脽o(wú)關(guān)。如本發(fā)明人預(yù)計(jì)的那樣，在補(bǔ)充了三甲基芐二胺嘧啶和胸苷的LB培養(yǎng)基(胰蛋白胨10g/l，酵母抽提液5g/INaCl10g/IpH7.5)中生長(zhǎng)的DH5α細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)對(duì)化合物2(非對(duì)映異構(gòu)體A)有抗性。在表達(dá)的蛋白質(zhì)上經(jīng)歷正常的甲?；^(guò)程的細(xì)胞被化合物2A抑制，而其中同樣在這些條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞中制造的未甲酰化的蛋白質(zhì)不被化合物2A抑制。這些示范例證明了化合物2A很可能通過(guò)抑制PDF進(jìn)行的去甲酰化反應(yīng)來(lái)起作用。
表3.
2用化合物2A處理細(xì)菌，導(dǎo)致N-封端蛋白質(zhì)的積聚如果本發(fā)明的化合物確實(shí)在體內(nèi)抑制PDF，則用化合物2(實(shí)施例2，非對(duì)映異構(gòu)體A)對(duì)細(xì)菌處理的結(jié)果是在新合成的蛋白質(zhì)的N-末端有N-甲?；琢虬彼岬姆e聚。這些蛋白質(zhì)會(huì)是N-封端的，而且將不能被用作以Edman降解法進(jìn)行N-末端測(cè)序的底物。
為了測(cè)試這個(gè)假設(shè)，將一想得到的蛋白質(zhì)在存在或缺少測(cè)試化合物的情況下表達(dá)。將該蛋白質(zhì)分離，純化，然后采用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所知的技術(shù)對(duì)它進(jìn)行Edman降解。
讓用能表達(dá)人類鈣激活中性蛋白酶小調(diào)節(jié)亞基的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌細(xì)胞生長(zhǎng)至0.6OD600的濃度，然后在存在200μM化合物2A，存在240μM羧芐青霉素，或存在載體對(duì)照的情況下，采用IPTG來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞2.5小時(shí)以使之表達(dá)異種蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)抽提物用SDS-PAGE分離，洗脫鈣激活中性蛋白酶亞基，用Edman降解法，使用ABI自動(dòng)蛋白質(zhì)測(cè)序儀來(lái)測(cè)定該蛋白質(zhì)序列。等量的蛋白質(zhì)被測(cè)序。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用化合物2A處理的蛋白質(zhì)的產(chǎn)量和載體以及羧芐青霉素處理的對(duì)照比較，明顯下降了85％。
用從胃腫瘤活組織切片，采用InVitrogen Micro Fast Track mRNA分離試劑盒2.2版(目錄號(hào)K1520-02)得到的信使RNA，克隆鈣激活中性蛋白酶小調(diào)節(jié)亞基。用Promega Riboclone cDNA合成系統(tǒng)M-MLV-RT(H-),Notl(Promega，目錄號(hào)C1660)按照廠商的指示來(lái)合成由此mRNA而來(lái)的拷貝DNA。用Applied Biosystems,Inc.,Custom Services，以已出版的鈣激活中性蛋白酶小亞基序列(EMBL登錄號(hào)X04106)為基礎(chǔ)，來(lái)合成兩種在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)中使用的寡聚核苷酸引物。
將Hindlll/Xhol鈣激活中性蛋白酶片段采用標(biāo)準(zhǔn)程序克隆入Hindlll和Xhol消化的表達(dá)載體pET24d(+)(從Novagen Inc,(Madison,WI,USA))。連接混合物被用來(lái)轉(zhuǎn)化感受態(tài)的DH5α細(xì)胞(Life Technologies,Inc,Grand Island,NY,USACat#18265-017)。通過(guò)在YT培養(yǎng)基上加入30μg/ml的卡那霉素，37℃培養(yǎng)過(guò)夜來(lái)篩選菌落。采用Promega Plus SV miniprep kit來(lái)制備質(zhì)粒DNA帶有鈣激活中性蛋白酶插入列的克隆，用標(biāo)準(zhǔn)程序識(shí)別。DNA序列用如上所述的PE Applied Biosystems循環(huán)測(cè)序儀來(lái)確定。
克隆入pET24d(+)(稱為pET24-CANS)的大腸桿菌基因被用來(lái)轉(zhuǎn)化BL21DE3細(xì)胞(來(lái)自Novagen Inc,(Madison,Wisconsin))。37℃在添加了30μg/ml的卡那霉素的YT瓊脂培養(yǎng)基(8g/l胰蛋白胨，5g/酵母提取物，NaCl 5g/l，瓊脂15g/l)上選擇克隆。
權(quán)利要求
1．一種式(Ⅰ)化合物或它的醫(yī)藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽在制備抗菌組合物中的用途 其中R1代表氫，或C1-C6烷基，或被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)m-基團(tuán)，其中R10代表氫，或C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜環(huán)基團(tuán)，其中的任意一個(gè)可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，氰基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，而ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-,-O-或-S-鍵，而X代表-NH-,-O-或-S-，而m和n分別獨(dú)立的代表0或1；而A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)的一個(gè)基團(tuán) 其中R3代表氫，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，或者，R3和R4當(dāng)與它們分別連接的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)5到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選的與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，R5和R6獨(dú)立代表氫，或任選取代的C1-C8烷基，環(huán)烷基，芳基，芳基(C1-C6烷基)，雜環(huán)基，或雜環(huán)(C1-C6烷基)，或者，R5和R6當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)3到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，該雜環(huán)任選的與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，而R7代表氫，C1-C6烷基，或?；鶊F(tuán)。
2．一種治療人和非人類哺乳動(dòng)物的細(xì)菌感染的方法，其特征在于對(duì)患此類感染的對(duì)象施用抗菌有效劑量的如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物。
3．如權(quán)利要求1所述的用途，或如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于在式(1)的化合物中R1代表氫，或C1-C6烷基；R2代表R10-(X)n-(ALK)-基團(tuán)，其中R10代表氫，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜芳基基團(tuán)，其中的任意一個(gè)可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，而ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-,-O-或-S-鍵，而X代表-NH-,-O-或-S-，而n是0或1；而R3代表氫或C1-C6烷基，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，而R5和R6分別獨(dú)立代表氫，或C1-C6烷基，或者，R5和R6當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)3到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，而R7代表氫，或?；鶊F(tuán)。
4．一種醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)抗菌藥物組合物，其特征在于，它包含如權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物和除權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)的化合物以外的抗菌劑，以及醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的賦形劑或載體。
5．式(Ⅰ)的化合物或其醫(yī)藥學(xué)和獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽，其特征在于 R1代表氫，C1-C6烷基或被一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)m-基團(tuán)，其中R10代表氫，或C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜環(huán)基團(tuán)，其中任意一個(gè)可以是非取代或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟，氯，溴和碘)，三氟甲烷，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-,-O-或-S-鍵，而m代表0或1；A代表(ⅰ)式(ⅠA),(ⅠB),(ⅠC)或(ⅠD)中的一個(gè)基團(tuán) 其中R3代表氫，而R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，或者，R3和R4當(dāng)與它們連接的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)5到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，該環(huán)可任選與碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)稠合，R5和R6分別獨(dú)立代表氫，或被任選取代的C1-C8烷基，環(huán)烷基，芳基(C1-C6烷基)，非芳族雜環(huán)，或雜環(huán)(C1-C6烷基)，或者，R5和R6當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)3到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，該環(huán)任選和碳環(huán)或第二個(gè)雜環(huán)相稠合，而R7代表氫，C1-C6烷基，或酰基基團(tuán)；條件是(ⅰ)當(dāng)A是式(ⅠA)或(ⅠB)基團(tuán)，而R2是C2-C5烷基時(shí)，則R4不是天然α氨基酸的側(cè)鏈，或任一功能性取代基被保護(hù)，任一氨基基團(tuán)被?；?，任一羧基基團(tuán)被酯化的天然α氨基酸的側(cè)鏈；(ⅱ)當(dāng)A是式(ⅠA)或(ⅠB)的基團(tuán)時(shí)，則R4不是二環(huán)芳基甲基基團(tuán)；而(ⅲ)當(dāng)A是式(ⅠA)基團(tuán)而R2是環(huán)丙基甲基、環(huán)丁基甲基，或環(huán)戊基甲基，并且R5和R6之一是氫時(shí)，則R4不是叔丁基。
6．如權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于R1代表氫，或C1-C6烷基；R2代表R10-(ALK)-基團(tuán)，其中R10代表氫，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，環(huán)烷基，芳基，或雜芳基基團(tuán)，其中的任意一個(gè)可以是非取代的或被(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素(包括氟、氯、溴和碘)，三氟甲基，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB取代，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基，而ALK代表直鏈或支鏈二價(jià)C1-C6亞烷基，C2-C6，亞烯基，C2-C6亞炔基，而且可插入一個(gè)或多個(gè)非相鄰的-NH-,-O-或-S-鍵，而R3代表氫或C1-C6烷基，R4代表天然或非天然的α氨基酸的側(cè)鏈，R5和R6分別獨(dú)立代表氫，C1-C6烷基，或者，R5和R6當(dāng)與它們連接的氮原子結(jié)合在一起時(shí)，形成一個(gè)3到8個(gè)原子的可任選取代的飽和雜環(huán)，而R7代表氫或?；鶊F(tuán)；條件是當(dāng)A是式(ⅠA)的基團(tuán)時(shí)，則(ⅰ)R4不是天然α氨基酸的側(cè)鏈，或任一功能性取代基被保護(hù)，任一氨基基團(tuán)被?；?，任一羧基基團(tuán)被酯化的天然α氨基酸的側(cè)鏈；(ⅱ)R4不是稠合的二環(huán)芳基亞甲基基團(tuán)；而(ⅲ)當(dāng)R2是環(huán)烷基(C1-C6)時(shí)，R4不是叔丁基。
7．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R1是氫。
8．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是；任選取代的C1-C8烷基，C3-C6鏈烯基，C3-C6炔基或環(huán)烷基；在苯環(huán)中任選取代的苯基(C1-C6烷基)-，苯基(C3-C6鏈烯基)-或苯基(C3-C6炔基)-；在環(huán)烷基環(huán)中任選取代的環(huán)烷基(C1-C6烷基)-，環(huán)烷基(C3-C6鏈烯基)-，或環(huán)烷基(C3-C6炔基)-；在雜環(huán)中任選取代的雜環(huán)(C1-C6烷基)-，雜環(huán)(C3-C6鏈烯基)-，或雜環(huán)(C3-C6炔基)-；或CH3(CH2)pO(CH2)q-或CH3(CH2)pS(CH2)q-，其中p是0,1,2或3而q是1,2或3。
9．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是甲基，乙基，正或異丙基，正和異丁基，正戊基，異戊基，3-甲基-丁-1-基，正己基，正庚基，n-乙?；?，正辛基，甲硫基乙基，乙硫基甲基，2-甲氧基乙基，2-乙氧基乙基，2-乙氧基甲基，3-羥基丙基，烯丙基，3-苯基丙-3-烯-1-基，丙-2-炔-1-基，3-苯基丙-2-炔-1-基，3-(2-氯苯基)丙-2-炔-1-基，丁-2-炔-1-基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)戊基甲基，環(huán)戊基乙基，環(huán)戊基丙基，環(huán)己基甲基，環(huán)己基乙基，環(huán)己基丙基，呋喃-2-基甲基，呋喃-3-基甲基，四氫呋喃-2-基甲基，四氫呋喃-2-基甲基，哌啶基甲基，苯基丙基，4-氯苯基丙基，4-甲基苯基丙基，4-甲氧基苯基丙基，芐基，4-氯芐基，4-甲基芐基，或4-甲氧基芐基。
10．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R2是正丁基，芐基或環(huán)戊基甲基。
11．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3是氫。
12．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是天然α-氨基酸的特征性基團(tuán)，例如芐基，或4-甲氧基芐基，其任一官能性基團(tuán)可被保護(hù)，任一氨基可被?；?，任一存在的羧基可被酯化；-[Alk]nR9基團(tuán)，其中Alk是(C1-C6)亞烷基或(C2-C6)亞烯基基團(tuán)，可任選插入一個(gè)或多個(gè)-O-，或-S-原子，或-N(R12)-基團(tuán)[其中R12是氫或(C1-C6)烷基]，n是0或1，而R9是氫，或任選取代的苯基，芳基，雜環(huán)基，環(huán)烷基或環(huán)烯基基團(tuán)或(僅當(dāng)n為1時(shí))R9也可能為羥基，巰基，(C1-C6)烷硫基，氨基，鹵素，三氟甲烷，硝基，-COOH,-CONH2,-COORA,-NHCORA,-CONHRA,-NHRA,-NRARB，或-CONRARB，其中RA和RB分別獨(dú)立為(C1-C6)烷基基團(tuán)；或被式為-OCH2COR8的基團(tuán)在苯環(huán)內(nèi)取代的芐基，其中R8是羥基，氨基，(C1-C6)烷氧基，苯基(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基氨基，二((C1-C6)烷基)氨基，苯基(C1-C6)烷基氨基；或雜環(huán)(C1-C6)烷基基團(tuán)，它是非取代的或在雜環(huán)內(nèi)被鹵素，硝基，羧基，(C1-C6)烷氧基，氰基，(C1-C6)烷?；?，三氟甲基(C1-C6)烷基，羥基，甲?；?，氨基，(C1-C6)烷基氨基，二-(C1-C6)烷基氨基，巰基，(C1-C6)烷硫基，羥基(C1-C6)烷基，巰基(C1-C6)烷基，或(C1-C6)烷基芐基單-或二-取代；或-CRaRbRc基團(tuán)，其中每一個(gè)Ra，Rb和Rc獨(dú)立的為氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基；或Rc是氫而Ra和Rb分別獨(dú)立為苯基或雜芳基，例如吡啶基，或Rc是氫，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或(C3-C8)環(huán)烷基，以及Ra和Rb和與它們相連的碳原子一起形成3到8元的環(huán)烷基或5-到6-元的雜環(huán)；或Ra，Rb和Rc與它們相連的碳原子一起形成三環(huán)核(例如金剛烷基)；或Ra和Rb分別獨(dú)立的為(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，苯基(C1-C6)烷基，或如下為Rc定義的除氫外的基團(tuán)，或Ra和Rb和與它們相連的碳原子一起，形成環(huán)烷基或雜環(huán)，而Rc是氫，-OH,-SH，鹵素，-CN,-CO2H,(C1-C4)全氟烷基，-CH2OH,-CO2(C1-C6)烷基，-O(C1-C6)烷基，-O(C2-C6)鏈烯基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-S(C2-C6)鏈烯基，-SO(C2-C6)鏈烯基，-SO2(C2-C6)鏈烯基，或-Q-W基團(tuán)，其中Q代表化學(xué)鍵或-O-，-S-，-SO-或-SO2-，而W代表苯基，苯基烷基，(C3-C8)環(huán)烷基，(C3-C8)環(huán)烷基烷基，(C4-C8)環(huán)烯基，(C4-C8)環(huán)烯基烷基，雜芳基或雜芳基烷基基團(tuán)，其中W可任選的被從羥基，鹵素，-CN,-CO2H,-CO2(C1-C6)烷基，-CONH2,-CONH(C1-C6)烷基，-CONH(C1-C6烷基)2，-CHO,-CH2OH,(C1-C4)全氟烷基，-O(C1-C6)烷基，-S(C1-C6)烷基，-SO(C1-C6)烷基，-SO2(C1-C6)烷基，-NO2,-NH2,-NH(C1-C6)烷基，-N((C1-C6)烷基)2，-NHCO(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷基，(C2-C6)鏈烯基，(C2-C6)炔基，(C3-C8)環(huán)烷基，(C4-C8)環(huán)烯基，苯基或芐基中獨(dú)立選出的一個(gè)或多個(gè)取代基取代。
13．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是甲基，乙基，芐基，4-氯芐基，4-羥基芐基，苯基，環(huán)己基，環(huán)己基甲基，吡啶-3-基甲基，叔-丁氧基甲基，萘基甲基，異丁基，仲丁基，叔丁基，1-芐硫基-1-甲基乙基，1-甲硫基-1-甲基乙基，1-巰基-1-甲基乙基，1-甲氧基-1-甲基乙基，1-羥基-1-甲基乙基，1-氟-1-甲基乙基，2-羥基乙基，2-羧基乙基，2-甲基氨基甲?；一?，2-氨基甲?；一?，或4-氨基丁基。
14．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R4是叔丁基，異丁基，芐基或甲基。
15．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3和R4與它們分別相連的氮和碳原子結(jié)合在一起時(shí)，形成可被任選取代的5到8個(gè)原子的飽和雜環(huán)。
16．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R3和R4在與它們分別相連的氮和碳原子之間形成橋，所述橋由二價(jià)基-(CH2)3-6-，或-(CH2)r-O-(CH2)s-，或-(CH2)r-S-(CH2)s-表示，其中r和s每個(gè)分別為1,2或3，附加條件是r+S=2,3,4，或5。
17．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6分別獨(dú)立為氫，甲基，乙基，叔丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，1,1,3,3-四甲基丁基，芐基，或2-羥基乙基。
18．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和與它們相連的氮原子結(jié)合一起時(shí)，形成飽和的5-到8-元的單環(huán)N-雜環(huán)，該雜環(huán)通過(guò)該N原子相連，且任選包含-N(R11)-，其中R11是氫或C1-C6烷基，芐基，酰基，或氨基保護(hù)基團(tuán)，O,S,SO或SO2作為環(huán)上成員，和/或在一個(gè)或多個(gè)碳原子上任選被羥基，C1-C6烷基，羥基(C1-C6烷基)-，C1-C6烷氧基，氧，縮酮化的氧，氨基，單(C1-C6烷基)氨基，雙(C1-C6烷基)氨基，羧基，C1-C6烷氧基羰基，羥甲基，C1-C6烷氧基甲基，氨基甲?；瑔?C1-C6烷基)氨基甲?；?，雙(C1-C6烷基)氨基甲?；?，或羥基亞氨基取代。
19．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和與它們相連的氮原子結(jié)合一起時(shí)，形成取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氫-1-哌嗪基，嗎啉-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氫-1,4-噻嗪-4-基1,1-雙氧，噻唑烷-3-基，六氫吖庚因基或八氫吖辛因基環(huán)。
20．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R5和R6在和與它們相連的氮原子結(jié)合一起時(shí)，形成取代或非取代的1-吡咯烷基，哌啶-1-基，1-哌嗪基，六氫-1-哌嗪基，嗎啉-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基，四氫-1,4-噻嗪-4-基1-氧，四氫-1,4-噻嗪-4-基1,1-雙氧，六氫吖庚因基或八氫吖辛因基，上述的取代例是2-(甲基氨基甲?；?-1-吡咯烷基，2-(羥甲基)-1-哌啶基，4-羥基哌啶基，2-(甲基氨基甲酰基)哌啶基，4-羥基亞氨基哌啶基，4-甲氧基哌啶基，4-甲基哌啶-1基，4-芐基哌啶-1-基，4-乙酰基哌啶-1-基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4,5]癸-8-基，六氫-3-(甲基氨基甲?；?-2-噠嗪基，和六氫-1-(芐氧基羰基)-2-噠嗪基，十氫異喹啉-2-基，或1,2,3,4-四氫異喹啉-2-基環(huán)。
21．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R7是氫，或R20C(O)-基團(tuán)，其中R20是(C1-C6)烷基基團(tuán)，例如甲基或乙基。
22．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，R20是甲基或乙基。
23．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，A代表式(ⅠA)的基團(tuán)，R1代表氫，R2代表正丁基，芐基或環(huán)戊基甲基，R3是氫，R4是叔丁基，異丁基，芐基或甲基，R5是氫或甲基，而R6代表甲基。
24．如權(quán)利要求1所述的用途，權(quán)利要求2所述的方法，權(quán)利要求4所述的組合物，或權(quán)利要求5所述的化合物，其特征在于式(Ⅰ)的化合物中，A代表式(ⅠB)的基團(tuán)，R1代表氫，R2代表正丁基，芐基或環(huán)戊基甲基，R3代表氫，而R4是叔丁基，異丁基，芐基或甲基。
25．2R(或S)-[(甲?；?羥基-氨基)-甲基]-己酸(1S-二甲基氨基甲酰基-乙基)-酰胺，或它的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽。
26．2R(或S)-[(甲酰基-羥基-氨基)-甲基]-3-環(huán)戊基-丙酸(1S-二甲基-氨基甲?；?2,2-二甲基-丙基)-酰胺或它的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽。
27．如權(quán)利要求5所述的化合物，其在本文的實(shí)施例1-3,5-13,15-78的任一例中被公開(kāi)，或它的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽。
28．一種抗菌的醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)的組合物，其中包括如權(quán)利要求5到27中任一項(xiàng)所述的化合物，以及醫(yī)藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的賦形劑或載體。
29．一種用以鑒定抗菌化合物的方法，其特征在于，包括(ⅰ)在體外篩選測(cè)試化合物作為PDF抑制劑的活性，(ⅱ)篩選展現(xiàn)出所述PDF抑制劑活性的化合物，以測(cè)定其抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力。
30．一種抑制細(xì)菌PDF活性的化合物在制備抗菌組合物或藥劑中的用途，條件是(ⅰ)該化合物不是式(Ⅺ)的化合物RCO-CH(W)-NH-CO(Y)-CH-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是環(huán)氨基基團(tuán)，W是氫，甲基，異丙基，異丁基或芐基，而Y是氫，C1-C6烷基，苯基，芐基，4-氯芐基，4-硝基芐基，或4-氨基芐基；或，(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是異丙基而Y是正戊基；或，(c)R是二乙基氨基，W是甲基或異丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)該化合物不是包含二價(jià)的哌嗪-1,6-二基基團(tuán)的化合物。
31．一種治療病毒感染或污染的方法，其特征在于通過(guò)對(duì)患有這種感染或污染的病人給藥，或?qū)@種感染或污染的位置施用抗菌有效量的化合物，該化合物抑制細(xì)菌PDF酶的活性，條件是(ⅰ)該化合物不是式(Ⅺ)的化合物RCO-CH(W)-NH-CO-CH(Y)-CH2-CO-NH-OH(Ⅺ)其中，(a)R是環(huán)氨基基團(tuán)，W是氫，甲基，異丙基，異丁基或芐基，而Y是氫，C1-C6烷基，苯基，芐基，4-氯芐基，4-硝基芐基，或4-氨基芐基；或，(b)R是2-吡啶基氨基或2-噻唑基氨基，W是異丙基而Y是正戊基；或，(c)R是二乙基氨基，W是甲基或異丙基，而Y是正戊基；或(ⅱ)該化合物不是包含二價(jià)的哌嗪-1,6-二基基團(tuán)的化合物。
全文摘要
式(Ⅰ)的化合物是抗菌劑，其中R
文檔編號(hào)A61K31/445GK1298299SQ9980275
公開(kāi)日2001年6月6日 申請(qǐng)日期1999年2月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年2月7日
發(fā)明者M·G·亨特, R·P·貝克特, J·M·克萊門茨, M·惠特克, S·J·戴維斯, L·M·普拉特, Z·M·斯帕沃爾德, S·朗克伯瑞 申請(qǐng)人:英國(guó)生物技術(shù)藥物有限公司