專利名稱：新的大環(huán)內(nèi)酯類化合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的康卡那霉素(concanamycin)類化合物及康卡那霉素類化合物在人體在動物體的預防和治療處理中的應用。
在人體和動物體內(nèi)，破骨細胞對老骨組織的連續(xù)吸收作用和成骨細胞的連續(xù)骨再生作用之間有一個動態(tài)平衡。在健康機體內(nèi)，骨吸收和再生是密切聯(lián)系的，從而使總骨量保持恒定。在促骨性疾病如骨缺乏癥中，吸收作用超過再生作用，導致骨組織的凈損失。破骨細胞位于骨骼表面的腔隙內(nèi)，其吸收活性是通過質子分泌而使骨骼和破骨細胞膜之間的細胞外間隙酸化。所產(chǎn)生的低pH值使骨骼脫礦質，并激活溶酶體酶類從而使所釋放出的膠原基質降解。
酸化機理的研究結果表明，位于破骨細胞膜內(nèi)的一種酶，即ATP依賴性質子泵(或H+-ATP酶)，尤其是破骨細胞質子泵，在跨過該膜的pH梯度的形成和維持中起到?jīng)Q定性的作用。破骨細胞質子泵屬于多體液泡類的H+-ATP酶，這類酶存在于多種細胞內(nèi)液泡(如溶酶體、內(nèi)涵素包被泡囊和嗜鉻顆粒)的膜內(nèi)。抑制破骨細胞質子泵，并因此而抑制酸化過程，是抑制骨質疏松和其他骨缺乏疾病中骨組織損失的一種方法。
本申請涉及的是提供破骨細胞質子泵抑制劑，因此涉及適于治療以骨組織損失為特征的疾病的藥物組合物。
康卡那霉素A、B和C是可由鏈霉菌制取的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，已知這些抗生素是液泡H+-ATP酶的強烈抑制劑(S.Drose等，Biochemistry323902-3906，1993)。由于液泡H+-ATP酶對許多細胞內(nèi)功能來說都是至關重要的，所以預計這類酶的抑制劑會有很高的細胞毒性。但出人意料的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)某些康卡那霉素類化合物是具有高活性的、極具特異性的破骨細胞質子泵抑制劑(OPPI)，也就是說，這些破骨細胞質子泵抑制劑沒有任何可測出的毒性(相對說來不影響液泡H+-ATP酶)，因此具有廣泛的醫(yī)療應用。已知的康卡那霉素A、B和C的特征是下列結構 康卡那霉素A∶Ra＝CH3;Rb＝O-C(＝O)-NH2康卡那霉素B∶Ra＝H;Rb＝O-C(＝O)-NH2康卡那霉素C∶Ra＝CH3;Rb＝OH.
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物在制備適于預防和治療對破骨細胞質子泵的抑制有反應的疾病的藥物中的應用 其中R1為羥基、2-羥基乙氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰氧基、鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺酰基、或下式的吡喃氧基 其中X為下式基團 其中R3為羥基、C1-C4烷酰氧基或有機磺酰氧基;
R4為羥基、C1-C4烷酰氧基或氨基甲酰氧基;
R2為氫、氫過氧基、羥基、C1-C4烷氧基;優(yōu)選氫、羥基或甲氧基;
Y為下式基團 其中R5為羥基或C1-C4烷酰氧基;
R6和R7彼此獨立地為氫或優(yōu)選為甲基。
C1-C4烷氧基的例子有乙氧基，特別是甲氧基。C1-C4烷酰氧基的例子有甲酰氧基、丙酰氧基，特別是乙酰氧基。有機磺酰氧基的例子有C1-C4烷磺酰氧基，例如甲磺酰氧基，或者未取代或被C1-C4烷基(如甲基)、鹵素(如氯或溴)或硝基單取代的苯磺酰氧基，例如4-硝基苯磺酰氧基。
如甲R1是酮基，則C23與氧之間的鍵是雙鍵。
術語鹵素代表氟、氯、溴或磺，特別是氯或溴。
優(yōu)選如下式(Ⅰ)化合物的應用，其中R1為羥基、甲氧基、NH3、氯、溴、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為羥基、乙酰氧基或氨基甲酰氧基;
X為下式基團 其中R3為羥基、乙酰氧基、或未取代或被C1-C4烷基、鹵素或硝基單取代的苯磺酰氧基;
R2為氫或羥基;
Y為下式基團 其中R5為羥基或乙酰氧基;
R6為甲基。
特別優(yōu)選的是如下式(Ⅰ)化合物的應用，其中R1為羥基、甲氧基、疊氮基、氯、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為羥基或氨基甲酰氧基;
X為下式基團 其中R3為羥基或乙酰氧基;
R2為氫或羥基;
Y為下式基團 R5為羥基或乙酰氧基。
本發(fā)明特別涉及以下化合物的應用康卡那霉素A、康卡那霉素C、康卡那環(huán)內(nèi)酯A(concanolide A)、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、23-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A、3，9-二-O-乙?；悼敲顾谹、16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21，23-二脫氧-23-表疊氮基康卡那環(huán)內(nèi)酯A、23-O-對硝基苯磺?；?21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮、脫氧康卡那霉素A和/或21，23-二脫氧-23-表氯康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
已知的及新的式(Ⅰ)化合物具有有價值的藥理性質，可用于預防和治療對破骨細胞質子泵的抑制有反應的疾病。這些以骨組織損失增加為特征的疾病例如原發(fā)性骨質疏松(幼年性、特發(fā)性、先天性、絕經(jīng)后(一型)和退化性(二型)骨質疏松)和繼發(fā)性骨缺乏(與以下疾病有關或由這些疾病引起惡性腫瘤、腎機能不全、內(nèi)分泌病、吸收障礙綜合癥、肝臟疾病、運動不能、關節(jié)病和醫(yī)原性疾病)。
為了測定抑制活性，有牛腦的內(nèi)涵素包被泡囊(含有液泡H+-ATP酶)作為酶的來源(見Xie等，Methods in Enzym.157634-646，1988)。利用小鼠3T3成纖維細胞的匯合培養(yǎng)物和XTT四唑染料來測定所研究的化合物的細胞毒性(Roehm等，J.Immunol.Methods142257-265，1991)?？梢园凑毡景l(fā)明使用的化合物是H+-ATP酶質子泵的強烈抑制劑，其IC50值在亞μM范圍內(nèi)(約0.5-1nM)，而細胞毒性(IC50)在μM范圍內(nèi)(約2-10μM)。把H+-ATP酶試驗和細胞毒性試驗中測得的抑制活性進行比較，發(fā)現(xiàn)這些化合物具有醫(yī)療用途。可以按照本發(fā)明使用的化合物的IC50(μM，細胞毒性試驗)∶IC50(μM，H+-ATP酶試驗)比值大于500，因此它們對液泡H+-ATP酶的抑制作用顯著，但細胞毒性低?？梢园凑毡景l(fā)明使用的化合物還在小鼠顱蓋試驗中抑制骨吸收(見ReynoldsBall等，Organic Culture in Biomedical Research，Cambridge University Press，355-366，1976)。小鼠顱蓋試驗中的IC50值＜0.3μM。
用式(Ⅰ)化合物制備的藥物優(yōu)選為藥物組合物的形式，這些組合物適于對人體或動物體進行預防和治療處理，特別是在上述疾病的情況下。這些藥物組合物含有有效量的、特別是有效預防或治療上述疾病之一量的活性成分，以及可藥用的載體，這些可藥用的載體適于局部施用或胃腸內(nèi)給藥(如直腸或口服給藥)或腸胃外給藥(如經(jīng)皮、皮下或靜脈給藥)，可以是無機的或有機的、固體的或液體的。優(yōu)選口服劑型。在預防和治療溫血動物的對破骨細胞質子泵有反應的疾病時，給該溫血動物施用具有有效預防或治療作用的、破骨細胞質子泵抑制劑量的式(Ⅰ)化合物。有效成分的劑量和治療的本質(給藥方式連續(xù)、間歇、循環(huán))主要取決于疾病的本質、所要治療的動物的種屬和體重、機體的防御狀況和給藥方式。例如，給體重約為70kg的溫血動物施用的日劑量約為0.5mg至1500mg，特別是約5mg至500mg，優(yōu)選約10mg至300mg式(Ⅰ)化合物。該總日劑量優(yōu)選每天分1-3次服用?？诜闆r下劑量優(yōu)選在所指出劑量的上限范圍。
口服給藥時，優(yōu)選使用含有活性成分的片劑或明膠膠囊劑;其中還含有稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘油;和/或潤滑劑，例如硅石、滑石、硬脂酸或其鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)、和/或聚乙二醇。片劑還可含有粘合劑，例如硅酸鋁鎂、淀粉(如玉米淀粉、麥淀粉或米淀粉)、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，如果需要，還可含有崩解劑，例如淀粉、瓊脂、藻酸或其鹽(如藻酸鈉)，和/或泡騰混合物、或吸附劑、著色劑、調味劑和甜味劑。本發(fā)明的藥物活性化合物還可以以可非腸道施用的組合物形式或輸注液形式使用。這類輸注液優(yōu)選可以在使用前配制的等滲水溶液或懸浮液，例如含有活性成分及載體(如甘露糖醇)的冰凍干燥組合物。這些藥物組合物可以是無菌的，而且/或者可以含有賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑和/或乳化劑;增溶劑;調節(jié)滲透壓的鹽類和/或緩沖劑。有關的藥物組合物在需要時可以含有其他有藥理活性的物質(如抗生素)，這類藥物組合物以本身已知的方式制備，例如借助常規(guī)的混合、造粒、成型、溶解或冰凍干燥方法，并含有約0.01%至90%活性成分，在冰凍干燥物的場合最高可達100%，優(yōu)選約0.1%至50%，更為優(yōu)選的是1%至30%，低于1%的活性成分濃度特別適于局部施用的組合物。
本發(fā)明還涉及式(Ⅰ)化合物及含有這些式(Ⅰ)化合物的藥物組合物 其中R6和R7彼此獨立地為氫，或優(yōu)選為甲基，并且R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺?；蛄u基，R2為氫，Y為下式基團 或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為氨基甲酰氧基，X為下式基團 R2為羥基，Y為下式基團 或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺酰基、2-羥基乙氧基或下式的吡喃氧基 其中R4為羥基或氨基甲酰氧基，X為下式基團 其中R3為未取代或被C1-C4烷基、鹵素或硝基單取代的苯磺酰氧基，R2為氫、氫過氧基或羥基，Y為下式基團
或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺?；?、C1-C4烷氧基或C1-C4烷酰氧基，R2為羥基或C1-C4烷氧基，優(yōu)選羥基或甲氧基，Y為下式基團 R5為C1-C4烷酰氧基。
特別優(yōu)選的是如下式(Ⅰ)化合物，其中R1為羥基、疊氮基、對硝基苯磺?；⑼蚵?，R2為氫，Y為下式基團 或者R1為下式的吡喃氧基 其中R4為氨基甲酰氧基，X為下式基團
其中R3為被硝基單取代的苯磺酰氧基，R2為羥基，Y為下式基團 或者R1為乙酰氧基，R2為羥基，Y為下式基團 R5為乙酰氧基。
本發(fā)明特別涉及21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21，23-二脫氧-23-表疊氮基康卡那環(huán)內(nèi)酯A、23-O-對硝基苯磺?；?21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮、脫氧康卡那霉素A和/或21，23-二脫氧-23-表氯康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
式(Ⅰ)化合物是已知的或者可以用本身已知的方法來制備?？梢园凑毡景l(fā)明使用的康卡那霉素A、B和C，在按照本發(fā)明制備新的式(Ⅰ)化合物時也需作為起始原料使用，它們可以按照Kinashi等人的方法(J.Antibiotics371333-1343，1984)，通過用淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌(Streptomyces diastatochromogenes)S-45(或鏈霉菌Go22/15，DSM8426)發(fā)酵并從菌絲體中分離而制得。
9位帶有酮基官能團(Y為羰基)的式(Ⅰ)化合物可以通過3′，9-二酮來制備。后者可以由康卡那霉素A經(jīng)溫和氧化(因為對水解高度不穩(wěn)定)制得，例如用四氧釕酸(Ⅶ)四正丙銨試劑(TPAP)進行氧化。在溫和條件下，例如用硼氫化鈉時，二酮中的3′-酮基可以被選擇性還原。
9、23和/或3′位的羥基的酰化，同樣以本身已知的方式，用C1-C4烷酸酐(例如，要引入乙?；鶗r用乙酐)在吡啶中進行。這樣，康卡那霉素A或B與乙酐反應生成9，3′-二-O-乙?；苌?用康卡那霉素C作原料時則形成9，3′，4′-三-O-乙?；苌?。在去糖基化康卡那環(huán)內(nèi)酯A和B(R1為羥基)中，9，23-二-O-乙?；苌锟梢砸酝瑯拥姆绞街迫　Ｈ绻?位和23位的兩個羥基中有一個被封閉，例如由醚官能團封閉，則游離羥基被酯化，形成單O-乙?；苌?。
康卡那霉素A和C中的3′-羥基可以通過與相應的磺酰氯反應而選擇性地磺化。在后續(xù)的反應中，3′-磺酰氧基化合物可以通過與疊氮化物(如疊氮化鈉)反應而轉化為3′-表疊氮基化合物。
為制備康卡那霉素的21-C1-C4烷基衍生物，使康卡那霉素與相應的C1-C4烷醇在酸(優(yōu)選路易斯酸，如FeCl3)存在下反應。這種康卡那霉素21-C1-C4烷基衍生物可以在酸性條件下(如在鹽酸存在下)用氰基硼氫化鈉轉化為相應的21-脫氧衍生物。
為使康卡那霉素去糖基化(并制備R1為羥基的康卡那環(huán)內(nèi)酯)，使康卡那霉素與有機磺酸(如對甲苯磺酸)反應，適當對在鹽酸存在下在水性有機溶劑(如含水二甲亞砜或乙腈)中反應。
R1為C1-C4烷氧基或2-羥基乙氧基的式(Ⅰ)化合物可以如下制備例如，對康卡那霉素進行酸催化的烷醇分解，例如甲醇分解或乙二醇分解。最好用對甲苯磺酸作催化劑。在路易斯酸存在下，也可以以這種方式制取21，23-二烷氧基衍生物。
微生物的保藏鏈霉菌Go22/15株于1993年7月19日保藏在德國微生物和細胞培養(yǎng)物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(DSM)，Brunswick，Germany)，保藏號為DSM8426。
下列實施例說明本發(fā)明，但決不限制本發(fā)明。
實驗部分一般方法熔點熔點和分解點用賴克特熱載臺顯微鏡測定，未經(jīng)校正。
質譜EI-MSVarian MAT731，70eV;Finnigan MAT311A，70eV，高分辨率，用全氟煤油作參比化合物;FAB-MSFinnigan MAT 95A(基質α-硝基芐醇)。DCI-MSFinnigan MAT95A(反應氣NH3)。
紅外光譜用Perkin-Elmer 298型光譜儀和Perkin-Elmer FT-IR 1600型光譜儀測定紅外光譜;所有化合物均以KBr壓片形式測定。
電子能譜Kontron Uvikon860。
比旋Perkin-Elmer 241型旋光儀;比旋以[10-1degcm2g-1]給出，c以[g100-1·ml-1]給出。
1H-NMR光譜Varian XL200(200MHz)、Varian VXR200(200MHz)、Varian VXR500(500MHz)、Bruker AMX300(300MHz)?；瘜W位移以相對于四甲硅烷內(nèi)標的δH值表示;偶合常數(shù)(J)以Hz表示?？s寫s＝單峰，d＝雙峰，t＝三峰，dd＝雙雙峰，m＝多峰，br＝寬峰。
13C-NMR光譜Varian XL200(50.3MHz)、VarianVXR200(50.3MHz)、Varian VXR500(125.7MHz)、Bruker AMX300(75.5MHz)。化學位移以相對于四甲硅烷內(nèi)標的δc值表示。
柱色譜0.08mm以下的硅膠60(Macherey&Nagel);0.2-0.05mm硅膠60(Macherey&Nagel);0.04-0.063mm硅膠60(Macherey&Nagel);所有硅膠柱均在p＝0.4-0.8巴過壓下操作(閃式色譜);Sephadex LH-20(Pharmacia)。
HPLC泵Kontron 414;檢測器Kontron 420;混合室Kontron M800、Kontron Multiport;數(shù)據(jù)系統(tǒng)Kontron Data System 450;分析性20ml進料回路;前置柱Waters Guard Pak Precolumn Module 5×5mm，帶有Resolve RP-18筒;柱Kontron 10C18。體系恒溶劑體系，CH3CN/水65∶35，流速4ml/分，245nm和285nm檢測。
溶劑和化學試劑閃式色譜所用的溶劑預先蒸餾;HPLC只使用梯度級溶劑(Merck)和使用前經(jīng)過膜過濾的雙蒸水。各種反應一般使用梯度級試劑(Merck)，適當時用合適的干燥劑預先干燥。所用的標準化學試劑得自Fluka、Aldrich和Merck，原樣使用。
色譜用的洗脫劑混合物體系ACHCl3/甲醇8∶2;體系BCHCl3/甲醇9∶1;體系CCHCl3/甲醇95∶5;體系D乙酸乙酯/正己烷4∶1;體系E乙酸乙酯/正己烷2∶1;體系F乙酸乙酯/正己烷1∶1;體系G乙酸乙酯/正己烷1∶2;體系H乙酸乙酯/正己烷1∶3;體系I乙酸乙酯/苯4∶1;體系K甲醇/H2O8∶2(在RP-8上)。
噴顯劑Reagenzien Merck的薄層色譜和紙色譜染色劑。
營養(yǎng)培養(yǎng)基組成成分所有營養(yǎng)培養(yǎng)基組成成分都得自Difco。
帶通氣裝置的搖動器和發(fā)酵罐Braun Certomat U、Braun Schuttelschrank(搖動室)BS4、Braun Biostat E(5升;5升/分)、Braun Biostat E(15升;10升/分)、Braun Biostat U(50升;2米3/小時)。
反應混合物的后處理常規(guī)后處理應理解為用指出的溶劑萃取三次，合并有機相，用Na2SO4干燥，隨后用旋轉蒸發(fā)器真空濃縮。
實施例1康卡那霉素A、B和C的分離和鑒定a)鏈霉菌(Go22/15)的培養(yǎng)和后處理將菌株保持在含M2瓊脂的培養(yǎng)皿上(10g/l麥芽汁、4g/l酵母提取物、4g/l葡萄糖、25g/l瓊脂)。該平板培養(yǎng)物用48小時振蕩培養(yǎng)物或老平板培養(yǎng)物接種，并于28℃下培養(yǎng)約10天。形成典型的棕黃色斑點。該菌株的氣生菌絲體呈白灰色。除非另外指出，在裝有100mlM2營養(yǎng)培養(yǎng)基的250ml帶擋板錐形瓶中，或者在裝有150mlM2營養(yǎng)培養(yǎng)基的1000ml錐形瓶中進行振蕩培養(yǎng)發(fā)酵。
為進行培養(yǎng)，用得自過度生長平板培養(yǎng)物的瓊脂塊(1cm2)進行接種，并將培養(yǎng)瓶在28℃下振蕩72小時。將作為生物反應器發(fā)酵預培養(yǎng)物的振蕩培養(yǎng)物振蕩48小時，然在4℃下冷卻24小時。
在5升或50升裝有M2營養(yǎng)培養(yǎng)基(10g/l麥芽汁、4g/l葡萄糖、4g/l酵母提取物、0.15g/l Niax消泡劑)的發(fā)酵罐中進行生物反應器發(fā)酵。在5升發(fā)酵罐中，以220rpm和5升/分的通氣速度進行發(fā)酵;在50升發(fā)酵罐中，以200rpm和2米3/小時的通氣速度進行發(fā)酵。接種時，所有情況下都使用10%(體積)48小時冷卻預培養(yǎng)物。發(fā)酵在5.8-7.4的pH范圍內(nèi)進行72小時，用2N檸檬酸和2NNaOH自動調節(jié)pH范圍。發(fā)酵結束時，通常會觀察到pH值為7.4，檸檬酸大量消耗。如果72小時后的pH值低于7.0，則把發(fā)酵延長24小時。收集時的pH值在6.8和7.4之間變化，用0.5N NaOH調至7.4。加入20%(體積)Celite后，可以分離出菌絲體。濾餅用丙酮吸收，在超聲浴中或使用Ultraturrax(以50升規(guī)模發(fā)酵時)處理15分鐘，使細胞消化。將該批物料再次過濾，真空蒸發(fā)掉有機溶劑。重復該過程，然后合并水性菌絲體萃取液，用乙酸乙酯萃取2-3次。只在個別情況下才用乙酸乙酯振蕩2-3次萃取培養(yǎng)濾液。
b)從鏈霉菌Go 22/15中分離康卡那霉素以進行光譜鑒定和生物試驗取8.06g由50升發(fā)酵得到的菌絲體萃取液，按下列方案分離康卡那霉素硅膠柱色譜(CHCl3/甲醇100∶0至9∶1梯度);
分離出康卡那霉素C，用SephadexLH20柱色譜法(甲醇)進一步純化;
分離出康卡那霉素A和B，并在RP-18硅膠上用MPLC法(CH3CN/水65∶35)分離。
初始的硅膠色譜分離(梯度CHCl3/體系C/體系B，8×60cm)就得到在色譜學和光譜學上高度富集的康卡那霉素級分。為了對康卡那霉素進行光譜鑒定，取120mg康卡那霉素C進行Sephadex LH-20凝膠過濾(MeOH，3×80cm)，得到109mg白色無定形固體形式的康卡那霉素C。取含有113g同源康卡那霉素A和B的混合物，在RP-18硅膠柱上用中壓色譜法(4×60cm，CH3CN-H2O 65∶35)分離出84mg康卡那霉素A和13mg康卡那霉素B。
康卡那霉素Am.p.163℃C46H75NO14(866.10)Rf0.19(RP-18，CH3CN-H2O 65∶35);0.31(體系B);0.25(體系I)Rt19.1 分(標準HPLC系統(tǒng))FAB-MS(負離子)m/e＝865[M-]FT-IRν＝3430，2960，2880，1710，1690，1620w，1450，1380，1250，1110，1070，1030，970，920，770cm-1[α]D20＝-18(c＝0.5，MeOH)康卡那霉素Bm.p.156℃C45H73NO14(851.51)Rf0.25(RP-18，CH3CN-H2O 65∶35);0.31(體系B);0.25(體系I)Rt14.1 分(標準HPLC系統(tǒng))FAB-MS(負離子)m/e＝851[M-]FAB-MS(正離子)m/e＝875[M++Na]DCI-MS(正離子)m/e＝852(100%，M+);861(75%);870(26%，M+NH4+)[α]D20＝-18(c＝0.5，MeOH)康卡那霉素Cm.p.153℃C45H74O13(823.07)Rf0.35(體系B);0.25(體系I)Rt16.8 分(標準HPLC系統(tǒng))FAB-MS(負離子)m/e＝822[M-]FT-IRν＝3430，2960，2880，1690，1620w，1450，1380，1250，1110，1070，1030，970，920，760cm-1[α]D20＝-17(c＝0.5，MeOH).
實施例221-O-甲基康卡那霉素A在徹底加熱過的50ml燒瓶中，將800mg(0.92mmol)康卡那霉素A溶解于19ml無水甲醇中。然后加入1ml甲醇中的15mg FeCl3(0.09mmol，0.1當量)，混合物于室溫下攪拌15分鐘。加入20ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7，Merck)后，將溶液轉移到250ml燒瓶中，真空下小心地脫除有機溶劑。剩余的水性殘余物用CHCl3萃取，經(jīng)常規(guī)后處理后用硅膠過濾(體系D，4×10cm)，得到標題化合物，m.p.141℃。
C47H77NO14(880.13)Rf0.31(體系B);0.58(體系I).
FAB-MS(正離子)m/e＝904[M++Na](5%);665(100%)FAB-MS(r 負離子)m/e＝1034[M-+基質](40%);880[M-]UV(MeOH)λmax(ε)＝245(37000);283nm(17000)[α]D20＝+45.6(c＝0.4，MeOH)實施例39，3′-二-O-乙?；悼敲顾谹在78mg康卡那霉素A在0.8ml吡啶中的溶液中，加入0.7ml乙酐，將該反應混合物于室溫下攪拌3小時。當檢測不到起始原料時(TLC監(jiān)測)，將反應混合物滴加到10ml冰水中，并水解30分鐘。所得混合物用CHCl3萃取，然后進行標準后處理，所得粗產(chǎn)物用甲苯吸收若干次，以共沸蒸餾出吡啶和乙酸。用硅膠柱色譜法(體系E，3×30cm)純化產(chǎn)物，得到標題化合物。
C50H79NO16(950.17)Rf0.69(體系C);0.63(體系E).
FAB-MS(正離子)m/e＝972[M++Na]FAB-MS(負離子)m/e＝948[M-][α]D20＝-28(c＝0.5，CHCl3).
實施例43′-O-對硝基芐磺?；悼敲顾谹在50mg(0.058mmol)康卡那霉素A在5ml CH2Cl2中的溶液中，依次加入35mgDMAP(0.29mmol，5當量)、0.5ml三乙胺和130mg對硝基苯-4-磺酰氯(0.58mmol，10當量)。將該反應混合物在室溫下攪拌2小時。轉化完全后，加冰停止反應，分開各相，水相用CH2Cl2萃取。經(jīng)常規(guī)后處理和后續(xù)的硅膠柱色譜(體系G，3×40cm)，得到黃色油狀的標題化合物，其中污染有約10%不穩(wěn)定的3′，9-二-O-對硝基芐磺?；悼敲顾谹。
C52H78N2O18S(1051.25)Rf0.72(體系B);0.93(體系E).
FAB-MS(負離子)m/e＝1051[M-]IRν＝3450，2980，1720，1690，1610，1530(-NO2)，1350(-SO2-O-)，1190(-SO2-O-)，1080cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(41000);284nm(17000)[α]D20＝-38(c＝0.3，CHCl3).
實施例53′-脫氧表疊氮基康卡那霉素A將96mg(0.092mmol)3′-O-對硝基芐磺酰基康卡那霉素A(實施例4)和120mg NaN3(1.84mmol，20當量)在10ml DMF中的混合物，于45℃下攪拌5小時。加入15ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)后，溶液用CHCl3萃取。經(jīng)常規(guī)后處理后，混合物用甲苯吸收若干次，以通過在旋轉蒸發(fā)器中共沸蒸餾(25mmHg，50℃)除去殘余的DMF。隨后用硅膠柱色譜法純化粗產(chǎn)物(體系E，3×30cm)，得到淺黃色無定形固體狀的標題化合物，m.p.123℃。
C46H74N4O13(891.11)Rf0.74(體系B);0.74(體系F);0.18(體系G)FAB-MS(負離子)m/e＝1144[M-+基質];890[M-]IRν＝3450，2980，2110(-N3)，1720，1690，1620w，1250，1110，1090cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(37000);284nm(16500)[α]D20＝-17(c＝0.6，MeOH)13C-NMR(500MHz，CDCl3-CD3OD 2∶1，-20℃)d＝6.9(20-Me);9.3(-18-Me);11.7(10-Me);13.3(24-Me);14.2(4-Me);16.2(12-Me);16.9(6-Me);17.7，17.8(C-28和6-Me);21.8，22.7(8-Et);35.0(C-6);35.9(C-10);36.3(C-2);37.0(C-18);39.6(C-22);41.40，41.44(C-20和C-24);43.7(CD-8);45.4(C-11);55.8(16-OMe);59.2，59.3(16-OMe和C-3);68.0(C-5);70.2(C-19);73.5(C-7);75.1，75.5，75.6，75.9(C-17，C-23，C-25和C-4);79.7(C-9);81.7(C-16);94.2(C-1);99.7(C-21);123.0(C-13);126.7(C-15);128.3(C-27);131.0(C-26);131.5，132.0(C-3和C-4);134.1(C-14);141.1，141.7(C-2和C-5);143.0(C-12);156.3(OCONH2);166.9(C-1)ppm.
實施例623-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A在140mg(0.17mmol)康卡那霉素C在25ml甲醇(分析級)中的溶液中，加入20mg(0.10mmol，0.6當量)甲苯-4-磺酸單水合物(工業(yè)級，經(jīng)過氯仿重結晶)，反應混合物于室溫下攪拌3小時，直到反應完全(TLC監(jiān)測)，原來混濁的溶液變?yōu)橥耆该鳌Ｈ缓髮⒃摶旌衔镛D移到裝有5ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)的250ml燒瓶中，在旋轉蒸發(fā)器中于真空下小心地除去有機溶劑，水性殘余物用CHCl3萃取。進行常規(guī)后處理，隨后進行硅膠柱色譜(體系G，3×30cm)，得到標題化合物。
C40H66O10(706.96)Rf0.62(體系C);0.44(體系G)FAB-MS(負離子)m/e＝707[M-]IRν＝3460，2960，1690，1610w;1440，1350，1240，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(40000);283nm(18000)[α]D20＝+16(c＝0.3，CHCl3).
實施例721，23-二-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A按照使康卡那霉素甲醇分解的一般方法(見實施例6)，但使用工業(yè)級的化學試劑，使140mg(0.17mmol)康卡那霉素C的溶液發(fā)生反應。進行完全類似的后處理，隨后進行硅膠柱色譜(體系G，3×30cm)，得到白色無定形固體狀的標題化合物，m.p.97℃。
C41H68O10(720.98)Rf0.53(體系C);0.50(體系G)FAB-MS(正離子)m/e＝745[M++Na]FAB-MS(負離子)m/e＝721[M-];773[M-+基質]IRν＝3480，2960，1690，1610w;1440，1350，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(42000);283nm(18000)[α]D20＝+9(c＝0.3，CHCl3)13C-NMR(125MHz，CH2Cl2-CD3OD 2∶1，-20℃)d＝7.5(20-Me);10.5(18-Me);12.1(8-Et);13.4(24-Me);14.3(4-Me);16.4(12-Me);17.1(6-Me);18.0(C-28);34.5，35.0，35.4，35.9(C-6，C-10，C-18，C-22);38.3，41.3(C-20和C-24);44.3(C-8);46.0(C-11);46.8(21-OMe);56.0(16-OMe);56.7(23-OMe);60.3(2-OMe);70.0(C-19);73.6(C-7);76.3，77.3，79.8，79.9(C-9，C-17，C-23，C-25);82.8(C-16);104.2(C-21);123.3(C-13);127.0(C-15);130.5，130.7，131.8，132.6(C-3，C-4，C-26，C-28);134.3(C-14);141.9，142.1(C-2和C-5);143.4(C-12);167.0(C-1)ppm.
實施例89-O-乙?；?21，23-二-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A按照使康卡那霉素乙?；囊话惴椒?見實施例3)，使37mg(0.051mmol)21，23-二-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A發(fā)生反應。經(jīng)硅膠柱色譜(體系G，2×20cm)，得到標題化合物。
C43H70O11(763.02)Rf0.56(體系G)FAB-MS(正離子)m/e＝787[M++Na]FAB-MS(負離子)m/e＝763[M-]IRν＝3420，2960，1740，1690，1620w;1450，1370，1250，1100;1010cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(42000);283nm(21000)[α]D20＝+5(c＝0.5，CHCl3).
實施例923-O-(2-羥基乙基)康卡那環(huán)內(nèi)酯A將700mg(0.81mmol)康卡那霉素A溶解于50ml 1，2-乙二醇、10ml THF和0.2ml 0.5N HCl的混合物中，反應混合物于室溫下攪拌。18小時后加入10ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)和190ml水中斷反應，經(jīng)常規(guī)后處理后用CHCl3進行萃取。經(jīng)硅膠柱色譜(體系E，4×40cm)后得到標題化合物。
C41H68O11(736.98)Rf0.43(體系B);0.45(體系E)IRν＝3450，2930，1720sh，1690，1620w，1460，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(35000);283nm(16000)[α]D20＝-5(c＝0.3，CHCl3)實施例10康卡那環(huán)內(nèi)酯A在118mg(0.143mmol)康卡那霉素C在15ml乙腈和3.5ml水中的溶液中，加入95mg(0.50mmol，3.5當量)甲苯-4-磺酸單水合物，反應混合物于室溫下攪拌20小時。然后使該混合物在冰浴中冷卻至0℃，加入30ml飽和NaHCO3溶液，反應混合物用CHCl3快速萃取。經(jīng)常規(guī)后處理后，可以用硅膠柱色譜法(體系E，3×30cm)得到標題化合物。
C39H64O10(692.93)Rf0.29(體系C);0.79(體系E);0.17(體系F)FAB-MS(負離子)m/e＝693[M-]IRν＝3460，2960，1690，1620w，1250，1100，960cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(32000);283nm(17000)[α]D20＝+11(c＝0.3，CHCl3).
實施例119，21-二-O-乙?；悼黔h(huán)內(nèi)酯A按照制備乙?；悼敲顾氐囊话惴椒?見實施例3)，由48mg(0.070mmol)康卡那環(huán)內(nèi)酯A制備標題化合物。用硅膠色譜法純化粗產(chǎn)物后，得到純化合物，m.p.125℃。
C43H68O12(777.01)Rf0.54(體系G)FAB-MS(正離子)m/e＝799[M++Na]FAB-MS(負離子)m/e＝776[M-]IRν＝3450，2980，1740，1690，1620w，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(35000);283nm(16000)[α]D20＝+7(c＝0.4，CH2Cl2).
實施例1221-脫氧康卡那霉素A在388mg(0.44mmol)21-O-甲基康卡那霉素A和193mg NaBH3CN(3.08mmol，7當量)在50ml乙醇中的溶液中，加入4ml 0.5N HCl，反應混合物在室溫下攪拌，直到用TLC法檢測不出起始原料。由于原料和產(chǎn)物的色譜行為相似，看來難以用TLC法監(jiān)測反應過程，但產(chǎn)物斑點可以用茴香醛/H2SO4噴顯劑染成黃棕色，而起始原料可以被染成藍紫色。3小時后，加入60ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)，真空除去乙醇，水溶液用CHCl3萃取。常規(guī)后處理后進行硅膠色譜(體系D，4×40cm)，m.p.140℃。
C46H75NO13(850.10)Rf＝0.31(體系B);0.54(體系D)FAB-MS(正離子)m/e＝872[M++Na]IRν＝3450，2980，1710，1690，1620w，1380，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(36500);283nm(16000)[α]D20＝-46(c＝1，MeOH)1H-NMR(300MHz，CDCl3)d＝1.58(d br，J＝6，3H，28-H3);1.80(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);2.18(ddd，J＝12，5，1.5，1H，22-Heq);2.70(m，1-H，6-H);3.22(m obs，1-H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.55(s，3H，2-OMe);3.74(ddd，J＝11，9，5，1H，3-H);3.83(dd，J＝9，9，1H，16-H);4.28(dd，J＝9，9，1H，3-H);4.56(dd，J＝10，2，1H，1-H);4.88(s，2H，NH2);5.18(d br，J＝10，1H，17-H);5.21(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.31(ddq，J＝15，8，2，1H，26-H);5.54(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.6-5.7(s br，1H，5-H);5.77(d br，J＝10，1H，13-H);6.35(s，1H，3-H);6.51(dd，J＝15，10，1H，14-H)ppm.
實施例1321-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A在10mg21-脫氧康卡那霉素A(0.117mmol)在15ml甲醇中的溶液中，加入500mg(2.6mmol，22.5當量)甲苯-4-磺酸在3ml1NHCl中的溶液，反應混合物在室溫下攪拌48小時。加入20ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)后，真空脫除溶劑。經(jīng)標準后處理后進行硅膠柱色譜(體系E，然后體系D)，得到標題化合物，m.p.104℃。
C39H64O9(676.93)Rf＝0.55(體系B);0.61(體系E);0.44(體系F)FAB-MS(正離子)m/e＝833[M++基質];699[M++Na]IRν＝3450，2960，1690，1650w，1620w，1450，1380，-1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(39000);282nm(17000)[α]D20＝-23(c＝0.6，MeOH)1H-NMR(200MHz，CDCl3)d＝1.62(dd，J＝6，1，3H，28-H3);1.83(s br，3H，12-Me);1.98(s br，3H，4-Me);2.78(m，1H，6-H);3.24(s，3H，16-OMe);3.58(s，3H，2-OMe);3.31(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.83(dd，J＝9，9，1H，H-16);5.23(dd，J＝9，1.5，1H，17-H);5.25(dd，J＝15，10，1H，15-H);5.33(ddq，J＝15，8，1，1H，27-H);5.57(dq，J＝15，6，1H，26-H);5.80(d，J＝10，1H，13-H);6.38(s，1H，3-H);6.52(dd，J＝15，10，1H，14-H)ppm.
實施例14康卡那霉素A-3′，9-二酮將400mg(0.462mmol)康卡那霉素A溶解在40ml無水二氯甲烷中，并加入250mg(4當量)4-甲基嗎啉4-氧化物單水合物(Fluka)和40ml(0.1當量)過釕酸四丙銨鹽(Fluka)。所得混合物在室溫下攪拌，溶液起初的綠色逐漸變?yōu)楹谏?。反應完全后，但最?小時后(催化劑活性變化很大)，不經(jīng)進一步后處理即用硅膠柱色譜法(體系E，3×30cm)分離反應混合物，得到標題化合物，m.p.170℃。
C46H71NO14(862.07)Rf＝0.54(體系B);0.53(體系E)FAB-MS(負離子)m/e＝862[M-]IRν＝3450，2970，1740，1690，1620w，1450，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(34000);283nm(15000)[α]D20＝-52.0(c＝0.9，CH2Cl2).
實施例15康卡那霉素A-9-酮將126.5mg(0.146mmol)康卡那霉素A-3′，9-二酮在11ml乙醇中的溶液冷卻到-78℃。加入38.5mg(7當量)NaBH4后，將反應混合物攪拌1小時，同時維持冷卻。在仍然是冷的混合物中加入10ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)停止反應，然后加熱至室溫并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)常規(guī)后處理后得到粗產(chǎn)物，用柱色譜法(乙酸乙酯∶正己烷3∶1)純化，得到標題化合物，m.p.138℃。
C46H73NO14(864.08)Rf＝0.42(體系B);0.24(體系E)FAB-MS(負離子)m/e＝863[M-]IRν＝3450，2970，1740，1690，1620w，1450，1250，1100cm-1UV(MeOH)λmax(ε)＝245(34000);283nm(15000)[α]D20＝-43.0(c＝0.4，CH2Cl2).
實施例16藥物組合物按常規(guī)方式以下列組成制備含有20mg活性成分(如上述實施例中所述式(Ⅰ)化合物中的一種)的片劑。
組成活性成分20mg麥淀粉60mg乳糖50mg膠態(tài)硅石5mg滑石9mg硬脂酸鎂1mg145mg制備將活性成分與一部分麥淀粉、乳糖、膠態(tài)硅石混合，使該混合物強制過篩。另一部分麥淀粉加5倍水在水浴上制成糊狀物。將粉末混合物與糊狀物捏和，直到形成弱塑性體。
將該塑性體壓過3mm網(wǎng)目篩并干燥，所得干燥顆粒再強制過篩。然后混入其余的麥淀粉、滑石和硬脂酸鎂，將該混合物壓制成重145mg并帶有斷裂槽的片劑。
實施例1721-脫氧康卡那霉素A
在500mg(0.57mmol)21-O-甲基康卡那霉素A和258mg NaBH3CN(4.11mmol，7當量)在65ml乙醇中的溶液中，加入5ml 0.5N HCl，然后將反應混合物在室溫下攪拌4小時。用RP-8硅膠板(Merck)進行TLC監(jiān)測(洗脫劑MeOH/H2O 9∶2)。為進行后處理，加入60ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7)，真空除去乙醇，水性殘余物用CHCl3萃取。在RP-18硅膠上用MPLC法進行純化(洗脫劑MeOH/H2O 8∶2)。得量為228mg(47%)，m.p.140℃。
Rf＝0.44(體系K)實施例18和1921-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A和16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A在467mg 21-脫氧康卡那霉素A(0.55mmol)在55ml CH3CN/H2O(5∶1)中的溶液中，加入350mg(1.83mmol，3當量)甲苯磺酸單水合物(經(jīng)過CHCl3重結晶)，反應混合物于38℃下攪拌12小時。為進行后處理，將反應混合物冷卻至0℃，加入50ml飽和NaHCO3溶液，真空除去有機溶劑，水相用CHCl3萃取。硅膠TLC監(jiān)測(洗脫劑∶乙酸乙酯/己烷1∶1)顯示，除了起始斑點處的起始原料外，還有兩個新的區(qū)域。硅膠柱色譜(乙酸乙酯/己烷1∶1乙酸乙酯梯度)得到63mg(22%轉化率)16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、122mg 21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A(42%轉化率)和105mg起始原料。
21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯AM.p.122℃C39H64O9(676.93)Rf＝0.40(體系F)FAB-MS(正離子)m/e＝699[M++Na]
IRν＝3450，2960，1690，1650w，1620w，1450，1380，1250，1110cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(39000);282nm(17000)[α]D20＝-23(c＝0.6，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.78-0.86(m，12H，20-Me，18-Me，8-乙基-CH3，24-Me);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，10-Me);1.09-1.18(m，4H，22β-H，24H，8-乙基-CH2);1.42(ddt，J＝11，8，3，1H，8-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.88(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);1.97-2.07(m，4H，11-H2，22α-H，18-H);2.38(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.26-2.33(m，2H，23-H，25-H);3.43(dt，J＝10，0.5，1H，21-H);3.51(s，3H，2-OMe);3.62(dd，J＝10，1，1H，19-H);3.67(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);5.11(dq，J＝9，0.5，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.28(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.56(dq，J＝15，6.6，1H，27-H);5.68(d，J＝9.5，1H，5-H);5.76(d，J＝11，1H，13-H);6.43(s，1H，3-H);6.61(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯AM.p.87℃C38H62O9(662.90)Rf＝0.60(體系F)FAB-MS(正離子)m/e＝684[M++Na]IRν＝3449，2962，2929，1711，1623，1454，1374，1244，1106，1016，970cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝243(23200);278nm(13400)[α]D20＝-108.61(c＝0.86，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.86(m，3H，8-乙基-CH3);0.90(d，J＝6.5，3H，24-Me);0.93(d，J＝6.5，3H，10-Me);0.99(d，J＝7，3H，20-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，18-Me);1.08(d，J＝6.5，3H，6-Me);1.10(m，comp，8-乙基-CH2，β-H);1.15-1.24(m，3H，24-H，22β-H，8-乙基-CH2，α-H);1.36(m，1H，8-H);1.53(dd，J＝16，9，1H，11β-H);1.65(s，3H，12-Me);1.71(dd，J＝6.6，1.5，3H，28-Me);1.79(m，1H，20-H);1.86(d，J＝18，1H，11α-H);1.92(s，3H，4-Me);2.08(dd，J＝14，4，1H，22α-H);2.18(m，1H，18-H);2.24(m，1H，10-H);2.63(m，1H，6-H);3.12(dd，J＝10，0.5，1H，9-H);3.28(ddd，J＝12，12，5，1H，23-H);3.37(m，2H，21-H，25-H);3.56(s，3H，2-OMe);3.57(dd，J＝10，2，1H，7-H);3.90(dd，J＝9，1H，9-H);4.59(dd，J＝9，1H，16-H);5.03(dd，J＝9，1.5，1H，17-H);5.38(m，comp，1H，26-H);5.43(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.69(dq，J＝15，6，1H，27-H);5.79(d，J＝11，1H，13-H);5.93(d，J＝10，1H，5-H);6.30(dd，J＝15，11，1H，14-H);6.43(s，1H，3-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.7(20-Me);12.5(10-Me);13.5(24-Me);13.7(18-Me);14.6(4-Me);17.2(8-CH2-CH3)18.1(28-Me);18.3(6-Me);19.3(12-Me);25.2(8-CH2-CH3);35.4(C-10);36.0(C-6);39.1(C-22);39.3(C-20);39.8(C-18);42.8(C-11);44.0(C-24);45.7(C-8);60.2(2-OMe);73.6(C-21);77.1(C-9);77.3(C-23);79.1(C-7);79.3(C-16);81.8(C-19);82.5(C-17);83.2(C-25);121.9(C-13);128.4(C-15);129.1(C-16);129.6(C-27);130.9(C-26);131.9(C-3);132.7(C-4);138.7(C-12);141.6(C-5);142.5(C-2);165.7(C-1)ppm.
實施例2023-O-對硝基苯磺酰基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A在85.5mg 21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A(0.13mmol)在5mlCH2Cl2中的溶液中，依次加入179.5mg(1.5mmol，11.3當量)DMAP、1.6ml三乙胺和334mg對硝基苯磺酰氯(1.5mmol，11.3當量)。反應混合物于0℃下攪拌1小時，加冰停止反應。分開各相，水相用CHCl3萃取。真空除去有機溶劑，反應混合物用硅膠柱色譜法純化(洗脫劑∶乙酸乙酯/己烷2∶3)。得量96.6mg(85%)。
M.p.96℃C45H67O14NS(878.09)Rf＝0.56(體系F)FAB-MS(負離子)m/e＝859[M-H2O]IRν＝3485，2967，2875，1696，1534，1351，1248，1186，1102，915cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(55700);278nm(28200)[α]D20＝-108.61(c＝0.62，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.55(d，J＝6.5，3H，24-Me);0.73(d，J＝7，3H，20-Me);0.80(m，6H，18-Me，8-乙基-CH3);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，3H，10-Me);1.06(m，2H，8-乙基-CH2);1.40-1.49(m，3H，8-H，24-H，22β-H);1.57(dd，J＝6.6，1.5，3H，28-Me);1.68(m，1H，20-H);1.80(s，3H，12-Me);1.93(s，3H，4-Me);1.96-2.03(m，3H，18-H，11-CH2);2.16(m，1H，22α-H);2.40(m，1H，10-H);2.66(m，1H，6-H);3.12(dd，J＝10，0.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.36(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.43(m，1H，21-H);3.50(s，3H，2-OMe);3.55(m，1H，17-H);3.68(dd，J＝10，2，1H，19-H);3.85(dd，J＝9，1H，16-H);4.42(m，1H，23-H);5.17(comp，17-H);5.24(m，2H，26-H，15-H);5.55(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.67(d，J＝10，1H，5-H);5.75(d，J＝11，1H，13-H);6.41(s，1H，3-H);6.62(dd，J＝15，11，1H，14-H);8.18(d，J＝8.8，2H，3-H);8.46(d，J＝8.5，2H，2-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.1(20-Me);9.7(18-Me);12.0(8-CH2-CH3)，13.6(24-Me);14.3(4-Me);16.5(12-Me);17.9(28-Me);22.0(10-Me);23.1(8-CH2-CH3);35.4(C-6);36.1(C-10);37.3(C-22);37.8(C-18);39.7(C-20);41.7(C-24);44.3(C-8);45.9(C-11);56.0(16-OMe);59.6(2-OMe);69.7(C-7);73.9(C-19);76.3(C-21);76.4(C-17);79.9(C-9);82.7(C-16);82.9(C-25);87.6(C-23);123.3(C-13);125.1(2xC-3);127.1(C-15);129.8(2xC-2);130.1(C-27);130.3(C-26);131.7(C-3);132.0(C-4);134.2(C-14);141.6(C-5);142.2(C-2);143.2(C-12，C-SO3);151.2(C-NO2);166.7(C-1)ppm.
實施例2121，23-二脫氧-23-表疊氮基康卡那環(huán)內(nèi)酯A于40℃下，將119mg23-O-對硝基苯磺?；?21-脫氧康卡環(huán)內(nèi)酯A(0.13mmol)和163mg(2.5mmol)NaN3在16.5ml DMF中的混合物攪拌45分鐘。加入15ml磷酸鹽緩沖液(pH＝7，Merck)后，溶液用CHCl3萃取。經(jīng)常規(guī)后處理后，反應混合物用甲苯吸收若干次，以在旋轉蒸發(fā)器中通過共沸蒸餾(25mmHg，50℃)除去殘余的DMF。隨后進行柱色譜(乙酸乙酯/己烷1∶2)，有可能得到63mg(69%)產(chǎn)物和32mg起始原料。
M.p.97℃C39H63O8N3(701.90)Rf＝0.43(體系G)FAB-MS(正離子)m/e＝723[M++Na]IRν＝3448，2966，2930，2098，1695，1622，1454，1379，1249，1104，967cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(33400);282nm(14000)[α]D20＝-108.61(c＝0.62，MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.81(m，12H，24-Me，8-乙基-CH3，18-Me，20-Me);0.98(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝6.5，3H，10-Me);1.10(m，2H，8-乙基-CH2);1.43(m，1H，8-H);1.54(m，3H，22β-H，24-H，20-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.88(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);1.98(m，2H，11-CH2);2.04(m，2H，22α-H，18-H);2.39(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.11(d，J＝10，5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.54(s，3H，2-OMe);3.62(m，2H，19-H，25-H);3.68(m，2H，21-H，7-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.91(m，1H，23-H);5.12(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.23(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.58(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.68(d，J＝10，1H，5-H);5.76(d，J＝11，1H，13-H);6.42(s，1H，3-H);6.60(dd，J＝14，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.3(20-Me);9.9(18-Me);12.2(8-乙基-CH3);14.5(4-Me);14.9(24-Me);16.6(12-Me);17.3(6-Me);18.0(28-Me);22.0(10-Me);23.3(8-乙基-CH2);34.9(C-22);35.7(C-6);36.2(C-10);38.2(C-18);39.8(C-24，C-20);44.7(C-8);46.2(C-11);6.1(16-OMe);59.7(2-OMe);63.2(C-23);70.0(C-19);73.6(C-7);74.2(C-21);76.5(C-17);79.9(C-25);80.0(C-9);83.1(C-16);123.6(C-13);127.4(C-15);129.5(C-27);131.2(C-26);131.7(C-3);132.2(C-4);134.3(C-14);141.7(C-5);142.5(C-2);143.4(C-12);166.8(C-1)ppm.
實施例2221，23-二脫氧-23-表氯康卡那環(huán)內(nèi)酯A于100℃下，將92.7mg(0.14mmol)21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A和61.4mg(0.23mmol，1.6當量)三苯膦在20ml CCl4中的混合物攪拌24小時。將反應混合物冷卻至室溫，然后用旋轉蒸發(fā)器除去溶劑，殘余物用柱色譜法分離(硅膠，洗脫劑∶乙酸乙酯/己烷1∶2)。得到22.1mg氯化物(43%轉化率)和43.2mg起始原料。
M.p.100℃C39H63O8Cl(695.37)Rf＝0.47(體系G)FAB-MS(正離子)m/e＝694/696[M+]，716/718[M++Na]IRν＝3505，2966，2875，1695，1453，1358，1248，1104，1005，967，762cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(35100);283nm(15600)[α]D20＝18.5(c＝0.59MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.82(m，12H，24-Me，18-Me，20-Me，8-乙基-CH3);0.99(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，10-Me);1.11(m，2H，8-乙基-CH2);1.43(ddt，J＝11，8，3，1H，8-H);1.60(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.62(m，comp，1H，20-H);1.68(ddq，J＝10，6.5，3，1H，24-H);1.76(m，1H，22β-H);1.88(s，3H，12-Me);1.93(m，comp，2H，11-CH2);1.94(s，3H，4-Me);2.04(m，1H，18-H);2.13(dd，J＝14，5，1H，22α-H);2.40(m，1H，10-H);2.67(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10.5，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.52(s，3H，2-OMe);3.64(dd，J＝10.5，1.5，1H，19-H);3.68(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.81(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.68(dd，J＝10，2.5，1H，7-H);3.81(dd，J＝10，8，1H，25-H);3.86(dd，J＝9，1H，16-H);3.91(dt，J＝10，1，1H，21-H);4.47(n，1H，23-H);5.14(dd，J＝9，0.5，1H，17-H);5.15(dd，J＝15，9，1H，15-H);5.26(ddq，J＝15，8，1，1H，26-H);5.60(dq，J＝15，6，1H，27-H);5.68(d，J＝10，1H，5-H);5.80(d，J＝11，1H，13-H);6.42(s，1H，3-H);6.62(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝8.3(20-Me);9.8(18-Me);12.0(8-CH2-CH3);14.3(4-Me);15.7(24-Me);16.5(12-Me);17.1(6-Me);18.0(28-Me);21.8(10-Me);23.1(8-CH2-CH3);35.4(C-6);36.3(C-10);38.0(C-18);38.9(C-22);39.4(C-20);40.5(C-24);44.4(C-8);45.8(C-11);56.0(16-OMe);59.7(2-OMe);65.0(C-23);69.9(C-19);73.0(C-21);74.2(C-7);76.4(C-17);78.8(C-25);79.8(C-9);82.9(C-16);123.4(C-13);127.2(C-15);129.5(C-27);130.8(C-26);131.5(C-3);132.1(C-4);134.0(C-14);141.3(C-5);142.3(C-2);143.0(C-12);166.6(C-1)ppm.
實施例2321-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A氧化成21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮將138mg21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A(0.20mmol)溶解于20ml無水CH2Cl2中，加入87.5mg(0.65mmol，3.25當量)4-甲基嗎啉4-氧化物單水合物和6.2mg(0.02mmol，0.1當量)過釕酸四丙銨鹽，反應混合物于室溫下攪拌2小時。不經(jīng)進一步的后處理，用硅膠色譜法分離反應混合物(洗脫劑乙酸乙酯/己烷1∶1)，得到45.2mg21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮(39%轉化率)、20.9mg 21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮(17%轉化率)和16mg起始原料。
產(chǎn)物的種類可通過改變反應溫度來控制。0℃時只以低收率(＜20%)得到21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮，室溫時還得到21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮，而21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮的收率沒有增加。
21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮M.p.98℃C39H62O9(674.91)Rf＝0.57(體系F)FAB-MS(正離子)m/e＝696[M++Na]IRν＝3451，2969，2931，1709，1621，1455，1356，1248，1103，967cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝245(26200);282nm(11500)[α]20D＝+3.7(c＝0.27MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.83(m，12H，20-Me，18-Me，20-Me，8-乙基-CH3);0.99(d，J＝7，3H，6-Me);1.02(d，J＝7，3H，10-Me);1.10(m，2H，8-乙基-CH2);1.42(m，1H，8-H);1.63(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.80(m，1H，20-H);1.89(s，3H，12-Me);1.94(s，3H，4-Me);2.00-2.09(m，3H，18-H，11-CH2);2.31(m，2H，24-H，22β-H);2.40(m，1H，10-H);2.52(dd，J＝9，2.5，1H，22α-H);2.68(m，1H，6-H);3.12(d，J＝10，1H，9-H);3.22(s，3H，16-OMe);3.53(s，3H，2-OMe);3.59(dd，J＝11，8，1H，25-H);3.67(m，3H，7-H，19-H，21-H);3.87(dd，J＝9，1H，16-H);5.12(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.15(dd，15，9，1H，15-H);5.40(ddq，J＝10，6.5，2，1H，27-H);5.63(dq，J＝15，6.5，1H，26-H);5.69(d，J＝10，1H，13-H);5.76(d，J＝11，1H，5-H);6.42(s，1H，3-H);6.63(d，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝7.8(20-Me);9.7(24-Me，18-Me);12.0(8-乙基-CH3);14.4(4-Me);16.4(12-Me);17.2(6-Me);18.0(28-Me);22.0(10-Me);23.0(8-乙基-CH2);35.4(C-6);36.0(C-10);37.7(C-18);40.6(C-20);44.3(C-8);46.0(C-11);46.7(C-22);50.4(C-24);56.0(16-OMe);59.6(2-OMe);69.7(C-19);73.8(C-21);76.3(C-17);78.7(C-7);79.8(C-9);82.6(C-16);84.6(C-25);123.3(C-13);127.0(C-15);130.1(C-26);130.6(C-27);131.7(C-3);132.0(C-4);134.6(C-14);141.6(C-5);142.1(C-12);143.3(C-2);166.8(C-1);210.7(C-23)ppm.
21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮M.p.100℃C39H60O9(672.90)Rf＝0.71(體系F)FAB-MS(正離子)m/e＝694[M++Na]IRν＝3454，2970，2932，1701，1623，1454，1357，1248，1104，968cm-1UV(MeOH)λmax(e)＝244(34400);278nm(15100)[α]20D＝-53.75(c＝0.4MeOH)1H-NMR(500MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δH＝0.71(t，J＝7，3H，8-乙基-CH3);0.81(d，J＝7，3H，18-Me);0.84(d，J＝7，3H，24-Me);0.85(d，J＝7，3H，20-Me);0.97(d，J＝7，3H，6-Me);1.09(d，J＝7，3H，10-Me);1.11(m，comp，1H，8-乙基-CH2，β-H);1.44(ddt，J＝13.5，11，7，1H，8-乙基-CH2，α-H);1.64(dd，J＝6.5，1.5，3H，28-Me);1.80(m，1H，20-H);1.94(s，3H，12-Me);1.97(s，3H，4-Me);2.05(m，1H，18-H);2.31(m，3H，24-H，22β-H，11β-H);2.42(dd，J＝16，8，1H，11α-H);2.52(dd，J＝14，2.5，1H，22α-H);2.61(ddd，J＝10，7，2.5，1H，6-H);2.78(dd，J＝10，2.5，1H，8-H);2.93(m，1H，10-H);3.24(s，3H，16-OMe);3.45(dd，J＝10，2.5，1H，19-H);3.55(s，3H，2-OMe);3.60(m，2H，21-H，25-H);3.67(m，1H，7-H);3.89(dd，J＝9，1H，16-H);5.19(dd，J＝9，1，1H，17-H);5.24(dd，J＝14.5，9，1H，25-H);5.41(ddq，J＝15，8，1.5，1H，26-H);5.63(dq，J＝15，6.5，1H，27-H);5.73(d，J＝9.5，1H，5-H);5.93(d，J＝10.5，1H，13H);6.50(s，1H，3-H);6.67(dd，J＝15，11，1H，14-H)ppm.
13C-NMR(125MHz，CD2Cl2/CD3OD2∶1，-20℃)δC＝7.8(20-Me);9.7(24-Me);9.8(18-Me);12.2(8-乙基-CH3);14.4(4-Me);15.9(12-Me);16.5(6-Me);18.0(10-Me);20.8(8-乙基-CH2);35.4(C-6);37.8(C-18);40.5(C-20);42.0(C-11);46.0(C-10);46.7(C-22);50.4(C-24);54.2(C-8);56.0(16-OMe);59.7(2-OMe);69.6(C-7);75.9(C-19);76.2(C-17);78.7(C-21);82.7(C-16);84.5(C-25);124.7(C-13);127.8(C-15);130.0(C-27);130.5(C-26);131.6(C-3);133.0(C-4);133.9(C-14);140.0(C-5);141.5(C-2);142.3(C-12);166.5(C-1);210.6(C-23);218.1(C-9)ppm.
權利要求
1.式(Ⅰ)化合物在制備適于預防和治療對破骨細胞質子泵的抑制有反應的疾病的藥物中的應用 其中R1為羥基、2-羥基乙氧基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷酰氧基、鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺?；?、或下式的吡喃氧基 其中X為下式基團 其中R3為羥基、C1-C4烷酰氧基或有機磺酰氧基；R4為羥基、C1-C4烷酰氧基或氨基甲酰氧基；R2為氫、氫過氧基、羥基或C1-C4烷氧基；Y為下式基團 其中R5為羥基或C1-C4烷酰氧基；R6和R7彼此獨立地為氫或甲基。
2.根據(jù)權利要求1的式(Ⅰ)化合物的應用，其中R1為羥基、甲氧基、NH3、氯、溴、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為羥基、乙酰氧基或氨基甲酰氧基;X為下式基團 其中R3為羥基、乙酰氧基、或未取代或被C1-C4烷基、鹵素或硝基單取代的苯磺酰氧基;R2為氫或羥基;Y為下式基團 其中R5為羥基或乙酰氧基;R6為甲基。
3.根據(jù)權利要求1的式(Ⅰ)化合物的應用，其中R1為羥基、甲氧基、NH3、氯、酮基、或下式的吡喃氧基 其中R4為羥基或氨基甲酰氧基;X為下式基團 其中R3為羥基或乙酰氧基;R2為氫或羥基;Y為下式基團 R5為羥基或乙酰氧基。
4.根據(jù)權利要求1的康卡那霉素A的應用。
5.根據(jù)權利要求1的康卡那環(huán)內(nèi)酯A的應用。
6.根據(jù)權利要求1的康卡那霉素B的應用。
7.根據(jù)權利要求1的康卡那環(huán)內(nèi)酯B的應用。
8.根據(jù)權利要求1的康卡那霉素C的應用。
9.根據(jù)權利要求1的21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A的應用。
10.根據(jù)權利要求1的21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯B的應用。
11.根據(jù)權利要求1的23-O-甲基康卡那環(huán)內(nèi)酯A的應用。
12.根據(jù)權利要求1的3′，9-二-O-乙?；悼敲顾谹的應用。
13.根據(jù)權利要求1的下列化合物的應用16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21，23-二脫氧-23-表疊氮基康卡那環(huán)內(nèi)酯A、23-O-對硝基苯磺?；?21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮、21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-二酮和/或21，23-二脫氧-23-表氯康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
14.式(Ⅰ)化合物 其中R6和R7彼此獨立地為氫或甲基，并且R1為羥基、鹵素、氨基、疊氮基、對硝基苯磺?；蛲?，R2為氫，Y為下式基團 或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為氨基甲酰氧基，X為下式基團 R2為羥基，Y為下式基團 或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、2-羥基乙氧基、酮基、對硝基苯磺?；蛳率降倪拎趸?其中R4為羥基或氨基甲酰氧基，X為下式基團 其中R3為未取代或被C1-C4烷基、鹵素或硝基單取代的苯磺酰氧基，R2為氫、氫過氧基或羥基，Y為下式基團 或者R1為鹵素、氨基、疊氮基、酮基、對硝基苯磺酰基、C1-C4烷氧基或C1-C4烷酰氧基，R2為羥基或C1-C4烷氧基，Y為下式基團 R5為C1-C4烷酰氧基。
15.根據(jù)權利要求14的式(Ⅰ)化合物，其中R1為羥基、疊氮基或氯，R2為氫，Y為下式基團 或者R1為下式的吡喃氧基 其中R4為氨基甲酰氧基，X為下式基團 其中R3為被硝基單取代的苯磺酰氧基，R2為羥基，Y為下式基團 或者R1為乙酰氧基，R2為羥基，Y為下式基團 R5為乙酰氧基。
16.根據(jù)權利要求14的21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
17.根據(jù)權利要求14的16-脫甲基-21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
18.根據(jù)權利要求14的21，23-二脫氧-23-表疊氮基康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
19.根據(jù)權利要求14的21，23-二脫氧-23-表氯康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
20.根據(jù)權利要求14的23-O-對硝基苯磺?；?21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A。
21.根據(jù)權利要求14的21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-23-酮。
22.根據(jù)權利要求14的21-脫氧康卡那環(huán)內(nèi)酯A-9，23-酮。
23.含有根據(jù)權利要求14的式(Ⅰ)化合物的藥物組合物。
24.根據(jù)權利要求14的式(Ⅰ)化合物，該化合物用于對人體或動物體進行預防或治療性處理的方法。
全文摘要
式(I)化合物適于制備用于治療和預防對破骨細胞質子泵的抑制有反應的疾病的藥物。其中各符號的含義如說明書所述。
文檔編號A61K31/70GK1106401SQ94108569
公開日1995年8月9日 申請日期1994年8月15日 優(yōu)先權日1993年8月16日
發(fā)明者A·齊克, K·U·賓塞爾, C·波迪恩 申請人:西巴-蓋爾基股份公司