專利名稱：用于保健和治療的富硒微生物制劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用微生物制備的保健、治療制品及其生產(chǎn)方法，具體說是一種利用光合細(xì)菌生產(chǎn)含有有機(jī)硒和中藥有效成份及光合細(xì)菌菌體蛋白的保健治療制劑。
目前已知的合成有機(jī)硒的方法很多，主要分兩種一種為生物法，如硒酵母、硒蘑菇；另一種為生物化學(xué)法，如卡拉膠、硫代硫酸軟骨素等，其硒轉(zhuǎn)化率低，轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物單一，只含有硒蛋白或硒酸酯多糖，而象硒核酸，硒卜啉色素從未見報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)利用光合細(xì)菌可以將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為包括硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸。硒卜啉色素等有機(jī)硒化合物。同時(shí)，光合細(xì)菌菌體蛋白含有18種氨基酸，多種維生素，其中B族維生素特別是B12的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于酵母。另外，含有泛醌、卜啉色素及類胡蘿卜色素等化合物及核酸片段，作為轉(zhuǎn)化無機(jī)硒遠(yuǎn)優(yōu)于酵母。
中藥有多種加工方法。如水提、酒精提取，CN93104737.4是利用食用菌發(fā)酵加工中草藥。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，光合細(xì)菌能利用中草藥中的一些小分子，合成光合細(xì)菌的菌體蛋白，同時(shí)又不破壞藥效成份，二者合起來，形成一種比中藥成份更加豐富的藥物。
本發(fā)明的目的是，提供一種利用微生物轉(zhuǎn)化無機(jī)硒及加工中草藥的方法，二者合二為一就形成一種利用微生物生產(chǎn)用于治療和保健的富硒微生物制劑的方法。
本發(fā)明中所述的用于生產(chǎn)富硒微生物保健和治療制劑的微生物為CGMCCNO0192光合細(xì)菌，于1993年2月22日已在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏，其中含有9株光合細(xì)菌，分別為Rhodospirillium1株Rhodopseudomonas2株Rodobacter2株Chromatium1株Chlorobium1株紅硫細(xì)菌2株。
光合細(xì)菌混合培養(yǎng)物CGMCC NO 0192的培養(yǎng)方法為1000ml蒸餾水中加入1gKH2PO4，0.5gMgCl2.6H2O，0.1gCaCl2.2H2O，1gNH4Cl，3gNaHCO3，0.7gNag2SO4，1gNaCl，1ml無硫酸鹽微量元素溶液及1ml維生素溶液，在常規(guī)有機(jī)碳源條件下，調(diào)節(jié)最初PH為6.9，用光照厭氧法培養(yǎng)，光波為可見光偏長波，光照強(qiáng)度為1000-3000lux，培養(yǎng)物逐漸變紅。其生長檢測(cè)是測(cè)其培養(yǎng)物在630nm處的吸收光譜，隨著菌液的生長，其0.D630nm的吸收逐漸增加。無硫酸鹽微量元素溶液為將1.8gFeCl2.4H2O、250mgCOCl2.6H2O，10mgNlCl2.6H2O，10mgCaCl2.5H2O，70mgMnCl2.4H2O，100mgZnCl2，500mgH3BO3，30mgNa2MO42H2O，10mgNa2SeO3.5H2O溶解1000ml蒸餾水中，溶液的PH值用HCL調(diào)節(jié)至2-3。
維生素溶液是100ml蒸餾水中含有10mg生物素，35mg煙酰胺，30mg二氧化硫胺素，20mg鈣對(duì)一氨基苯甲酸，10mg鹽酸吡哆醛，10mg泛酸鈣，5mg維生素B12。
本發(fā)明的實(shí)施方案是10-30%(以重量計(jì))的淀粉水溶液與10-30%的豆粉11混合，用1NHCl調(diào)PH為2，煮0.5-2小時(shí)，用NaOH調(diào)PH為中性；按每種中草藥10g/10L培養(yǎng)基的量稱取菊花、黃精、五加皮、地骨皮、蚤休、茯苓、地苓、桑粟肖、龜板、紅花、牧櫪、山芋、茍杞子、女貞子14種中草藥，加10倍重量的水浸泡24小時(shí)，水煮抽提直至體積縮小到約一半為止，與糖化后的淀粉溶液混合，10-30℃進(jìn)行酸化8-48小時(shí)，使PH至4-5，沉淀2小時(shí)取出上清液，加至400-800ppm的無機(jī)硒，用NaHCO3調(diào)PH為中性，經(jīng)加壓1Kg，126℃滅菌30分鐘，冷卻至室溫，無菌接入占液體總量20%的CGMCC NO 0192光合細(xì)菌培養(yǎng)混合物或其中的任何單一菌株培養(yǎng)物，在10-30℃，最好是28-30℃，溶氧為0.1～1PPm，最好是0.5PPm，光強(qiáng)為1000-3000Lux，最佳是2000Lux的條件下培養(yǎng)8-12天，即得紅色富硒光合細(xì)菌保健和治療劑，其中含有光合細(xì)菌菌體細(xì)胞為20×108～80×108個(gè)/ml，含有硒蛋白，硒酸酯多糖及硒核酸、硒卜啉類色素四類有機(jī)硒化合物，有機(jī)總硒含量為320～724mg/L，同時(shí)亦含有皂、膽堿、磷脂等多種藥效成份。
本發(fā)明中的硒卜啉色素，是一類含有Se-C鍵的卜啉類化合物，將培養(yǎng)好的硒光合細(xì)菌，在5000rpm離心20分鐘，取其沉淀物，懸于15體積的4mol/L的氫溴酸溶液中，超聲波破碎，再在50℃充氮?dú)獾沫h(huán)境中水解50小時(shí)，再用體積比為15的四氯化碳抽提24小時(shí)，取出四氯化碳層，蒸干，即得硒卜啉色素。
本發(fā)明中的硒核酸，是一種含有硒的轉(zhuǎn)移RNA(RNA)，用常規(guī)的方法分離硒光合細(xì)菌的總RNA，每用DEAE-纖維素和苯甲酰纖維素(11)柱分離，其洗脫液為PH7.4的Tris-HCL緩沖液，洗脫速度為1-2ml/min。
發(fā)明中用于保健和治療的富硒光合細(xì)菌制劑，能減少四氯化碳對(duì)肝的損傷，氮氧化物和硫氧化物對(duì)肺的損傷；減少X線引起的白細(xì)胞減少及染色體變異，增加小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬量，抗小白鼠心肌缺氧和增強(qiáng)小鼠體力和抗應(yīng)激作用，降低血糖和尿糖，因而對(duì)保護(hù)因化學(xué)毒物和輻射對(duì)機(jī)體的傷害。對(duì)心臟病、糖尿病，及免疫力低下均有療效，對(duì)癌細(xì)胞亦表現(xiàn)出極大的抑制作用。經(jīng)100人的臨床觀察表明，其對(duì)心臟病的有效率為81.2%；對(duì)糖尿病的有效率高達(dá)80.6%，也可以使68.8%的病人明顯提高免疫力。
本發(fā)明的附圖
為工藝流程圖，圖中1(淀粉溶液)經(jīng)IN的HCL調(diào)PH至2，水煮0.5-2小時(shí)得2(糖化液)，3(中草藥用水煮)抽提得4(抽提液)，2、4混合得5(糖化抽提混合液)，加入NaOH調(diào)至PH為中性，在10-30℃酸化4-48小時(shí)，用NaHCO3調(diào)至中性，得6(中性營養(yǎng)液)，7(加入亞硒酸鈉)，使液體硒含量為400-800ppm，高壓滅菌后接入占液體總量20%的CGMCC NO 0192光合細(xì)菌，在10-30℃，DO為0.1-1ppm，光強(qiáng)為1000-3000Lux的條件下培養(yǎng)8-12天，即得8(紅色的用于保健治療的富硒光合細(xì)菌的制劑)。
實(shí)施例1以占重量百分比15%的玉米和15%的黃豆用水浸泡8小時(shí)，粉碎其液體中用IN的HCL調(diào)PH為2，煮沸水解1小時(shí)后，用INaOH調(diào)至中性，菊花、黃精、五加皮、地骨皮、蚤休、茯苓、地苓、桑粟肖、龜板、紅花、牧櫪、山芋、茍杞子、女貞子14種中藥分別按10g/L發(fā)酵液的量稱取，用10倍重量的水浸泡24小時(shí)，水煮提取，直至體積減少一半為止，此時(shí)將中性的玉米、黃豆水解液加入中藥液中，28℃酸化24小時(shí)，PH值降至4，沉淀2小時(shí)，取出上清液，加入600ppm的亞硒酸鈉，用NaHCO調(diào)PH值為中性，在1Kg壓力126℃滅菌30分鐘，冷卻后接入液體總重量20%的CGMCCNO0192中的Rhodopesudomonas,sphaeroides培養(yǎng)物，28℃溶氧為0.5ppm，光照為2000lux條件下培養(yǎng)10天，即得紅色的用于保健和治療的富硒光合細(xì)菌培養(yǎng)物，其中含有機(jī)硒400ppm，加入醫(yī)用淀粉，將其制成膠囊，每粒膠囊0.3g，含硒100ug。該膠囊用于病人，每日兩次，每次兩粒，一個(gè)月為一療程，其100人的臨床結(jié)果如下病型例數(shù)顯效有效無效有效率病型例數(shù)顯效有效無效有效率心臟病321511881.2%糖尿病361910780.6%免疫力低下321481068.8%實(shí)施例2以20%的黃豆浸泡，粉碎后，蒸沸5分鐘，加入占液體重量2%的石膏粉，沉淀2小時(shí)，取其上清液，與實(shí)施例1中相同的方法提取中草藥，豆?jié){上清液與中藥水提液混合，在28℃條件下，酸化8小時(shí)，PH值為4.5，用IN的NaHCO3調(diào)PH為中性，加入亞硒酸鈉，使總液中硒含量達(dá)800ppm，高壓滅菌后，接入占總重20%的CGMCC NO 0192光合細(xì)菌培養(yǎng)物，在0.5ppm溶氧，2000Lux光強(qiáng)，28℃培養(yǎng)12天，即得用于治療和保健的光合菌制劑。
實(shí)施例3實(shí)施例2中的亞硒酸鈉換為二氧化硒，用同樣的方法進(jìn)行培養(yǎng)，得到的為光合細(xì)菌制劑，其硒含量為620mg/L，加工成膠囊，每粒0.3克，含硒147ug，其治療效果為心臟病有效率達(dá)74.3%，糖尿病有效率為81.3%，提高免疫效率為63.2%。
權(quán)利要求
1.一種用于保健和治療的富硒微生物制劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，將10-30%(以重量計(jì))的淀粉水溶液糖化后，與中草藥的水浸提液混合，加入微量的無機(jī)硒，在10-30℃厭氧酸化至PH4-5，調(diào)至中性，高壓滅菌后，接入細(xì)菌培養(yǎng)物，在生長條件下發(fā)酵8-15天，所述的生長條件包括一種生理上可接受的PH、溫度、溶氧和光照強(qiáng)度，即得紅色微生物制劑。
2.通過權(quán)利要求1的方法生產(chǎn)的一種富硒微生物制劑，其特征在于所述富硒的微生物制劑，含有光合細(xì)菌菌體蛋白其及代謝物，有機(jī)硒化合物和中藥藥效成份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述淀粉溶液以玉米淀粉加豆粉(11)混合為最佳。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中所述的糖化是先用1N的HCL調(diào)PH為2，水煮0.5-2小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中所述的中草藥包括菊花、黃精、五加皮、地骨皮、蚤體、茯苓、地苓、桑粟肖、龜板、紅花、牧櫪、山芋、茍杞子、女貞子或其中的任一種或幾種藥物，加入量為每種中草藥10g/10L培養(yǎng)基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中中藥水提液，是將權(quán)利要求5中的中藥每種按101的水浸泡、煮沸直至體積縮小一半，即為中藥水提液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中無機(jī)硒，可以是二氧化硒，也可以是亞硒酸鈉，加入量為使總?cè)芤褐形窟_(dá)200-800ppm。
8.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中高壓滅菌溫度為126℃，1Kg壓力。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中的方法，其中所用的細(xì)菌培養(yǎng)物為CGMCCNO0192光合細(xì)菌培養(yǎng)混合物，或用其中的任一菌株。
10.根據(jù)權(quán)利要求2中的富硒微生物制劑，其中光合細(xì)菌的菌體個(gè)數(shù)為20×108～80×108個(gè)/ml以及硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸、硒卜啉類化合物。
11.一種利用微生物合成有機(jī)硒的方法。光合細(xì)菌利用權(quán)利要求7中的無機(jī)硒，通過權(quán)利要求1中的方法，將其轉(zhuǎn)化為硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸及硒卜啉類色素，得到的紅色微生物制劑是一種富硒光合細(xì)菌制劑。
12.一種利用微生物加工中草藥的方法。將權(quán)利要求5中的中草藥或單一藥的水提液，10-30℃自然酸化8-48小時(shí)，調(diào)PH至中性，接入占液體總重量20%的CGMCCNO0192光合細(xì)菌培養(yǎng)物或任一菌株培養(yǎng)物，在10-30℃，溶氧0.1-1ppm，光照為1000-3000Lux條件下培養(yǎng)8-12天，就得含有藥效成份和光合細(xì)菌菌體的混合物。
13.一種生物合成硒卜啉色素的方法。通過權(quán)利要求12所述的方法制得的光合細(xì)菌菌體中含有大約占重量7%的硒卜啉色素，用特定方法可以提取純的硒卜啉色素。
14.一種生物合成硒核酸的方法。通過權(quán)利要求12所述的方法制得的光合細(xì)菌體內(nèi)，約含有占重量0.79%的硒核酸，用特定的方法可以提取純的硒核酸。
全文摘要
用于保健和治療目的的富硒微生物組合物，是一種經(jīng)過微生物發(fā)酵而形成的含有光合細(xì)菌菌體蛋白及其代謝分泌物，有機(jī)硒化合物和中草藥發(fā)酵物的混合物。它的制備方法是將含有淀粉、無機(jī)硒及中草藥提取物的混合物作為培養(yǎng)基，培養(yǎng)光合細(xì)菌而得的紅色細(xì)菌混懸物，進(jìn)一步加工成各種食品和藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1108944SQ94106408
公開日1995年9月27日 申請(qǐng)日期1994年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月21日
發(fā)明者王夢(mèng)亮, 劉繼彪, 張肇銘, 鞏明, 鄧孔融, 張肖洪 申請(qǐng)人:太原康強(qiáng)生物技術(shù)開發(fā)公司, 張肖洪