專利名稱：緩激肽拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于具有藥效作用的由緩激肽拮抗劑(BKAn)組分與另一種不同藥效基團組分共價連結(jié)組成的異質(zhì)二聚物(het-erodimers)。
在1992年10月15日公開的在先申請WO92/17201中描述了下列類型的緩激肽拮抗劑二聚物
其中BKAn代表一種緩激肽拮抗劑肽，X為連結(jié)兩種BKAn組分末端的中介基團。BKAn組分可相同或不同。但也描述了一些通過連結(jié)基團X連結(jié)BKAn肽與另一種不同受體活性肽的異質(zhì)二聚物，例如NK1或NK2拮抗劑肽或μ-阿片受體激動劑肽。當相關(guān)活性之間的關(guān)系密切時，這些異質(zhì)二聚物特別有用。已知在多種重要的病理生理過程中，存在炎性和神經(jīng)介質(zhì)之間的相互作用。例如在組織創(chuàng)傷(偶發(fā)及手術(shù)后)繼發(fā)性疼痛及哮喘中都存在這種情況。在這兩種情況下都存在組織及血漿產(chǎn)生的介質(zhì)(如作用于BK2受體的激肽)和神經(jīng)元產(chǎn)生的因子如P物質(zhì)(NK1受體)及神經(jīng)激肽(Neurokinin)A(NK2受體)之間的復雜的相互作用。也存在局部作用的μ-阿片類神經(jīng)元受體，當受刺激后能夠抑制無論何種類型的神經(jīng)肽(P物質(zhì)、神經(jīng)激肽A、神經(jīng)激肽B、縮膽囊素、CGRP等)的釋放。
沒有一種藥物普遍有效地改善上述介質(zhì)或其它炎性和神經(jīng)介質(zhì)間的相互作用誘發(fā)的病理生理學癥狀。上述專利申請描述的異質(zhì)二聚物是試圖用具有雙向選擇性的單一藥物來解決這些問題。這樣的異質(zhì)二聚物的其它優(yōu)點同樣被本領(lǐng)域技術(shù)人員所認識。
廣泛意義上講，本發(fā)明是關(guān)于連結(jié)一種BKAn肽和另一種非緩激肽拮抗劑的藥效基團而形成的異質(zhì)二聚物，例如這種藥效基團可以是如WO92/17201中描述的肽，或非肽物質(zhì)，并對如疼痛和/或炎癥或其它與激肽活性有關(guān)的問題的非緩激肽作用成分有不同效應。形成的化合物為具有“雙重作用”的化合物，它可以作用于兩類受體或作用于一種受本和一種酶。這并不是說單個分子可以同時與兩種受體或一種受體及一種酶作用;只是說此分子能夠與兩種受體中的一種受體或與一類受體和/或一種酶中任一種相作用。使用適當劑量的這種化合物，其總體藥理作用至少相當于兩種活性的加和。這種化合物可以設計成保持完整化合物，或設計為分解成兩個分離的分子后，各自保持自己獨立的活性。
本發(fā)明的異質(zhì)二聚物可用下式結(jié)構(gòu)表示。
其中BKAn為緩激肽拮抗劑肽;X為連結(jié)基團及Y為肽或非肽藥效基團，它為非緩激肽拮抗劑并且具有作用于與BKAn組分不同的受體或酶的活性，優(yōu)選作用于與疼痛或炎癥有關(guān)的過程。
本發(fā)明的異質(zhì)二聚物提供了廣譜地治療疼痛及炎癥的可能性。一般認為在炎癥狀態(tài)，無論其嚴重程度如何，用單一藥物或介質(zhì)治療或解釋該綜合癥的所有臨床癥狀的可能性是極微小的。依此推論，由于上述緩激肽在炎癥病理生理學上的作用，治療炎癥疾病的任何綜合治療都應該包括緩激肽拮抗劑作為整體治療作用的一部分。廣譜及有效的非特異性治療方法(例如在哮喘中用甾類化合物)雖然可能是有效的，但它們會引起較嚴重的毒負作用。
在許多情況下，已知兩種獨立的介質(zhì)協(xié)同作用并可解釋絕大部分所治療疾病的重要臨床癥狀。例如說哮喘及創(chuàng)傷后或手術(shù)后疼痛與P物質(zhì)作用于NK1受體及緩激肽作用于BK2受體的關(guān)系。同樣，嗜中性彈性蛋白酶為一很重要的炎癥下游作用因子及緩激肽為一重要的引發(fā)和持續(xù)的炎癥介質(zhì)，兩者的作用可被看作是協(xié)同的。
將藥理活性物質(zhì)做成同質(zhì)二聚物(homodimers)以改善代謝穩(wěn)定性、選擇性及受體結(jié)合等特性的概念已在前邊其它系統(tǒng)中描述過。這方面的已有技術(shù)包括為了增加作用效力和/或作用時間而將肽激動劑和拮抗劑二聚化。見Caporale等Proc.10th American Pep-tide Symp.，Pierce化學公司，Rockford，IL 449-451(1988)及Rosenblatt等的歐洲專利申請No.EP 293130A2。這樣的肽激動劑二聚化物已經(jīng)公開了的有腦啡肽/內(nèi)啡肽(Shimohigashi，Y.等，BBRC，146，1109-1115，1987);P物質(zhì)(Higuchi，Y.等E.J.P.，160，413-416，1989);緩激肽(Vavrek，R.及Stewart.，J.J.Proc.8th Amer.Pept.Symp.，381-384，1983);神經(jīng)激肽A和B(Ko-dama，H.等E.J.P.，151，317-320，1988);胰島素(Roth，R.A.等FEBS，170，360-364，1984)及前房鈉尿肽(Chino，N.等BBRC，141，665-672，1986)。拮抗劑二聚化已公開的如甲狀旁腺激素(Caproale，L.H.等Proc.10th Amer.Pept.Symp.，449-451，1987)。但文獻并沒有公開本文所指由緩激肽拮抗劑和不同的藥效基團組成的異質(zhì)二聚物。
在本領(lǐng)域中有許多已知緩激肽拮抗劑，其中任何一種都可用作本發(fā)明二聚物中BKAn組分。一種在體外很有效的緩激肽拮抗劑為下式的肽D-ARG0-Arg1-Pro2-Hyp3-Gly4-Phe5-Ser6-D-Phe7-Leu8-Arg9見Regoli等，Trends in Pharmacological Science，11156-161(1990)。為方便起見此肽在本文中稱為CP-0088。
CP-0088為一種使用方便的BKAn，當然本領(lǐng)域技術(shù)人員會看出其它已有或已知緩激肽拮抗劑肽也可用于本發(fā)明的目的。各種這樣的緩沖激肽拮抗劑肽已被最近的專利文獻所公開，其中任何一種均可用于本發(fā)明的目的。見如EP-A-0334244(Procter和Gamble)公開了九肽或更大的緩激肽拮抗劑肽，其中某些氨基酸殘基是經(jīng)修飾的。EP-A-0370453(Hoechst)和WO.89/01780及WO 89/01781(Stewart等)也描述了緩激肽拮抗劑肽。這些專利出版物中沒有出現(xiàn)本文所指二聚物。但注意到這些出版物的肽可用于施行本發(fā)明。
任何連結(jié)基團X均可用于本發(fā)明以使BKAn和Y組分以化學或共價方式連結(jié)在一起，只要這不影響B(tài)KAn和Y組分的活性即可。連結(jié)基團可以是無機的(如-S-)或有機的，并可選擇連結(jié)基團以使在體內(nèi)水解或以其它方式分解并釋放出兩種活性組分BKAn和Y。或者，連結(jié)基團可使這種異質(zhì)二聚物在使用時保持完整化合物。
方便的連結(jié)基團X可包括-S-原子，它由BKAn肽鏈上的巰基與另外的藥效基團組分反應生成。這可以通過涉及肽鏈中如肽P末端的半胖氨酸(Cys)的巰基的反應來完成。這可能需要在開始階段修飾起始BKAn肽，使它在肽鏈的適當位置含有Cys基團。例如CP-0088可用Cys在6-位取代Ser來進行修飾(這樣修飾過的CP-0088在下文中稱為CP-0126)以通過Cys的巰基與其它藥效基團方便地連結(jié)。
CP-0126可由下式結(jié)構(gòu)表示
上式可用縮寫表示如下
用Cys作為連結(jié)位點，那么連結(jié)基團X包括半脫氨酸巰基的-S-。它可以是整個連結(jié)基團X(如在二硫基二聚物中)或僅為X的一部分。這樣，例如連結(jié)基團可包括一個二琥珀酰亞胺基烷如二琥珀酰亞胺基己烷，它以末端連結(jié)在BKAn和Y組分上。申請人的相關(guān)申請還公開了其它連結(jié)基團，它們都可用于此目的。其它連結(jié)基團X(其中某些不要求或不含-S-原子)可來源于下列六族化合物，它們一般被分類為氨基酸類似物連結(jié)劑或基于馬來酰亞胺的連結(jié)劑。這些連結(jié)劑僅為例子，這里并不想窮舉所有潛在的連結(jié)基團
第一類(氨基酸類似物)
氨基酸類似物連結(jié)劑(第一類)可直接摻入到BKAn肽鏈中，然后用于與成對藥效基團(Y組分)形成對酯酶穩(wěn)定或不穩(wěn)定的異質(zhì)二聚物。另外，基于馬來酰亞胺的連結(jié)劑可與所希望的藥效基團反應，然后與含巰基的肽連結(jié)。最后，這幾類化合物中任何含R3基團為-CO2H的連結(jié)劑可與這幾類化合物中的另一種連結(jié)劑反應以形成對酯酶不穩(wěn)定(含R3＝-OH的連結(jié)劑)或?qū)︴ッ阜€(wěn)定(含R3＝-NH2的連結(jié)劑)的連結(jié)劑，然后用于形成希望的肽/非肽異質(zhì)二聚物。R1和R2可以變化，以使對連結(jié)基團的酯羰基碳的接近完全不阻礙或明顯阻礙，從而希望控制所說的酯在體內(nèi)的水解速度。
某些用來制備本發(fā)明二聚物的為連結(jié)劑所修飾的BKAn或藥效基團本身是提新的，并進一步構(gòu)成本發(fā)明的一個方面。
此異質(zhì)二聚物的Y組分可以是任何非緩激肽拮抗劑的肽或非肽的藥效基團，它具有對抗有關(guān)疼痛和/或炎癥過程的不同方面的活性(非緩激肽)從而形成雙重作用化合物，它可以獨立地作用于兩類不同受體或一種受體及一種酶。例如Y組分為非肽μ-阿片受體激動劑，如嗎啡或它的一種衍生物如14-羥基二氫可待因酮或14-羥基雙氫嗎啡酮。
當希望環(huán)氧酶抑制劑(COI)時，消炎痛可作為Y組分的一個有用的選擇。但其它任何傳統(tǒng)的非甾醇類抗炎藥物如阿斯匹林、布洛芬、甲氧萘丙酸(naproxyn)等都可使用。在這種情況下，異質(zhì)二聚物BKAn/COI可能需要被水解以便在體內(nèi)得到COI活性，因為環(huán)氧酶一般被認為是一種胞內(nèi)酶。嗜中性彈性蛋白酶抑制劑可能是一種活性酯，如2-苯基烷酸酯。它也可以用作雜芳基烷酸酯酯酶抑制劑?？勺鳛閅組分的一種較好的嗜中性彈性蛋白酶抑制劑為如下描述的CE-1218。據(jù)信這是一種新化合物，并進一步組成本發(fā)明的一個特征。
其它類型的彈性蛋白酶抑制劑也可以用作Y組分，包括氟甲基酮、磷酸鹽、苯并惡唑、β-內(nèi)酰胺等。
如前邊所提到的，Y組分可由肽或非肽類具有適當?shù)牟煌诰徏る霓卓箘┗钚缘囊种苿┧M成。但Y組分優(yōu)選對與緩激肽活性有一般或密切關(guān)系的受體或酶有活性的物質(zhì)。如關(guān)于治療疼痛或炎癥。為了說明問題下面討論BKAn與μ-阿片受體激動劑、嗜中性彈性蛋白酶抑制劑、環(huán)氧酶抑制劑或NK1或NK2受體拮抗劑在各種條件下結(jié)合應用的理論基礎。
BKAn/μ-阿片受體激動劑C-纖維傳入神經(jīng)已知介導痛覺和炎癥的神經(jīng)性部分。這些傳入神經(jīng)元在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和周圍神經(jīng)支配的組織中受到特異性和非特異性刺激后釋放出各種神經(jīng)肽。一些神經(jīng)肽包括P-物質(zhì)、神經(jīng)激肽A、神經(jīng)激肽B、降鈣素基團相關(guān)肽(CGRP)、縮膽囊素(CCK)、血管活性腸多肽(VIP)、神經(jīng)肽Y及其它神經(jīng)遞質(zhì)。對于這些復雜物質(zhì)，依據(jù)神經(jīng)支配組織，不同的C-纖維含有不同量和/或比例的這些神經(jīng)肽。已表明所有這些肽在各種影響許多疾病和臨床綜合癥的神經(jīng)性過程中起作用。實際上許多藥物公司和獨立研究實驗室正在將這些肽的特異性拮抗劑開發(fā)為可能的治療藥物。
這些不同種類的神經(jīng)元的一個明顯的共同特征是它們都有調(diào)節(jié)上述神經(jīng)肽釋放的μ-阿片受體。無論內(nèi)源性腦啡肽還是其它外源注入的小分子化合物如嗎啡、14-羥基雙氫嗎啡酮、芬太尼及它們的衍生物都可以作為局部的(外周神經(jīng)末梢μ-阿片受體)和CNS中的μ-阿片受體激動劑，從而抑制從外周C-纖維中釋放出神經(jīng)肽。這種抑制作用與C-纖維所含的那些肽和導致它們釋放的刺激都無關(guān)。
結(jié)果，BKAn/μ-阿片受體激動劑異質(zhì)二聚物被認為是重要的一類化合物，它們特別對治療激素與神經(jīng)性過程中產(chǎn)生的綜合狀況有好的整體活性。希望這些化合物不但減低或阻斷以激肽為代表的炎癥過程的激素部分，而且阻斷神經(jīng)肽釋放引起的炎癥的神經(jīng)性部分。另外，用已有μ-阿片受體激動劑的一個局限的方面是它們傾向于產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、精神錯亂及抑制呼吸運動，更不用說在用這些藥治療的病人身上還有發(fā)展為成癮和/或耐受的危險。μ-阿片受體激動劑的這些不良方面是由于它們易于透過CNS的能力。但由于BKAn的高陽離子特性，BKAn/μ-阿片受體激動劑異質(zhì)二聚物應不會穿透CNS。結(jié)果，μ-阿片受體激動劑的活性被限制在外周組織中，這樣就大大減低了這些類型化合物的毒付作用。
BKAn/嗜中性彈性蛋白酶抑制劑(NEI)如前邊提及的要同時控制全身和局部炎癥反應，需要阻斷多種炎癥途徑。特別是具有阻斷引發(fā)和維持炎癥過程的初級介質(zhì)(如緩激肽)和稅性組織挫傷和損傷有關(guān)的初級末端途徑活性因子(如嗜中性彈性蛋白酶)的能力對治療敗血癥或其它要求非腸道治療的嚴重炎癥或治療皮膚或牙/牙周的炎癥是“單一藥物治療”的關(guān)鍵。
含有BKAn/NEI結(jié)合活性的異質(zhì)二聚物可設計為保持完整化合物或可分解為作用在存在于細胞內(nèi)的兩種靶點(緩激肽受體及嗜中性彈性蛋白酶)上的兩種物質(zhì)。但當希望兩種活性藥效基團可解離時，異質(zhì)二聚物中連結(jié)兩個活性組分的連結(jié)部分可設計為被如血漿水解酶水解。這里討論這些種類的可解離或可水解的異質(zhì)二聚物。BKAn/環(huán)氧酶抑制劑(COI)大部分緩激肽的生物活性與前列腺素的產(chǎn)生密切相關(guān)。例如大部分與炎癥疼痛有關(guān)的痛覺過敏似乎依賴于損傷組織及C-纖維自身產(chǎn)生某些前列腺素。對后一種情形，緩激肽及P-物質(zhì)可能是這些“第二信使”(second messengers)的初級刺激。受損傷組織局部產(chǎn)生前列腺素是非緩激肽依賴性的。這種前炎癥介質(zhì)肽和前列腺素的相互作用也可以在其它環(huán)境中發(fā)生，并也可以看作雙重作用化合物的一個靶點。具有BKAn/COI結(jié)合活性的異質(zhì)二聚物需要在體內(nèi)解離兩種藥效基團，因為環(huán)氧酶為胞內(nèi)酶而機能緩激肽受體限于漿膜外。BKAn/NK1受體拮抗劑(NK1An)
緩激肽和P-物質(zhì)已知協(xié)同作用于引發(fā)和維持炎癥以及哮喘和多種疼痛狀況的神經(jīng)性作用部分。這兩種情形下，緩激肽是一種很強的(如果不是最強)能夠刺激介導外周疼痛和/或哮喘中的咳嗽感和呼吸困難的C-纖維感覺傳入的物質(zhì)。無論對于何種初級刺激，這些神經(jīng)元將釋放P-物質(zhì)，它能擴大和增強緩激肽或其它刺激物在刺激所作用的感覺神經(jīng)末梢上的活性。這種緊接著被局部放大的“單/雙沖動”(one/two punch)的起始刺激已被充分驗證并對任何單一干預(imtervention)的成功或失敗有明顯的影響。通過單一化合物以這些過程的兩個方面為靶點，提供一種雙重特異性的藥物是可能的，它優(yōu)于單特異性藥物單獨作用，而且比綜合治療容易且便宜。
BKAn/NK2拮抗劑(NK2An)緩激肽引起支氣管平滑肌急性收縮的能力至少部分地依賴于釋放P-物質(zhì)的同一C-纖維釋放神經(jīng)激肽A。神經(jīng)激肽A通過支氣管平滑肌上NK2受體起作用。但不只緩激肽能從這些神經(jīng)元中釋放神經(jīng)激肽A，所以結(jié)合BKA2/NK2拮抗劑活性的雙重特異性拮抗劑應比單一藥物更好地整體改善哮喘病人的支氣管平滑肌收縮。
一般地，本發(fā)明的異質(zhì)二聚物可用WO 92/17201中描述的相同方法來制備。這一般涉及在肽鏈適當位置向BKAn組分加入連結(jié)基團X，然后通過連結(jié)基團將非肽藥效基團連結(jié)到BKAn上。也可以將連結(jié)基團加在非肽藥效基團上，接著BKAn連結(jié)在連結(jié)基團修飾的藥效基團上。盡管會認識到需要不同的修飾，下面將描述具有代表性的步驟。
下列實施例用來說明本發(fā)明，但不受此限制。
實施例1-4(BKAn/μ-阿片受體激動劑)為了說明本發(fā)明，制備了四個不同的肽/鴉片制劑異質(zhì)二聚物(指CP-0477、CP-0488、CP-0494和CP-0499)。其中三個化合物是用CP0126(DR-R-P-J-G-F-C-DF-L-R)制得，第四個化合物是用CP-02347(DR-R-P-J-G-Thi-C-DTic-Oic-R)制備。相似地，用二種不同的鴉片制劑(14-羥基二氫可待因酮和14-羥基雙氫嗎啡酮)和兩種不同的化學連結(jié)劑分別制成下列異質(zhì)二聚物化合物化合物#肽鴉片制劑1 CP-0477 CP-0126 14-羥基二氫可待因酮2 CP-0488 CP-0126 14-羥基二氫可待因酮3 CP-0494 CP-0126 14-羥基雙氫嗎啡酮4 CP-0499 CP-0347 14-羥基雙氫嗎啡酮異質(zhì)二聚物CP-0477、CP-0488、CP-0494和CP-0499的制備詳見下述，參照附

圖1化合物Ⅰ的制備混合14-羥基二氫可待因酮鹽酸鹽(0.182g，0.52mmol)、醋酸(0.475ml，8.3mmol)、S-芐基半胱胺(0.174g、1.04mmol)及甲醇(5ml)并在室溫下攪拌一小時。加入氰基硼氫化鈉(95%，0.033g、0.52mmol)，并在室溫下攪拌反應24小時。真空濃縮混和物。生成的油溶解在乙酸乙酯中，乙酸乙酯部分用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)品在硅膠柱上層析，用EtOAc、EtOAc-MeOH(9∶1，V/V)及EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.2，V/V/V)連結(jié)洗脫，分得化合物Ⅰ為油狀，產(chǎn)率25.0%(59.0mg)。
化合物Ⅱ(CP-0477)的制備化合物Ⅰ(0.059g，0.127mmol)溶解于2ml無水四氫呋喃中，然后轉(zhuǎn)入到烘干的100ml三頸燒瓶中。將燒瓶與一杜瓦(dewar)冷凝器、氮源及氨入口管連好。大約10ml的氨冷凝到保持-78℃的燒瓶中。加入小片的鈉直到保持亮蘭色，40秒鐘后用固體氯化銨中止反應。反應混合物升至室溫，氨冒泡沸騰溢出，加入甲醇(25ml×3)并真空蒸發(fā)。分得的硫醇溶解在小量的DMF(N，N-二甲基甲酰胺，2ml)中?；衔颴(大約0.3當量)溶解在三羥甲基氨基甲烷緩沖液(0.5M，4.0ml)中，并加入到DMF溶液中，然后攪拌17小時。粗品混合物用反向Vydac C-18HPLC柱純化，用含0.1%TFA(不變)的水中15-40%CH3CN梯度洗脫20分鐘。保留時間為16.0分鐘。冷凍干燥后得到26.4mg化合物Ⅱ白色粉末。
分析質(zhì)譜用Finnigan Lasermat質(zhì)譜分析儀測定。
理論分子量-1916實測分子量-1918氨基酸分析Gly1.02(1)、Arg3.14(3)、Pro1.01(1)、Leu0.97(1)、Phe1.92(2)及Hyp0.94(1)。
化合物Ⅲ的制備向溶于甲醇(10.0ml)的14-羥基二氫可待因酮鹽酸鹽(1.0g，2.84mol)和醋酸銨(2.2g，28.4mmol)的混合物中加入NaC-NBH3(0.18g，2.84mmol)的甲醇(4.0ml)溶液。形成的溶液用濃鹽酸鹽調(diào)到pH7.0，攪拌17小時，再用濃鹽酸酸化至pH1.0。真空除去溶劑，殘余物溶解在水中。水層用氯仿提取，用10%碳酸鈉溶液調(diào)pH9.0，用NaCl飽和再用氯仿提取。氯仿層用硫酸鎂干燥、真空蒸發(fā)。粗品油用硅膠柱層析純化，用EtOAc、EtOAc-MeOH(9∶1V/V)、EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)連續(xù)洗脫。分得化合物Ⅲ，油狀，產(chǎn)率為47.0%(0.42g)。
化合物Ⅳ的制備將BOC-甘氨酸(0.16g，0.91mmol)、HOBt(0.125g，0.91mmol)及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)(98.0%，0.18g 0.91mmol)溶解在DMF(2.0ml)中，0℃下攪拌一小時。將溶解于DMF(3.0ml)的胺Ⅲ(0.24g，0.76mmol)加入到反應混合物中，將反應混合物升至室溫，攪拌17小時。真空除去DMF，生成物溶解于乙酸乙酯中。乙酸乙酯層用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)有機層，粗品混合物在硅膠柱上進行閃式層析(flash chromatographed)，用EtOAc-MeOH-Et3N(9.5∶0.5∶0.3V/V/V)洗脫。分得油狀化合物Ⅳ，產(chǎn)率82.0%(0.29g)。
化合物Ⅴ的制備在二氯甲烷中用TFA(5.0ml)除去化合物Ⅳ的保護基BOC。真空除去二氯甲烷，殘余物用二氯甲烷(20ml×3)洗滌，再用三乙胺(3ml×3)洗滌。將3-S-芐基巰基丙酸(0.15g，0.75mmol)，EDC(0.15g，0.75mmol)、HOBt(0.103g，0.75mmol)及Et3N(0.35ml，2.48mmol)溶解在DMF(5.0ml)中，0℃下攪拌一小時。將溶解在DMF(3.0ml)的胺(0.23g，0.62mmol)加入到反應混合液中。將反應混合液升溫至室溫，再攪拌17小時。真空除去DMF，殘余物溶解在EtOAc中、EtOAc層用10%Na2CO3、鹽水洗滌，干燥(用MgSO4)，再真空蒸發(fā)。粗品在閃式硅膠柱上純化，用EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)洗脫。分得油狀化合物V，產(chǎn)率60.0%(0.205g)。
化合物Ⅵ(CP-0488)的制備用制備化合物Ⅱ的步驟將32.0mg(0.057mmol)的化合物Ⅴ脫保護。分離得到的硫醇與化合物Ⅹ(0.073g，0.048mmol)在三羥甲基基氨基甲烷緩沖液中進行反應。粗品混合物用化合物Ⅱ的方法進行純化。產(chǎn)品的保留時間為16.82分。冷凍干燥得到9.5mg(10%)白色粉末Ⅵ。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)理論分子量2002實測分子量2004氨基酸分析Gly1.76(2)、Arg3.19(3)、Pro1.06(1)、Leu0.99(1)、Phe2.06(2)、Hyp0.95(1)。
化合物Ⅶ的制備用14-羥基雙氫嗎啡酮鹽酸鹽(0.56g，1.06mmol)、S-芐基半胱胺(0.69，4.15mmol)、醋酸(1.52ml，26.5mmol)及氰基硼氫化鈉(0.11g，1.66mmol)按化合物Ⅰ的步驟進行。粗品純化的第三種洗脫劑的組成為EtOAc-MeOH-Et3N(9∶1∶0.3V/V/V)。經(jīng)純化得到0.213g油狀化合物Ⅶ。
化合物Ⅷ(CP-0494)的制備按照化合物Ⅱ的步驟將Ⅶ(0.063g，0.14mmol)去保護。得到的硫醇用Ⅹ(0.335g，0.152mmol)在三羥甲基氨基甲烷緩沖液中處理。粗品用含0.1%TFA(不變)的水中15-70%乙腈梯度洗脫條件下35分鐘內(nèi)在反相Vydac C-18HPLC柱上進行純化。Ⅷ的保留時間為15.0分。冷干得119.0mg(45.0%)的白色粉末化合物Ⅵ-Ⅱ。
質(zhì)譜數(shù)據(jù)理論分子量1902實測分子量1904氨基酸分析Gly0.81(1)、Arg3.12(3)、Pro1.07(1)、Leu0.99(1)、Phe2.04(2)、Hyp0.98(1)。
化合物Ⅸ(CP-0499)的制備將Ⅶ(0.009g，0.02mmol)按化合物Ⅱ的方法去保護，然后硫醇與Ⅺ(0.026g，0.016mmol)在三羥甲基氨基甲烷緩沖液中反應。粗品在反相Vydac C-18 HPLC上純化，用含0.1%TFA(不變)的水中15-70%CH3CN梯度洗脫，流速8.0ml/min，時間40分。Ⅸ的保留時間為14.22分。冷干得到白色粉末狀Ⅸ(6.4mg，20.0%)。
質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)理論分子量1957實測分子量1958體外實驗用大鼠子宮(BK2受體活性)和電刺激豚鼠回腸(μ-阿片受體活性)實驗評BKAn/μ-阿片受體激動劑異質(zhì)二聚物。這些實驗要在本領(lǐng)域是熟知的。所得結(jié)果示于表Ⅰ表Ⅰ化合物 pA2-大鼠子宮 IC50豚鼠回腸(nmol)CP-0126 7.1 無活性CP-0347 9.5 無活性14-羥基二氫可待因酮 無活性 無活性14-羥基雙氫嗎啡酮 無活性 21.7CP-0477 7.9 無活性CP-0488 8.2 無活性CP-0494 8.4 24.0CP-0499 8.9 17.0應注意到14-羥基二氫可待因酮和14-羥基二氫可待因酮形成的異質(zhì)二聚物(CP-0477和CP-0488)都沒有在μ-阿片受體激動劑活性的體外豚鼠回腸實驗中表現(xiàn)出任何活性。這可能是由于14-羥基二氫可待因酮顯然需要在體內(nèi)去甲基化才具有活性。結(jié)果，在這種缺少適當?shù)娜ゼ谆傅膶嶒炛胁豢赡鼙憩F(xiàn)活性。
但更重要地是關(guān)于這些異質(zhì)二聚物的BKAn組分活性的數(shù)據(jù)以及關(guān)于含14-羥基雙氫嗎啡酮化合物活性的數(shù)據(jù)。從表Ⅰ的數(shù)據(jù)可以看出，所用異質(zhì)二聚體都保持了全部BKAn活性，那些利用14-羥基雙氫嗎啡酮作為鴉片制劑的化合物同時保持了全部μ-阿片受體激動劑活性。從這些數(shù)據(jù)可明顯看出BKAn/μ-阿片受體激動劑異質(zhì)二聚物可以在體外體系中與它們的每類受體起作用。
體內(nèi)實驗為了測試這些化合物在體內(nèi)的活性，使用了一種炎癥和神經(jīng)性痛疼模型。此模型測試在小鼠后肢腳墊上注射50μl富爾馬林后所表現(xiàn)的行為反應。這些研究的數(shù)據(jù)綜合在圖2，3和4中。對照小鼠(空心環(huán))在注射富爾馬林后表現(xiàn)兩階段特征反應，其中有一個短時間的起始反應，然后是一個安靜階段，再接著是持續(xù)的舔后肢的階段。舔后肢的行為意味著后肢不舒服有疼感。舔的時間越長，則刺激越疼痛。
14-羥基雙氫嗎啡酮(圖2A和B)減少兩個階段的舔肢的行為，但在最大劑量(0.9和3.0μmol/kg)時行為明顯遲鈍并引起強直性昏厥和明顯的呼吸抑制。緩激肽拮抗劑CP-0127(有效的選擇性BK2拮抗劑-圖3A和B)可減少富爾馬林實驗中兩個階段舔肢的時間，但劑量要明顯高于實際臨床所用劑量。但CP-0494(圖4A和B)不僅阻斷疼痛反應的兩個階段，而且所用劑量(0.1μmol/kg)明顯低于14-羥基雙氫嗎啡酮(0.9μmol/kg)或CP-0127(12.6μmol/kg)單獨使用時的劑量，同樣重要或更為重要的是數(shù)小時內(nèi)沒有可觀察到的麻醉作用。這些數(shù)據(jù)表明正象前述理論考慮所希望地那樣，BKAn/μ-阿片受體激動劑異質(zhì)二聚物在藥理學性質(zhì)上優(yōu)于原藥效基團。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可認識到上述化合物代表了廣泛的一組化合物，其中異質(zhì)二聚物的每個組分(BKAn、連結(jié)劑和/或μ-阿片受體拮抗劑)都可變化，以產(chǎn)生所希望的任意效果。
實施例5(BKAn/NEI)合成了一個具有合成路線3所示結(jié)構(gòu)的BKAn/NEI型化合物(CP-0502)，用來證明此類化合物可用作有效的局部和/或全身抗炎藥物。此化合物來自CP-0126和原型彈性蛋白酶抑制劑CE-1218(見下述合成路線1中化合物(6))。
合成路線1
選擇用于此異質(zhì)二聚物中的連結(jié)基團以便使連結(jié)酯鍵被血漿酯酶無阻礙地水解。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認識到可以通過改變酯羰基碳的空間阻礙或使化學基團改為酰胺連結(jié)基團來修飾連結(jié)基團以使水解速度可以從快速到幾乎為零之間變化。也可以用完全穩(wěn)定的連結(jié)殘基，使不受潛在的水解破壞的影響。
BKAn/NEI異質(zhì)二聚物的合成和分析這些化合物的合成參照合成路線2和3來說明，下列詳細的合成說明包括按照合成路線1的彈性蛋白酶抑制CE-1218的制備合成路線14-叔丁基乙酰苯(1)的合成向干燥有1-L燒瓶中加入CS2(250ml)和AlCl3(133.34g，0.56mol)，并攪拌。將此懸浮液用冰浴冷卻，2小時內(nèi)滴加叔丁基苯(50.00g，0.37mol)和乙酰氯(78.50g，0.41mol)的溶液(使溫度不超過25℃)。室溫攪拌反應過夜，然后傾入到裝滿冰的2L燒杯中。用200ml6NHCl終止反應后，將溶液用NaCl飽和并分離。水層用乙醚洗滌(2×100ml)并與前邊的有機層合并。這種新的有機溶液用水洗(100ml)、干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到的油進行蒸餾，生成52.1g(79.3%)的澄清無色油4-叔丁基乙酰苯(bp0.05mm70-76℃)。
1H NMR(CDCl3)δ1.35(s，9H)，2.58(s，3H)，7.48(d，J＝8.5Hz，2H)，7.91(d，J＝8.5Hz，2H).13C NMR(CDCl3)δ26.42，30.96，34.95，125.36，128.16，134.49，156.64，197.61.
4-叔丁基苯基乙酸甲酯(2)的合成裝有機械攪拌裝置的1L燒瓶中含有Pb(oAc)4(132.06g，0.298mol)和250ml苯，用氮氣吹掃、冰浴冷卻。1小時內(nèi)向此冷漿中滴加BF3OEt2(137.8ml，1.12mol)、4-叔丁基乙酰苯(50.00g，0.284mol)在70ml甲醇中的溶液。攪拌此混合液過夜、用水(500ml)終止反應、再用250ml乙醚稀釋并分層。有機層用水、稀NaHCO3(小心)洗滌，并用MgSO4干燥?；旌衔锝?jīng)過濾、蒸發(fā)及蒸餾得到31.2g(53.4%)澄清無色油4-叔丁基苯基乙酸甲酯(pb0.04mm75-80℃)。
1H NMR(CDCl3)1.32(s，9H)，3.62(s，2H)，3.71(s，3H)，7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H).13C(CDCl3)31.33，34.46，40.67，52.04，125.53，128.88，130.91，149.94，172.26.
4-叔丁基苯基異丁酸(3)的合成將4-叔丁基苯基乙酸甲酯(30.00g，0.145mol)和碘甲烷(45.41g，0.320mol)在125ml無水THF中的溶液30分鐘內(nèi)滴加到NaH(8.72g，0.363mol)在200mlTHF中的漿液中。加完后，將反應混合物加熱回流1.5小時。反應物冷卻至室溫，用硅藻土過濾、濃縮。殘余物用乙醚稀釋、水洗滌并用MgSO4干燥。蒸去溶劑后生成想要的油狀產(chǎn)品。4-叔丁基苯基異丁酸甲酯和含KOH(10.07g，0.179mol)的4∶1EtOH/H2O的混和液加熱回流4小時。真空蒸去E-tOH、殘液用2N HCl酸化至pH2，濾出固體沉淀。將白色固體干燥(60℃，1mmHg，24小時)得到目標產(chǎn)品(23.45g，從4-叔丁基苯基乙酸甲酯計算，產(chǎn)率為73.2%)。
1H NMR(CDCl3)1.34(s，9H)，1.62(s，6H)，7.37(s，4H)，11.4-12.4(brs，1H).13C NMR(CDCl3)26.16，31.30，34.35，45.81，125.31，125.48，140.64，149.66，183.57.
4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羰-叔丁基氧基-丙基巰基)苯基酯(4)的合成將4-叔丁基苯基異丁酸(2.00，0.0091mol)和亞硫酰二氯(1.62g，0.0136mol)在16mlCH2Cl2中的混合液在氬氣中攪拌過夜。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，形成的固體用THF(15ml)溶解，然后10分鐘內(nèi)滴加4-(4′-羥苯基)巰基丁酸叔丁基酯(2.44g，0.0091mol)、TEA(2.5ml)在THF(15ml)中的溶液?；旌衔飻嚢?天后用Et2O稀釋并用5%NaHCO3提取。有機層用水、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)。蒸發(fā)后，有色油經(jīng)分離(HPLC，硅膠柱，70∶30CH2Cl2/己烷對CH2Cl2線性梯度)得到目標油狀產(chǎn)品(2.20g，51.5%)。
1H NMR(CDCl3)δ1.33(s，9H)，1.43(s，9H)，1.70(s，6H)，1.88(tt，J＝7.2Hz，2H)，2.35(t，J＝7.2Hz，2H)，2.90(t，J＝7.2Hz，2H)，6.92(d，J＝8.6Hz，2H)，7.32(d，J＝8.6Hz，2H)，7.34-7.40(m，4H).13C NMR(CDCl3)δ24.50，26.42，28.08，31.31，33.70，34.11，34.39，46.40，80.40，121.92，125.23，125.46，130.82，133.03，140.86，149.58，149.69，172.21，175.34.
4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基巰基)苯基酯(5)的合成攪拌下，15分鐘內(nèi)將三氟乙酸(25ml)加入到4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羰-叔丁氧基-丙基巰基)苯基酯(2.40g，0.00510mol)在20mlCH2Cl2中的溶液中。加完后15分鐘，除去揮發(fā)性物質(zhì)，油狀物結(jié)晶(己烷)生成1.94g(91.8%)白色固體目標產(chǎn)品。
m.p.86.0-87.0℃，1H(CDCl3)1.33(s，9H)，1.70(s，6H)，1.92(tt，J＝7.0Hz，2H)，2.50(t，J＝7.0Hz，2H)，2.93(t，J＝7.0Hz，2H)，6.93(d，J＝8.7Hz，2H)，7.33(d，J＝8.7Hz，2H)，7.35-7.39(m，4H).13C NMR(CDCl3)23.89，26.45，31.32，32.34，33.63，34.42，46.42，122.03，125.24，125.48，131.12，132.63，140.85，149.74，175.40，178.65.
4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基磺?；?苯基酯(6)的合成向-50ml燒瓶中加入4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基巰基)苯基酯(1.64g，0.00396mol)、HOAc(25ml)和25ml 30%H2O2。攪拌反應過夜，用水(50ml)稀釋，濾出生成的固體。干燥(12小時，1mmHg)后，固體重結(jié)晶(CH2Cl2/己烷)得到1.54g(87.1%)的白色粉末目標化合物。
mp 107-108.5℃.1H(CDCl3)1.33(s，9H)，172.(s，6H)，2.02(p，J＝7.0Hz，2H)，2.52(t，J＝7.0Hz，2H)，3.17(t，J＝7.0Hz，2H)，7.20(d，J＝8.7Hz，2H)，7.36(d，J＝8.7Hz，2H)，7.41(d，J＝8.6Hz，2H)，7.90(d，J＝8.6Hz，2H).13C NMR(CDCl3)17.88，26.29，31.28，31.79，34.42，46.53，55.04，122.56，125.16，125.61，129.70，135.81，140.22，150.02，155.29，174.73，177.71.
6-馬來酰亞胺基己醇(7)的合成用作連結(jié)劑的6-馬來酰亞胺基己醇(7)的合成用下述合成路線2來說明合成路線2
向-100ml燒瓶中加入6-氨基己醇(0.76g，0.0064mol)和25ml飽和NaHCO3。室溫攪拌此均一溶液，并加入固體N-甲氧基羰基馬來酰亞胺(1.00g，0.0064mol)。加入后不久混合物變清，攪拌1小時，混合物用EtOAc提取，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。生成的混和物在硅膠柱上分離(CH2Cl2對EtOAc)。得到白色固體產(chǎn)品0.32g(25.2%)，無需進一步純化。
1H(CDCl3)δ1.25-1.45(m，4H)，1.45-1.70(m，4H)，3.53(t，J＝7.3Hz，2H)，3.63(t，J＝6.0Hz)，6.71(s，2H).
CP-0502的合成化合物(6)(CE-1218)用化合物(7)酯化形成化合物(8)，然后再與CP-0126連結(jié)以生成二聚物CP-0502。這些反應在合成路線3中說明
合成路線3
更具體地參照合成路線3，化合物(6)(200mg，0.448mol)、三乙胺(0.124ml，2當量)、6-馬來酰亞胺基己醇(7)(97mg，1.1i當量)溶解于2ml二氯甲烷中。攪拌下向此溶液中加入雙(2-氧代-3-噁性烷基)次膦酸氯化物(122mg，1.0當量)。形成的懸浮液室溫攪拌4小時。反應混合物用二氯甲烷稀釋，用飽和NaHCO3洗滌。此有機溶液用無水MgSO4干燥，真空除去溶劑。硅膠層析(2×18cm柱);35/65的丙酮/己酮(Rf＝0.4)作為洗脫劑，得到無色油狀化合物(8)。
將經(jīng)合物(8)(50mg，0.08mmol)溶解在10ml含有100μl二異丙基乙胺的DMF中。加入100mg(0.08mmol)的CP-0126，不時攪拌下反應30分鐘。反應混合物注入Vydacl″C-18反相柱，用水中15%-90%乙腈(含0.1%TFA)梯度10ml/分洗脫30分鐘。將適當流份冷凍干燥，得到52mg(35%)白色粉末(CP-0502)。激光解吸質(zhì)譜M/Z＝1890(M+H)，理論值1890。自動氨基酸序列分析結(jié)果證實了肽的氨基酸(無變化)序列正確。
BKAn/NEI異質(zhì)二聚物的體外活性體外評價下列化合物的BKAn和NEI活性用本領(lǐng)域熟知的標準實驗方法(Protocols)進行。BKAn活性(pA2)用大鼠子宮制備物測定，NEI(Kiss)活性用純化的人嗜中性彈性蛋白酶(HNE)和合成可溶性產(chǎn)色底物甲氧基琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰-纈氨酰-鄰硝基苯胺(MOS-AAPV-pNA)進行評價。抑制劑在含0.05M磷酸鈉、0.1M的NaCl、0.005%的Triton X-100、5%DMSO、pH7.5的溶液中與MOS-AAPV-pNA(0.5mM)混和。然后加入HNE(10-20nM)。硝基苯胺的生成用分光光度計在波長400-410nm處、溫度為25℃下檢測。然后用ENZFITTER程序自動計算標準酶動力學參數(shù)，包括Kiss。
得到下列結(jié)果表Ⅱ化合物 pA2--大鼠子宮 Kiss(HNE)nMCP-0126 7.1 無活性CE-1218 無活性 10.5CP-0487 8.4 無活性CP-0502 7.5 6.6注意它們各自的Ki值，表Ⅱ中的數(shù)據(jù)提示完整的異質(zhì)二聚物(CP-0502)與游離子NEI片段單體(CE-1218)的NEI活性幾乎沒有區(qū)別。但對于完整異質(zhì)二聚物的BKAn和它的水解產(chǎn)物CP-0487(CP-0126的琥珀酰亞胺基己醇衍生物)的BKAn方面活性則不同，其中完整化合物效力幾乎比單體BKAn低一個數(shù)量級(afullLog)有趣的是完整化合物表現(xiàn)為不可逆型的緩激肽拮抗劑，并且在溫育時間較長時，明顯增強對緩激肽誘導的子宮收縮的拮抗活性。這種類型的受體作用不能用標準pA2分析很好地測量，所以觀察到的CP-0487和CP-0502之間BKAn活性差異可能比實際上的更明顯。無論這些數(shù)背后的分子藥理學機制如何，很明顯可以將BKAn和NEI活性整合在單一分子中。
上述數(shù)據(jù)提示考慮完整化合物的體內(nèi)水解可改變兩者的作用行為以增強原化合物體內(nèi)活性。遺憾地是沒有已建立的動物模型可以用來測定體內(nèi)BKAn和NEI的結(jié)合活性。因此，為了測定完整異質(zhì)二聚物在體內(nèi)的水解潛力，使用了一種體外“代用”系統(tǒng)，其中異質(zhì)二聚物(CP-0502)與人血漿一起溫育，然后用反相HPLC分析產(chǎn)生的代謝物。
將CP-0502加入新取的人血漿中，并在37℃溫育不同時間。在這些設定的時間下用酸化(0.1NHCl)乙腈處理樣品以沉淀血漿蛋白。上清液的等份試樣(75μl)在Vydac C-18反相HPLC柱上用0.1%TFA中24%到80%乙腈梯度洗脫條件下進行分析。洗脫液在214nm下檢測。
圖5a和b代表說明這種分析的反相HPLC色譜圖。從這些色譜圖中可以看出，母化合物看來很快就水解為琥珀酰亞胺基己醇修飾的單體CP-0487及它的脫Arg9衍生物(血漿羧肽酶將從完整異質(zhì)二聚物CP-0502及CP-0487中裂解末端精氨酸殘基)。此水解反應的表觀T1/2大約為113分鐘。異質(zhì)二聚物的NEI組分為一活性酯，并同時進行水解。但完整NEI組分及它的水解產(chǎn)物被圖中部來自血漿的峰掩蓋，而且用此系統(tǒng)無法使其可見化。由于NEI作為異質(zhì)二聚物組分和作為單體具有同樣的活性，所以異質(zhì)二聚物分解為二個部分對它的活性的影響要小于BKAn組分。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到“連結(jié)”酯片斷的立體和電子環(huán)境會影響異質(zhì)二聚物的水解速度，這里所用化學基團僅為可用來調(diào)節(jié)異質(zhì)二聚物解離速度(或不解離)的化學基團的一個例子。
實施例6(BKAn/COI)BKAn/COI異質(zhì)二聚物的合成和分析按照下列合成路線4和5合成了代表性BKAn/COI異質(zhì)二聚物(CP-0460)。
合成路線4
1-(4-氯苯甲?；?-5-甲氧基-2-甲基-3-吲哚乙酸6-馬來酰亞胺基己基酯(9)的合成向-100ml燒瓶中加入消炎痛(1.90g，0.00532mol)、25mlCH2Cl2及DCC(0.55g，0.00266mol)。2小時后，將混和物過濾，用15mlCH2Cl2洗滌二環(huán)己脲(DCU)，向此新溶液中加入固體6-馬來酰亞胺基己醇(0.50g，0.00253mol)，再加入無水Na2CO3(0.32g，0.00304mol)。4天后，將混和物過濾，用Et2O稀釋，用5%NaH-CO3、H2O洗滌并干燥(MgSO4)。生成的黃色油用HPLC(硅膠;CH2Cl2對80∶20CH2Cl2/EtOAc線性梯度，60分鐘)純化，得到0.79g(58.0%)的黃色油狀目標產(chǎn)品。1HNMR(CDCl3)1.20-1.35(m，4H)，2.38(s，3H)，3.47(t，J＝7.3Hz，2H)，3.66(s，2H)，3.83(s，3H)，4.08(t，J＝6.6Hz，2H)，6.66(J＝9.0Hz，J＝2.5Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.87(d，J＝9.0Hz，1H)，6.96(d，J＝2.5Hz，1H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，7.66(d，J＝8.5Hz，2H).
化合物(9)與CP-0126連結(jié)生成CP-0460在合成路線5中說明并描述如下
合成路線5
CP-0126(100mg，0.08mmol)與化合物(9)(0.12mmol，1.5當量)在2ml95%DMF/5%含50μl二異丙基乙胺的碳酸氫銨中不時攪拌下反應30分鐘。將反應混合物注入Vydac 1″C-18反相柱在流速10ml/分，20分鐘內(nèi)從15%乙腈/0.1%TFA到40%乙腈/0.1%TFA梯度洗脫條件下純化。適當流份冷凍干燥后生成64mg(45%)無色粉末(CP-0460)。激光解離質(zhì)譜M/Z＝1802(M+H)，理論值1802。
如前文提到的，COI起作用需與BKAn解離以使其穿透到細胞內(nèi)。因此，為了評價BKAn/COI異質(zhì)二聚物的機能活性，將CP-0460作用于大鼠肺實質(zhì)條上，然后用花生四烯酸激動。此組織已知既具有非專一性酯酶活性又可將四烯酸轉(zhuǎn)變?yōu)檠ㄋ?通過環(huán)氧酶依賴性途徑)，后者最終引起本實驗中觀察到的平滑肌收縮。
用此系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)血栓素和CP-0460的對數(shù)劑量比位移分別為0.988+/-0.425和1.029-/-0.042，說明單獨用消炎痛和CP-0460抑制外源性花生四烯酸引起的收縮效力相同。BKAn本身的對數(shù)劑量比位移值對此系統(tǒng)沒有影響。這些數(shù)據(jù)顯示BKAn/COI異質(zhì)二聚物的COI組分在同時具有酯水解和環(huán)氧酶活性的組織中有機能活性。
用標準大鼠子宮實驗也測試了完整CP-0460的BKAn活性，發(fā)現(xiàn)CP-0460的pA2大約為7.8。另外，CP-0460(與CP-0502相似)不表現(xiàn)為典型的緩激肽誘發(fā)的子宮收縮的竟爭性拮抗劑，而為一種“假非竟爭性”拮抗劑(特別是濃度較高時)。這種非典型行為不涉及COI活性本身，因為消炎痛無論濃度高低對此實驗都沒有影響。
無論如何解釋所觀察到的數(shù)據(jù)，象本文說明的其它兩類化合物一樣，本領(lǐng)域的技術(shù)人員會認識可以用各種各樣適當連結(jié)片斷來制備藥理學上重要的BKAn/COI異質(zhì)二聚物，以使自由羥基和COI組分的羧基基團(許多COI的一般特性)形成具有可水解酯的異質(zhì)二聚物。這些化合物可以用來治療各種炎癥或疼痛狀況以及治療子宮平滑肌功能失常。
本發(fā)明已例舉了上述應用非肽Y組分的例子，此組分也可由整個或部分如在前述WO 92/172001中例舉的一種肽組成，包括此文描述的異質(zhì)二聚物。
本發(fā)明的二聚物可以以由活性組份和藥用載體組成的傳統(tǒng)藥物組合物形式使用。這些組合物可適用于局部、口服、氣霧、肌內(nèi)、皮下或靜脈給藥。這些組合物中活性組份的含量可根據(jù)用途和給藥途徑在例如0.001和90.0%之間變化，盡管可用更多或更少的活性組分。常用的劑量將在很大程度上根據(jù)具體用途和給藥方式變化。但一般有效劑量在每公斤體重0.1至1000mg數(shù)量級之間。
本發(fā)明的范圍如下述權(quán)利要求所定義。
權(quán)利要求
1.下式的異質(zhì)二聚物其中BKAn為緩激肽拮抗劑肽；Y為一不同于BKAn的藥效基團；X是化學連結(jié)BKAn和Y組份的連結(jié)片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為具有對抗炎癥過程的非激肽部分的活性的非肽藥效基團。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為具有對抗炎癥過程的非激肽部分的活性的肽類藥效基團。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為μ-阿片受體激動劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為嗜中性彈性蛋白酶抑制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為環(huán)氧酶抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為NK1受體拮抗劑或NK2受體拮抗劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X是可水解的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X是不可水解的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X由摻在BKAn中的氨基酸或氨基酸類似物組成。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X由基于馬來酰亞胺/琥珀酰亞胺的連結(jié)基團組成。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X由雙琥珀酰亞胺基烷組成。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中X由BKAn肽巰基的S原子組成。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y選自14-羥基二氫可待因酮或14-羥基雙氫嗎啡酮。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為消炎痛。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中Y為嗜中性彈性蛋白酶抑制劑而X包括通過BKAn鏈上巰基的硫原子連結(jié)在BKAn上的琥珀酰亞胺基團。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的異質(zhì)二聚物，其中嗜中性彈性蛋白酶抑制劑為4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基磺?；?苯基酯。
18.包含為了連結(jié)到BKAn肽上而加入的連結(jié)基團的藥效基團。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的藥效基團，其中連結(jié)基團由胺、羧酸、羥基、巰基或馬來酰亞胺基團或能夠整合到肽中的氨基酸組成。
20.包含為連結(jié)非肽藥效基團而加入的連結(jié)基團的BKAn肽。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的BKAn肽，其中連結(jié)基團由巰基、馬來酰亞胺基團或以羥基為末端的烷烴鏈、胺或羧酸基團組成。
22.根據(jù)權(quán)利要求18的藥效基團，它為μ-阿片受體激動劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求18的藥效基團，它為嗜中性彈性蛋白酶抑制劑。
24.根據(jù)權(quán)利要求18的藥效基團，它為環(huán)氧酶抑制劑。
25.根據(jù)權(quán)利要求18的藥效基團，它為NK1受體拮抗劑或NK2受體拮抗劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物，其中BKAn為DR-R-P-J-G-F-C-DF-L-R或DR-R-P-J-G-Thi-G-DTic-Oic-R。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的異質(zhì)二聚物，其中另一藥效基團為μ-阿片受體激動劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求26的異質(zhì)二聚物，其中另一藥效基團為嗜中性彈性蛋白酶抑制劑。
29.根據(jù)權(quán)利要求26的異質(zhì)二聚物，其中另一藥效基團為環(huán)氧酶抑制劑。
30.根據(jù)權(quán)利要求26的異質(zhì)二聚物，其中另一藥效基團為NK1拮抗劑或NK2拮抗劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求28的異質(zhì)二聚物，其中藥效基團為4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基-磺?；?苯基酯。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的異質(zhì)二聚物，其中X由用-S-原子連結(jié)到BKAn組分上的雙琥珀亞胺基烷基團組成。
33.化合物4-叔丁基苯基異丁酸4-(3′-羧基-丙基磺?；?苯基酯。
34.由權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物和藥用載體組成的藥物組合物。
35.在用緩激肽拮抗劑治療疼痛或炎癥的方法中，使用權(quán)利要求1的異質(zhì)二聚物所構(gòu)成的改進。
全文摘要
下式的緩激肽拮抗劑 (BKA其中BKA
文檔編號A61P25/04GK1094058SQ9311448
公開日1994年10月26日 申請日期1993年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1992年11月10日
發(fā)明者J·C·徹奧尼斯, J·K·博勞德格特, V·S·古德佛樓, M·V·馬拉瑟, L·W·思普魯斯, E·T·瓦雷 申請人:科泰徹公司