本發(fā)明涉及一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗、制備方法及其應(yīng)用，屬于醫(yī)用配制品。

背景技術(shù)：

1、樹突狀細胞（dendritic?cells，簡稱dc）是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強的抗原呈遞細胞，其表面具有豐富的抗原呈遞分子，能有效激活初始t細胞。dc也可通過il-6和ifn-γ調(diào)控記憶b細胞和漿細胞，從而影響體液免疫。dc疫苗，是一種新型的生物免疫治療手段，它不同于傳統(tǒng)的滅活或減毒疫苗，而是dc負載抗原肽制備的疫苗，目前在人體抗腫瘤和抗病毒領(lǐng)域均發(fā)揮著重要作用，然而在畜牧業(yè)研究中處于空白階段。

2、干擾素（interferon，ifn）是一類由動物機體產(chǎn)生的多功能分泌性蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功能。α干擾素（interferon?alpha，ifn-α）主要由單核-吞噬細胞產(chǎn)生，是天然免疫和獲得性免疫的橋梁，可以激活nk細胞的細胞毒性并促進其增殖，調(diào)節(jié)機體免疫。它具有抗病毒作用，既可以與疫苗配合使用，增強免疫效果，也可以單獨使用，提高動物的免疫機能，治療病毒性疾病。但是重組表達的單體干擾素抗病毒活性不高，無法兼具抗病毒與免疫調(diào)節(jié)的作用。

3、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，prrs)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine?reproductive?and?respiratory?syndromevirus，prrsv)感染豬只而引起的一種急性病毒性傳染病。prrsv能夠感染所有年齡段的豬，尤其以懷孕母豬和仔豬的臨床癥狀最為嚴重。由于prrsv毒株的遺傳多樣性，目前市售的滅活疫苗及減毒活疫苗均是提供預(yù)防作用無法提供治療作用，并且減毒活疫苗存在毒力返祖及遺傳不穩(wěn)定的風險。因此，急需開發(fā)其它有效的prrs防控方法。

4、現(xiàn)有技術(shù)中未見有將豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白結(jié)合制備針對prrs的疫苗的相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗、制備方法及其應(yīng)用，實現(xiàn)以下發(fā)明目的：提高該疫苗對于豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗病毒作用，提高該疫苗對于豬繁殖與呼吸綜合征的治療效果。

2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：

3、一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，所述prrsv?gp5蛋白的核酸人工序列如seqid?no.1所示，所述豬α干擾素的核酸人工序列如seq?id?no.3所示。

4、所述疫苗中包含目的基因片段，所述目的基因片段由prrsv?gp5蛋白、自裂解多肽t2a、豬α干擾素串聯(lián)得到。

5、所述自裂解多肽t2a的核酸人工序列如seq?id?no.2所示。

6、所述疫苗為包含目的基因片段的成熟dc細胞。

7、所述疫苗為包含目的基因片段的重組慢病毒感染的成熟dc細胞。

8、所述疫苗的制備方法為將目的基因片段插入慢病毒表達載體后構(gòu)建目的表達質(zhì)粒，采用慢病毒包裝后，感染未成熟的dc細胞，再誘導(dǎo)培養(yǎng)得到成熟的dc細胞。

9、所述的疫苗在制備預(yù)防或治療豬繁殖與呼吸綜合征的藥品中的應(yīng)用。

10、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得以下有益效果：

11、本發(fā)明首次將prrsv?gp5蛋白、自裂解多肽t2a和豬α干擾素的基因串聯(lián)，然后穩(wěn)定整合至dc細胞基因組中，制備得到dc疫苗，該疫苗可以持續(xù)表達prrsv?gp5抗原，該抗原能夠持續(xù)刺激和活化dc，同時激活細胞免疫和體液免疫，發(fā)揮抗prrsv作用；該疫苗能夠釋放豬α干擾素，直接抑制prrsv的侵染。

12、本發(fā)明對prrsv?gp5蛋白、豬α干擾素的核苷酸序列進行優(yōu)化，可以提高dc疫苗的免疫效果，提高對prrsv的抗病毒作用，還可以提高對于豬繁殖與呼吸綜合征的治療效果。

技術(shù)特征：

1.一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，其特征在于：所述prrsv?gp5蛋白的核酸人工序列如seq?id?no.1所示，所述豬α干擾素的核酸人工序列如seq?id?no.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，其特征在于：所述疫苗中包含目的基因片段，所述目的基因片段由prrsv?gp5蛋白、自裂解多肽t2a、豬α干擾素串聯(lián)得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，其特征在于：所述自裂解多肽t2a的核酸人工序列如seq?id?no.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，其特征在于：所述疫苗為包含目的基因片段的成熟dc細胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種高表達豬α干擾素和prrsv?gp5蛋白的疫苗，其特征在于：所述疫苗為包含目的基因片段的重組慢病毒感染的成熟dc細胞。

6.權(quán)利要求1-5任一項所述疫苗的制備方法，其特征在于：將目的基因片段插入慢病毒表達載體后構(gòu)建目的表達質(zhì)粒，采用慢病毒包裝后，感染未成熟的dc細胞，再誘導(dǎo)培養(yǎng)得到成熟的dc細胞。

7.權(quán)利要求1-5任一項所述的疫苗在制備預(yù)防或治療豬繁殖與呼吸綜合征的藥品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種高表達豬α干擾素和PRRSV?GP5蛋白的疫苗、制備方法及其應(yīng)用，屬于醫(yī)用配制品技術(shù)領(lǐng)域，所述PRRSV?GP5蛋白的核酸人工序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述豬α干擾素的核酸人工序列如SEQ?ID?NO.3所示。本發(fā)明首次將PRRSV?GP5蛋白、自裂解多肽T2A和豬α干擾素的基因串聯(lián)，然后穩(wěn)定整合至DC細胞基因組中，制備得到DC疫苗，該疫苗可以持續(xù)表達PRRSV?GP5抗原，該抗原能夠持續(xù)刺激和活化DC，同時激活細胞免疫和體液免疫，發(fā)揮抗PRRSV作用；該疫苗能夠釋放豬α干擾素，直接抑制PRRSV的侵染。

技術(shù)研發(fā)人員：郭海巖,劉剛,王興業(yè),李琦,韓國英,于明玉,王曉冉,喬雪
受保護的技術(shù)使用者：山東仙普愛瑞科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9