本發(fā)明一般涉及生物醫(yī)用材料領域，具體地，涉及一種負載原花青素和甲鈷胺的羊膜及其制備方法和應用。

背景技術：

1、角膜上皮缺損是眼科常見的臨床問題，常由多種非感染性原因引起，如機械創(chuàng)傷、化學灼傷、干眼癥、神經營養(yǎng)性角膜炎、自身免疫性疾病等。如果角膜上皮缺損長期得不到有效修復，可能引發(fā)一系列嚴重的并發(fā)癥，包括角膜潰瘍和角膜穿孔，這不僅會嚴重影響視力，甚至可能導致失明。

2、羊膜是胎盤的最內層，其結構與人眼結膜組織相似，并富含多種生長因子，能夠為角膜上皮細胞提供了一個類似于眼表組織的生長環(huán)境；還因其無血管、神經及淋巴的特性，減少了移植后的免疫排斥反應和炎癥反應。因此，羊膜在眼科臨床中成為促進角膜上皮損傷恢復的重要手段。

3、但是羊膜天然的膠原纖維結構和原本含有的促進上皮細胞粘附劑遷移的生長因子的活性在反復清洗、嚴格的消毒、保存方式不當、長時間保存等過程中會遭到不同程度的破壞，導致抗炎、促上皮修復的能力降低。如何維持并增強羊膜的促修復功能是本領域的研究重點。

技術實現思路

1、本發(fā)明提供的羊膜選擇性的負載有原花青素和甲鈷胺，具有抗炎、抗菌、促進角膜上皮和神經修復的功能，解決了現有的羊膜經處理后促修復功能下降的問題。

2、在本發(fā)明的第一方面，提供了一種負載原花青素和甲鈷胺的羊膜的制備方法，包括：將羊膜浸泡于含有原花青素、甲鈷胺和n-羥基琥珀酰亞胺的溶液中，反應后得到負載原花青素和甲鈷胺的羊膜。

3、本發(fā)明中，甲鈷胺與原花青素的濃度比為(1-10):(30-100)，優(yōu)選為(2-8):(50-100)，更優(yōu)選為(5-8):(50-80)。

4、優(yōu)選的，溶液中原花青素的濃度為3-10mg/ml，更優(yōu)選為5-8mg/ml。

5、優(yōu)選的，溶液中甲鈷胺的濃度為0.1-0.8mg/ml，更優(yōu)選為0.4-0.8mg/ml，更優(yōu)選為0.5mg/ml。

6、優(yōu)選的，溶液中nhs的濃度為8-20mg/ml，更優(yōu)選為10-15mg/ml。

7、優(yōu)選的，溶液的ph為6.5-7.5。

8、優(yōu)選的，反應的條件為在室溫下靜置30分鐘-3小時。

9、在本發(fā)明的第二方面，提供了一種負載原花青素和甲鈷胺的羊膜。

10、優(yōu)選的，羊膜上甲鈷胺的負載濃度為1.5-2.3ug/ml，原花青素的負載濃度為3-4ug/ml。

11、更優(yōu)選的，羊膜上甲鈷胺的負載濃度為2.3ug/ml；原花青素的負載濃度為3.6ug/ml。

12、在本發(fā)明的第三方面，提供了上述制備負載原花青素和甲鈷胺的羊膜的方法及其制備得到的負載原花青素和甲鈷胺的羊膜在用于制備治療或緩解角膜上皮缺損、促進角膜上皮細胞修復的醫(yī)療器械中的應用。

13、應當理解，
技術實現要素：
部分中所描述的內容并非旨在限定本發(fā)明的實施例的關鍵或重要特征，亦非用于限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的其它特征將通過以下的描述變得容易理解。

14、本發(fā)明提供的羊膜具有以下有益效果：

15、1)本發(fā)明的羊膜負載了原花青素和甲鈷胺，藥物在羊膜里緩慢釋放，增加了羊膜抗炎、抗菌、促進上皮和神經修復的功能，縮短病程，可以減少術后藥物的使用頻率，減輕病人痛苦和經濟負擔。

16、2)本發(fā)明的羊膜材料生物相容性好，利于細胞的粘附和增殖。

17、3)本發(fā)明的羊膜在干燥后可以長期保存，使用、存儲、運輸均方便，可廣泛用于臨床。

技術特征：

1.一種負載原花青素和甲鈷胺的羊膜的制備方法，其特征在于，包括：將羊膜浸泡于含有原花青素、甲鈷胺和n-羥基琥珀酰亞胺的溶液中，反應后得到負載原花青素和甲鈷胺的羊膜。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，甲鈷胺與原花青素的濃度比為2-10:30-100。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，原花青素的濃度為3-10mg/ml；甲鈷胺的濃度為0.1-0.8mg/ml；nhs的濃度為8-20mg/ml。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，原花青素的濃度為5-8mg/ml；甲鈷胺的濃度為0.4-0.8mg/ml；nhs的濃度為10-15mg/ml。

5.如權利要求1-4中任一所述的制備方法，其特征在于，溶液的ph為6.5-7.5。

6.如權利要求1-4中任一所述的制備方法，其特征在于，所述反應的條件為在室溫下靜置30分鐘至3小時。

7.根據權利要求1-6中任一所述的制備方法制備得到的負載原花青素和甲鈷胺的羊膜。

8.如權利要求7所述的羊膜，其特征在于，甲鈷胺的負載濃度為1.5-2.3ug/ml，原花青素的負載濃度為3-4ug/ml。

9.如權利要求8所述的羊膜，其特征在于，甲鈷胺的負載濃度為2.3ug/ml，原花青素的負載濃度為3.6ug/ml；或甲鈷胺的負載濃度為2.0ug/ml，原花青素的負載濃度為4.0ug/ml。

10.如權利要求1-6中任一所述的制備方法或如權利要求7-9中任一所述的負載原花青素和甲鈷胺的羊膜在用于制備治療或緩解角膜上皮缺損、促進角膜上皮細胞修復的醫(yī)療器械中的應用。

技術總結
本發(fā)明公開了一種負載原花青素和甲鈷胺的羊膜的制備方法，包括：將羊膜浸泡于含有原花青素、甲鈷胺和N?羥基琥珀酰亞胺的溶液中，反應后得到負載原花青素和甲鈷胺的羊膜。本發(fā)明中的羊膜選擇性的負載有原花青素和甲鈷胺，具有抗炎、抗菌、促進角膜上皮和神經修復的功能，解決了羊膜經處理后促修復功能下降的問題。

技術研發(fā)人員：史偉云,王敬亭,趙龍,史真
受保護的技術使用者：山東第一醫(yī)科大學附屬眼科醫(yī)院（山東省眼科醫(yī)院）
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/9