發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及包括多肽的化合物，該化合物可用作補(bǔ)體活性的抑制劑和/或拮抗劑。還提供利用該抑制劑作為療法的方法。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、脊椎動(dòng)物的免疫應(yīng)答由適應(yīng)性免疫和先天性免疫組分組成。適應(yīng)性免疫應(yīng)答對(duì)具體病原體有選擇性并且應(yīng)答緩慢，而先天性免疫應(yīng)答的組分識(shí)別廣泛范圍的病原體并且在侵染時(shí)迅速應(yīng)答。先天性免疫應(yīng)答的一種此類(lèi)組分是補(bǔ)體系統(tǒng)。

2、補(bǔ)體系統(tǒng)包括主要由肝合成的約20種循環(huán)蛋白。此特定免疫應(yīng)答的組分因觀測(cè)到在細(xì)菌破壞中補(bǔ)充抗體應(yīng)答而最早被稱(chēng)為“補(bǔ)體”。在應(yīng)答感染而激活之前，這些蛋白保持無(wú)活性形式。激活借助于由病原體識(shí)別引發(fā)并導(dǎo)致病原體破壞的蛋白水解性裂解的途徑而發(fā)生。三種此類(lèi)途徑在補(bǔ)體系統(tǒng)中已知，并被稱(chēng)作經(jīng)典途徑、凝集素途徑和替代途徑。當(dāng)igg或igm分子結(jié)合至病原體表面時(shí)激活經(jīng)典途徑。凝集素途徑由識(shí)別細(xì)菌細(xì)胞壁糖殘基的結(jié)合甘露聚糖的凝集素蛋白引發(fā)。在缺乏任何特異性刺激物的情況下替代途徑在低水平上保持活性。雖然所有三種途徑關(guān)于引發(fā)事件有所不同，但所有三種途徑因補(bǔ)體組分c3的裂解而會(huì)聚。c3被裂解成稱(chēng)為c3a和c3b的兩種產(chǎn)物。在這兩種產(chǎn)物中，c3b變得共價(jià)連接至病原體表面，而c3a充當(dāng)可擴(kuò)散信號(hào)來(lái)促進(jìn)炎癥并招募循環(huán)免疫細(xì)胞。表面連接的c3b與其它組分形成復(fù)合體來(lái)在補(bǔ)體系統(tǒng)的其它后續(xù)組分中引發(fā)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。由于對(duì)表面附著的要求，補(bǔ)體活性保持局部化并使對(duì)非靶細(xì)胞的破壞降到最低。

3、病原體相關(guān)的c3b以?xún)煞N方式來(lái)促進(jìn)病原體破壞。在一種途徑中，c3b由吞噬細(xì)胞直接識(shí)別并導(dǎo)致病原體的吞食。在第二種途徑中，病原體相關(guān)的c3b引發(fā)膜攻擊復(fù)合體(mac)的形成。在第一個(gè)步驟中，c3b與其它補(bǔ)體組分復(fù)合來(lái)形成c5-轉(zhuǎn)化酶復(fù)合體。取決于最初的補(bǔ)體激活途徑，此復(fù)合體的組分可不同。因經(jīng)典補(bǔ)體途徑而形成的c5-轉(zhuǎn)化酶除c3b以外還包含c4b和c2a。當(dāng)由替代途徑形成時(shí)，c5-轉(zhuǎn)化酶包含c3b的兩種亞基以及一種bb組分。

4、補(bǔ)體組分c5由任一c5-轉(zhuǎn)化酶復(fù)合體裂解成c5a和c5b。c5a很像c3a，擴(kuò)散入循環(huán)并促進(jìn)炎癥，充當(dāng)針對(duì)炎癥細(xì)胞的趨化物。c5b保持附著至細(xì)胞表面，在該處它經(jīng)由與c6、c7、c8和c9的相互作用來(lái)觸發(fā)mac的形成。mac是跨膜的親水孔并促進(jìn)流體進(jìn)出細(xì)胞的自由流動(dòng)，由此破壞細(xì)胞。

5、所有免疫活性的重要組分是免疫系統(tǒng)區(qū)分自體細(xì)胞與非自體細(xì)胞的能力。當(dāng)免疫系統(tǒng)不能作出此區(qū)分時(shí)病理出現(xiàn)。就補(bǔ)體系統(tǒng)而言，脊椎動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)保護(hù)其免受補(bǔ)體級(jí)聯(lián)效應(yīng)的蛋白。這確保了補(bǔ)體系統(tǒng)的靶標(biāo)局限于病原細(xì)胞。許多補(bǔ)體相關(guān)性病癥和疾病與補(bǔ)體級(jí)聯(lián)導(dǎo)致的自體細(xì)胞異常破壞相關(guān)聯(lián)。在一個(gè)實(shí)例中，患有陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿(pnh)的受試者不能在造血干細(xì)胞上合成補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白cd55和cd59的功能版本。這導(dǎo)致補(bǔ)體介導(dǎo)性溶血和各種下游并發(fā)癥。其它補(bǔ)體相關(guān)性病癥和疾病包括但不限于自身免疫疾病和病癥、神經(jīng)疾病和病癥、血液疾病和病癥，和傳染性疾病和病癥。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明許多補(bǔ)體相關(guān)性病癥經(jīng)由補(bǔ)體活性的抑制來(lái)減輕。因此，存在開(kāi)發(fā)能夠選擇性阻斷補(bǔ)體介導(dǎo)性細(xì)胞破壞的化合物的需要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供包括多肽(例如，模擬肽、環(huán)狀多肽和環(huán)狀模擬肽)、小分子、抗體、抗體片段和適體的化合物，以及將所述化合物用于補(bǔ)體調(diào)節(jié)的方法。根據(jù)本發(fā)明，多肽可具有seq?id?no?1-201或211中所示的序列。多肽可為線性或環(huán)狀并且可包含由兩個(gè)氨基酸之間的橋接部分(bridging?moiety)形成的環(huán)狀環(huán)。橋接部分可包含選自由二硫鍵、酰胺鍵(內(nèi)酰胺)、硫醚鍵、芳族環(huán)、不飽和脂肪族烴鏈、飽和脂肪族烴鏈、三唑環(huán)或它們的組合組成的組的特征。此外，環(huán)狀環(huán)可在長(zhǎng)度上變化并且可為1個(gè)氨基酸、2個(gè)氨基酸、3個(gè)氨基酸、4個(gè)氨基酸、5個(gè)氨基酸、6個(gè)氨基酸、7個(gè)氨基酸、8個(gè)氨基酸、9個(gè)氨基酸、10個(gè)氨基酸、11個(gè)氨基酸、12個(gè)氨基酸、13個(gè)氨基酸、14個(gè)氨基酸、15個(gè)氨基酸、16個(gè)氨基酸，或更多。

2、橋接部分可包含兩個(gè)半胱氨酸殘基之間的二硫基或通過(guò)與聚(溴甲基)苯反應(yīng)產(chǎn)生的芳族環(huán)，并且此類(lèi)聚(溴甲基)苯可選自由1,2-雙(溴甲基)苯、1,3-雙(溴甲基)苯和1,4-雙(溴甲基)苯組成的組。

3、橋接部分還可包含通過(guò)與選自由2,6-雙(溴甲基)吡啶、(e)-1,4-二溴丁-2-烯和1,2-雙(溴甲基)-4-烷基苯組成的組的化合物反應(yīng)產(chǎn)生的芳族環(huán)。

4、橋接部分還可包含通過(guò)以下氨基酸對(duì)的側(cè)鏈的反應(yīng)產(chǎn)生的酰胺鍵：賴(lài)氨酸和谷氨酸鹽，賴(lài)氨酸和天冬氨酸鹽，鳥(niǎo)氨酸和谷氨酸鹽，鳥(niǎo)氨酸和天冬氨酸鹽，高賴(lài)氨酸和谷氨酸，高賴(lài)氨酸和天冬氨酸，氨基酸、非天然氨基酸或包括伯胺和羧酸的非氨基酸殘基的其它組合。

5、根據(jù)本發(fā)明，多肽因可展現(xiàn)補(bǔ)體c5抑制活性而有用。在一些情況下，此類(lèi)活性可為約50nm至約200nm或小于50nm的半最大抑制濃度(ic50)。

6、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供具有色氨酸或者一種或多種色氨酸類(lèi)似物的多肽，所述色氨酸類(lèi)似物選自由存在于氨基酸序列內(nèi)的5-氟色氨酸、5-甲基-o-色氨酸、1-甲基色氨酸、d-色氨酸和7-氮雜色氨酸組成的組。此類(lèi)化合物尤其包括seq?id?no：3、9、11、19、45、46、50和59的那些。

7、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的多肽可結(jié)合至c5上的區(qū)域，其中所述區(qū)域在c5a-c5b裂解位點(diǎn)的遠(yuǎn)端。在一些情況下，本發(fā)明的多肽可抑制c5裂解成c5a和c5b裂解產(chǎn)物。

8、在一些情況下，本發(fā)明的多肽可為抗體的部分。

9、本發(fā)明的多肽可被包含在組合物中。此類(lèi)組合物可包含一種或多種可接受的載體或賦形劑。此類(lèi)多肽可進(jìn)一步結(jié)合至諸如像水溶性聚合物的另一非多肽部分。這些聚合物可為親水或疏水的。在一些實(shí)施方案中，親水聚合物選自由聚烷撐氧均聚物、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇和它們的共聚物組成的組。親水聚合物還可包括聚乙二醇(peg)。組合物可進(jìn)一步包含結(jié)合至選自由seq?id?no：202-204組成的組的白蛋白結(jié)合多肽的多肽。在一些情況下，組合物可包含結(jié)合至選自由seq?id?no：205-210組成的組的細(xì)胞穿透多肽的多肽。組合物可進(jìn)一步包含結(jié)合至脂類(lèi)部分的多肽。脂類(lèi)部分可包括但不限于脂肪酸、磷脂和固醇。在一些實(shí)施方案中，脂類(lèi)部分可直接結(jié)合至本發(fā)明的多肽或連接至多肽-peg結(jié)合物。一些組合物可包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。

10、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在細(xì)胞系統(tǒng)中抑制c5裂解的方法，該方法包括使用諸如上述那些的根據(jù)本發(fā)明的組合物。一些此類(lèi)方法可降低c5a水平。另外的方法可減少膜攻擊復(fù)合體(mac)形成。

11、本發(fā)明的一些方法可導(dǎo)致具有約50nm至約200nm的ic50的c5裂解抑制。在一些情況下，本發(fā)明的方法可包括具有小于50nm的ic50的c5裂解抑制。

12、本發(fā)明的一些方法可應(yīng)用于選自體外系統(tǒng)、體內(nèi)系統(tǒng)和離體系統(tǒng)的細(xì)胞系統(tǒng)。一些體內(nèi)系統(tǒng)可包括受試者，諸如人受試者。在一些情況下，多肽和多肽組合物可用于在受試者中治療或預(yù)防補(bǔ)體相關(guān)性疾病、病癥和/或病狀。對(duì)受試者的施用可選自由經(jīng)頰、鼻內(nèi)、經(jīng)口、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、經(jīng)皮膚和玻璃體內(nèi)組成的組。在一些情況下，組合物可用來(lái)治療陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿和/或非典型性溶血性尿毒癥綜合征。在一些情況下，本發(fā)明的組合物可用來(lái)治療炎性適應(yīng)癥、外傷、損傷、自身免疫疾病、血管適應(yīng)癥、神經(jīng)適應(yīng)癥、腎相關(guān)性適應(yīng)癥和眼部疾病中的一種或多種。

13、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在細(xì)胞系統(tǒng)中抑制凝血酶誘導(dǎo)性補(bǔ)體激活的方法，該方法包括使此類(lèi)系統(tǒng)與本發(fā)明的多肽接觸。進(jìn)一步提供在受試者中治療溶血的方法，該方法包括施用本文所述的多肽。根據(jù)一些此類(lèi)方法，受治療的溶血是由凝血酶誘導(dǎo)性補(bǔ)體激活造成的。

14、在一些實(shí)施例中，提供用于在包括人的哺乳動(dòng)物中診斷、預(yù)后、預(yù)防或治療疾病、病癥和/或病狀的試劑盒。此類(lèi)試劑盒將包含本發(fā)明的一種或多種多肽或者多肽組合物，以及任選地，試劑和/或使用說(shuō)明書(shū)。在此類(lèi)試劑盒中，多肽可包含可檢測(cè)標(biāo)記或結(jié)合至可檢測(cè)標(biāo)記以形成可檢測(cè)復(fù)合體的能力。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，標(biāo)記包括bodipy-tmr標(biāo)記。