本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及虛擬篩選化合物在制備法尼醇x受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用及藥物。

背景技術(shù)：

1、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic?fatty?liver?disease,nafld)指排除過(guò)量飲酒、藥物影響和慢性肝病等其他明確的肝損因素引起的，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征的臨床病理綜合征。nafld病理演變過(guò)程復(fù)雜，其疾病譜包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化等。nafld與肥胖的關(guān)聯(lián)性很高，近年來(lái)，我國(guó)肥胖人群數(shù)量連續(xù)上漲，nafld的流行率也隨之升高。根據(jù)2018年的統(tǒng)計(jì)，我國(guó)nafld的流行率已達(dá)到的29.6％。目前，市場(chǎng)上尚無(wú)治療nafld的特效藥。

2、法尼醇x受體(farnesoid?x?receptor，fxr)是一種膽汁酸活化受體，屬于核受體超家族的一員，存在于人體多個(gè)器官，包括腎臟、腸道、肝臟等，對(duì)人體的膽汁酸代謝、脂代謝和糖代謝起重要調(diào)節(jié)作用。fxr與nafld、nash、肝纖維化、膽汁淤積性肝病、原發(fā)性膽汁性膽管炎、脂質(zhì)代謝紊亂等疾病聯(lián)系密切，特別地，對(duì)于控制nafld的發(fā)生和發(fā)展、治療nafld具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，激活fxr可誘導(dǎo)小異二聚體伴侶對(duì)膽固醇7α羥化酶產(chǎn)生抑制作用，促進(jìn)膽固醇代謝轉(zhuǎn)化，激活fxr還可抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1表達(dá)，下調(diào)肝細(xì)胞甘油三酯水平，減少肝臟脂質(zhì)沉積。fxr激動(dòng)劑作為治療nafld的潛在方法，目前已有多種研究較為成熟的fxr激動(dòng)劑進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段，如奧貝膽酸(obeticholic?acid，oca)、edp-305、tropifexor、met-409、nidufexor等。但是，上述的fxr激動(dòng)劑在臨床實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被發(fā)現(xiàn)易出現(xiàn)瘙癢、低密度脂蛋白水平升高、高密度脂蛋白水平降低的副作用(adorini?l,traunerm.j?hepatol.2023,79(5):1317-1331)，導(dǎo)致其在應(yīng)用治療nafld方面往往無(wú)法獲得令人滿意的療效。為此，針對(duì)fxr激動(dòng)劑現(xiàn)存的不足，開(kāi)發(fā)新型的高效低毒的fxr激動(dòng)劑，減少不良反應(yīng)，是很有必要且有意義的。

3、虛擬篩選是計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的一個(gè)重要方法，其利用分子對(duì)接技術(shù)尋找與目標(biāo)靶點(diǎn)受體有理想結(jié)合方式的配體化合物，通過(guò)打分函數(shù)評(píng)價(jià)對(duì)接結(jié)果的優(yōu)劣，篩選獲得苗頭化合物，結(jié)合體外生物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，進(jìn)一步將苗頭化合物開(kāi)發(fā)為先導(dǎo)化合物，加快新藥研發(fā)的進(jìn)程。當(dāng)前，虛擬篩選在藥物研發(fā)初期的應(yīng)用廣泛且成熟，其具有成本低、效率高的優(yōu)點(diǎn)，借助分子對(duì)接技術(shù)虛擬篩選fxr激動(dòng)劑對(duì)于開(kāi)發(fā)新型nafld治療藥物具有積極意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明公開(kāi)了一種虛擬篩選化合物在制備法尼醇x受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用及藥物，選擇法尼醇x受體為靶點(diǎn)，篩選出具有法尼醇x受體激動(dòng)活性的化合物，為制備法尼醇x受體激動(dòng)劑提供了更廣闊的思路。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

3、虛擬篩選化合物在制備法尼醇x受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用，所述化合物為以下任意一種：

4、

5、進(jìn)一步的，所述法尼醇x受體激動(dòng)劑用于治療和/或預(yù)防法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病。

6、更進(jìn)一步的，所述法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病為非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、膽汁淤積性肝病、肝纖維化、原發(fā)性膽汁性膽管炎、脂質(zhì)代謝紊亂中的一種或兩種以上的綜合疾病。

7、一種治療和/或預(yù)防法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病的藥物，以下任意一種化合物為活性成分：

8、

9、進(jìn)一步的，以上所述藥物，由化合物1-化合物14中的任意一種和藥學(xué)上可接受的載體組成。

10、以上所述的化合物1-化合物14，是通過(guò)以下篩選方法實(shí)現(xiàn)的：

11、(1)從protein?data?bank蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取法尼醇x受體的蛋白晶體復(fù)合物，進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)優(yōu)化和定義活性位點(diǎn)操作，建立分子對(duì)接模型；

12、(2)從chemdiv、drugbank、zinc數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取化合物的結(jié)構(gòu)信息，對(duì)化合物進(jìn)行加氫、結(jié)構(gòu)優(yōu)化、能量?jī)?yōu)化處理，根據(jù)lipinski規(guī)則進(jìn)行類藥性篩選，構(gòu)建符合類藥性的待篩選化合物數(shù)據(jù)庫(kù)；

13、(3)使用discovery?studio?2020和autodock?vina分子對(duì)接軟件依次對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)化合物進(jìn)行l(wèi)ibdock、cdocker、autodock?vina三輪分子對(duì)接，虛擬篩選具有潛在fxr激動(dòng)活性的苗頭化合物。

14、進(jìn)一步地，步驟(1)中，所述fxr的蛋白晶體復(fù)合物pdb?id為：3olf。

15、進(jìn)一步地，步驟(1)中，所述的建立分子對(duì)接模型，具體方法為：使用discoverystudio?2020軟件的prepare?protein模塊對(duì)蛋白晶體復(fù)合物進(jìn)行刪除多余側(cè)鏈，刪除水分子，加氫處理，以蛋白的共晶配體小分子所處位置為中心，定義活性位點(diǎn)。使用pymol軟件對(duì)蛋白晶體復(fù)合物進(jìn)行刪除多余側(cè)鏈，刪除水分子，加氫處理，導(dǎo)入autodock軟件中，活性位點(diǎn)定義為：x＝13.354,y＝21.993,z＝4.063，在該活性位點(diǎn)上設(shè)置一個(gè)的分子對(duì)接盒子。

16、進(jìn)一步地，步驟(2)中，所述的構(gòu)建符合類藥性的待篩選化合物數(shù)據(jù)庫(kù)，具體方法為：將化合物導(dǎo)入discovery?studio?2020軟件中，使用prepare?ligand和fullminimization模塊對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)中的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化和能量最小化處理；利用filteredby?lipinski?and?veber?rules模塊，根據(jù)類藥性規(guī)則中的lipinski類藥性五規(guī)則和veber規(guī)則，排除數(shù)據(jù)庫(kù)中不符合類藥性規(guī)則的化合物，剩余化合物用以構(gòu)建待篩選化合物數(shù)據(jù)庫(kù)。

17、本發(fā)明采用基于分子對(duì)接的虛擬篩選方法，獲得14個(gè)與法尼醇x受體有較強(qiáng)結(jié)合能力的化合物，進(jìn)行體外法尼醇x受體激動(dòng)活性實(shí)驗(yàn)、mtt法檢測(cè)化合物細(xì)胞毒性、以及gpo-pap法測(cè)試化合物對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的hepg2細(xì)胞的甘油三酯含量的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，上述14個(gè)化合物對(duì)法尼醇x受體具有顯著的激動(dòng)活性，對(duì)hepg2細(xì)胞和l02細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性，特別地，化合物1、2、3能顯著降低脂肪變性的hepg2細(xì)胞中甘油三酯的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這14個(gè)化合物可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為治療非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、膽汁淤積性肝病、肝纖維化、原發(fā)性膽汁性膽管炎、脂質(zhì)代謝紊亂等法尼醇x受體介導(dǎo)的相關(guān)疾病的藥物。

技術(shù)特征：

1.虛擬篩選化合物在制備法尼醇x受體激動(dòng)劑中的應(yīng)用，其特征在于：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述法尼醇x受體激動(dòng)劑用于治療和/或預(yù)防法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病為非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、膽汁淤積性肝病、肝纖維化、原發(fā)性膽汁性膽管炎、脂質(zhì)代謝紊亂中的一種或兩種以上的綜合疾病。

4.一種治療和/或預(yù)防法尼醇x受體介導(dǎo)的疾病的藥物，其特征在于：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述藥物，其特征在于：由化合物1-化合物14中的任意一種和藥學(xué)上可接受的載體組成。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明采用基于分子對(duì)接的虛擬篩選方法，獲得14個(gè)與法尼醇X受體有較強(qiáng)結(jié)合能力的苗頭化合物。對(duì)14個(gè)苗頭化合物進(jìn)行了一系列體外實(shí)驗(yàn)，包括法尼醇X受體激動(dòng)活性實(shí)驗(yàn)、MTT法檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性、以及GPO?PAP法測(cè)試化合物對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞的甘油三酯水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，14個(gè)化合物均對(duì)法尼醇X受體具有顯著的激動(dòng)活性，對(duì)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性。特別地，化合物1、2、3能顯著降低脂肪變性的HepG2細(xì)胞中甘油三酯的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，這14個(gè)化合物可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為治療非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、膽汁淤積性肝病、肝纖維化等法尼醇X受體介導(dǎo)的疾病的藥物。

技術(shù)研發(fā)人員：譚相端,班正鵠,余啟明,彭彥芬,張兵,涂嬌嬌,寧嘉怡,唐鑫
受保護(hù)的技術(shù)使用者：桂林醫(yī)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6