本發(fā)明屬于生物制藥，具體涉及一種新型疫苗遞送體系。
背景技術(shù)：
：：1、抗腫瘤治療中，腫瘤疫苗作為腫瘤免疫療法的三駕馬車之一，在過去的50年里被廣泛研究。腫瘤疫苗通過加強(qiáng)現(xiàn)有的、或引起新的t淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤抗原特異性反應(yīng)發(fā)揮作用[1,2]。由于目標(biāo)抗原主要與腫瘤細(xì)胞有關(guān)，所以腫瘤疫苗可以避免脫靶效應(yīng)，安全性高[3]；且腫瘤疫苗產(chǎn)生的是主動免疫效應(yīng)，可通過免疫系統(tǒng)的激活，誘導(dǎo)全身性的抗腫瘤作用及記憶保護(hù)效應(yīng)[3]，已成為腫瘤學(xué)領(lǐng)域中一類很有前途的療法，特別是生物相容性較好的多肽類腫瘤疫苗[4]。但目前腫瘤疫苗的臨床效益有限[5,6]，腫瘤特異性免疫應(yīng)答激活不足是主要因素，而免疫激活水平受制于腫瘤抗原的交叉遞呈[7]。在腫瘤疫苗體系中，佐劑效率、遞送方式是影響交叉遞呈的關(guān)鍵因素[8,9]。2、首先佐劑對于疫苗的效能起到重要作用，決定了疫苗所引起的免疫應(yīng)答類型及強(qiáng)度。其中，cpg寡脫氧核苷酸(cpg?oligodeoxynucleotide，cpg?odn)作為一種高效的tlr9激動劑被廣泛關(guān)注和使用，其不僅可以增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答，而且可以大大增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答，后者是鋁佐劑所達(dá)不到的。cpg的作用受體位于胞內(nèi)的內(nèi)吞小體膜上，所以cpg佐劑需要進(jìn)入抗原遞呈細(xì)胞內(nèi)才能發(fā)揮作用，如何將其高效遞送入胞是此類佐劑在疫苗應(yīng)用中的關(guān)鍵問題。3、腫瘤疫苗遞送方式可以改變疫苗成分的分布及藥代動力學(xué)從而影響交叉遞呈。在以cpg為佐劑的腫瘤疫苗方案中，良好的疫苗載體除了遞送cpg入胞外，對于抗原的遞送同樣重要。首先，外源性抗原在抗原遞呈細(xì)胞中的胞質(zhì)遞送是交叉遞呈的重要前提[10]，其次，通過疫苗載體實現(xiàn)抗原和cpg佐劑共遞送是促進(jìn)交叉遞呈的另一重要方式。目前有眾多方法可以用來促進(jìn)疫苗的遞送，其中研究較多的納米載體雖然可有效包裹抗原及佐劑實現(xiàn)共遞送，且能夠不同程度地增強(qiáng)交叉遞呈，但是大部分的納米顆粒入胞后會被溶酶體降解[11]，導(dǎo)致抗原胞質(zhì)遞送效率低，且納米顆粒的生產(chǎn)成本、安全性及生物相容性等同樣是待解決的問題[12,13]。技術(shù)實現(xiàn)思路1、目前已報道細(xì)胞穿膜肽(cell-penetrating?peptides,cpps)在跨膜遞送中具有較高的效率及生物相容性，是一種有潛力的疫苗遞送載體，其中應(yīng)用最為廣泛的是來自于hiv病毒的陽離子肽tat。然而，雖然tat能夠增強(qiáng)抗原交叉遞呈[14]，但其內(nèi)吞小泡逃逸效率同樣不高，大部分遞送的抗原無法有效釋放到細(xì)胞質(zhì)中[10,15,16]。需要進(jìn)一步增強(qiáng)胞質(zhì)遞送效率來促進(jìn)交叉遞呈。并且基于穿膜肽實現(xiàn)抗原和佐劑共遞送的可能性及具體效率還有待研究。2、本研究團(tuán)隊在前期已開發(fā)了被稱為etat的胞內(nèi)遞送系統(tǒng)，具有良好的胞質(zhì)遞送能力，etat詳細(xì)描述于中國專利申請cn202011240557.4、國際專利申請wo2021135647a1，以及yu,s.,yang,h.,li,t.et?al.nat?commun?12,5131(2021)。本技術(shù)的發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，etat在促進(jìn)抗原交叉遞呈方面具有很大潛力并對其作為疫苗遞送載體的免疫增效作用進(jìn)行了研究。由此，本發(fā)明提供了一種新型疫苗遞送體系，其可顯著提升淋巴結(jié)共遞送及交叉遞呈，顯示出顯著的免疫增效作用，最終誘導(dǎo)強(qiáng)效的抗原特異性的免疫反應(yīng)，具有顯著的腫瘤預(yù)防及治療作用。3、復(fù)合物4、在第一方面，本發(fā)明提供了一種復(fù)合物，其包含：5、(i)蛋白組分，其包含載體肽(carrier?peptide)和貨物肽(cargo?peptide)；其中，所述載體肽包含多聚化結(jié)構(gòu)域序列、細(xì)胞穿膜肽、ph敏感融合肽以及蛋白酶識別序列；所述貨物肽包含抗原肽；6、(ii)核酸組分，其包含cpg佐劑。7、i.連接方式8、在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分通過靜電作用綴合。9、在某些實施方案中，所述蛋白組分從n端至c端包含載體肽和貨物肽。在某些實施方案中，所述蛋白組分從n端至c端包含貨物肽和載體肽。10、在某些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與抗原肽可以通過融合或共價連接或非共價連接。11、在一些實施方案中，所述載體肽與貨物肽通過融合方式連接。12、在某些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭融合至所述載體肽的n端或c端。在某些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭融合至所述載體肽的c端。在某些實施方案中，所述接頭優(yōu)選是肽接頭，例如柔性肽接頭，例如包含一個或多個甘氨酸和/或一個或多個絲氨酸的肽接頭。13、在另一些實施方案中，所述載體肽與貨物肽通過共價方式連接。14、在某些實施方案中，所述蛋白組分中的載體肽任選地通過接頭連接至蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員以形成第一蛋白，所述貨物肽任選地通過接頭連接至所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員以形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員由共價鍵結(jié)合。在本文中，“蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對”具備本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義，其包含兩種蛋白質(zhì)(例如第一成員(例如第一多肽)和第二同源成員(例如第二多肽))，其在實現(xiàn)或促進(jìn)共價鍵(如異肽鍵)形成的條件下相互作用以形成共價鍵(如異肽鍵)，其中術(shù)語“同源”是指在一起起作用，即在一起反應(yīng)以形成共價鍵(如異肽鍵)的組分。15、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的c端。在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的n端。16、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的n端。在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的c端。17、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的c端。在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的c端。18、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的n端。在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的n端。19、在某些實施方案中，所述共價鍵為異肽鍵。20、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對選自：(i)spytag:spycatcher對，(ii)spytag:ktag對，(iii)isopeptag:pilin-c對，(iv)snooptag或snooptagjr:snoopcatcher對，(v)spytag002:spycatcher002對，(vi)rrgatag、rrgatag2或dogtag:rrgacatcher對，(vii)isopeptag-n:pilin-n對，(viii)pscstag:pscscatcher對。21、在某些實施方案中，所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對是spytag:spycatcher對。例如，所述spytag包含如seq?id?no:9所示的序列；例如，所述spycatcher包含如seq?id?no:10所示的序列。22、在某些實施方案中，所述接頭優(yōu)選是肽接頭，例如柔性肽接頭，例如包含一個或多個甘氨酸和/或一個或多個絲氨酸的肽接頭。23、在某些實施方案中，所述蛋白組分由第一蛋白和第二蛋白通過異肽鍵連接形成，其中：24、所述第一蛋白包含所述載體肽以及spytag:spycatcher對的第一成員，所述第一成員任選地通過第一接頭與所述載體肽連接(例如連接至所述載體肽的c端)；25、所述第二蛋白包含所述貨物肽以及spytag:spycatcher對的第二成員，所述第二成員任選地通過第二接頭與所述貨物肽連接(例如連接至所述貨物肽的n端)。26、在某些實施方案中，所述第一蛋白包含所述載體肽以及spycatcher，所述第二蛋白包含所述貨物肽以及spytag。27、在另一些實施方案中，所述載體肽與貨物肽通過非共價方式連接。如本文使用的術(shù)語“非共價結(jié)合”是指特異性結(jié)合，諸如在抗體和其抗原之間、配體和其受體之間、或者酶和其底物之間的特異性結(jié)合，例如由鏈霉親和素結(jié)合蛋白和鏈霉親和素之間或抗體和其抗原之間的相互作用例示。28、在某些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭連接至特異性結(jié)合對的第一成員以形成第一蛋白，所述載體肽任選地通過接頭連接至所述特異性結(jié)合對的第二成員以形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員通過由特異性結(jié)合介導(dǎo)的非共價鍵結(jié)合。29、在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的c端。在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的n端。30、在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的n端。在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的c端。31、在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的c端。在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的c端。32、在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第一成員任選地通過接頭連接至載體肽的n端。在某些實施方案中，所述特異性結(jié)合對的第二成員任選地通過接頭連接至貨物肽的n端。33、ii.多聚化結(jié)構(gòu)域34、在本文中，術(shù)語“多聚化結(jié)構(gòu)域”是指，能夠使包含該多聚化結(jié)構(gòu)域的融合多肽的若干拷貝多聚化(即形成生物分子復(fù)合物)的任何多肽或蛋白質(zhì)。在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域是同源多聚化結(jié)構(gòu)域，其將相同的融合多肽聚集并形成多聚體。35、在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域可以是二聚化結(jié)構(gòu)域、三聚化結(jié)構(gòu)域、四聚化結(jié)構(gòu)域，或基本上任何更高級別的多聚化結(jié)構(gòu)域，只要該結(jié)構(gòu)域能夠促進(jìn)至少兩個結(jié)構(gòu)域(和它們形成部分的多肽)之間的相互作用。36、在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域選自：亮氨酸拉鏈、noe(seq?id?no:38)、gcn4-p1(seq?id?no:39)、delta(seq?id?no:40)及其任何組合。37、在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域選自亮氨酸拉鏈。38、在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列包含seq?id?no:36或37所示的序列。在某些實施方案中，所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列包含seq?id?no:36所示的序列。39、iii.ph敏感肽40、在本文中，術(shù)語“ph敏感融合肽(ph-sensitive?fusogenic?peptide)”與“ph敏感肽”可互換使用，其是指一類能夠在酸性條件(例如，ph<6.5)下發(fā)生構(gòu)象改變從而促進(jìn)與內(nèi)吞小泡囊膜融合的多肽。當(dāng)ph敏感肽被細(xì)胞內(nèi)吞后，內(nèi)吞小泡在成熟酸化的過程中，一旦ph值下降到臨界點，此類多肽發(fā)生構(gòu)象改變并與小泡囊膜的脂雙層結(jié)合從而劇烈擾動磷脂雙層膜的完整性，在其上形成小孔或?qū)е履夷ち呀?，從而將被轉(zhuǎn)運(yùn)的生物大分子釋放進(jìn)入胞漿。這類多肽是本領(lǐng)域熟知的，并描述于例如，varkouhi,amir?k.,et?al.journal?ofcontrolled?release?151.3(2011):220-228；erazo-oliveras?a,muthukrishnan?n,bakerr,et?al.pharmaceuticals,2012,5(11):1177-1209，其全部通過引用并入本文。41、能夠用于本發(fā)明的載體肽的ph敏感肽可以選自下列的蛋白或多肽，或者源自選自下列蛋白或多肽：42、病毒蛋白來源：ha2(流感病毒)及其突變體kala,gala；五鄰體蛋白(penton?base)(腺病毒或鼻病毒)，gp41(hiv)，l2(乳頭瘤病毒)，包膜蛋白(西尼羅河病毒(west?nilevirus))；43、細(xì)菌蛋白來源：單增李斯特氏菌溶血素o(listeriolysin?o(llo))，肺炎球菌溶血素(pneumococcal?pneumolysin(plo))，鏈球菌溶血素o(streptococcal?streptolysin?o(slo))，白喉毒素(diphtheria?toxin)，銅綠假單胞菌外毒素a(pseudomonas?aeruginosaexotoxin?a)，志賀毒素(shiga?toxin)，霍亂毒素(cholera?toxin)；44、植物蛋白來源：蓖麻毒素(ricin)，皂草素(saporin)，gelonin毒素；45、人類/動物蛋白來源：人降鈣素，成纖維細(xì)胞生長因子受體，蜂毒素(melittin)；46、人工合成多肽：(r-ahx-r)(4)ahxb，穿透素(penetratin(pantp))，eb1，牛朊蛋白(bovine?prion?protein(bprpp))，甜箭肽(sweet?arrow?peptide(sap)),聚l-組氨酸(poly(l-histidine))，脯氨酸富含肽(proline-rich)。47、在某些實施方案中，所述ph敏感融合肽選自流感病毒ha2(seq?id?no:47)或其突變體、蜂毒素(melittin)(seq?id?no:50)，及其任意組合。在某些實施方案中，所述流感病毒ha2的突變體選自inf7(seq?id?no:46)、kala(seq?id?no:48)或gala(seq?id?no:49)。48、在某些實施方案中，所述ph敏感融合肽包含inf7。在某些實施方案中，所述ph敏感融合肽包含下述序列或由其組成：seq?id?no:46。49、iv.細(xì)胞穿膜肽50、在本文中，術(shù)語“細(xì)胞穿膜肽(cell?penetrating?peptide，cpp)”又稱為“細(xì)胞穿透肽”、“蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)域(protein?translocation?domain，ptd)、“trojan?horse?peptides”或“轉(zhuǎn)導(dǎo)肽(transduction?peptide)”等，其是指，能夠促進(jìn)各種分子(例如，各種大分子包括蛋白或核酸)的細(xì)胞攝取的多肽。這類多肽是本領(lǐng)域熟知的，并描述于例如，stewart?km,et?al.org?biomol?chem.2008jul?7；6(13):2242-55以及中國專利申請cn101490081a(其全部通過引用并入本文)；或者可以通過本領(lǐng)域已知的方法獲得，例如詳細(xì)描述于美國專利申請us2008/0234183中的方法，其全部通過引用并入本文。51、能夠用于本發(fā)明的融合蛋白的cpp包括但不限于：陽離子型:penetratin、hiv-tat-47-57、hiv-1rev?34-50、fhv?coat-35-49、低聚精氨酸(oligoarginines)(r9-r12)、ccmv?gag-7-25、s413-pv、vp22、bp16、dpv3、dpv6、fah外殼蛋白、魚精蛋白1(protamine?1)、人cjun、engrailed-2、islet-1、hoxa-13、tp10等；兩親性型：轉(zhuǎn)運(yùn)肽(transportan)、transportan10、pep-1、mpgα、mpgβ、cady、pepfect6、pepfect14、pepfect15、nickfect、hel、sc18、pvec、arf(1-22)、yta2、par1(palmitoyl-sfllrn)、f2pal10(palmitoyl-sfllrn)、bprpp(1-30)、hlf肽(19-40)、buforin?2、crotamine、azurin?p18、hct肽(18-32)、s413-pvrev等；疏水型：kaposi's肉瘤成纖維細(xì)胞生長因子、源自caiiman?crocodylus的ig輕鏈的信號肽、整合素β3片段、grb2-sh2結(jié)構(gòu)域、hiv-1gp41(1-23)、hbv移位基序(translocation?motif)、精卵融合蛋白(89-111)、人降鈣素(9-32)、pep-7、c105y、k-fgf等。52、此外，用作本發(fā)明的融合蛋白中的cpp還可以選自與如上所述的任何多肽序列具有大約60、70、80、90、95、99％或100％的序列同一性的多肽序列，只要該多肽序列仍然保留其生物學(xué)活性，即，促進(jìn)分子的細(xì)胞攝取。53、在某些實施方案中，所述細(xì)胞穿膜肽選自穿透素(penetratin)(seq?id?no:51)、tat衍生肽、rev(34-50)(seq?id?no:53)、vp22(seq?id?no:54)、轉(zhuǎn)運(yùn)肽(transportan)(seqid?no:55)、pep-1(seq?id?no:56)、pep-7(seq?id?no:57)，及其任意組合。在某些實施方案中，所述tat衍生肽選自tat(48-60)(seq?id?no:1)或tat(47-57)(seq?id?no:52)。54、在某些實施方案中，所述細(xì)胞穿膜肽包含tat衍生肽，例如tat(48-60)。在某些實施方案中，所述細(xì)胞穿膜肽包含下述序列或由其組成：seq?id?no:1。55、v.蛋白酶識別序列56、在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列包含弗林蛋白酶識別序列和/或組織蛋白酶l識別序列。57、在某些實施方案中，所述弗林蛋白酶識別序列包含下述序列或由其組成：r-x1-x2-r↓(seq?id?no:41)，其中，x1為任意氨基酸，x2為k或r，↓表示切割位點。58、在某些實施方案中，所述弗林蛋白酶識別序列包含下述序列或由其組成：r-r-x1-x2-r↓(seq?id?no:42)。59、在某些實施方案中，x1選自丙氨酸(a)、精氨酸(r)、天冬氨酸(d)、半胱氨酸(c)、谷氨酰胺(q)、谷氨酸(e)、組氨酸(h)、異亮氨酸(i)、甘氨酸(g)、天冬氨酸(n)、亮氨酸(l)、賴氨酸(k)、甲硫氨酸(m)、苯丙氨酸(f)、輔氨酸(p)、絲氨酸(s)、蘇氨酸(t)、色氨酸(w)、酪氨酸(y)和纈氨酸(v)。60、在某些實施方案中，所述弗林蛋白酶識別序列包含下述序列或由其組成：rrhkr↓(seq?id?no:43)。61、在某些實施方案中，所述弗林蛋白酶識別序列包含下述序列或由其組成：qsvassrrhkr↓fagv(seq?id?no:44)。62、在某些實施方案中，所述組織蛋白酶l識別序列包含下述序列或由其組成：nnthdlvgdvrlagv(seq?id?no:45)。63、在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列包含弗林蛋白酶識別序列和組織蛋白酶l識別序列。在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列是單鏈多肽，其從n端至c端包含弗林蛋白酶識別序列和組織蛋白酶l識別序列，或者其從n端至c端包含組織蛋白酶l識別序列和弗林蛋白酶識別序列。64、在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列包含rrhkr(seq?id?no:43)和nnthdlvgdvrlagv(seq?id?no:45)。在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列包含seq?idno:44和seq?id?no:45。65、vi.連接順序66、在一些實施方案中，所述載體肽從n端至c端包含：所述細(xì)胞穿膜肽、ph敏感融合肽、蛋白酶識別序列，并且所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列位于所述載體肽的n端或c端，或者位于上述任何兩個相鄰結(jié)構(gòu)域之間。例如，所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列位于所述載體肽的n端，或者位于所述載體肽的c端。67、在另一些實施方案中，所述載體肽從n端至c端包含：所述ph敏感融合肽、細(xì)胞穿膜肽、蛋白酶識別序列，并且所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列位于所述載體肽的n端或c端，或者位于上述任何兩個相鄰結(jié)構(gòu)域之間。例如，所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列位于所述載體肽的n端，或者位于所述載體肽的c端。68、在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列從n端至c端包含所述弗林蛋白酶識別序列和組織蛋白酶l識別序列。在某些實施方案中，所述蛋白酶識別序列從n端至c端包含所述組織蛋白酶l識別序列和弗林蛋白酶識別序列。69、在某些示例性實施方案中，所述載體肽從n端至c端包含：所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列、細(xì)胞穿膜肽、ph敏感融合肽、以及蛋白酶識別序列。70、在某些示例性實施方案中，所述載體肽從n端至c端包含：所述多聚化結(jié)構(gòu)域序列、ph敏感融合肽、細(xì)胞穿膜肽、以及蛋白酶識別序列。71、在某些實施方案中，所述載體肽中所包含的任意相鄰結(jié)構(gòu)域之間任選地通過肽接頭連接。在某些實施方案中，所述肽接頭是(gms)n，其中m選自1-4的整數(shù)(例如，1，2，3或4)，n選自1-3的整數(shù)(例如，1，2或3)。在某些實施方案中，所述肽接頭是seq?id?no:58。在某些實施方案中，任意相鄰結(jié)構(gòu)域之間的肽接頭可以相同或不同。72、在某些實例性實施方案中，所述載體肽包含seq?id?no:3所示的序列或與其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％序列同一性的變體，所述變體具備與seq?id?no:3基本相同的活性(例如胞質(zhì)遞送能力以及與cpg佐劑通過靜電作用形成復(fù)合物的能力)。73、在某些實例性實施方案中，本發(fā)明提供了由蛋白組分和核酸組分通過靜電作用形成的復(fù)合物，其中：74、(i)所述蛋白組分包含載體肽(carrier?peptide)和貨物肽(cargo?peptide)；其中，所述載體肽包含seq?id?no:3所示的序列或與其具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％序列同一性的變體，所述變體具備與seq?id?no:3基本相同的活性(例如胞質(zhì)遞送能力以及與cpg佐劑通過靜電作用形成復(fù)合物的能力)；所述貨物肽包含抗原肽；75、(ii)所述核酸組分包含cpg佐劑。76、vii.抗原肽77、在一些實施方案中，所述貨物肽包含的抗原肽源自腫瘤抗原，或是腫瘤抗原蛋白或其表位肽。78、在某些實施方案中，所述腫瘤抗原選自腫瘤相關(guān)抗原(taa)、腫瘤特異性抗原(tsa)或腫瘤新生抗原(neoantigen)。79、在某些實施方案中，所述腫瘤抗原為實體瘤抗原，例如黑色素瘤抗原、結(jié)直腸癌抗原、乳腺癌抗原、前列腺癌抗原、膀胱癌抗原、肺癌抗原、卵巢癌抗原、腦癌抗原、胃癌抗原、腎細(xì)胞癌抗原、胰腺癌抗原、肝癌抗原、食道癌抗原、頭頸癌抗原。在某些實施方案中，所述腫瘤抗原為黑色素瘤抗原。在某些實施方案中，所述腫瘤抗原為結(jié)直腸癌抗原。80、在某些實施方案中，所述腫瘤抗原為血液腫瘤抗原，例如淋巴瘤抗原、骨髓瘤(如多發(fā)性骨髓瘤或漿細(xì)胞骨髓瘤)抗原、急性淋巴細(xì)胞白血病抗原、慢性骨髓性白血病抗原或急性骨髓性白血病抗原。81、在某些實施方案中，所述腫瘤抗原選自reps1(例如seq?id?no:26)、adpgk(例如seq?id?no:27)、her2、gp100、trp1、trp2、m27、m30、wt1、cea、hvp16?e7、kras、p53、lcmvgp33、lcmv?np369、influenzanp、hiv?gag、mulv?gp70、mcmv?ie1、vsv?np、hsv-1gb、hbchelper?peptide等。82、在某些示例性實施方案中，所述腫瘤抗原選自gp33(例如seq?id?no:7)、e738～57(例如seq?id?no:18)、cea567～584(例如seq?id?no:19)、trp1(例如seq?id?no:23)、gp100(例如seq?id?no:24)、m27(例如seq?id?no:25)、reps1(例如seq?id?no:26)、adpgk(例如seqid?no:27)。83、在某些示例性實施方案中，所述腫瘤抗原選自黑色素瘤抗原，例如trp1(seq?idno:23)、gp100(seq?id?no:24)、m27(seq?id?no:25)。84、在某些示例性實施方案中，所述腫瘤抗原選自結(jié)直腸癌抗原，例如reps1(seq?idno:26)、adpgk(seq?id?no:27)。85、在某些示例性實施方案中，所述腫瘤抗原選自人類腫瘤抗原，例如e738～57(seq?idno:18)、cea567～584(seq?id?no:19)。86、在另一些實施方案中，所述貨物肽包含的抗原肽源自病原體抗原，或是病原體抗原蛋白或其表位肽。87、在某些實施方案中，所述病原體選自、細(xì)菌感染、真菌、病毒或寄生蟲。88、在某些實施方案中，上述任一實施方案中所述的貨物肽任選地還包含與所述抗原肽連接的另外的功能肽。在某些實施方案中，所述另外的功能肽為促溶標(biāo)簽，例如蛋白磷酸酶1b(ppm1b)。89、viii.多聚體90、在某些實施方案中，所述蛋白組分為包含所述載體肽和貨物肽的融合蛋白單體。91、在某些實施方案中，所述蛋白組分為由包含所述載體肽和貨物肽的融合蛋白單體形成的多聚體。92、在某些實施方案中，所述多聚體是二聚體、三聚體或四聚體。在某些實施方案中，所述多聚體是二聚體。在某些實施方案中，所述多聚體是三聚體。93、在某些實施方案中，所述多聚體是同源多聚體。在某些實施方案中，所述多聚體是同源二聚體。在某些實施方案中，所述多聚體是同源三聚體。94、ix.核酸組分95、本發(fā)明的復(fù)合物包含cpg佐劑。cpg佐劑具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的含義，是指含非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸(cpg)基序的dna片段。它能激活b細(xì)胞、nk、dc樹突狀等細(xì)胞，誘導(dǎo)釋放ifn-α等細(xì)胞因子，從而誘導(dǎo)強(qiáng)th1型應(yīng)答和細(xì)胞免疫。cpg佐劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，包括但不限于cpg?2395(seq?id?no:17)、cpg?1826(seq?id?no:22)、cpg?7909(seq?id?no:59)、cpg?1018(seq?id?no:60)、cpg?1585(seq?id?no:61)、cpg?1668(seq?idno:62)、cpg?2007(seq?id?no:63)、cpg?2336(seq?id?no:64)、cpg?2088(seq?id?no:65)、cpg?m362(seq?id?no:66)等。96、在某些示例性實施方案中，所述cpg佐劑為b類或c類cpg。97、在某些示例性實施方案中，所述cpg佐劑包含seq?id?no:17或22所示的序列。98、在某些實施方案中，所述復(fù)合物中，以約1:1～10:1摩爾比(根據(jù)單體計算，不是多聚體)混合所述蛋白組分和核酸組分。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約1:1～8:1，例如約1:1，約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約2:1～8:1，例如約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。99、試劑盒100、在第二方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含在分開的容器中包含的第一方面所述的復(fù)合物中的蛋白組分以及核酸組分。101、在一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以融合方式連接，也即所述蛋白組分為所述貨物肽與載體肽形成的融合蛋白。在此類實施方案中，所述試劑盒包含：含有所述蛋白組分的第一容器以及含有所述核酸組分的第二容器。102、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以共價方式連接：所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭連接至蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員形成第一蛋白，所述載體肽任選地通過接頭連接至所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員由共價鍵結(jié)合。在此類實施方案中，所述試劑盒包含：含有所述蛋白組分中的第一蛋白的第一容器，含有所述蛋白組分中的第二蛋白的第二容器，以及含有所述核酸組分的第三容器。103、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以非共價方式連接：所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭連接至特異性結(jié)合對的第一成員形成第一蛋白，所述載體肽任選地通過接頭連接至所述特異性結(jié)合對的第二成員形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員由非共價鍵結(jié)合。在此類實施方案中，所述試劑盒包含：含有所述蛋白組分中的第一蛋白的第一容器，含有所述蛋白組分中的第二蛋白的第二容器，以及含有所述核酸組分的第三容器。104、在第三方面，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包含：105、(i)核酸分子或載體，其包含編碼第一方面所述的復(fù)合物中的蛋白組分的核苷酸序列；以及，106、(ii)cpg佐劑。107、在一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以融合方式連接，也即所述蛋白組分為所述貨物肽與載體肽形成的融合蛋白。在此類實施方案中，(i)所述的核酸分子或載體包含編碼所述蛋白組分的核苷酸序列。108、在某些實施方案中，所述試劑盒包含：含有(i)所述核酸分子或載體的第一容器，以及含有cpg佐劑的第二容器。109、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以共價方式連接：所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭連接至蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員形成第一蛋白，所述載體肽任選地通過接頭連接至所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員由共價鍵結(jié)合。在此類實施方案中，(i)所述的核酸分子或載體包含：編碼所述載體肽以及與其連接的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員的第一核苷酸序列，以及編碼所述抗原肽以及與其連接的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員的第二核苷酸序列。在某些實施方案中，所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列存在于相同或不同的核酸分子或載體上。所述蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對如第一方面中定義。110、在某些實施方案中，所述試劑盒包含一種或多種載體(例如表達(dá)載體)，所述一種或多種載體包含所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列。所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列任選地包含與其可操作連接的調(diào)節(jié)元件(例如啟動子)。111、在某些實施方案中，所述試劑盒包含一種或多種載體(例如表達(dá)載體)，所述一種或多種載體包含所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列。所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列任選地包含與其可操作連接的調(diào)節(jié)元件(例如啟動子)。112、在某些實施方案中，所述試劑盒包含：含有包含所述第一核苷酸序列的載體的第一容器，含有包含所述第二核苷酸序列的載體的第二容器，以及含有cpg佐劑的第三容器。113、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以非共價方式連接：所述蛋白組分中的貨物肽任選地通過接頭連接至特異性結(jié)合對的第一成員形成第一蛋白，所述載體肽任選地通過接頭連接至所述特異性結(jié)合對的第二成員形成第二蛋白；其中所述第一成員和第二成員由非共價鍵結(jié)合。在此類實施方案中，(i)所述的核酸分子或載體包含：編碼所述載體肽以及與其連接的特異性結(jié)合對的第一成員的第一核苷酸序列，以及編碼所述抗原肽以及與其連接的特異性結(jié)合對的第二成員的第二核苷酸序列。在某些實施方案中，所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列存在于相同或不同的核酸分子或載體上。所述特異性結(jié)合對如第一方面中定義。114、在某些實施方案中，所述試劑盒包含一種或多種載體(例如表達(dá)載體)，所述一種或多種載體包含所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列。所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列任選地包含與其可操作連接的調(diào)節(jié)元件(例如啟動子)。115、在某些實施方案中，所述試劑盒包含：含有包含所述第一核苷酸序列的載體的第一容器，含有包含所述第二核苷酸序列的載體的第二容器，以及含有cpg佐劑的第三容器。116、復(fù)合物制備117、第四方面，本發(fā)明提供了制備第一方面所述的復(fù)合物的方法，其包括：118、(1)提供所述復(fù)合物中的蛋白組分和核酸組分；119、(2)使所述蛋白組分與核酸組分混合并任選地培育以形成復(fù)合物。120、在某些實施方案中，在混合之前，所述蛋白組分和/或核酸組分經(jīng)過純化。蛋白或核酸的純化可通過本領(lǐng)域熟知的常規(guī)純化程序進(jìn)行，適當(dāng)?shù)姆椒捌涫褂玫幕|(zhì)和緩沖液的選擇是本領(lǐng)域熟知的，因此本文不再詳細(xì)描述。121、在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分以約1:1～10:1摩爾比(根據(jù)單體計算，不是多聚體)混合。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約1:1～8:1，例如約1:1，約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約2:1～8:1，例如約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。122、核酸組分123、本發(fā)明的復(fù)合物中的核酸組分可以本領(lǐng)域已知的各種方法來制備，例如，通過基因工程方法產(chǎn)生，也可以通過化學(xué)合成方法(例如固相合成)產(chǎn)生。本發(fā)明的核酸組分不受其產(chǎn)生方式的限定。在某些實施方案中，所述核酸組分優(yōu)選地由固相合成產(chǎn)生，例如使用寡核苷酸合成儀。124、蛋白組分125、本發(fā)明的復(fù)合物中的蛋白組分可以本領(lǐng)域已知的各種方法來制備，例如，通過基因工程方法(重組技術(shù))產(chǎn)生，也可以通過化學(xué)合成方法(例如fmoc固相方法)產(chǎn)生。本發(fā)明的蛋白組分不受其產(chǎn)生方式的限定。126、在一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽以融合方式連接，也即所述蛋白組分為所述貨物肽與載體肽形成的融合蛋白。在此類實施方案中，步驟(1)包括：將編碼所述蛋白組分的核苷酸序列的核酸分子或載體引入宿主細(xì)胞，在允許蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收(例如并純化)所述蛋白組分，其中所述蛋白組分任選地以多聚體形式存在。127、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對以共價(例如異肽鍵)方式連接。在此類實施方案中，步驟(1)包括：(a)提供由所述載體肽以及與其連接的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第一成員形成的第一蛋白，和由所述抗原肽以及與其連接的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對的第二成員形成的第二蛋白；(b)將所述第一蛋白與第二蛋白混合并任選地培育以形成異肽鍵連接，由此提供蛋白組分。128、在某些實施方案中，所述第一蛋白通過以下步驟提供：將編碼所述第一蛋白的第一核苷酸序列或包含所述第一核苷酸序列的核酸分子或載體引入宿主細(xì)胞，在允許蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收(例如并純化)所述第一蛋白，其中所述第一蛋白任選地以多聚體形式存在。129、在某些實施方案中，所述第二蛋白通過以下步驟提供：將編碼所述第二蛋白的第二核苷酸序列或包含所述第二核苷酸序列的核酸分子或載體引入宿主細(xì)胞，在允許蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收(例如并純化)所述第二蛋白。130、本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，編碼所述第一蛋白和第二蛋白的核苷酸序列可以存在于相同的核酸分子或載體中，也可以存在于不同的核酸分子或載體中。因此，所述第一蛋白和第二蛋白的獲得可以同時、分開或以任意順序相繼進(jìn)行。131、在另一些實施方案中，所述蛋白組分中的貨物肽與載體肽通過特異性結(jié)合對以非共價方式連接。在此類實施方案中，步驟(1)包括：(a)提供由所述載體肽以及與其連接的特異性結(jié)合對的第一成員形成的第一蛋白，和由所述抗原肽以及與其連接的特異性結(jié)合對的第二成員形成的第二蛋白；(b)將所述第一蛋白與第二蛋白混合并任選地培育以形成由所述第一成員和第二成員的特異性結(jié)合介導(dǎo)的非共價連接，由此提供蛋白組分。132、在某些實施方案中，所述第一蛋白通過以下步驟提供：將編碼所述第一蛋白的第一核苷酸序列或包含所述第一核苷酸序列的核酸分子或載體引入宿主細(xì)胞，在允許蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收(例如并純化)所述第一蛋白，其中所述第一蛋白任選地以多聚體形式存在。133、在某些實施方案中，所述第二蛋白通過以下步驟提供：將編碼所述第二蛋白的第二核苷酸序列或包含所述第二核苷酸序列的核酸分子或載體引入宿主細(xì)胞，在允許蛋白表達(dá)的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，和從培養(yǎng)的宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中回收(例如并純化)所述第二蛋白。134、本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，編碼所述第一蛋白和第二蛋白的核苷酸序列可以存在于相同的核酸分子或載體中，也可以存在于不同的核酸分子或載體中。因此，所述第一蛋白和第二蛋白的獲得可以同時、分開或以任意順序相繼進(jìn)行。135、藥物組合物136、第五方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含第一方面所述的復(fù)合物。137、在某些實施方案中，所述藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。138、在某些實施方案中，所述藥物組合物是疫苗。139、在某些實施方案中，所述復(fù)合物中，以約1:1～10:1摩爾比(根據(jù)單體計算，不是多聚體)混合所述蛋白組分和核酸組分。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約1:1～8:1，例如約1:1，約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。在某些實施方案中，所述蛋白組分和核酸組分的摩爾比為約2:1～8:1，例如約2:1，約3:1，約4:1，約5:1，約6:1，約7:1，約8:1。140、本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物可以配制成醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已知的任何劑型，例如，片劑、丸劑、混懸劑、乳劑、溶液、凝膠劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、錠劑、栓劑、注射劑(包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液)、吸入劑、噴霧劑等。優(yōu)選劑型取決于預(yù)期的給藥方式和治療用途。本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物應(yīng)當(dāng)是無菌的并在生產(chǎn)和儲存條件下穩(wěn)定。一種優(yōu)選的劑型是注射劑。此類注射劑可以是無菌注射溶液。此外，可以將無菌注射溶液制備為無菌凍干粉劑(例如，通過真空干燥或冷凍干燥)以便于儲存和使用。此類無菌凍干粉劑可在使用前分散于合適的載體中，例如注射用水(wfi)、抑菌性注射用水(bwfi)、氯化鈉溶液(例如0.9％(w/v)nacl)、葡萄糖溶液(例如5％葡萄糖)、含有表面活性劑的溶液(例如0.01％聚山梨醇20)、ph緩沖溶液(例如磷酸鹽緩沖溶液)、ringer氏溶液及其任意組合。141、本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法來施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、腸胃外、直腸、葉鞘內(nèi)、內(nèi)胞漿網(wǎng)槽內(nèi)、腹股溝、膀胱內(nèi)、局部(如，粉劑、藥膏或滴劑)，或鼻腔途徑。但是，對于許多治療用途而言，優(yōu)選的給藥途徑/方式是胃腸外給藥(例如靜脈注射或推注，皮下注射，腹膜內(nèi)注射，肌內(nèi)注射)。技術(shù)人員應(yīng)理解，給藥途徑和/或方式將根據(jù)預(yù)期目的而發(fā)生變化。在某些示例性實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物通過皮下注射給予。142、本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物應(yīng)以有效劑量施用?？筛鶕?jù)待治療或預(yù)防的特定疾病或病癥、嚴(yán)重程度、對象的年齡以及特定對象的其他個人屬性(例如，對象健康的一般狀態(tài)和對象免疫系統(tǒng)的穩(wěn)健性)來確定合適的量。有效劑量的確定還通過動物模型研究引導(dǎo)，隨后進(jìn)行人體臨床試驗，并且通過顯著降低對象中目標(biāo)疾病癥狀或病癥的發(fā)生或嚴(yán)重性的施用方案來指導(dǎo)。143、用途及方法144、第六方面，本發(fā)明提供了用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物。還提供了本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在制備用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的制劑(例如藥物)中的用途。145、在某些實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答。146、在某些實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物中包含的抗原肽源自腫瘤抗原，例如選自腫瘤抗原蛋白或其表位肽。在此類實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答。147、在某些實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物中包含的抗原肽源自病原體抗原，例如選自病原體抗原蛋白或其表位肽。在此類實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)針對病原體的免疫應(yīng)答。148、在某些實施方案中，所述免疫應(yīng)答是細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答或體液應(yīng)答。在某些實施方案中，所述免疫應(yīng)答包括b細(xì)胞增殖、cd4+t細(xì)胞增殖、cd8+t細(xì)胞增殖或其組合的增強(qiáng)。149、在某些實施方案中，所述免疫應(yīng)答是t細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。150、在某些實施方案中，所述免疫應(yīng)答包括t細(xì)胞增殖、il-2生產(chǎn)、ifn-γ生產(chǎn)或其組合的增強(qiáng)。151、第七方面，本發(fā)明提供了用于在受試者(例如人)中預(yù)防和/或治療腫瘤的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物。還提供了本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在制備用于在受試者(例如人)中預(yù)防和/或治療腫瘤的制劑(例如藥物)中的用途。152、在某些實施方案中，所述腫瘤為實體瘤，例如黑色素瘤、結(jié)直腸癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌、腦癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、頭頸癌。本發(fā)明的復(fù)合物包含與上述腫瘤對應(yīng)的腫瘤抗原。153、在某些實施方案中，所述腫瘤為血液腫瘤，例如淋巴瘤、骨髓瘤(如多發(fā)性骨髓瘤或漿細(xì)胞骨髓瘤)、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓性白血病或急性骨髓性白血病。本發(fā)明的復(fù)合物包含與上述腫瘤對應(yīng)的腫瘤抗原。154、在某些實施方案中，所述腫瘤為轉(zhuǎn)移性腫瘤，例如轉(zhuǎn)移性實體瘤，例如轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。155、在某些實施方案中，所述受試者是未患腫瘤的受試者或已患腫瘤的受試者。156、在某些實施方案中，所述復(fù)合物或藥物組合物單獨施用或與另外的治療劑(抗腫瘤劑)聯(lián)合施用。157、在某些實施方案中，所述復(fù)合物或藥物組合物與免疫檢查點抑制劑(例如pd-l1抗體、pd-1抗體、ctla-4抗體)聯(lián)合施用。158、在某些實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物可以局部、瘤內(nèi)、鼻內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、局部、皮膚、靜脈內(nèi)或通過吸入施用于例如可容易到達(dá)的腫瘤，如黑色素瘤、頭頸癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、膀胱癌和淋巴瘤；或全身性地用于其它癌癥，如肺癌、肝癌、胰腺癌、前列腺癌、腦癌、腎癌、血癌和轉(zhuǎn)移癌等。159、對于預(yù)防性應(yīng)用，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在出現(xiàn)任何癥狀之前，例如未患腫瘤時提供。預(yù)防性施用用于預(yù)防或改善任何后續(xù)相關(guān)疾病癥狀的預(yù)期嚴(yán)重性、持續(xù)時間或程度。在一些實施方案中，待治療的對象是未患腫瘤的對象。160、對于治療應(yīng)用，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在疾病的癥狀發(fā)作時或之后施用，例如在腫瘤的癥狀發(fā)生之后或在診斷出腫瘤之后提供。在一些實施方案中，待治療的對象是患有腫瘤的受試者。161、第八方面，本發(fā)明提供了用于在受試者(例如人)中預(yù)防和/或治療感染的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物。還提供了本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在制備用于在受試者(例如人)中預(yù)防和/或治療感染的制劑(例如藥物)中的用途。162、在某些實施方案中，所述感染選自病毒感染、細(xì)菌感染、真菌感染或寄生蟲感染。163、在某些實施方案中，所述受試者是未患感染的受試者或已患感染的受試者。164、對于預(yù)防性應(yīng)用，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在出現(xiàn)任何癥狀之前，例如在感染之前提供。預(yù)防性施用用于預(yù)防或改善任何后續(xù)感染，以在暴露或懷疑暴露于病毒之后或在實際開始感染之后減弱感染和/或相關(guān)疾病癥狀的預(yù)期嚴(yán)重性、持續(xù)時間或程度。在一些實施方案中，待治療的對象可以是有發(fā)生感染風(fēng)險的對象，例如由于暴露于或可能暴露于病原體。165、對于治療應(yīng)用，本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在疾病或感染的癥狀發(fā)作時或之后施用，例如在感染的癥狀發(fā)生之后或在診斷出感染之后提供。在一些實施方案中，待治療的對象也可以是已感染的受試者。166、第九方面，本發(fā)明提供了將活性劑靶向遞送至受試者中的淋巴器官的方法，所述方法包括：向受試者施用有效量的本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物，所述活性劑包含所述復(fù)合物中的貨物肽以及cpg佐劑。還提供了本發(fā)明的復(fù)合物或藥物組合物在制備用于將活性劑靶向遞送至受試者中的淋巴器官的制劑中的用途。167、在某些實施方案中，所述淋巴器官是次級淋巴器官。在某些實施方案中，所述淋巴器官是淋巴結(jié)。168、在某些實施方案中，所述方法用于在受試者(例如人)中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答、預(yù)防和/或治療腫瘤、或預(yù)防和/或治療感染。169、在某些實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物具備提高的淋巴結(jié)遞送效率，例如與不包含本發(fā)明所提供的載體肽的復(fù)合物(例如以tat為載體肽的復(fù)合物)相比提高至少2倍、至少5倍、或至少10倍。170、術(shù)語定義171、在本發(fā)明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學(xué)和技術(shù)名詞具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所通常理解的含義。同時，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關(guān)術(shù)語的定義和解釋。172、如本文中所使用的，術(shù)語“抗原”是誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的物質(zhì)?！澳[瘤特異性抗原(tsa)”是指腫瘤細(xì)胞特有的抗原，其不存在于體內(nèi)其他細(xì)胞上?！澳[瘤相關(guān)抗原(taa)”并非腫瘤細(xì)胞所特有，可能以極低水平存在于正常細(xì)胞上，但在腫瘤細(xì)胞增殖時高度表達(dá)?！澳[瘤新抗原”是存在于受試者的腫瘤細(xì)胞或組織中但不存在于受試者的相應(yīng)正常細(xì)胞或組織中的新抗原。鑒定新抗原序列的示例性方法描述于kreiter?et?al.(2015)nature?520(7549):692-696,ott?et?al.(2017)nature?547:217-221,and?sahin?et?al.(2017)nature?547:222-226，其全部內(nèi)容通過引用并入本文。173、如本文中所使用的，術(shù)語“cpg佐劑”是指含非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸(cpg)基序的dna片段?！癱pg基序”是指通過磷酸二酯核苷酸間鍵或磷酸二酯衍生物核苷酸間鍵與3’g核苷酸連接的5’c核苷酸。在一些實施方案中，cpg基序包含磷酸二酯核苷酸間鍵。在一些實施方案中，cpg基序包含磷酸二酯衍生物核苷酸間鍵。cpg佐劑典型地包括a類cpg?odn、b類cpg?odn和c類cpg?odn。174、a類cpg?odn是指：包含寡脫氧核苷酸的cpg基序，所述寡脫氧核苷酸包含在5'、3'或兩端處的一或多個poly-g序列；包含cpg基序的內(nèi)部回文序列；或者連接脫氧核苷酸的一或多種磷酸二酯衍生物。在實施例中，a類cpg?odn包含在5'、3'或兩端處的poly-g序列；包含cpg基序的內(nèi)部回文序列；以及連接脫氧核苷酸的一或多種磷酸二酯衍生物。在實施例中，磷酸二酯衍生物是硫代磷酸酯。a類cpg?odn的實例包含odn?d19、odn?1585、odn?2216和odn?2336。175、b類cpg?odn是指：包含寡脫氧核苷酸的cpg基序，所述寡脫氧核苷酸包含一或多個包含cpg基序的6聚體基序；連接所有脫氧核苷酸的磷酸二酯衍生物。在實施例中，b類cpgodn包含6聚體基序的一或多個拷貝，所述6聚體基序包含cpg基序和連接所有脫氧核苷酸的磷酸二酯衍生物。在實施例中，磷酸二酯衍生物是硫代磷酸酯。在實施例中，b類cpg?odn包含含有cpg基序的6聚體基序的一個拷貝、兩個拷貝、三個拷貝或四個拷貝。b類cpg?odn的實例包含odn?1668、odn?1826、odn?2006和odn?2007。176、c類cpg?odn是指代包含回文序列的寡脫氧核苷酸，所述回文序列包含cpg基序和連接所有脫氧核苷酸的磷酸二酯衍生物(硫代磷酸酯)。c類cpg?odn的實例包含odn?2395和odn?m362。177、如本文中所使用的，術(shù)語“表位肽”是指，抗原上能夠用作表位的肽段。在一些情況下，單獨的表位肽即能夠被針對所述表位的抗體特異性識別/結(jié)合。178、如本文中所使用的，術(shù)語“蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合對”包含兩種蛋白質(zhì)(例如第一成員(例如第一多肽)和第二同源成員(例如第二多肽))，其在實現(xiàn)或促進(jìn)異肽鍵形成的條件下相互作用以形成共價異肽鍵，其中術(shù)語“同源”是指在一起起作用，即在一起反應(yīng)以形成異肽鍵的組分。因此，在實現(xiàn)或促進(jìn)異肽鍵形成的條件下有效地在一起反應(yīng)以形成異肽鍵的兩種蛋白質(zhì)還可稱為“互補(bǔ)”肽連接子對。能夠相互作用以形成共價異肽鍵的特異性結(jié)合對綜述于veggiani?g,zakeri?b,howarth?m.superglue?from?bacteria:unbreakablebridges?for?protein?nanotechnology.trends?biotechnol.2014；32(10):506-512.中，非限制性實例包括，spytag:spycatcher、spytag002:spycatcher002、spytag:ktag、isopeptag:pilinc、snooptag:snoopcatcher等。179、術(shù)語“異肽鍵”是指羧基或甲酰胺基與氨基之間的酰胺鍵，所述基團(tuán)中的至少一個不衍生自蛋白質(zhì)主鏈，或另一種觀點，不是蛋白質(zhì)主鏈的一部分。異肽鍵可形成于單一蛋白質(zhì)內(nèi)或可出現(xiàn)于兩個肽或肽與蛋白質(zhì)之間。因此，異肽鍵可分子內(nèi)地形成于單一蛋白質(zhì)內(nèi)，或分子間，即形成于兩個肽/蛋白質(zhì)分子之間，例如兩個肽連接子之間。通常，異肽鍵可出現(xiàn)于賴氨酸殘基與天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸殘基或蛋白質(zhì)或肽鏈的末端羧基之間，或可出現(xiàn)于蛋白質(zhì)或肽鏈的α-氨基末端與天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺或谷氨酸之間。180、spytag:spycatcher系統(tǒng)描述于美國專利第9,547,003號和zakeri等人.peptidetag?forming?a?rapid?covalent?bond?to?a?protein,through?engineering?abacterial?adhesin.proc?natl?acad?sci?u?s?a.2012；109(12):e690-e697(其以全文引用的方式并入本文中)，且衍生自釀膿鏈球菌(streptococcus?pyogenes)纖連蛋白結(jié)合蛋白fbab的cnab2域。衍生自cnab2域的另一特異性結(jié)合對為spytag:ktag，其在spyligase存在下形成異肽鍵，可參見fierer?jo,veggiani?g,howarth?m.spyligase?peptide-peptideligation?polymerizes?affibodies?to?enhance?magnetic?cancer?cell?capture.procnatl?acad?sci?u?s?a.2014；111(13):e1176-e1181，其以全文引用的方式并入本文中。spytag002:spycatcher002系統(tǒng)描述于keeble?ah等人.evolving?accelerated?amidationby?spytag/spycatcher?to?analyze?membrane?dynamics.angew?chem?int?edengl.2017；56(52):16521-16525.中，其以全文引用的方式并入本文中。181、snooptag:snoopcatcher系統(tǒng)描述于veggiani?g,nakamura?t,brenner?md,etal.programmable?polyproteams?built?using?twin?peptide?superglues.proc?natlacad?sci?u?s?a.2016；113(5):1202-1207.中，其以全文引用的方式并入本文中。rrga的d4ig樣域(與肺炎鏈球菌粘附)被分離以形成snooptag和snoopcatcher。182、isopeptag:pilin-c特異性結(jié)合對衍生自來自釀膿鏈球菌的主要菌毛蛋白蛋白spy0128，可參見zakeri?b,howarth?m.spontaneous?intermolecular?amide?bondformation?between?side?chains?for?irreversible?peptide?targeting.j?am?chemsoc.2010；132(13):4526-4527.，其以全文引用的方式并入本文中。183、如本文中所使用的，術(shù)語“載體(vector)”是指，可將多聚核苷酸插入其中的一種核酸運(yùn)載工具。當(dāng)載體能使插入的多核苷酸編碼的蛋白獲得表達(dá)時，載體稱為表達(dá)載體。載體可以通過轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)或者轉(zhuǎn)染導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使其攜帶的遺傳物質(zhì)元件在宿主細(xì)胞中獲得表達(dá)。載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括但不限于：質(zhì)粒；噬菌粒；柯斯質(zhì)粒；人工染色體，例如酵母人工染色體(yac)、細(xì)菌人工染色體(bac)或p1來源的人工染色體(pac)；噬菌體如λ噬菌體或m13噬菌體及動物病毒等。可用作載體的動物病毒包括但不限于，逆轉(zhuǎn)錄酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相關(guān)病毒、皰疹病毒(如單純皰疹病毒)、痘病毒、桿狀病毒、乳頭瘤病毒、乳頭多瘤空泡病毒(如sv40)。一種載體可以含有多種控制表達(dá)的元件，包括但不限于，啟動子序列、轉(zhuǎn)錄起始序列、增強(qiáng)子序列、選擇元件及報告基因。另外，載體還可含有復(fù)制起始位點。184、如本文中所使用的，術(shù)語“宿主細(xì)胞”是指，可用于導(dǎo)入載體的細(xì)胞，其包括但不限于，如大腸桿菌或枯草菌等的原核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞或曲霉菌等的真菌細(xì)胞，如s2果蠅細(xì)胞或sf9等的昆蟲細(xì)胞，或者如纖維原細(xì)胞，cho細(xì)胞，cos細(xì)胞，nso細(xì)胞，hela細(xì)胞，bhk細(xì)胞，hek?293細(xì)胞或人細(xì)胞等的動物細(xì)胞。185、如本文中所使用的，術(shù)語“同一性”用于指兩個多肽之間或兩個核酸之間序列的匹配情況。當(dāng)兩個進(jìn)行比較的序列中的某個位置都被相同的堿基或氨基酸單體亞單元占據(jù)時(例如，兩個dna分子的每一個中的某個位置都被腺嘌呤占據(jù)，或兩個多肽的每一個中的某個位置都被賴氨酸占據(jù))，那么各分子在該位置上是同一的。兩個序列之間的“百分?jǐn)?shù)同一性”是由這兩個序列共有的匹配位置數(shù)目除以進(jìn)行比較的位置數(shù)目×100的函數(shù)。例如，如果兩個序列的10個位置中有6個匹配，那么這兩個序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(總共6個位置中有3個位置匹配)。通常，在將兩個序列比對以產(chǎn)生最大同一性時進(jìn)行比較。這樣的比對可通過使用，例如，可通過計算機(jī)程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地進(jìn)行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443-453的方法來實現(xiàn)。還可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用pam120權(quán)重殘基表(weight?residue?table)、12的缺口長度罰分和4的缺口罰分來測定兩個氨基酸序列之間的百分?jǐn)?shù)同一性。此外，可使用已整合入gcg軟件包(可在www.gcg.com上獲得)的gap程序中的needleman和wunsch(j?moibiol.48:444-453(1970))算法，使用blossum?62矩陣或pam250矩陣以及16、14、12、10、8、6或4的缺口權(quán)重(gap?weight)和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重來測定兩個氨基酸序列之間的百分?jǐn)?shù)同一性。186、本文涉及的二十個常規(guī)氨基酸的編寫遵循常規(guī)用法。參見例如，immunology-asynthesis(2nd?edition,e.s.golub?and?d.r.gren,eds.,sinauer?associates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本發(fā)明中，氨基酸通常用本領(lǐng)域公知的單字母和三字母縮寫來表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。187、如本文中所使用的，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑”是指，在藥理學(xué)和/或生理學(xué)上與受試者和活性成分相容的載體和/或賦形劑，其是本領(lǐng)域公知的，并且包括但不限于：ph調(diào)節(jié)劑，表面活性劑，離子強(qiáng)度增強(qiáng)劑，維持滲透壓的試劑，延遲吸收的試劑，稀釋劑，佐劑，防腐劑，穩(wěn)定劑等。例如，ph調(diào)節(jié)劑包括但不限于磷酸鹽緩沖液。表面活性劑包括但不限于陽離子，陰離子或者非離子型表面活性劑，例如tween-80。離子強(qiáng)度增強(qiáng)劑包括但不限于氯化鈉。維持滲透壓的試劑包括但不限于糖、nacl及其類似物。延遲吸收的試劑包括但不限于單硬脂酸鹽和明膠。稀釋劑包括但不限于水，水性緩沖液(如緩沖鹽水)，醇和多元醇(如甘油)等。佐劑包括但不限于鋁佐劑(例如氫氧化鋁)，弗氏佐劑(例如完全弗氏佐劑)等。防腐劑包括但不限于各種抗細(xì)菌試劑和抗真菌試劑，例如硫柳汞，2-苯氧乙醇，對羥苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。188、如本文中所使用的，術(shù)語“癌癥”或“腫瘤”可以互換使用，并且指特征在于不受控制的或失調(diào)的細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化降低、不恰當(dāng)?shù)那忠u周圍組織的能力和/或在異位部位建立新的生長能力的細(xì)胞疾病。術(shù)語“癌癥”包括但不限于實體瘤和血源性腫瘤。術(shù)語“癌癥”包含皮膚、組織、器官、骨骼、軟骨、血液和血管的疾病。術(shù)語“癌癥”進(jìn)一步包含原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性癌癥。實體瘤的非限制性實施例包括：胰腺癌；膀胱癌；結(jié)腸直腸癌；乳腺癌；前列腺癌；腎癌；肝細(xì)胞癌；肺癌；卵巢癌；宮頸癌；胃癌；食管癌；頭頸癌；皮膚癌，包括例如惡性黑色素瘤；神經(jīng)內(nèi)分泌癌；腦腫瘤，包括例如膠質(zhì)瘤、少突膠質(zhì)瘤、成人多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和成人間變型星形細(xì)胞瘤；骨癌；軟組織肉瘤；以及甲狀腺癌。惡性血液病的非限制性實施例包括：急性髓細(xì)胞白血病(aml)；慢性粒細(xì)胞白血病(cml)；急性淋巴細(xì)胞白血病(all)；慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)；霍奇金(hodgkin's)病(hd)；非霍奇金淋巴瘤(nhl)；b細(xì)胞淋巴瘤；t細(xì)胞淋巴瘤；多發(fā)性骨髓瘤(mm)等。189、如本文中所使用的，術(shù)語“預(yù)防”是指，為了阻止或延遲疾病或病癥或癥狀(例如，腫瘤)在受試者體內(nèi)的發(fā)生而實施的方法。如本文中所使用的，術(shù)語“治療”是指，為了獲得有益或所需臨床結(jié)果而實施的方法。為了本發(fā)明的目的，有益或所需的臨床結(jié)果包括(但不限于)減輕癥狀、縮小疾病的范圍、穩(wěn)定(即，不再惡化)疾病的狀態(tài)，延遲或減緩疾病的發(fā)展、改善或減輕疾病的狀態(tài)、和緩解癥狀(無論部分或全部)，無論是可檢測或是不可檢測的。此外，“治療”還可以指，與期望的存活期相比(如果未接受治療)，延長存活期。190、如本文中使用的，術(shù)語“受試者”是指哺乳動物，例如靈長類哺乳動物，例如人。191、如本文中所使用的，術(shù)語“有效量”是指足以獲得或至少部分獲得期望的效果的量。例如，預(yù)防疾病(例如腫瘤)有效量是指，足以預(yù)防，阻止，或延遲疾病(例如腫瘤)的發(fā)生的量；治療疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并發(fā)癥的量。測定這樣的有效量完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。例如，對于治療用途有效的量將取決于待治療的疾病的嚴(yán)重度、患者自己的免疫系統(tǒng)的總體狀態(tài)、患者的一般情況例如年齡，體重和性別，藥物的施用方式，以及同時施用的其他治療等等。192、發(fā)明的有益效果193、本發(fā)明提供了一種新型疫苗遞送體系，可以高效地將抗原及佐劑共同遞送至淋巴結(jié)，并促進(jìn)抗原的交叉呈遞，誘導(dǎo)強(qiáng)效的抗原特異性的免疫反應(yīng)，且優(yōu)于臨床常用的油式復(fù)合佐劑系統(tǒng)，并且所激發(fā)的免疫應(yīng)答還具有強(qiáng)烈的記憶效應(yīng)，對于腫瘤及感染等疾病的預(yù)防及治療具有重要意義。194、下面將結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明的實施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，下列附圖和實施例僅用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的范圍的限定。根據(jù)附圖和優(yōu)選實施方案的下列詳細(xì)描述，本發(fā)明的各種目的和有利方面對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將變得顯然。當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12