本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)及其制備方法。

背景技術(shù)：

在癌癥的化療中，單一藥物治療往往達(dá)不到最佳的效果，基于多種藥物同時給藥的聯(lián)合化療(combinationchemotherapy)已經(jīng)成為有效的解決方案之一。腫瘤的化療失敗很大一個原因就是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生了多藥耐藥(mdr)效應(yīng)，而聯(lián)合化療是當(dāng)前克服mdr的常用方法。聯(lián)合化療通常指2種或2種以上的藥物同時給藥，彼此產(chǎn)生協(xié)同作用得到1+1>2的治療效果。與單一藥物治療相比，聯(lián)合用藥可以調(diào)節(jié)細(xì)胞不同的信號通路，在降低單一藥物的用量及減輕副作用的同時有效地提高抗癌活性，克服腫瘤的耐藥性。除了化學(xué)藥物，腫瘤抗體及抗癌基因等也可以一起遞送產(chǎn)生協(xié)同作用。目前，聯(lián)合化療已經(jīng)成為癌癥治療的普遍方案?；谥|(zhì)體，高分子載體，納米顆粒的共遞送載藥系統(tǒng)也已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。當(dāng)然也各自有不少存在的問題，比如藥物的突釋現(xiàn)象；不同藥物的順序釋放等。因此，設(shè)計(jì)出合理的藥物共傳遞系統(tǒng)，在降低藥物對正常組織的副作用同時有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖，提升療效，對當(dāng)前癌癥的治療具有非常重要的理論意義及實(shí)用價值。

光敏載體可以利用光響應(yīng)型化合物與化療藥物共軛結(jié)合生成前藥，在體內(nèi)受到光刺激后吸收光子產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，重新釋放出活性藥物，產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。

此種治療方法可利用外源激發(fā)光的非入侵性及極佳的操控性優(yōu)點(diǎn)，對用藥部位進(jìn)行精準(zhǔn)調(diào)控。是除光動力治療外另一種有效的光學(xué)治療方案。但是受到光敏載體活性位點(diǎn)的限制，普通的單個光敏載體分子只能攜帶一個藥物分子，傳遞效率比較低，并無法直接應(yīng)用于多藥協(xié)同遞送。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)及其制備方法。該光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)利用光敏載體對化療藥物進(jìn)行共價連接，制備成相應(yīng)的前藥，再利用光子優(yōu)異的時空操控性，對給藥部位直接激發(fā)，實(shí)現(xiàn)藥物的定時、定點(diǎn)及順序釋放，協(xié)同作用而抑制腫瘤化療中的mdr效應(yīng)。

本發(fā)明的發(fā)明目的是由以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

一種光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)，它是含鄰硝基芐基的雙支化光敏載體同時搭載上不同作用機(jī)制的抗腫瘤藥物，形成藥物共遞送系統(tǒng)，所述藥物共遞送系統(tǒng)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為下述結(jié)構(gòu)式ⅰ、ⅱ和ⅲ中的任意一種：

其中，r1和r2為兩種不同的攜帶羧基的化療藥物；r為親水的oeg(n)側(cè)鏈，n為自然數(shù)，1≤n≤10；

其中，r3為攜帶羧基的化療藥物，r4為攜帶羥基或氨基的化療藥物；r為親水的oeg(n)側(cè)鏈，n為自然數(shù)，1≤n≤10；x為o或者n；

其中，r5和r6為兩種不同的攜帶羥基的化療藥物，或者為兩種不同的攜帶氨基的化療藥物；或者為一種攜帶羥基，另一種攜帶氨基的不同化療藥物；r為親水的oeg(n)側(cè)鏈，n為自然數(shù)，1≤n≤10；x1、x2均為o，或者x1、x2均為n，或者x1、x2中其中一個o，另一個為n。

進(jìn)一步的，所述攜帶羧基的化療藥物為苯丁酸氮芥、美法侖、葉酸、甲氨蝶呤、阿里維a酸、倍薩羅丁和9-順式視黃酸中的任意一種。

進(jìn)一步的，所述攜帶羥基的化療藥物為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、長春花堿、長春新堿、去甲長春花堿、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、7-乙基喜樹堿、康普瑞汀a4、依立替康、拓?fù)涮婵?、吉西他濱、安西他濱、地西他賓、卡培他濱、曲沙他濱、紫杉醇、多烯紫杉醇、米托蒽醌和阿糖胞苷中的任意一種。

進(jìn)一步的，所述攜帶氨基的化療藥物為阿霉素、表阿霉素、吡喃阿霉素、柔紅霉素、氟脲嘧啶和喃氟啶中的任意一種。

上述的光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)的制備方法，包括下述步驟：

一、制備鄰硝基芐基為結(jié)構(gòu)單元的雙支化光敏載體：

(1)將4-位鹵代的鄰硝基芐醇通過鈀催化偶聯(lián)方法制成芳基硼酸酯；

(2)將含不同聚合度的乙二醇單甲醚先在甲苯中用對甲苯磺酰氯活化；將活化后的含寡聚乙二醇的對甲苯磺酸酯溶入二甲基亞砜中，在碳酸鉀存在下與鄰二鹵代苯酚反應(yīng)，得到親水性的二鹵代苯；

(3)將親水性的二鹵代苯與芳基硼酸酯用suzuki方法進(jìn)行偶聯(lián)，制備出親水雙支化的光敏載體；

二、制備兩種化療藥物的共遞送系統(tǒng)：

(1)當(dāng)兩種化療藥物均為攜帶羧基的化療藥物時，其制備方法如下：

a、將含鄰硝基芐基的雙支化光敏載體溶于有機(jī)相中，在縮合劑存在下，將第一種藥物的羧基與鄰硝基芐醇片段上的羥基進(jìn)行脫水縮合，生成酯鍵；

b、將步驟a中的產(chǎn)物溶于有機(jī)相中，在縮合劑存在下，將第二種藥物的羧基與另一個鄰硝基芐醇片段上的羥基進(jìn)行脫水縮合，得到目標(biāo)產(chǎn)物；

(2)當(dāng)兩種化療藥物中一種為攜帶羧基的化療藥物，另一種為攜帶羥基或氨基的化療藥物時，其制備方法如下：

a、將含鄰硝基芐基的雙支化光敏載體通過苯環(huán)上的活性羥基與含羧基的化療藥物在縮合劑存在下脫水反應(yīng)，制備出含一個藥物分子的前藥；

b、將步驟a中的產(chǎn)物與氯甲酸對硝基苯酯或二(對硝基苯基)碳酸酯反應(yīng)，生成活性酯；

c、將步驟b中的產(chǎn)物活性酯與含羥基或氨基的化合物在堿催化下反應(yīng)，得到目標(biāo)產(chǎn)物；

(3)當(dāng)兩種化療藥物均為攜帶羥基的不同化療藥物，或者均為攜帶氨基的不同化療藥物；或者為一種攜帶羥基，另一種攜帶氨基的不同化療藥物時，其制備方法如下：

a、將含鄰硝基芐基的雙支化光敏載體與過量氯甲酸對硝基苯酯或二(對硝基苯基)碳酸酯反應(yīng)生成雙活性酯；

b、將步驟a中的產(chǎn)物雙活性酯依次與兩種藥物在堿催化下反應(yīng)，制備出目標(biāo)產(chǎn)物。

進(jìn)一步的，所述步驟一(1)中鈀催化劑為四(三苯基膦)鈀、醋酸鈀、[1，1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀和二(乙酰丙酮)鈀中的任意一種。

進(jìn)一步的，所述步驟一(2)中不同聚合度的乙二醇單甲醚為含2-11個乙二醇單體的寡聚乙二醇[oeg(n)]，1≤n≤10。

進(jìn)一步的，所述步驟二中的有機(jī)相為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃、n，n-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜和乙腈中的任意一種；縮合劑為二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、碳酰二咪唑(cdi)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edci)和2-(7-氧化苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)中的任意一種。

進(jìn)一步的，所述步驟二中的堿為三乙胺、乙基二異丙基胺、n，n-二甲氨基吡啶、碳酸鉀、碳酸鈉、乙醇鈉、叔丁醇鈉和叔丁醇鉀中的任意一種。

本發(fā)明的有益效果：

(1)本發(fā)明中的光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)，是對鄰硝基芐基類光敏載體進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，制備出雙功能型載體，使之能夠同時攜帶不同的化療藥物制備出抗腫瘤的前藥，可以應(yīng)用在腫瘤的治療中。當(dāng)前藥被輸送到病灶部位后，利用外源非破壞性的光子作為刺激因子，通過控制外源激發(fā)光的強(qiáng)度、時間、波長等參數(shù)，可以定時、定位地激發(fā)反應(yīng)，釋放出藥物的活性分子；實(shí)現(xiàn)對藥物的可控釋放，使藥物按照不同的作用機(jī)制協(xié)同工作，產(chǎn)生藥物的協(xié)同治療，提高腫瘤化療的療效及靶向性，具有較為廣闊的應(yīng)用價值。

(2)本發(fā)明中的光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)，運(yùn)用基于鄰硝基芐基的雙支化光敏載體，同時搭載上不同作用機(jī)制的抗腫瘤化療藥物，制備出一類光響應(yīng)型抗腫瘤前藥，建立了一種新型的化療藥物共遞送系統(tǒng)，只運(yùn)用一個載體分子，就可實(shí)現(xiàn)不同藥物的同時傳遞。與高分子載體不同，本發(fā)明制備出的是小分子前藥，并且具有親水性的側(cè)鏈，更有利于藥物在水相生物體系中的分布。

(3)本發(fā)明中的光響應(yīng)型化療藥物共遞送系統(tǒng)由于采用的是光響應(yīng)型載體，對ph和溫度均不敏感，在生物體內(nèi)還具有穩(wěn)定性好，沒有細(xì)胞毒性的優(yōu)點(diǎn)。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為雙支化光敏載體6(1)的合成路線圖；

圖2為實(shí)施例一中oeg(1)-cb-bex的制備路線圖；

圖3為實(shí)施例二中oeg(1)-cb-a4的制備路線圖；

圖4為實(shí)施例三中oeg(1)-dox-a4的制備路線圖；

圖5為實(shí)施例三中制備的oeg(1)-dox-a4的核磁共振氫譜圖；

圖6為實(shí)施例三中制備的oeg(1)-dox-a4的核磁共振碳譜圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

一、制備實(shí)施例：

1、雙支化結(jié)構(gòu)光敏載體的制備：

參考文獻(xiàn)(tetrahedronletters，2016，57，959-963)所報(bào)導(dǎo)的方法，制備路線如圖1所示，步驟如下：

(1)取20ml濃硝酸，在冰浴攪拌至0℃，移液管加入25ml濃硫酸，冰浴下攪拌20min，再加入10g間溴苯甲醛。室溫下攪拌4h，加入少量水，用naoh調(diào)節(jié)ph為3-4。然后用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相旋蒸濃縮得產(chǎn)物1；將產(chǎn)物1用25ml甲醇溶解，冰浴下分批加入2g硼氫化鈉，室溫下攪拌2h。在反應(yīng)液中加入20ml水，然后用20ml乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相合并，無水硫酸鈉干燥后旋蒸濃縮。粗產(chǎn)品過柱純化，得11.29g產(chǎn)物2，產(chǎn)率90％；

(2)取0.5克產(chǎn)物2溶于5ml甲苯中，分批加入聯(lián)硼酸頻那醇酯0.66g,醋酸鉀0.64g，室溫?cái)嚢?min后加入少量[1，1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀作催化劑，120℃回流4h。反應(yīng)液加入10ml水，然后用10ml乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相合并，無水硫酸鈉干燥后旋蒸濃縮。粗產(chǎn)物過柱純化，得0.46g產(chǎn)物3，產(chǎn)率76％；

(3)取2.25g鄰苯二酚溶于15ml三氯甲烷中，冰浴下分批加入2.6ml液溴，室溫反應(yīng)24h，冷卻反應(yīng)液。抽濾，并用三氯甲烷洗滌，得4.38g灰色固體產(chǎn)物4，產(chǎn)率80％；

(4)取二乙二醇單甲醚(r:n＝1)先在甲苯中用對甲苯磺酰氯活化，將活化后的含寡聚乙二醇的對甲苯磺酸酯1.96g溶入二甲基亞砜中，加入0.87g產(chǎn)物4及2.70g碳酸鉀，120℃反應(yīng)7h。反應(yīng)液加水10ml稀釋，用稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為3-4，然后用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相旋蒸濃縮后過柱純化，得1.98g產(chǎn)物5(1)，產(chǎn)率55％；

(5)取0.63g產(chǎn)物5(1)溶于甲苯，加入0.54g產(chǎn)物3，分別移取2mol/l的碳酸鈉、無水乙醇1ml,加入[1，1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀作催化劑，120℃回流7h,反應(yīng)液加水20ml，然后用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相旋蒸濃縮后過柱，得0.2g雙支化結(jié)構(gòu)的光敏載體6(1)，產(chǎn)率33％。

2、藥物共遞送系統(tǒng)的制備：

制備實(shí)施例一：

苯丁酸氮芥-蓓薩羅丁共遞送系統(tǒng)[oeg(1)-cb-bex]的制備路線如圖2所示，包括以下步驟：

(1)稱取0.4g雙支化結(jié)構(gòu)的光敏載體6(1)溶于15ml二氯甲烷中，加入0.24g苯丁酸氮芥，0.2克二環(huán)已基碳二亞胺及少量的4-二甲胺基吡啶，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h；加入10ml水，用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相濃縮后過柱純化，得到0.29g黃色的產(chǎn)物7(1)，產(chǎn)率50％；

(2)稱取0.2克產(chǎn)物7(1)溶于15ml二氯甲烷中，加入0.1克蓓薩羅丁，70毫克二環(huán)已基碳二亞胺及少量的4-二甲胺基吡啶，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h；加入10ml水，用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相濃縮后，殘留物過柱純化，得到0.22g黃色的產(chǎn)物oeg(1)-cb-bex，產(chǎn)率82％。

制備實(shí)施例二：

苯丁酸氮芥-康普瑞汀a4共遞送系統(tǒng)[oeg(1)-cb-a4]的制備路線如圖3所示，包括以下步驟：

(1)稱取0.8g雙支化結(jié)構(gòu)的光敏載體6(1)溶于30ml二氯甲烷中，加入0.48g苯丁酸氮芥，0.4克二環(huán)已基碳二亞胺及少量的4-二甲胺基吡啶，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h；加入20ml水，用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相濃縮后過柱純化，得到0.58g黃色的產(chǎn)物7(1)，產(chǎn)率50％；

(2)稱取0.4克產(chǎn)物7(1)溶于15ml三氯甲烷中，加入氯甲酸對硝基苯酯0.13克，三乙胺0.2ml，室溫下攪拌3h。反應(yīng)液中加入20ml水，用15ml乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相合并后濃縮，殘留物過柱純化得0.38克產(chǎn)物8(1)，產(chǎn)率80％；

(3)稱取0.3克前一步產(chǎn)物8(1)溶于20ml三氯甲烷中，加入0.12克碳酸鉀，0.1克康譜瑞汀a。室溫下攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)液濃縮后過柱純化，得到0.3克目標(biāo)產(chǎn)物oeg(1)-cb-a4，產(chǎn)率85％。

制備實(shí)施例三：

阿霉素-康普瑞汀a4共遞送系統(tǒng)[oeg(1)-dox-a4]的制備，如圖4所示，包括下述步驟：

(1)稱取0.5g雙支化結(jié)構(gòu)的光敏載體6(1)溶于20ml三氯甲烷中，分批加入氯甲酸對硝基苯酯0.33克，完全溶解后，移液管加入三乙胺0.4ml，室溫下攪拌3h，旋蒸上除去有機(jī)溶劑，殘余黃色油狀物柱層析純化，得到0.69克黃色固體9(1)，產(chǎn)率90％；

(2)稱取0.6g步驟(1)得到的黃色固體9(1)溶于20ml二甲基亞砜中，加入0.2g康普瑞汀a4，邊攪拌邊加入碳酸鉀0.18g，室溫?cái)嚢柽^夜；反應(yīng)液加水20ml，用6m的鹽酸調(diào)ph為3-4，然后用乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相減壓濃縮后過柱純化，得0.28克產(chǎn)物10(1)，產(chǎn)率40％；

(3)稱取0.2g步驟(2)得到的產(chǎn)物10(1)溶于無水n,n-二甲基甲酰胺中，加入鹽酸阿霉素0.11g，加入三乙胺0.1ml，室溫下攪拌過夜；反應(yīng)液加20ml水稀釋，乙酸乙酯萃取三次，有機(jī)相減壓濃縮，殘留物過柱純化，得0.2g紅黑色目標(biāo)產(chǎn)物oeg(1)-dox-a4，產(chǎn)率74％。

本實(shí)施例制備得的中間體9(1)的¹hnmr的譜圖數(shù)據(jù)歸納如下，溶劑為氘代氯仿：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.30(d,j＝8hz,4h),8.05(d,j＝8hz,2h),7.36-7.38(m,6h),7.29(dd,j＝8hz,4hz,2h),7.04(s,2h),5.58(s,4h),4.27-4.29(m,4h),3.91-3.93(m,4h),3.73-3.76(m,4h),3.56-3.58(m,4h),3.37(s,6h)

中間體9(1)的¹³cnmr歸納如下，溶劑為氘代氯仿：¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ155.17,151.87,149.71,146.70,145.58,145.50,131.11,130.71,130.50,130.41,125.66,125.43,121.59,116.65,71.97,70.85,69.71,69.30,67.25,59.06

本實(shí)施例制備得的中間體10(1)的¹hnmr的譜圖數(shù)據(jù)歸納如下，溶劑為氘代氯仿：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝8hz,2h),8.05(d,j＝8hz,2h),7.45(dd,j＝8hz,4hz,2h),7.33(d,j＝8hz,2h),7.21-7.24(m,3h),7.13(d,j＝8hz,1h),7.03-7.07(m,3h),6.83(d,j＝8hz,1h),6.49(s,2h),6.45(d,j＝8hz,1h),5.59(s,2h),5.54(s,2h),4.27-4.29(m,4h),3.90-3.93(m,4h),3.82(s,3h),3.74-3.76(m,4h),3.70(s,6h),3.66(s,3h),3.55-3.58(m,4h),3.37(s,6h)

中間體10(1)的¹³cnmr歸納如下，溶劑為氘代氯仿：¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ155.24,153.02,152.54,151.82,150.05,149.64,149.54,146.79,146.52,145.49,145.18,139.52,137.24,132.29,131.83,131.47,131.35,130.78,130.50,130.44,130.21,129.92,129.86,129.74,128.21,128.15,125.61,125.36,122.59,121.63,116.71,116.55,112.24,105.84,71.99,71.97,70.85,69.72,69.29,67.31,66.66,60.89,59.06,55.94,55.87

本實(shí)施例制備得的目標(biāo)產(chǎn)物oeg(1)-dox-a4的¹hnmr及¹³cnmr分別如圖5、圖6所示，溶劑為氘代氯仿。圖5的譜圖數(shù)據(jù)歸納如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ13.98(s,1h),13.75(s,1h),8.02-8.04(m,2h),7.91(d,j＝8hz,1h),7.78-7.80(m,1h),7.47(s,1h),7.38(d,j＝8hz,1h),7.30(s,1h),7.01-7.14(m,6h),6.83(d,j＝12hz,1h),6.45-6.49(m,4h),5.27-5.56(m,8h),4.76(s,2h),4.56(s,1h),4.27(s,4h),4.07-4.12(m,5h),3.57-3.91(m,27h),3.37(s,6h),2.96-3.05(m,2h),2.17(t,j＝16hz,3h)

圖6的譜圖數(shù)據(jù)歸納如下：¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ214.06,187.15,186.76,161.13,156.29,155.73,154.94,153.07,152.76,150.12,149.54,146.80,145.65,145.29,139.64,137.26,135.88,135.55,133.68,132.42,131.81,131.50,130.34,130.13,130.01,128.37,128.24,125.63,125.39,125.25,122.75,120.92,119.94,118.56,116.97,116.65,112.34,111.66,111.48,105.94,72.09,72.03,70.92,70.85,69.81,69.37,67.44,66.88,65.67,63.33,61.01,59.16,59.13,56.78,56.04,52.14,47.26,36.04,35.78,34.06,32.04,31.55,30.43,29.82,29.44,29.36,27.33,25.64,22.81,16.96,14.25。

當(dāng)然，在不背離本發(fā)明精神及其實(shí)質(zhì)的情況下，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該可以根據(jù)本發(fā)明作出各種相應(yīng)的改變和變形，但這些相應(yīng)的改變和變形都應(yīng)屬于本發(fā)明所附的權(quán)利要求的保護(hù)范圍。