本發(fā)明屬于物理學(xué)、生物學(xué)與醫(yī)學(xué)交叉領(lǐng)域，涉及醫(yī)療器械，尤其是腫瘤治療性電磁場。

背景技術(shù)：

低頻電磁場頻率在300千赫(kHz)之內(nèi)，不具有熱效應(yīng)但具有生物學(xué)效應(yīng)，其機(jī)制尚不明，可能與作用于帶電荷的大分子并改變其功能狀態(tài)有關(guān)。磁場對(duì)腫瘤的抑制作用已有廣泛報(bào)道(參見Artacho-Cordón Francisco等，2013，Int J Mol Sci；Tofani S，2015，Curr Topics in Med Chem)。歐盟與美國FDA已批準(zhǔn)腫瘤治療性磁場發(fā)生設(shè)備(以色列Novocure公司)用于多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的臨床治療，該技術(shù)特征是采用100-300kHz的磁場(參見美國專利US8019414，US8019414，US8406870)。中國專利中也提出了多種具有腫瘤抑制效應(yīng)的磁場加載方法，其中包括大于0.4特斯拉(T)的強(qiáng)磁場(參見中國專利90100152.X)和脈沖磁場(參見中國專利94111668.9)。在該領(lǐng)域的研究和應(yīng)用中，電磁場自身屬性與作用對(duì)象、方式不同，包括時(shí)間、強(qiáng)度、脈沖頻率、載波頻率、間隔時(shí)間等參數(shù)不同，會(huì)產(chǎn)生不同的生物效應(yīng)。而且磁場的生物物理作用機(jī)制復(fù)雜，并非單一分子通路起作用，故對(duì)磁場的生物學(xué)效應(yīng)，包括抑制腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)，并沒有統(tǒng)一的和完整的認(rèn)識(shí)。具體效果需針對(duì)某種特定的磁場加載方式和特定的作用對(duì)象來進(jìn)行甄別驗(yàn)證。

有一種特殊的加載方式，將直流電產(chǎn)生的靜態(tài)磁場與超低頻交流電產(chǎn)生的交變磁場疊加。在理論上，這種疊加磁場對(duì)自由基孤對(duì)電子單線態(tài)-三線態(tài)躍遷的影響最大，可能增加能級(jí)躍遷幾率、延長自由基的半衰期，從而擴(kuò)大其生物效應(yīng)(參見Tofani S,1999，Physica Medica；Barnes FS等，2015，Bioelectromagnetics)。

目前腫瘤治療通常采用有創(chuàng)的手術(shù)治療以及無創(chuàng)的放化療。放療可為全身性或局部性。化療分為靶向與非靶向。對(duì)于放化療抵抗并且目前沒有有效靶向藥物的病例，臨床上亟待發(fā)現(xiàn)新的治療方法，尤其是無創(chuàng)、低毒副作用的方法。在低頻電磁場作用于動(dòng)物和人類的過程中，尚未發(fā)現(xiàn)明顯的全身性毒副作用(參見Tofani S等,2002,IEEE Transactions on Plasma Science；Ronchetto F等，2004，Bioelectromagnetics)。

細(xì)胞自噬具有重要的病生理功能，大隅良典因在此領(lǐng)域的開拓性貢獻(xiàn)獲得2016年諾貝爾醫(yī)學(xué)與生理學(xué)獎(jiǎng)。自噬對(duì)細(xì)胞命運(yùn)決定具有雙刃劍作用，可幫助細(xì)胞存活或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征與治療靶點(diǎn)(參見White E等，2009，Clin Caner Res；Hanahan D等，2011，Cell；Booth LA等，2014，Cell Signal)。低頻磁場具有誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的作用(參見Marchesi N等，2014，Cellular Physiology)，但繼而如何影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)存活和死亡，以及具體分子機(jī)制，均尚未明確了解。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種具有腫瘤抑制作用的工頻電磁場發(fā)生裝置，是一種超低頻、低強(qiáng)度，可作用于生物體并產(chǎn)生特定生物學(xué)效應(yīng)的磁場發(fā)生裝置和加載方式，該裝置和加載方法在體內(nèi)外具有腫瘤抑制作用。

本發(fā)明提供一種工頻電磁場發(fā)生裝置，由工頻電源、第一自耦變壓器(交流AC)、第二自耦變壓器(直流DC)、第一二極管電橋、第二二極管電橋，第一組線圈、第二組線圈、輻照部件、電壓檢測部件、磁場檢測部件、測溫部件和終端電腦組成，工頻電源分別與第一自耦變壓器和第二自耦變壓器的一端連接，第一自耦變壓器和第二自耦變壓器的另一端分別與第一二極管電橋和第二二極管電橋連接，第一二極管電橋的另一端與第一組線圈連接，第二二極管電橋的另一端與第二組線圈連接，輻照部件置于第一組線圈和第二組線圈之間，電壓檢測部件一端分別與第一組線圈和第二組線圈連接，另一端與終端電腦連接，磁場檢測部件和測溫部件各自一端分別與輻照部件相連，各自的另一端分別與終端電腦相連。

輻照部件有兩種，第一種為細(xì)胞輻照平臺(tái)，針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿設(shè)計(jì)，由隔板一、隔板二、以及位于兩個(gè)隔板之間的載物臺(tái)組成，細(xì)胞培養(yǎng)板放置于載物臺(tái)之上，隔板一和隔板二間距為12.9厘米，載物臺(tái)高度可調(diào)，保證細(xì)胞培養(yǎng)板底部位于輻照區(qū)域正中位置。第二種輻照部件為動(dòng)物輻照平臺(tái)，主要針對(duì)小鼠設(shè)計(jì)，由隔板一、隔板二、以及位于兩個(gè)隔板之間的6個(gè)動(dòng)物輻照小室組成，組成動(dòng)物輻照小室的部件包括前擋板、后擋板、中間隔板、以及小室隔板一、小室隔板二、小室隔板三、小室隔板四，其中前擋板和后擋板鉆多個(gè)小孔作為透氣孔，以免動(dòng)物發(fā)生缺氧，隔板一和隔板二間距為12.9厘米，6個(gè)輻照小室位于輻照區(qū)域正中位置，每輪輻照可處理6只小鼠。輻照部件的材料選用透明樹脂板，可以清洗與紫外消毒。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供利用所述裝置進(jìn)行磁場加載的方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

采用工頻50/60Hz電源，通過直流與交流自耦變壓器不斷改變電壓，從而在輻照部件內(nèi)部產(chǎn)生疊加的靜態(tài)(來自直流)與交變(來自交流)電磁場；具體改變電壓方案與加載的磁場強(qiáng)度如下：分為T1-T8共8個(gè)時(shí)間段，T1時(shí)間段直流電壓為3毫伏(mV)，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97毫特斯拉(mT)，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T2時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為2.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為2.47mT；T3時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T4時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為2.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為2.47mT；T5時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.08mT；T6時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T7時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.08mT；T8時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；輻照區(qū)域內(nèi)部不同位置總磁場強(qiáng)度相同，T1至T8時(shí)間段平均磁場強(qiáng)度為5.5mT；T1-T8時(shí)間段每次改變電壓持續(xù)輻照3.5-10分鐘，每輪輻照時(shí)間累計(jì)30-90分鐘，每日輻照2-4輪，對(duì)于細(xì)胞和動(dòng)物每天總輻照時(shí)間為60-120分鐘。

本發(fā)明描述的具有腫瘤抑制效應(yīng)的電磁場，其頻率在30-300Hz范圍內(nèi)，靜態(tài)(直流)與交變(交流)電磁場總強(qiáng)度在1-10mT范圍內(nèi)，靜態(tài)(直流)與交變(交流)電磁場強(qiáng)度比值在0.5-2.5范圍內(nèi)。

磁場作用時(shí)間為，各個(gè)時(shí)間段每次改變電壓持續(xù)輻照3.5-10分鐘，每輪輻照時(shí)間30-90分鐘，對(duì)于細(xì)胞和動(dòng)物每天總輻照時(shí)間為60-120分鐘，此裝置和加載方法對(duì)多種腫瘤產(chǎn)生顯著的體內(nèi)外抑制作用，磁場作用可以增加細(xì)胞內(nèi)超氧自由基含量、并促進(jìn)細(xì)胞自噬。

通過本發(fā)明中描述的電磁場發(fā)生裝置和加載方式，對(duì)多種腫瘤產(chǎn)生顯著的體內(nèi)外抑制作用，磁場作用可以增加細(xì)胞內(nèi)超氧自由基含量、并促進(jìn)細(xì)胞自噬。在細(xì)胞體外培養(yǎng)和細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)中，顯示所產(chǎn)生的磁場可以抑制多種腫瘤細(xì)胞生長，包括腎母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、乳腺癌，結(jié)直腸癌等細(xì)胞；在體外實(shí)驗(yàn)中，可以有效抑制結(jié)直腸癌和乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移。

本發(fā)明具有如下有益效果：(1)裝置設(shè)計(jì)合理，采用獨(dú)特的工頻，實(shí)施方便；(2)將直流電產(chǎn)生的靜態(tài)磁場與交流電產(chǎn)生的交變磁場疊加，可影響磁場中的自由基，擴(kuò)大其生物效應(yīng)；(3)輻照部件內(nèi)磁場強(qiáng)度均勻；(4)操作簡便，通過改變電壓即可實(shí)現(xiàn)加載方案；(5)持續(xù)監(jiān)測輻照部件內(nèi)部產(chǎn)生磁場的相關(guān)電壓、磁場強(qiáng)度、溫度，高度可控；(6)置于輻照部件內(nèi)的生物體所受干擾小，無創(chuàng)傷；(7)對(duì)多種腫瘤具有顯著的抑制作用，且毒副作用低；(8)對(duì)細(xì)胞自噬具有促進(jìn)作用。

附圖說明

圖1是本發(fā)明電磁場發(fā)生裝置結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2是本發(fā)明裝置輻照部件之一，置于磁場中的細(xì)胞輻照平臺(tái)示意圖。

圖3是本發(fā)明裝置輻照部件之二，置于磁場中的動(dòng)物輻照平臺(tái)示意圖。

圖4是本發(fā)明電磁場加載方式的主要參數(shù)，即直流(DC)與交流(AC)電壓變化方案與產(chǎn)生的對(duì)應(yīng)電磁場強(qiáng)度，圖中交流電壓以平均值表示。

圖5是本發(fā)明針對(duì)腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401的抑制效果圖。

圖6是本發(fā)明針對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞CHLA255的抑制效果圖。

圖7是本發(fā)明針對(duì)體內(nèi)生長結(jié)直腸細(xì)胞WiDr的抑制效果圖。

圖8是本發(fā)明針對(duì)乳腺癌細(xì)胞MBA-MD-435肺轉(zhuǎn)移的抑制效果圖。

圖9是本發(fā)明中電磁場改變腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401內(nèi)超氧自由基含量的效果圖。

圖10是本發(fā)明中電磁場抑制腫瘤細(xì)胞G401與CHLA255的原理圖，包括HRP化學(xué)發(fā)光法顯影自噬相關(guān)蛋白條帶。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。

實(shí)施例1，本發(fā)明提供的一種具有腫瘤抑制作用的工頻電磁場發(fā)生裝置，由一個(gè)工頻電源1、第一自耦變壓器2(交流AC)、第二自耦變壓器3(直流DC)、第一二極管電橋4、第二二極管電橋5，第一組線圈6、第二組線圈7、輻照部件8、電壓檢測部件9、磁場檢測部件10、測溫部件11和終端電腦12組成，工頻電源1分別與第一自耦變壓器2和第二自耦變壓器3的一端連接，第一自耦變壓器2和第二自耦變壓器3的另一端分別與第一二極管電橋4和第二二極管電橋5連接，第一二極管電橋4的另一端與第一組線圈6連接，第二二極管電橋5的另一端與第二組線圈7連接，輻照部件8置于第一組線圈6和第二組線圈7之間，電壓檢測部件9一端分別與第一組線圈6和第二組線圈7相連，另一端與終端電腦12相連，磁場檢測部件10和測溫部件11各自一端分別與輻照部件8相連，各自的另一端分別與終端電腦12相連。

輻照部件8有兩種，第一種為細(xì)胞輻照平臺(tái)，針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿設(shè)計(jì)，由隔板一13、隔板二14、以及位于兩個(gè)隔板之間的載物臺(tái)15組成，細(xì)胞培養(yǎng)板放置于載物臺(tái)之上，隔板一13和隔板二14間距為12.9厘米，載物臺(tái)高度可調(diào)，保證細(xì)胞培養(yǎng)板底部位于輻照區(qū)域正中位置。

第二種輻照部件8為動(dòng)物輻照平臺(tái)，主要針對(duì)小鼠設(shè)計(jì)，由隔板一13、隔板二14、以及位于兩個(gè)隔板之間的6個(gè)動(dòng)物輻照小室16組成，組成動(dòng)物輻照小室16的部件包括前擋板18、后擋板19、中間隔板20、以及小室隔板一21、小室隔板二22、小室隔板三23、小室隔板四24，其中前擋板18和后擋板19鉆多個(gè)小孔17作為透氣孔，以免動(dòng)物發(fā)生缺氧，隔板一13和隔板二14間距為12.9厘米，6個(gè)輻照小室16位于輻照區(qū)域正中位置，每輪輻照可處理6只小鼠。輻照部件8的材料選用透明樹脂板，可以清洗與紫外消毒。

具體磁場加載方式采取如圖4所示方案，采用工頻50/60Hz電源，通過直流與交流自耦變壓器不斷改變電壓，從而在輻照部件內(nèi)部產(chǎn)生靜態(tài)與交變場疊加的電磁場；具體改變電壓方案與產(chǎn)生的磁場強(qiáng)度如下：分為T1-T8共8個(gè)時(shí)間段，T1時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T2時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為2.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為2.47mT；T3時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T4時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為2.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為2.47mT；T5時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.08mT；T6時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；T7時(shí)間段直流電壓為3mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為2.97mT，交流電壓平均值為1mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.08mT；T8時(shí)間段直流電壓為4mV，產(chǎn)生靜態(tài)電磁場強(qiáng)度為3.95mT，交流電壓平均值為1.5mV，產(chǎn)生交變電磁場平均強(qiáng)度為1.48mT；輻照區(qū)域內(nèi)部不同位置總磁場強(qiáng)度相同，T1至T8時(shí)間段平均磁場強(qiáng)度為5.5mT；T1-T8時(shí)間段每次改變電壓持續(xù)輻照3.5-10分鐘，每輪輻照時(shí)間累計(jì)30-90分鐘，每日輻照2-4輪，對(duì)于細(xì)胞和動(dòng)物每天總輻照時(shí)間為60-120分鐘。

實(shí)施例2，本發(fā)明作用于培養(yǎng)的腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401，使用圖1與圖2所示裝置，按照?qǐng)D4所述方案處理細(xì)胞，每次改變電壓作用3.5分鐘，每輪作用時(shí)間共約30分鐘，每天處理4輪，共2小時(shí)電磁場輻照時(shí)間；陰性對(duì)照組將細(xì)胞置于未加載電磁場的線圈之間的置物臺(tái)，時(shí)間相同；陽性對(duì)照為順鉑(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司)，給藥濃度為500nM，每天給藥1次。

具體實(shí)施過程是：

細(xì)胞系和培養(yǎng)方法：腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401，此細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，用含10％胎牛血清的McCoy培養(yǎng)基培養(yǎng)于37℃孵箱，含5％二氧化碳和飽和水蒸氣；

主要設(shè)備：工頻電磁場發(fā)生裝置，細(xì)胞培養(yǎng)箱，活細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，多功能酶標(biāo)儀；

主要試劑：CCK8試劑盒，熒光探針DCFH-DA，BCA試劑盒，40％丙烯酰胺凝膠貯存液，Tris堿，TEMED，SDS，蛋白酶抑制劑，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，HRP化學(xué)放光檢測試劑盒；

抗體：一抗包括LC3，GAPDH，p62，抗鼠與抗兔HRP偶聯(lián)二抗；

細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)：將腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401以1×10∧5個(gè)/孔的密度接種于6孔板，每個(gè)處理?xiàng)l件3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組、輻照組和順鉑組按照上述方案分別處理，每天收集前一天處理的細(xì)胞，用活細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，根據(jù)讀數(shù)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目，做出細(xì)胞增殖曲線和電磁場對(duì)細(xì)胞的抑制曲線；

統(tǒng)計(jì)分析：每種輻照條件重復(fù)3次，每次3個(gè)復(fù)孔，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，結(jié)果做T檢驗(yàn)，以P<0.05作為具有顯著性差異指標(biāo)；

如圖5所示，左側(cè)圖為細(xì)胞增殖曲線，其中X軸為磁場輻照天數(shù)，Y軸為細(xì)胞數(shù)，曲線一為對(duì)照組細(xì)胞增殖曲線，曲線二為輻照組細(xì)胞增殖曲線，曲線三為陽性對(duì)照順鉑組細(xì)胞增殖曲線；右側(cè)圖為細(xì)胞抑制曲線，其中X軸為磁場輻照天數(shù)，Y軸為抑瘤率(％)，曲線一為輻照組細(xì)胞抑制率曲線，曲線二為順鉑組細(xì)胞抑制率曲線；圖中結(jié)果顯示輻照組細(xì)胞增殖減慢，抑制率增加；

超氧自由基含量測定：將腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞G401以1×10∧4個(gè)/孔的密度接種于96孔板，每個(gè)處理?xiàng)l件3個(gè)復(fù)孔，輻照組按照?qǐng)D4所述方案處理，每輪時(shí)間30分鐘，對(duì)照組放在未加載電磁場的線圈之間的置物臺(tái)，一共處理4輪，輻照時(shí)間共計(jì)120分鐘，每輪處理結(jié)束后用熒光探針DCFH-DA(10μM)在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘，孵育后用PBS洗去未進(jìn)入細(xì)胞的探針，用多功能酶標(biāo)儀檢測，激發(fā)波長488nm，吸收波長525nm，分別讀取各組熒光強(qiáng)度值；如圖9所示，其中X軸為磁場輻照時(shí)間，Y軸為細(xì)胞內(nèi)探針熒光強(qiáng)度，即超氧自由基的相對(duì)含量，曲線一為對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)超氧自由基的相對(duì)含量，曲線二為輻照組細(xì)胞內(nèi)超氧自由基的相對(duì)含量，圖中結(jié)果顯示輻照組細(xì)胞內(nèi)超氧自由基在接受一輪30分鐘的輻照后即比對(duì)照組有所增高，并且一直持續(xù)，直到120分鐘時(shí)降至與對(duì)照組接近的水平，此結(jié)果說明此磁場加載方式的確可以提高細(xì)胞內(nèi)自由基含量，并且顯效迅速，時(shí)間在1小時(shí)之內(nèi)。

免疫雜交實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞處理后離心、PBS洗滌后，懸浮于預(yù)冷的RIPA緩沖液(加入蛋白酶和磷酸化酶抑制劑)，試劑盒BCA法進(jìn)行蛋白定量后，用SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白，每孔上樣量為20μg，用適當(dāng)?shù)目贵w進(jìn)行免疫雜交后，HRP化學(xué)發(fā)光法顯影蛋白條帶，如圖10所示，輻照后p62降低，LC3-II增加，說明輻照可誘導(dǎo)G401細(xì)胞自噬。

實(shí)施例3，本發(fā)明作用于培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞CHLA255，使用圖1與圖2所示裝置，按照?qǐng)D4所述方案處理細(xì)胞，每次改變電壓作用3.5分鐘，每輪作用時(shí)間約30分鐘，每天處理4輪，共2小時(shí)電磁場輻照時(shí)間；陰性對(duì)照組將細(xì)胞置于沒有加載電磁場的線圈之間的置物臺(tái)相同時(shí)間；陽性對(duì)照為順鉑(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司)，給藥濃度為500nM，每天給藥1次。

具體實(shí)施過程是：

細(xì)胞系和培養(yǎng)方法：神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞CHLA255，此細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，用含10％胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基培養(yǎng)于37℃孵箱，含5％二氧化碳和飽和水蒸氣；

主要設(shè)備：工頻電磁場發(fā)生裝置，細(xì)胞培養(yǎng)箱，活細(xì)胞計(jì)數(shù)儀；

主要試劑：CCK8試劑盒，BCA試劑盒，40％丙烯酰胺凝膠貯存液，Tris堿，TEMED，SDS，蛋白酶抑制劑，蛋白上樣標(biāo)準(zhǔn)品，HRP化學(xué)放光檢測試劑盒；

抗體：一抗包括LC3，GAPDH，p62，抗鼠與抗兔HRP偶聯(lián)二抗；

細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)：將神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞CHLA255以1×10∧5個(gè)/孔的密度接種于6孔板，每個(gè)處理?xiàng)l件3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組、輻照組和順鉑組按照上述方案分別處理，每天收集前一天處理的細(xì)胞，用活細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，根據(jù)讀數(shù)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目，做出細(xì)胞增殖曲線和電磁場對(duì)細(xì)胞的抑制曲線；

統(tǒng)計(jì)分析：每種輻照條件重復(fù)3次，每次3個(gè)復(fù)孔，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，結(jié)果做T檢驗(yàn)，以P<0.05作為具有顯著性差異指標(biāo)；

如圖6所示，左側(cè)圖為細(xì)胞增殖曲線，其中X軸為磁場輻照天數(shù)，Y軸為細(xì)胞數(shù)，曲線一為對(duì)照組細(xì)胞增殖曲線，曲線二為輻照組細(xì)胞增殖曲線，曲線三為順鉑組細(xì)胞增殖曲線；右側(cè)圖為細(xì)胞抑制曲線，其中X軸為磁場輻照天數(shù)，Y軸為抑瘤率(％)，曲線一為輻照組細(xì)胞抑制率曲線，曲線二為順鉑組細(xì)胞抑制率曲線，圖中結(jié)果顯示輻照組細(xì)胞增殖減慢，抑制率增加；

免疫雜交實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞處理后離心、PBS洗滌后，懸浮于預(yù)冷的RIPA緩沖液(加入蛋白酶和磷酸化酶抑制劑)，BCA法進(jìn)行蛋白定量后，用SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白，每孔上樣量為20μg，用適當(dāng)?shù)目贵w進(jìn)行免疫雜交后，HRP化學(xué)發(fā)光法顯影蛋白條帶，如圖9所示，輻照后p62降低，LC3-II增加，說明輻照可誘導(dǎo)CHLA255細(xì)胞自噬。

實(shí)施例4，本發(fā)明作用于體內(nèi)生長的結(jié)直腸癌細(xì)胞WiDr，

具體實(shí)施過程是：裸鼠皮下接種結(jié)腸腺癌細(xì)胞WiDr后，輻照組使用圖1與圖3所示裝置，按照?qǐng)D4所述方案處理動(dòng)物，每次改變電壓作用10分鐘，每輪輻照時(shí)間為70分鐘，每天輻照1輪。對(duì)照組同時(shí)放入無磁場的動(dòng)物輻照平臺(tái)中。每日記錄輻照組與對(duì)照組小鼠生存情況。如圖7所示，輻照組小鼠生存期顯著延長。

實(shí)施例5，本發(fā)明針對(duì)乳腺癌細(xì)胞MBA-MD-435，

具體實(shí)施過程是：SCID鼠皮下接種乳腺癌細(xì)胞MBA-MD-435，輻照組使用圖1與圖3所示裝置，按照?qǐng)D4所述方案處理動(dòng)物，每次改變電壓作用10分鐘，每輪輻照時(shí)間為70分鐘，每天處理1輪，每周5天，連續(xù)4周。陰性對(duì)照組同時(shí)放入不加載磁場的輻照平臺(tái)內(nèi)。陽性對(duì)照組給予環(huán)磷酰胺，劑量為50mg/kg，每日1次。4周處理結(jié)束后處死動(dòng)物，取肺臟固定，病理切片，觀察并計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目與大小，**P<0.01,***P<0.001，如圖8所示，輻照組小鼠轉(zhuǎn)移灶數(shù)目顯著減少，效果與環(huán)磷酰胺相當(dāng)，同時(shí)輻照組轉(zhuǎn)移灶顯著減小，輻照抗轉(zhuǎn)移效果優(yōu)于環(huán)磷酰胺。