本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說，涉及一種樹鼩脊髓全橫斷模型的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
：樹鼩被認為是靈長類最親密的近親，由于樹鼩的許多分子和細胞結(jié)構(gòu)近似于人類，因此其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究中有應(yīng)用優(yōu)勢。脊髓損傷(Spinalcordinjury,SCI)是一類中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重的致殘性疾病，據(jù)報道，其年發(fā)生率高達(10.4～83)/100萬，目前尚缺乏針對脊髓損傷的有效治療手段，其中研究的難點和關(guān)鍵在于，如何促進殘存神經(jīng)元的存活，促進神經(jīng)和軸突再生通過膠質(zhì)瘢痕區(qū)重建脊髓神經(jīng)環(huán)路。理想的脊髓損傷神經(jīng)再生模型應(yīng)既能模擬人類脊髓損傷，又能很好研究神經(jīng)再生，目前大鼠、小鼠是常用的脊髓全橫斷模型。而樹鼩比大鼠、小鼠更加接近人類，可以更好的復(fù)制人類脊髓全橫斷損傷模型。本實驗制備樹鼩的脊髓全橫斷模型，建立模型制備技術(shù)規(guī)范，為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究奠定模型基礎(chǔ)。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明針對上述的問題，提供了一種脊髓全橫斷模型的構(gòu)建方法，本疾病模型為脊髓外傷的研究提供了一種穩(wěn)定性好、復(fù)制性強、存活率高的研究模型。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種樹鼩脊髓全橫斷模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：1)對樹鼩進行分組，將樹鼩分成假手術(shù)組和脊髓全橫斷組；2)制備脊髓全橫斷組；3)制備假手術(shù)組；4)術(shù)后護理。進一步地，步驟2)中的制備脊髓全橫斷組具體為：術(shù)者帶口罩帽子，對所有樹鼩采用腹腔注射10ml/kg、3.6％水合氯醛進行麻醉，待樹鼩失去意識后使用橡皮筋固定于手術(shù)臺上，采用俯臥位；使用電動推子將樹鼩自肩部至臀部的背部毛發(fā)剃凈以進行備皮；術(shù)者洗手消毒后采用0.5％聚維酮碘進行皮膚消毒三遍，鋪無菌洞巾，然后穿無菌手術(shù)衣帶無菌手套。沿樹鼩背部中線以胸10為中心作一縱行切口，切口長4cm，逐層切開皮下組織，分離棘突兩側(cè)肌肉，充分暴露胸9-11棘突及椎板；使用咬骨鉗咬除胸10棘突及椎板，顯露硬脊膜；使用組織剪于胸10處剪斷脊髓，2.5倍的手術(shù)放大鏡下觀察脊髓斷端無任何纖維組織相連；若術(shù)后安靜狀態(tài)下樹鼩尾巴小幅度不自主的痙攣性擺動，用手指壓迫尾部，樹鼩尾巴立即出現(xiàn)痙攣、卷曲、張力增加及抽搐等現(xiàn)象，表明造模成功；使用0.1％聚維酮碘消毒液沖洗傷口，采用絲線逐層縫合肌肉、皮下組織及皮膚，無菌敷貼覆蓋傷口。進一步地，步驟3)中制備假手術(shù)組具體為：進行手術(shù)切開皮膚，肌肉并暴露脊髓，但不損傷脊髓。進一步地，步驟4)中術(shù)后護理具體為：手術(shù)后每日早、晚擠尿兩次，直至樹鼩恢復(fù)排尿反射。隔日換藥直至傷口愈合。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明可以獲得包括以下技術(shù)效果：1)與假手術(shù)組樹鼩相比，全橫斷手術(shù)組樹鼩脊髓損傷后平衡木實驗及運動行為評分顯著下降，說明脊髓明顯受損，但術(shù)后有逐漸好轉(zhuǎn)的趨勢。2)脊髓全橫斷模型為其將來應(yīng)用于治療人類脊髓外傷后運動功能障礙研究及藥物治療提供了實驗?zāi)Ｐ突A(chǔ)。當(dāng)然，實施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時達到以上所述的所有技術(shù)效果。附圖說明此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，構(gòu)成本發(fā)明的一部分，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：圖1是本發(fā)明樹鼩固定圖；圖2是本發(fā)明實施例1中的樹鼩改良橫梁實驗；圖3是本發(fā)明實施例1中的樹鼩改良Tarlov評分。具體實施方式以下將配合實施例來詳細說明本發(fā)明的實施方式，藉此對本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來解決技術(shù)問題并達成技術(shù)功效的實現(xiàn)過程能充分理解并據(jù)以實施。實施例1脊髓全橫斷模型的構(gòu)建方法術(shù)者帶口罩帽子，對所有樹鼩采用腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.6％水合氯醛(10ml/kg)進行麻醉，待樹鼩失去意識后使用橡皮筋固定于手術(shù)臺上，采用俯臥位。使用電動推子將樹鼩背部(自肩部至臀部)毛發(fā)剃凈以進行備皮(如圖1所示)。術(shù)者洗手消毒后采用0.5％聚維酮碘進行皮膚消毒三遍，鋪無菌洞巾，然后穿無菌手術(shù)衣帶無菌手套。沿樹鼩背部中線以胸10為中心作一縱行切口，切口長約4cm，逐層切開皮下組織，分離棘突兩側(cè)肌肉，充分暴露胸9-11棘突及椎板。使用咬骨鉗咬除胸10棘突及椎板，顯露硬脊膜。使用組織剪于胸10處剪斷脊髓，手術(shù)放大鏡(2.5倍)下觀察脊髓斷端無任何纖維組織相連。若術(shù)后安靜狀態(tài)下樹鼩尾巴小幅度不自主的痙攣性擺動，用手指壓迫尾部，樹鼩尾巴立即出現(xiàn)痙攣、卷曲、張力增加及抽搐等現(xiàn)象，表明造模成功。使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％聚維酮碘消毒液沖洗傷口，采用絲線逐層縫合肌肉、皮下組織及皮膚，無菌敷貼覆蓋傷口。本實驗分兩個組，分別是假手術(shù)組和脊髓全橫斷組。對于假手術(shù)組樹鼩(只進行手術(shù)切開皮膚，肌肉并暴露脊髓，但不損傷脊髓)是脊髓全橫斷組的對照；而脊髓全橫斷組暴露硬脊膜后即使用0.1％聚維酮碘消毒液沖洗傷口，采用絲線逐層縫合肌肉、皮下組織及皮膚，無菌敷貼覆蓋傷口。手術(shù)后每日擠尿兩次(早、晚)，直至樹鼩恢復(fù)排尿反射。隔日換藥直至傷口愈合。下面結(jié)合具體的實驗過程來說明本發(fā)明的技術(shù)效果：1、橫梁評分結(jié)果正常組行為學(xué)變化：正常組樹鼩放上橫梁后直接逃逸，得分為6分，評分結(jié)果見(表1)。脊髓全橫斷后行為學(xué)變化：在術(shù)后4～6天脊髓全橫斷組樹鼩上肢懸掛于橫梁上，給予刺激后移動距離超過橫梁中點，評分在1分之間，評分結(jié)果見(表1)。脊髓全橫斷組得分比假手術(shù)組明顯降低(圖2)。表1橫梁評分結(jié)果假手術(shù)脊髓全橫斷脊髓全橫斷標(biāo)準(zhǔn)差第二天600第四天60.30.5第四天6002、Tarlov評分結(jié)果正常組樹鼩步態(tài)正常，得分為5分，評分結(jié)果見(表2)。脊髓全橫斷術(shù)后第二天脊髓全橫斷組僅限于髖、膝關(guān)節(jié)的非反射性運動，評分在1分內(nèi)，4-6d評分為0分，結(jié)果見(表2)。脊髓全橫斷組得分比假手術(shù)組明顯降低(圖3)。表2Tarlov評分結(jié)果假手術(shù)脊髓全橫斷脊髓全橫斷標(biāo)準(zhǔn)差第二天50.250第四天500第六天5003、動物分組及樹鼩存活率各組術(shù)后7天內(nèi)死亡情況如下表3所示，該實驗技術(shù)方案樹鼩存活率較高。適用于實驗室研究。表3動物分組及樹鼩存活率假手術(shù)組脊髓全橫斷組樹鼩數(shù)量1010存活樹鼩數(shù)量109存活率100％90％綜上所述，本模型為脊髓外傷的研究提供了一種穩(wěn)定性好、復(fù)制性強、存活率高的研究模型。上述說明示出并描述了發(fā)明的若干優(yōu)選實施例，但如前所述，應(yīng)當(dāng)理解發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對其他實施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識進行改動。而本領(lǐng)域人員所進行的改動和變化不脫離發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3