本發(fā)明涉及護(hù)膚品
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是一種皮膚微生態(tài)改善制劑，及其制備方法。
背景技術(shù)：
：微生物對(duì)皮膚的影響，美容業(yè)界很少人關(guān)注，但隨著生命科學(xué)的進(jìn)步，醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域研究者發(fā)現(xiàn)微生物對(duì)人體及生命有著至關(guān)重要的作用，人體皮膚的好壞跟微生物有著密不可分的關(guān)系。皮膚微生物對(duì)微生態(tài)平衡恢復(fù)和重建起關(guān)鍵作用，同時(shí)對(duì)于生物屏障的構(gòu)成，皮脂腺的分解，酸罩形成起及其重要的作用。皮膚微生物群與宿主，環(huán)境之間保持協(xié)調(diào)的，生理的動(dòng)態(tài)的平衡，它有益于宿主，這種平衡就是皮膚微生態(tài)平衡。由于皮膚自身的、環(huán)境的、藥物的原因，他們的微生態(tài)會(huì)經(jīng)常失調(diào)，可以從外界補(bǔ)充益生菌或益生因子使之恢復(fù)。益生菌要發(fā)揮清潔皮膚、抑制皮膚表面有害菌的生長(zhǎng)繁殖、分泌角膜和胞外多糖幫助防護(hù)皮膚等護(hù)膚功效，必須滿足兩個(gè)前提條件，一是益生菌具有活性，即以活菌的形式添加并存在于產(chǎn)品中；二是活性益生菌數(shù)量足夠，即一定的活菌含量才能保證活性益生菌的護(hù)膚效果。1、中國(guó)專利：含有微生態(tài)調(diào)節(jié)劑的化妝品(CN1183266A)，其特征在于所述化妝品內(nèi)含有重量百分比1％～10％的郎比克假絲酵母和/或深紅酵母菌或其代謝物。通過(guò)實(shí)施本發(fā)明技術(shù)方案，能夠進(jìn)一步提高化妝品的護(hù)膚、養(yǎng)膚、健膚以及促進(jìn)皮膚細(xì)胞新陳代謝效果，并為皮膚提供一種不可缺少的正常生理性細(xì)菌，達(dá)到維護(hù)皮膚微生態(tài)平衡。但存在以下缺點(diǎn)：1.酵母菌不是皮膚常駐菌，無(wú)法在皮膚上定殖，所以無(wú)法參與皮膚的新陳代謝，且只有持續(xù)不斷的供給才能對(duì)皮膚起作用，有待進(jìn)一步改進(jìn)。2.使用的郎比克假絲酵母和深紅酵母菌為死菌，無(wú)法進(jìn)一步生長(zhǎng)繁殖。3.克假絲酵母和深紅酵母菌并沒(méi)有達(dá)到口服益生菌級(jí)別，所以直接敷用臉部皮膚，可能破壞人體的生理循環(huán)。2、中國(guó)專利：一種含有微生態(tài)調(diào)節(jié)劑的化妝品(CN102755281A)，在所述的化妝品中含有重量比例0.5％～1％的雙歧桿菌，采用雙歧桿菌作為化妝品的微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，生產(chǎn)出來(lái)的微生態(tài)護(hù)膚品能促進(jìn)皮膚新陳代謝，達(dá)到護(hù)膚養(yǎng)顏的效果；但存在以下缺點(diǎn)：1.所用的雙歧桿菌為一株青春雙歧桿菌，其生理代謝能力較為單一。2.青春雙歧桿菌主要是腸道益生菌，在皮膚上較難定殖。3.使用的青春雙歧桿菌主要為死菌，無(wú)法進(jìn)一步生長(zhǎng)繁殖，參與人體生理循環(huán)。3、中國(guó)專利：美容方法、護(hù)膚用組合物、菌體及干燥菌體(CN103945829A)，在所述發(fā)明提供一種從人體表面常駐微生物篩選得到的表皮葡萄球菌，并且在取樣對(duì)象的同一個(gè)體進(jìn)行所獲得細(xì)菌的投入與表面增殖，從而改善皮膚健康狀態(tài)的護(hù)膚方式；但存在以下缺點(diǎn)：1.菌株具有特異性，沒(méi)有到菌株水平的表皮葡萄球菌，無(wú)法確定其是否是有益菌，風(fēng)險(xiǎn)太大。2、表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌僅靠選擇性培養(yǎng)基區(qū)分鑒別，區(qū)分度不夠。3、護(hù)膚方式雖然個(gè)性化，但是操作繁冗，工藝生產(chǎn)較困難。4、中國(guó)專利：一種活性益生菌護(hù)膚霜及其制備方法(CN103251547A)，在所述專利中，采用菌泥、甘油和海藻糖制備易分散于乳化體系的含高活菌量的活性益生菌菌液。其次確定該活性益生菌菌液在護(hù)膚霜制備工藝中的添加條件和添加量，確保護(hù)膚霜體態(tài)穩(wěn)定以及含有高活菌量從而具有護(hù)膚益膚功效；但存在以下缺點(diǎn)：1：添加0.1％的防腐劑尼泊爾甲脂，不利于皮膚健康。2、所獲得的活性益生菌護(hù)膚霜沒(méi)有療效性數(shù)據(jù)；3、保質(zhì)期短。5、中國(guó)專利：一種微生物泡騰片及其制備方法(CN103585184B)，在所述專利中，提供了制備活性微生物泡騰片的方法，將保護(hù)微生物活性的輔料加入泡騰片中有效延長(zhǎng)了微生物泡騰片的保藏時(shí)間；但所用的酸源是檸檬水、乳酸、酒石酸、琥珀酸、蘋(píng)果酸等人工合成的乳酸，不是天然發(fā)酵產(chǎn)物。且崩解時(shí)間在2.0～3.0min，不屬于緩釋，加大了微生物在加工、使用、儲(chǔ)存過(guò)程中失活的風(fēng)險(xiǎn)。目前益生菌在護(hù)膚品中的應(yīng)用存在以下幾個(gè)問(wèn)題：益生菌以顆粒或粉劑存在，絕大多數(shù)為死菌，不能進(jìn)行新陳代謝；益生菌無(wú)法在皮膚上長(zhǎng)時(shí)間停留；益生菌不能均勻分散在霜或乳體系中；絕大多數(shù)化妝品里含有防腐劑，增加了安全隱患且不利于益生菌生存。因而活性益生菌護(hù)膚效果并不盡如人意。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出一種皮膚微生態(tài)改善制劑，無(wú)污染，效果好。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種皮膚微生態(tài)改善制劑，由益生菌片溶于肌底液中構(gòu)成，該皮膚微生態(tài)改善制劑中含有1×106～1×108CFU/g活性益生菌；該皮膚微生態(tài)改善制劑的pH為5.0～5.6。優(yōu)選地，該活性益生菌為嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、鼠李糖乳桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌和嗜熱乳桿菌中的一種或多種任意比例的混合。優(yōu)選地，該肌底液為所述活性益生菌在發(fā)酵培養(yǎng)后離心所得的上清液。優(yōu)選地，該肌底液中含有乳酸和胞外多糖。一種如上所述皮膚微生態(tài)改善制劑的制備方法，包括以下步驟：(1)、將益生菌接種到胞外多糖選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行37～40℃靜置培養(yǎng)17～24h，12000～18000rpm離心3～10min，得益生菌粉和上清液；取上清液90～95℃滅菌3～7min后冷卻至室溫，得肌底液；(2)、測(cè)定步驟(1)肌底液的滴定酸度和pH值，計(jì)算得到中和肌底液所需的NaHCO3量，與步驟(1)益生菌粉，以及片劑常規(guī)助劑混勻，壓片，得益生菌片，每個(gè)益生菌片里活菌數(shù)至少為1×109CFU/g。優(yōu)選的，所述片劑常規(guī)助劑包括海藻糖、葡萄糖、蔗糖、牛奶粉、珍珠粉、玫瑰花粉和硬脂酸鎂。優(yōu)選的，所述胞外多糖選擇性培養(yǎng)基為：脫脂乳粉5％，葡萄糖5％，酵母提取物0.35％，蛋白胨0.35％，去離子水89.3％，調(diào)節(jié)pH6.2～6.4。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：采用益生菌發(fā)酵培養(yǎng)上清液作為益生菌泡騰片的酸液，同時(shí)壓片中加入NaHCO3緩沖劑，能維持弱酸性環(huán)境，減少堿性潔面類產(chǎn)品的殘留對(duì)于皮膚的傷害。本發(fā)明首先將一定比例的混合益生菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，離心取上清。此上清發(fā)酵液不僅是高營(yíng)養(yǎng)液，含有益生菌生長(zhǎng)所需的碳氮源，而且特別包含天然發(fā)酵代謝產(chǎn)物乳酸和胞外多糖。胞外多糖一方面對(duì)人體皮膚具有保濕作用，另一方面對(duì)益生菌具有保護(hù)劑作用，能保護(hù)益生菌活性。乳酸是人體皮膚所必須的，一方面可以幫助皮膚提高堿中和的能力，減少堿性潔面類產(chǎn)品的殘留對(duì)于皮膚的傷害。同時(shí)，乳酸是天然發(fā)酵產(chǎn)物，不是人工合成或添加，其作為泡騰片酸源，這是一個(gè)創(chuàng)新。然后根據(jù)離心上清液酸度，計(jì)算得中和每克離心上清液的NaHCO3量，建立中和公式和模型，使整個(gè)護(hù)膚品體系pH達(dá)到5.0～5.6。接著將混合益生菌粉和計(jì)算得到的NaHCO3進(jìn)行配比，其他物料在恒濕無(wú)菌室內(nèi)混勻，進(jìn)行壓片，得到泡騰片所需的堿源。為了繼續(xù)提供益生菌生長(zhǎng)所需的碳源，片劑物料中含有葡萄糖。片劑中還加入海藻糖，海藻糖是一種保護(hù)劑，一方面對(duì)益生菌菌株細(xì)胞具有高效的生物保護(hù)作用，可以幫助生物抵抗外界惡劣環(huán)境，進(jìn)而提高益生菌活性，另一方面對(duì)皮膚具有抗衰老、保濕、曬后修復(fù)等特性。每個(gè)片劑的活菌數(shù)至少達(dá)到1×109CFU/g。這里的益生菌是嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌，且為一種或多種任意比例的混合。將片劑放入肌底液中，泡騰片緩慢釋放，而且不會(huì)迅速產(chǎn)生大量泡沫，使益生菌在一個(gè)兼性厭氧的環(huán)境生長(zhǎng)，有助于保證在貯存過(guò)程中益生菌具有活性和數(shù)量穩(wěn)定性。所得的皮膚微生態(tài)改善制劑中含有1×106～1×108CFU/g的活性益生菌。本發(fā)明的皮膚微生態(tài)改善制劑能保證在生產(chǎn)及產(chǎn)品貯存過(guò)程中益生菌具有活性和數(shù)量穩(wěn)定性，最終從根本上調(diào)節(jié)皮膚的微生態(tài)平衡，維護(hù)皮膚健康，克服了傳統(tǒng)化妝品/護(hù)膚品治標(biāo)不治本和易產(chǎn)生副作用的缺陷，同時(shí)具有保濕，柔膚，緊致等多效修復(fù)功能，為解決皮膚問(wèn)題提供了新的思路。其制備是通過(guò)科學(xué)計(jì)算反應(yīng)體系和混合比例，最大程度的保持了各功能組分的活性成份。本專利中活性益生菌在泡騰片緩釋和保護(hù)劑的作用下，暴露在過(guò)去認(rèn)為容易失活的水體系中。泡騰片使用形式：一方面能有效混合益生菌，使其均勻分布；另一方面，泡騰片能產(chǎn)生大量CO2，使環(huán)境呈厭氧形式，大大有利于兼性厭氧的益生菌生長(zhǎng)于存活，保證了益生菌的活性與穩(wěn)定性。皮膚微生態(tài)改善制劑不同于以往化妝品，其肌底液是益生菌天然發(fā)酵得到的，不僅含有乳酸和胞外多糖等護(hù)膚物質(zhì)，而且含有益生菌生長(zhǎng)所需的碳氮源，有限防止益生菌在水體系中容易衰退失活，具有較高的穩(wěn)定性和活性。所以本發(fā)明一方面在片劑劑型方面引入泡騰片，可以降低液態(tài)或某些固態(tài)活性益生菌在加工、存儲(chǔ)、使用過(guò)程中的失活風(fēng)險(xiǎn)，最終達(dá)到抑制有害菌，平衡肌膚表面pH，補(bǔ)水保濕的功效。另一方面，解決益生菌暴露在大量游離水存在的體系中很容易衰退失活，活菌穩(wěn)定性低，活菌不易均勻分散等技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用堿源片劑加天然發(fā)酵培養(yǎng)液的形式，而且整個(gè)體系維持在pH5.0～5.6的范圍內(nèi)，使得本制劑對(duì)人皮膚更加安全有益。堿源中NaHCO3有一定的緩沖效果，NaHCO3產(chǎn)生的中和效應(yīng)并不是完全中和H+，而是在中和過(guò)程中建立緩沖體系，最終體系中會(huì)有這樣的平衡：建立這樣的平衡體系好處是加入菌株后，一方面可以對(duì)菌株的產(chǎn)酸進(jìn)行緩沖，一方面也可以隨著菌株產(chǎn)酸而不斷釋放CO2，使益生菌在一個(gè)兼性厭氧的環(huán)境生長(zhǎng)，有助于保證在貯存過(guò)程中益生菌具有活性和數(shù)量穩(wěn)定性。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明中NaHCO3滴定上清液的滴定圖；圖2為本發(fā)明中NaHCO3滴定上清液的中和率和滴定度的關(guān)系圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，本部分的描述僅是示范性和解釋性，不應(yīng)對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍有任何的限制作用。一種皮膚微生態(tài)改善制劑，包括益生菌片和肌底液，益生菌片溶于肌底液中；皮膚微生態(tài)改善制劑中的活菌數(shù)為1×106～1×108CFU/g；皮膚微生態(tài)改善制劑的pH為5.0～5.6。皮膚微生態(tài)改善制劑的制備采用下述方法得到：1、培養(yǎng)液的獲得1)活化菌種活性益生菌為嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌的一種或多種。取乳酸菌凍干菌種，進(jìn)行活化。將凍干管消毒割開(kāi)，加入少量培養(yǎng)基，吸出菌液，進(jìn)行平板涂布，在37℃厭氧條件下培養(yǎng)48h。挑選符合乳酸菌形態(tài)，生長(zhǎng)發(fā)育良好的菌落，進(jìn)行液體種子培養(yǎng)基活化，活化條件在37℃厭氧條件下培養(yǎng)12～24h，成為一級(jí)種子。將一級(jí)種子按2％～8％(v/v)的接種量接種到種子培養(yǎng)基里進(jìn)行活化培養(yǎng)17h。MRS液體培養(yǎng)基配方如下：酪蛋白胨10.0g，牛肉浸取物10.0g，酵母提取液5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸鈉5.0g，檸檬酸二胺2.0g，吐溫801.0g，磷酸氫二鉀2.0g，七水硫酸鎂0.2g，七水硫酸錳0.05g，碳酸鈣20.0g，蒸餾水1.0L，pH6.8。MRS固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上加瓊脂20.0g(進(jìn)口的15g)。118℃，滅菌30min。2)菌株發(fā)酵將菌體濃度達(dá)到1×107CFU/g接種，進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基為胞外多糖選擇性ESM(expolysaccharidesselectionmedium)：脫脂乳粉5％，葡萄糖5％，酵母提取物0.35％，蛋白胨0.35％，去離子水89.3％，調(diào)節(jié)pH6.2。在37℃靜置培養(yǎng)17h，10,000rpm離心，取上清液90～95℃滅菌5min后冷卻至室溫，獲得的pH，滴定酸度。此離心上清液即所需的培養(yǎng)液。不僅是高營(yíng)養(yǎng)液，含有益生菌生長(zhǎng)所需的碳氮源，而且包含天然發(fā)酵代謝產(chǎn)物：乳酸和胞外多糖。胞外多糖一方面對(duì)人體皮膚具有保濕作用，另一方面對(duì)益生菌具有保護(hù)劑作用，能保護(hù)益生菌活性。乳酸是人體皮膚所必須的，一方面可以幫助皮膚提高堿中和的能力，減少堿性潔面類產(chǎn)品的殘留對(duì)于皮膚的傷害。同時(shí)，乳酸是天然發(fā)酵產(chǎn)物，不是人工合成或添加，其作為泡騰片酸源，這是一個(gè)創(chuàng)新。2、堿源NaHCO3的計(jì)算根據(jù)上清液滴定酸度計(jì)算得中和每克離心上清液的NaHCO3量，再按照最大添加量的不同百分比添加NaHCO3，建立中和公式和模型，使整個(gè)護(hù)膚品體系達(dá)到皮膚微生物生長(zhǎng)的最適pH5.0～5.6。計(jì)算所需的NaHCO3質(zhì)量的計(jì)算過(guò)程完全中和1g或1mL樣品所需的NaHCO3質(zhì)量＝滴定酸度/°T×84×10-6g/g樣品其中，滴定酸度/°T×84×10-6為mol數(shù)，相當(dāng)于NaHCO3和H+的摩爾數(shù)，也相當(dāng)于產(chǎn)CO2的摩爾數(shù)。所以根據(jù)滅菌后上清液的酸度，套入上述公式，計(jì)算得到完全中和需要NaHCO3的量。因?yàn)镹aHCO3也具有一定的緩沖效果，因此考慮把緩沖體系做成公式，如圖1所示。由圖1可以看出，所得的緩沖體系跟指數(shù)公式的契合度最好。這是因?yàn)镹aHCO3產(chǎn)生的中和效應(yīng)并不是完全中和H+，而是在過(guò)程中建立緩沖體系，最終體系中會(huì)有這樣的平衡：這樣的平衡體系好處是加入菌株后，一方面可以對(duì)菌株的產(chǎn)酸進(jìn)行緩沖，一方面也可以隨著菌株產(chǎn)酸而不斷釋放CO2。產(chǎn)生的CO2有利于兼性厭氧的益生菌生長(zhǎng)。帶入指數(shù)公式，可以計(jì)算出pH5.6時(shí)，對(duì)應(yīng)的滴定酸度。由于緩沖體系的原因，在滴定酸度比較高的時(shí)候，平衡朝一個(gè)方向進(jìn)行，因此，選取滴定酸度所在的區(qū)域，進(jìn)行線性推導(dǎo)，如圖2所示。帶入公式后，根據(jù)滴定酸度可以得到對(duì)應(yīng)的理論中和率。按照理論中和率進(jìn)行計(jì)算，得到對(duì)應(yīng)pH為5.6左右。根據(jù)緩沖公式的建立，1g發(fā)酵上清液，中和達(dá)到pH5.6所需要的NaHCO3添加量公式為：實(shí)際中和1g或1mL樣品所需的NaHCO3質(zhì)量＝滴定酸度/°T×84×10-6g/g樣品×理論中和率3、益生菌壓片每個(gè)片劑里活菌數(shù)至少要達(dá)到1×109CFU/mL，計(jì)算得到益生菌凍干粉添加量。這里的益生菌是嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌和嗜熱鏈球菌，且為一種或多種任意比例的混合菌。計(jì)算得到的堿源NaHCO3量為30％～50％，葡萄糖添加量為5～10％，海藻糖、葡萄糖、蔗糖、牛奶粉、珍珠粉、玫瑰花粉和硬脂酸鎂補(bǔ)齊剩余的量。配料烘干滅菌，無(wú)菌室內(nèi)混勻，過(guò)40目的篩子篩，抽濕壓片。葡萄糖的補(bǔ)充，為益生菌的生長(zhǎng)提供了充足碳源。海藻糖是一種保護(hù)劑，一方面對(duì)益生菌菌株細(xì)胞具有高效的生物保護(hù)作用，可以幫助生物抵抗外界惡劣環(huán)境，進(jìn)而提高益生菌活性，另一方面對(duì)皮膚具有抗衰老、保濕、曬后修復(fù)等特性。4、皮膚微生態(tài)改善制劑的獲得最終獲得的片劑在發(fā)酵上清液中可以達(dá)到緩慢釋放的效果，不會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。實(shí)施例11、將干酪乳桿菌干酪亞種在MRS培養(yǎng)基中活化兩代，將生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期的菌體，在胞外多糖選擇性ESM，37℃進(jìn)行高密度培養(yǎng)20h，后將發(fā)酵液用臺(tái)式離心機(jī)10,000rpm進(jìn)行離心5min，得到上清液。2、所得上清液90℃滅菌5min后冷卻至室溫，測(cè)定其酸度，測(cè)得pH3.72，滴定酸度159.54°T，將混合好的上清液分在兩個(gè)滅菌好的藍(lán)蓋瓶中。3、根據(jù)滅菌后離心上清液酸度，計(jì)算得到理論中和每克離心上清液的NaHCO3量是1.34×10-2g。根據(jù)緩沖公式的建立，1kg發(fā)酵上清液，中和達(dá)到pH5.6所需要的NaHCO3添加量8gNaHCO3。4、將活菌數(shù)為2.4×1011CFU/g乳雙歧桿菌進(jìn)行壓片，計(jì)算得到0.3g片劑菌粉添加量為6％，葡萄糖添加量為30％，NaHCO3添加量為40％，海藻糖添加量為14％，奶粉添加量為5％，珍珠粉添加量為5％。5、除菌粉之外，其他配料烘干滅菌，無(wú)菌室內(nèi)過(guò)40目篩網(wǎng)，混合均勻后，開(kāi)抽濕機(jī)。在抽濕后的操作臺(tái)進(jìn)行混合和壓片，發(fā)酵液上清分裝至噴霧瓶?jī)?nèi)。6、將片劑加入到肌底液內(nèi)，無(wú)大量氣泡迅速放出，氣體均勻緩慢釋放，無(wú)爆瓶情況，得到皮膚微生態(tài)改善制劑，益生菌活菌數(shù)為5.4×106CFU/g，pH值為5.1。實(shí)施例21、分別將嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、嗜熱乳桿菌在MRS培養(yǎng)基中活化兩代，將生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期的菌體，在胞外多糖選擇性ESM，37℃進(jìn)行高密度培養(yǎng)17h，培養(yǎng)液活菌數(shù)分別達(dá)到1.4×109、5.5×109、6×109CFU/g，后將發(fā)酵液用臺(tái)式離心機(jī)12,000rpm進(jìn)行離心5min，取上清。2、將所得上清按照體積比3∶3∶4進(jìn)行混合，得到益生菌上清液。將上清液在95℃滅菌5min后冷卻至室溫，測(cè)定其酸度，測(cè)得pH3.63，滴定酸度183.80°T。3、根據(jù)滅菌后離心上清液酸度，計(jì)算得到理論中和每克離心上清液的NaHCO3量是1.55×10-2g。根據(jù)緩沖公式的建立，10kg發(fā)酵上清液，中和達(dá)到pH5.6所需要的NaHCO3添加量93gNaHCO3。4、將嗜酸乳桿菌和乳雙歧桿菌按照1∶1比例混合，總活菌數(shù)為7.9×1010CFU/g，計(jì)算得到0.15g片劑菌粉添加量為18％，葡萄糖添加量為10％，NaHCO3添加量為30％，海藻糖添加量為12％，奶粉添加量為15％，珍珠粉添加量為10％，硬脂酸鎂5％。5、除菌粉之外，其他配料烘干滅菌，無(wú)菌室內(nèi)過(guò)40目篩網(wǎng)，混合均勻后，開(kāi)抽濕機(jī)。在抽濕后的操作臺(tái)進(jìn)行混合和壓片，發(fā)酵液上清分裝至噴霧瓶?jī)?nèi)。6、將片劑加入到肌底液內(nèi)，無(wú)大量氣泡迅速放出，氣體均勻緩慢釋放，無(wú)爆瓶情況，得到皮膚微生態(tài)改善制劑，益生菌活菌數(shù)為8×106CFU/g，pH值為5.5。實(shí)施例31、分別將嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌在MRS培養(yǎng)基中活化兩代，將生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期的菌體，在胞外多糖選擇性ESM，37℃進(jìn)行高密度培養(yǎng)，培養(yǎng)液活菌數(shù)分別達(dá)到5.5×109、4×109、9×109CFU/g，后將發(fā)酵液用臺(tái)式離心機(jī)9,000rpm進(jìn)行離心15min，取上清。2、將所得上清按照體積比1∶3∶3進(jìn)行混合，到益生菌上清液。將上清液在95℃滅菌5min后冷卻至室溫，測(cè)定其酸度，測(cè)得pH3.71，滴定酸度184.53°T。3、根據(jù)滅菌后離心上清液酸度，計(jì)算得到理論中和每克離心上清液的NaHCO3量是1.55×10-2g。根據(jù)緩沖公式的建立，100kg發(fā)酵上清液，中和達(dá)到pH5.6所需要的NaHCO3添加量0.93kgNaHCO3。4、將嗜酸乳桿菌和乳雙歧桿菌按照4∶1比例混合，總活菌數(shù)為1.4×1011CFU/g，計(jì)算得到0.35g片劑菌粉添加量為10％，葡萄糖添加量為15％，NaHCO3添加量為40％，海藻糖添加量為15％，奶粉添加量為10％，珍珠粉添加量為5％，硬脂酸鎂5％。5、除菌粉之外，其他配料烘干滅菌，無(wú)菌室內(nèi)過(guò)40目篩網(wǎng)，混合均勻后，開(kāi)抽濕機(jī)。在抽濕后的操作臺(tái)進(jìn)行混合和壓片，發(fā)酵液上清分裝至噴霧瓶?jī)?nèi)。6、將片劑加入到肌底液內(nèi)，無(wú)大量氣泡迅速放出，氣體均勻緩慢釋放，無(wú)爆瓶情況，得到皮膚微生態(tài)改善制劑，益生菌活菌數(shù)為1×107CFU/g，pH值為5.4。實(shí)施例41、分別將嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌在MRS培養(yǎng)基中活化兩代，將生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期的菌體，在胞外多糖選擇性ESM，37℃進(jìn)行高密度培養(yǎng)17h，培養(yǎng)液活菌數(shù)分別達(dá)到5.5×109、4×109、6×109、4.5×109CFU/g，后將發(fā)酵液用臺(tái)式離心機(jī)12,000rpm進(jìn)行離心5min，取上清。2、將所得上清按照體積比1∶1∶1∶1進(jìn)行混合，到益生菌上清液。將上清液在90℃滅菌5min后冷卻至室溫，測(cè)定其酸度，測(cè)得pH3.69，滴定酸度185.35°T。3、根據(jù)滅菌后離心上清液酸度，計(jì)算得到理論中和每克離心上清液的NaHCO3量是1.55×10-2g。根據(jù)緩沖公式的建立，100kg發(fā)酵上清液，中和達(dá)到pH5.6所需要的NaHCO3添加量0.93kgNaHCO3。4、將嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種、乳雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌按照1∶1∶1∶1比例混合，總活菌數(shù)為2.9×1011CFU/g，計(jì)算得到0.5g片劑菌粉添加量為10％，葡萄糖添加量為25％，NaHCO3添加量為35％，海藻糖添加量為8％，奶粉添加量為2％，珍珠粉添加量為10％，硬脂酸鎂10％。5、除菌粉之外，其他配料烘干滅菌，無(wú)菌室內(nèi)過(guò)40目篩網(wǎng)，混合均勻后，開(kāi)抽濕機(jī)。在抽濕后的操作臺(tái)進(jìn)行混合和壓片，發(fā)酵液上清分裝至噴霧瓶?jī)?nèi)。6、將片劑加入到肌底液內(nèi)，無(wú)大量氣泡迅速放出，氣體均勻緩慢釋放，無(wú)爆瓶情況，得到皮膚微生態(tài)改善制劑，益生菌活菌數(shù)為5×107CFU/g，pH值為5.2。上述實(shí)例制得的皮膚微生態(tài)改善制劑和活性益生菌片的穩(wěn)定性試驗(yàn)，將4個(gè)系列的樣品在25℃室溫條件下保藏30d，于0d、3d、7d、15d、30d，取樣測(cè)定樣品中益生菌活菌，每個(gè)樣品取三個(gè)平行樣，最終結(jié)果為3個(gè)樣品活菌數(shù)的平均值。根據(jù)《GB7918.1-7918.5-1987化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》處理樣品，根據(jù)《GBT4789.35-2010食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)食品中乳酸菌檢驗(yàn)》選擇檢測(cè)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。試驗(yàn)結(jié)果參見(jiàn)下表：表1不同皮膚微生態(tài)改善制劑在室溫條件下保藏過(guò)程中的穩(wěn)定性由表1可見(jiàn)，本專利工藝所得的皮膚微生態(tài)改善制劑活菌含量高且活菌穩(wěn)定性好。表2不同活性益生菌片在保藏過(guò)程中的穩(wěn)定性由表2可見(jiàn)，本專利工藝所得的活性益生菌片的活菌含量高且活菌穩(wěn)定性好。療效性測(cè)試本研究選取400名成年女性臉上進(jìn)行測(cè)試，其年齡為25～55歲，平均分成4組，每組100人。這四組一一對(duì)應(yīng)地使用含有實(shí)施例1～4的皮膚微生態(tài)改善制劑。使用頻率為一天2～3次，持續(xù)使用4周。分別對(duì)保濕水平、膚色均勻度和刺激性進(jìn)行測(cè)試觀察，并由志愿者進(jìn)行問(wèn)卷評(píng)估，綜合取得數(shù)據(jù)。測(cè)試結(jié)果如下。A、保濕水平保濕水平的測(cè)試結(jié)果如表3所示。表3中，5分表示保濕水平非常好，4分表示保濕水平較好，3分表示保濕水平一般，2分表示保濕水平比較差，1分表示保濕水平非常差。表3產(chǎn)品5分4分3分2分1分實(shí)施例18515000實(shí)施例235501500實(shí)施例378101200實(shí)施例432482000從志愿者臉部皮膚測(cè)試的保濕水平的測(cè)試結(jié)果來(lái)看，皮膚微生態(tài)改善制劑對(duì)皮膚保濕效果明顯。B、膚色均勻度膚色均勻度的測(cè)試結(jié)果如表4所示。表4中，5分表示膚色均勻度明顯改善，4分表示膚色均勻度有所改善，3分表示膚色均勻度無(wú)區(qū)別，2分表示膚色均勻度有所變差，1分表示膚色均勻度變差。表4產(chǎn)品5分4分3分2分1分實(shí)施例110532700實(shí)施例28227000實(shí)施例315523300實(shí)施例427452800從志愿者臉部皮膚測(cè)試的膚色均勻度的測(cè)試結(jié)果來(lái)看，使用皮膚微生態(tài)改善制劑的志愿者的面部膚色均有改善，基本沒(méi)有出現(xiàn)變差的情況。C、刺激性刺激性的測(cè)試結(jié)果如表5所示。表5中，5分表示無(wú)刺激性，4分表示有輕微刺激性，3分表示中等刺激性，2分表示強(qiáng)烈刺激性，1分表示非常強(qiáng)烈刺激性。表5產(chǎn)品5分4分3分2分1分實(shí)施例11000000實(shí)施例27525000實(shí)施例38416000實(shí)施例4919000從刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，添加了活性益生菌成分的制劑對(duì)志愿者皮膚沒(méi)有或只有輕微刺激。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3